学术投稿

人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

王庆苓;张鹏

关键词:Midkine, RNA干扰, 慢病毒载体
摘要:目的:构建人Midkine( MK)基因RNA干扰( RNA interference, RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108 TU/ml。感染 MDA-MB-231细胞后, RT-PCR 检测结果表明, GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87.2%( P<0.05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。
临床与实验病理学杂志相关文献
  • 胃癌组织中RKIP基因启动子甲基化及蛋白表达

    目的:探讨胃癌组织中RKIP基因启动子甲基化及蛋白的表达,分析RKIP基因启动子甲基化及蛋白表达与胃癌生物学行为的关系。方法采用甲基化特异性PCR( methylation-specific PCR, MSP)技术和免疫组化SP法检测45例胃癌组织、21例癌旁胃黏膜组织中RKIP基因启动子甲基化及蛋白的表达。结果胃癌及癌旁胃黏膜组织中RKIP基因启动子的甲基化阳性率分别为48.89%和4.8%(P<0.05);RKIP蛋白在胃癌及癌旁胃黏膜组织中的阳性率分别为42.22%和90.48%(P<0.05);RKIP基因启动子甲基化及蛋白的表达分别与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关( P<0.05)。 RKIP基因启动子甲基化与蛋白表达呈明显负相关(P<0.05)。结论 RKIP基因启动子的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的原因之一,RKIP蛋白表达缺失与胃癌的发生、发展有关。

    作者:李冬霞;张慧;汤正;武辉;李巧香 刊期: 2014年第04期

  • 液基细胞学沉降法在儿童支气管肺泡灌洗液中的应用

    液基细胞学在非妇科疾病中广泛应用,有助于疾病的诊断[1]。其在儿童支气管肺泡灌洗液中通过各种染色方法观察细胞类型和细胞成分,可为肺部多种疾病的诊断和治疗提供理论依据[2]。本文回顾性分析524例肺泡灌洗液标本检查结果,现对液基细胞学沉降法操作体会介绍如下。

    作者:熊枫;黄慧;黄志娜;曾华;杨文萍;章高平 刊期: 2014年第04期

  • 统计学符号书写要求

    作者: 刊期: 2014年第04期

  • 局部复发性鼻咽癌的临床病理学特征

    目的:探讨局部复发性鼻咽癌的临床病理学特征。方法收集46例局部复发性鼻咽癌和63例原发性鼻咽癌活检组织,行HE染色、免疫组化、EBERs原位杂交检测。结果局部复发性鼻咽癌中p63和CK5/6的强阳性表达率均高于原发性鼻咽癌(P=0.005和P=0.026);Ki-67的强阳性表达率差异无显著性(P=0.387);组织坏死、炎性渗出和间质促纤维增生明显;畸形瘤巨细胞多见,癌细胞鳞状分化程度更高。5例复发性鼻咽癌细胞EBERs原位杂交和LMP-1免疫组化标记均为阴性。结论(1)局部复发性鼻咽癌有2个复发间歇高峰,即2~5年和9~11年。(2)局部复发性鼻咽癌细胞p63和CK5/6强阳性表达率、鳞状分化程度更高,侵袭性更强。(3)10.87%(5/46)的局部复发性鼻咽癌细胞EBERs原位杂交和LMP-1免疫组化标记均为阴性。

    作者:雍娟娟;吴秋良;宗永生;侯景辉;梁建中;匡亚玲;奚少彦;卢佳斌 刊期: 2014年第04期

  • 肿瘤中DNA甲基化对miRNA调控作用的研究进展

    miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关,但miRNA的表达调控机制目前尚不清楚。有研究提示,在肿瘤细胞中DNA 甲基化异常会引起 miRNA 的表达改变,即DNA甲基化程度的改变将促进或抑制miRNA的表达,从而抑制或促进肿瘤的发生、发展。因此,DNA甲基化对miRNA的调控作用已成为肿瘤相关研究领域中的“新大陆”。该文就DNA甲基化调控miRNA的表达并参与人类肿瘤发生、发展的有关研究进展作一综述。

    作者:顾页;林洁 刊期: 2014年第04期

  • 滤泡树突状细胞肉瘤7例临床病理分析

    目的:探讨滤泡树突状细胞肉瘤( follicular dendritic cell sarcoma, FDCS)的临床病理学特征、病因与发病机制、诊断及鉴别诊断。方法对7例淋巴结及结外部位FDCS进行临床病理学分析及免疫组化染色,并结合文献讨论。结果FDCS多发生于青壮年,以头颈部淋巴结多见,结外少见,多为无痛性肿块。瘤组织具有多种形态学特征,典型表现是瘤细胞由梭形至卵圆形或圆形构成,呈片状、束状、席纹状、漩涡状及模糊的结节状结构排列。胞核呈长梭形至圆形,染色质空泡状或细颗粒状,核仁小而明显,常见核内假包涵体,核分裂易见;胞质丰富淡染或嗜酸,胞界不清。间质散在淋巴细胞,并常见围绕血管形成袖套状结构。免疫表型:肿瘤细胞CD21、CD23、CD35均阳性(7/7)。结论 FDCS是一种较罕见的恶性肿瘤,诊断与鉴别诊断主要依据组织形态学及免疫表型,术后易复发。

