学术投稿

CDK2 shRNA慢病毒载体的构建及其基因沉默效应

晋佳路;朱仁书;谢育媛;刘红春

关键词:Cdk2, 慢病毒载体, shRNA, 基因沉默
摘要:目的:构建CDK2 shRNA慢病毒载体,并在黑色素瘤细胞B16-F1中鉴定其基因沉默效应。方法体外构建3个慢病毒重组目的质粒pUL-CDK2-shRNAs和1个阴性对照慢病毒重组质粒pUL-NC-shRNA,转化感受态细胞,PCR鉴定后进一步测序验证;293T细胞中测定病毒滴度;用重组慢病毒感染B16-F1细胞测定其感染效率,RT-PCR和Western印迹检测其对 B16-F1细胞中CDK2的基因沉默效应。结果 PCR鉴定后进一步测序表明,成功构建了重组慢病毒质粒;病毒滴度为4.5×107~5.5×107 TU/ml;用重组慢病毒感染 B16-F1细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率可达90%;RT-PCR和Western印迹结果表明,与未感染组和NC-shRNA感染组细胞相比,CDK2-shRNA1、CDK2-shRNA2、CDK2-shRNA3感染的细胞中CDK2 mRNA和蛋白表达均受到不同程度抑制(P<0.05),以 CDK2-shRNA3感染组的抑制率高,RT-PCR和 Western Blot 检测其抑制率分别为78.5%±4.23%和70.5%±3.54%。结论利用RNAi技术成功构建了3种CDK2-shRNA重组慢病毒载体,均可有效感染B16-F1细胞并具有一定的基因沉默效应,其中以针对靶位点1012-1020的pUL-CDK2-shRNA3基因沉默效应强,为进一步研究CDK2基因沉默对黑色素瘤化疗敏感性的影响奠定了基础。
中国老年学杂志相关文献
  • 地佐辛三种全麻方式对老年患者手术后早期认知功能的影响

    目的:观察三种全麻方式对老年患者手术后早期认知功能的影响。方法采用双盲随机原则将114例老年手术患者随机分为异丙酚、地佐辛静脉组(P组)、七氟烷与异丙酚、静吸复合组(SP组)和七氟烷吸入麻醉组(S组),比较3组不同时间简易精神状态量表(MMSE)评分、不同时间认知功能障碍发生及手术前后白细胞介素( IL)-1β、IL-6水平变化情况。结果3组出麻醉恢复室和术后1 d MMSE评分均显著低于术前1 d ( P<0.05);3组不同时间MMSE评分差异显著( P>0.05);3组均为出麻醉恢复室时认知功能障碍发生率高,之后逐渐下降,至术后3、7 d明显降低( P<0.05);3组不同时间认知功能障碍发生率差异不显著( P>0.05);3组术后1 d IL-1β、IL-6水平与术前1 d比较均显著升高( P<0.05);3组术前1 d、术后1 d IL-1β、IL-6水平差异不显著( P>0.05)。结论老年患者全麻术后出麻醉恢复室时和术后1 d认知功能均受到明显影响,至术后3~7 d基本恢复,三种全麻方式对认知功能的影响基本相同,术后IL-1β和IL-6水平升高可能与术后早期认知功能障碍的发生有紧密联系。

    作者:徐艳;田江艳;田桃苇;杨昌勇;王东海;罗涛 刊期: 2015年第16期

  • PCI术后再次住院男性冠心病患者血脂达标的情况

    目的:观察冠脉支架植入( PCI)术后再次住院的男性冠心病患者血脂达标情况。方法选择暨南大学附属第一医院2007年12月至2012年12月行PCI术后再次住院治疗的男性冠心病患者,共133例。按年龄分为老年组( n=83)和中青年组( n=50)。所有患者第一次入院后即开始每日服用阿托伐他汀钙片20 mg。收集两组患者2次入院时的一般资料、既往病史、血脂和冠脉造影情况。对比患者2次入院血脂水平,观察血脂变化和达标情况。结果①两组患者第2次入院时总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平低于第1次入院(P<0.05),而甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平的变化无统计学差异。②两组患者血脂达标率基本一致,但 TC和 LDL-C达标率较低。结论介入治疗术后再次住院的男性冠心病患者单用他汀类药物常规剂量治疗,能降低患者TC和LDL-C水平,但达标率较低,对控制TG和HDL-C水平效果较差。

    作者:梁穗;李自成;张涛 刊期: 2015年第16期

  • 《中国老年学杂志》被国际数家数据库、检索性期刊检索机构收录情况

    根据国际检索机构给中国科学技术期刊编辑学会国际交流工作委员会、中国高等学校自然科学学报研究会对外联络委员会发来的电子邮件及其附件统计整理,《中国老年学杂志》2009年又被4种国际重要检索系统列为来源期刊。

    作者: 刊期: 2015年第16期

  • 热带老年脑梗死患者脂蛋白酯酶基因多态性

    目的:研究热带地区老年脑梗死患者脂蛋白酯酶基因HpL多态性分布及其与脑梗死的关联性。方法检测海南省脑梗死患者血脂水平及脂蛋白酯酶HindⅢ及PvuⅡ位点基因多态性,并与正常组进行比较。结果 HindⅢ位点的三个基因型 TT、TG、GG在脑梗死组和对照组的分布存在显著差异(P<0.05),TT和GG在组间的OR值分别为1.279和0.56。 PvuⅡ位点的三个基因型CC、CT、TT在脑梗死和对照组中的分布频率无显著差异( P>0.05)。结论脂蛋白酯酶基因HindⅢ位点的突变可能与脑梗死的发生存在关联,等位基因GG对热带地区中老年人心血管具有保护作用,而TT可能是脑梗死的危险因素。