    作者:侯卫华;载律;杨虎;马晓艳 刊期: 2014年第04期

  • CIK细胞在荷瘤鼠体内的肿瘤靶向性与安全性

    目的:探讨CIK细胞对肿瘤组织的靶向性及其在荷瘤鼠体内的运行轨迹和对主要脏器的影响。方法分离制备人CIK细胞,采用体外Transwell迁移试验观察CIK细胞对人乳腺癌细胞MDA-MB-435的靶向迁移效应;以该细胞系接种BALB/c裸鼠建立乳腺癌移植瘤模型,尾静脉注射DiI标记的CIK细胞,应用活体成像和病理学检查观察CIK细胞运行轨迹及对主要脏器的影响。结果 CIK细胞在体外培养14~20天时,细胞增殖达到高峰,CD3+CD56+ T细胞的比例也达到高值。体外Tr-answell迁移实验显示,随着肿瘤细胞上清液浓度的增加,CIK细胞的迁移数量也随之增多。荷瘤裸鼠尾静脉注射DiI标记的CIK细胞后,活体成像显示肿瘤组织24 h开始出现荧光信号,48 h达到强;HE和免疫组化染色结果显示,注射后6 h肿瘤周围开始聚集CIK细胞,48 h多,第14天时肿瘤部位仍有CIK细胞存在,各脏器均未发现由CIK细胞导致的病理组织学损伤。结论 CIK细胞在体内外对肿瘤组织均具有靶向性,对正常组织有安全性,可作为一种有潜力的细胞载体应用于肿瘤的靶向治疗。

    作者:刘霞;胡奇婵;王涛;黄睿;崔静;王丽;杨举伦 刊期: 2014年第04期

  • 论文修改注意事项

    作者: 刊期: 2014年第04期

  • 乳头状胶质神经元肿瘤3例临床病理学分析

    目的:探讨乳头状胶质神经元肿瘤( papillary glioneuronal tumor, PGNT)的临床病理学特征、免疫表型及鉴别诊断。方法分析3例PGNT的临床表现、影像学、病理形态及免疫表型特征,并复习相关文献。结果本组中女性2例,男性1例,临床表现为头晕或慢性难治性癫痫,头部MRI检查显示左侧颞叶或右侧顶叶脑实质内囊性占位。镜下可见肿瘤由星形胶质细胞、少突样胶质细胞和神经节细胞及神经节样细胞构成,呈假乳头状排列,乳头中心为玻璃样变性的血管。免疫表型:星形胶质细胞GFAP阳性,少突样胶质细胞Olig-2阳性,神经节细胞Syn、NeuN阳性。结论 PGNT是一种新增的、少见的神经元-胶质混合性肿瘤,绝大多数呈良性经过,属WHOⅠ级,预后良好。熟悉其病理学特征有助于与其他具有乳头状结构的中枢神经系统肿瘤鉴别诊断。

    作者:张安莉;李恒;丁敏 刊期: 2014年第04期

  • 幼儿腹膜后伴腺体分化的恶性周围神经鞘膜瘤1例

    患者女性,1岁1个月,3个月前洗澡时发现左下腹部无痛性质硬包块,近期包块增大明显,并伴有腹泻,无发热、呕吐。体检:腹部膨隆,软,无压痛及反跳痛,左下腹部触及一6 cm ×6 cm ×3 cm大小包块,位置固定,质硬,无压痛,肝脾肋下未触及,余无异常。 CT检查示中下腹部腹膜后间隙有一巨大肿瘤,97 mm ×87 mm大小,中心部分液化坏死伴钙化,包绕腹主动脉、下腔静脉及双侧输尿管,至双肾轻度积水,推压腹膜后及腹腔结构,考虑为恶性肿瘤,以神经母细胞瘤或生殖细胞瘤可能性大。 CT增强扫描示:腹膜后巨大占位,考虑为恶性肿瘤,以神经母细胞瘤可能性大或生殖细胞瘤,腹膜后被包围。骨髓穿刺术见少量原始及幼稚淋巴细胞。腹部B超示:腹腔内探及一102 mm ×93 mm ×65 mm大小的不均质低回声,边界尚清,似有包膜。生化检查:β-HCG 0.138 mIU/ml,癌胚抗原CEA 6.50 ng/ml,NSE 24.24 ng/ml。尿多巴胺2990.0μg/24 h,血多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素正常。术中见中下腹膜后有一4.5 cm ×3.5 cm ×2 cm大小肿块,打开侧腹膜、右侧腹膜后发现肿块与右肾、右侧肾动静脉、右侧输尿管,左侧腹膜后,左侧输尿管,上部囊壁与十二指肠水平段、降结肠肠系膜、肠系膜血管,前壁与空肠及回肠系膜、肠系膜血管,后壁与下腔静脉、腹主动脉及神经纤维融合粘连。

    作者:肖学文;张兰凤;李伟松;肖海;范钦和 刊期: 2014年第04期

  • Six1蛋白在恶性肿瘤中的研究进展

    Six1是同源盒基因家族中的成员,与胚胎细胞发育和器官分化有关,促进细胞分化前的前体细胞增殖和生存。Cyclin D1、Cyclin A1和c-myc在细胞生长和增殖中起着至关重要的作用, Six1通过这些蛋白可调控细胞周期。文献报道,Six1通过组织、血液系统及阶段依赖等多种方式调节癌细胞启动、增殖和转移,在肿瘤发生、发展中发挥重要作用。该文总结Six1蛋白在恶性肿瘤发生、发展中的作用及其分子机制研究进展,Six1有可能成为抑制肿瘤生长的靶点。

    作者:金爱花;金海燕 刊期: 2014年第04期

  • EGFR基因20外显子突变与非小细胞肺癌

    目前有关非小细胞肺癌( non-small cell lung carcinoma, NSCLC)中EGFR突变研究为广泛。经典的EGFR突变,如19外显子的框内缺失及21外显子L858R点突变,对表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂( epidermal growth factor recep-tor tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKIs)治疗敏感。20外显子的插入突变占EGFR突变的4%,患者常对EGFR-TKIs可用的大剂量耐药。现就EGFR20外显子的基因结构及临床意义进行综述。

    作者:陈瑚;余英豪 刊期: 2014年第04期

  • 常见编辑规范

    1常见缩写:小时( h),分钟( min),秒( s),转/分( r/min),“周”和“天”不用英文缩写。2标点符号不能位于行首,英文无“《》、;~”符号。3超过三位的阿拉伯数字,以小数点为起点,分别向前向后每三位空一个字符,如:4532,231456,0.23456。

    作者: 刊期: 2014年第04期

  • ZEB1过表达及 E-cadherin、mR-NA-200 s表达下调是未分化子宫内膜癌的特征性表现

    未分化子宫内膜癌是一种侵袭性极强的高级别子宫内膜癌,被定义为一种由中等大小或大细胞构成的、完全缺乏腺样结构、缺乏或伴极少(<10%)神经内分泌分化的肿瘤,约占子宫内膜癌的9%。目前,由于病理医师对未分化子宫内膜癌的认识不足,使其经常不能被诊断,或者将其归入FI-GO 3级子宫内膜样腺癌中。

    作者:王建(摘译);刘勇(审校) 刊期: 2014年第04期

  • 透明胸膜斑尸检1例

    患者男性,67岁。无明显诱因及症状,因恶病质、全身器官功能衰竭死亡。既往诊断包括“(1)胃窦炎;(2)浅表性胃炎;(3)右上肺肋骨渗出性结核病”。采取常规Letulle法进行尸体解剖,并对各器官进行病理检查。所有组织均经10%中性福尔马林固定,常规制片及HE染色。

    作者:刘绮颖;崔风云;朱虹光 刊期: 2014年第04期

  • 肠系膜纤维瘤病2例临床病理分析

    目的:探讨肠系膜纤维瘤病( mesenteric fibromatosis, MF)的临床病理学特征、鉴别诊断、治疗及预后。方法对2例MF进行临床资料分析、光镜观察及免疫组化标记,并复习相关文献。结果2例患者肿瘤均位于小肠系膜,与周围组织界限不清,无明显包膜,切面灰白、灰红色,实性,质韧。镜下见肿瘤由增生的梭形纤维母细胞和胶原纤维组成,呈平行状、波浪状或束状交错排列,细胞形态较一致,核分裂象少见,无明显异型性。肿瘤向肠壁肌层及周围脂肪组织呈浸润性生长。免疫表型:肿瘤细胞 vimentin、β-catenin 均阳性, SMA 局灶阳性,而 CK ( AE1/AE3)、desmin、S-100、CD34、CD117、DOG1、S-100和ALK1均阴性。结论 MF是一种罕见的纤维组织增生性病变,具有局部浸润和术后复发的生物学特性。临床表现及影像学检查无特征性,易与其他原发胃肠道肿瘤混淆。其诊断及鉴别诊断主要依靠病理检查及免疫表型。手术切除是治疗MF的主要方法。

    作者:高金莉;张明智 刊期: 2014年第04期

  • 肺腺癌患者胸腔积液中 Axin、β-catenin和 p53的表达及意义

    目的:观察胸腔积液中Axin、β-catenin和p53的表达,探讨三者表达的关系及意义。方法采用免疫细胞化学SP法观察40例原发性肺腺癌患者恶性胸腔积液和40例肺良性疾病患者反应性胸腔积液中Axin、β-catenin和p53的表达。结果在原发性肺腺癌胸腔积液中,Axin阳性率为30%(12/40),β-catenin细胞膜阳性率为15%(6/40),细胞质阳性率为60%(24/40),p53阳性率为57.5%(23/40)。 Axin阳性率与β-catenin细胞膜表达呈正相关,与p53表达呈负相关。在肺良性疾病胸腔积液中Axin阳性率为77.5%(31/40),β-catenin无阳性表达,p53阳性率为1.25%(5/40)。结论在原发性肺腺癌胸腔积液中Axin表达降低,β-catenin细胞质阳性率高于细胞膜,差异有显著性(P<0.05),p53呈过表达。提示恶性胸腔积液中的癌细胞可能存在Wnt信号的激活。

    作者:侯兴华;徐洪涛;李春杨;金素芬 刊期: 2014年第04期

  • 敬告作者

    敬请作者严格按照本刊退修通知单中意见作出相应修改并作修改答复,如有不同意见也可写出说明材料并发回。欢迎您修改时参阅并引用本刊相关文献。

    作者: 刊期: 2014年第04期

  • 早期喉癌手术阴性切缘组织中PCNA、COX-2表达与肿瘤局部复发的关系

    目的:探讨早期喉癌手术阴性切缘组织中PCNA、COX-2的表达与肿瘤局部复发的关系。方法选择63例经CO2激光手术治疗后的早期喉癌患者标本,对切除的肿瘤组织及切缘组织中PCNA、COX-2表达进行检测,所有患者均随访2年以上,对其生存及肿瘤复发情况进行观察。结果63例早期喉癌患者肿瘤组织中PCNA、COX-2阳性率分别为73.02%、71.43%;切缘组织中PCNA和COX-2阳性率分别为33.33%、30.16%。肿瘤组织与切缘组织中PCNA、COX-2均阳性的患者分别为41例和13例,阳性率分别为65.08%、20.63%;63例随访病例中,局部复发17例,复发率为26.98%。 PCNA阳性患者复发率为71.43%,COX-2阳性患者复发率为73.68%(P<0.05)。联合检测PCNA和COX-2阳性者复发率明显高于单独阳性者(P<0.05)。结论早期喉癌手术切缘组织中PCNA、COX-2的表达是喉癌患者预后的重要生物学标志,并可根据检查结果制定针对性的后续治疗方案,联合检测二者对术后治疗具有更可靠的指导意义。

    作者:孙玉满;杨俊泉;曹渤海;张玲;王宝良;吴蒙 刊期: 2014年第04期

  • 伴上皮样肉芽肿反应的肺上皮性恶性肿瘤11例临床病理分析

    目的:探讨伴上皮样肉芽肿反应的肺上皮性恶性肿瘤的临床病理学特征。方法对11例肺上皮性恶性肿瘤伴上皮样肉芽肿反应的临床资料进行回顾性分析;根据肺肿瘤组织学类型、免疫表型、抗酸染色和结核PCR检测结果,并结合随访资料进行总结。结果患者平均年龄62.3岁,男女之比为10∶1。临床主要表现为咳嗽、胸痛、发热、咯血等。术前临床诊断肺癌9例,肺结核和炎性病变各1例。全部肿瘤病灶的上皮样肉芽肿反应病变与肿瘤在同一部位(混合存在),病理组织学表现为上皮样或典型结核样肉芽肿形态,其中腺癌4例,鳞癌5例、神经内分泌肿瘤2例。11例中3例抗酸染色找到抗酸杆菌,6例结核分枝杆菌PCR检测阳性。5例术后2年内因不同原因死亡。结论伴上皮样肉芽肿反应的肺上皮性恶性肿瘤多见于中老年人,临床表现为肺癌征象,预后差,明确病变性质需依赖病理活组织检查。重视该类病变(尤其病灶穿刺样本)的病理检查与鉴别诊断,对明确诊断及治疗极其重要。

    作者:蒋小芹;陆珍凤;时姗姗;周晓军;印洪林 刊期: 2014年第04期

临床与实验病理学杂志

临床与实验病理学杂志

主管:

主办:安徽医科大学;中华医学会安徽分会