    作者:黄达;冯清春;胡少敏;王兴文;吴碧莹;黄志萍 刊期: 2015年第16期

  • 六味地黄丸抑制H2O2诱导的PC-12细胞凋亡的作用机制

    目的:探讨经典名方六味地黄丸对H2 O2所致PC12细胞凋亡时bax、caspase-8和bcl-2基因和蛋白表达的调控作用。方法把大鼠肾上腺嗜铬瘤( PC-12)细胞分为4组:对照组、模型组、六味地黄丸组、维生素( Vit) E组。待细胞培养24 h贴壁后吸去培养液,对照组和模型组都加入含10%大鼠血清培养液,六味地黄丸组和VitE组分别加入含10%六味地黄丸大鼠血清培养液和含VitE的培养液,预保护24 h后,除对照组之外的各组加入H2 O2终浓度为200μmol/L,对照组加入等量的培养液,继续孵育24 h后离心收集细胞,提取总RNA和蛋白。应用RT-PCR和Western印迹方法分别测定bax、caspase-8、bcl-2基因和蛋白质表达的变化。结果六味地黄丸能下调bax、caspase-3基因和蛋白的表达,对 bcl-2基因和蛋白表达有上调作用。结论六味地黄丸能通过有效降低bax、caspase-8基因和蛋白表达,提高bcl-2的表达,抑制、阻止PC-12细胞凋亡,促进细胞存活。

    作者:高海宁;王艳杰;赵丹玉;崔勇;柳春 刊期: 2015年第16期

  • 奥施康定治疗老年晚期胰腺癌中重度癌痛的疗效及安全性

    目的:探讨老年晚期胰腺癌应用奥施康定对患者疼痛的疗效及安全性。方法选择78例老年晚期胰腺癌患者,随机分为两组,其中观察组予以奥施康定治疗,对照组予以常规疼痛控制措施治疗,观察两组患者不同时间段疼痛情况、止痛效果、止痛相关指标、体力状况稳定情况,并进行安全性评定。结果与对照组比较,观察组在治疗后4 w、8 w、12 w的NRS评分、起效时间、日均用药量、高日用量以及不良反应发生率均降低明显,疼痛缓解率、镇痛持续时间、体力稳定率则升高明显,差异具统计学意义( P<0.05)。结论在老年晚期胰腺癌患者中应用奥施康定可有效缓解疼痛,稳定患者的体力,且安全性较佳,具有临床推广价值。

    作者:万红;王晓娟;黄雪兰;车婷 刊期: 2015年第16期

  • 有氧运动对老年顽固性高血压患者心血管自主神经功能的影响

    目的:探讨有氧运动对老年顽固性高血压( RH)患者心血管自主神经功能的影响。方法78例老年 RH患者随机分为对照组和观察组各39例。对照组患者常规治疗。观察组患者在常规治疗的基础上进行3个月的有氧运动训练。结果治疗后,观察组患者心率( HR )、收缩压(SBP)及舒张压(DBP)低于对照组(P<0.01)。治疗后,观察组患者心率变异性(HRV TP)和HRV高频功率(HF)高于对照组(P<0.01)。治疗后,观察组患者(HRV)、低频功率(LF)/HF低于对照组(P<0.01)。治疗后,观察组患者血压变异性(BPV)TP、BPV LF和BPV归一化低频功率(LFn)低于对照组(P<0.01)。治疗后,观察组患者反射敏感性(BRS)HF高于对照组(P<0.01)。结论老年RH患者进行有规律的有氧运动,可有效调节交感神经和迷走神经张力恢复至正常水平,纠正心血管自主神经功能的失衡,改善压力反射功能,促使患者血压下降。

    作者:孙漾丽;白起君 刊期: 2015年第16期

  • 社区老年原发性高血压患者治疗依从性的研究进展

    原发性高血压( EH)是多种心脑血管疾病的重要病因和危险因素,影响心、脑、肾等重要脏器的结构与功能,终导致这些器官的功能衰竭。 EH是冠心病和脑卒中直接的原因〔1〕。老年人常因EH并发各种心血管事件,增加了死亡率和住院率〔2〕。因此,防治心脑血管病的关键在于控制高血压〔3〕。目前人群中EH的发病率高而控制率低仍是医学界面临的难题,其中社区EH患者对治疗的依从性差是导致血压控制率低的主要原因〔4〕。本文将近年来有关社区老年EH患者治疗依从性的研究进展作一综述。

    作者:郑雪娇;曹长翠;黄卫东 刊期: 2015年第16期

  • 老年非小细胞肺癌患者的临床分布与治疗方法研究

    目的:探讨老年非小细胞肺癌( NSCLC)在患者中发病特征及不同治疗方式的效果比较。方法收集2010~2013年由该科治疗的188例70岁以上 NSCLC 患者的临床资料,进行性别及年龄分布的统计以及与同时期70岁以下肺癌患者在治疗方法上进行比较。结果老龄NSCLC患者发病情况上,男性多于女性,随着年龄的增加,男女患者比例缩小,而接受手术治疗却逐渐减少;而当患者年龄超过80岁后,患者采取抗肿瘤治疗的配合状况大大减低。结论老龄NSCLC患者人数随着年龄的增加而逐渐减少,而相应女性患者比例却不断增高;老龄患者在治疗方式上倾向非手术方式的其他治疗手段;结合患者的个人体质,采用合理的多元综合治疗(手术、化疗、放疗、靶向治疗)是老龄NSCLC患者的治疗特点。

    作者:张丽萍;孙宏斌;李文宇;翟旭杰 刊期: 2015年第16期

  • 右美托咪定对老年心脏瓣膜置换术患者心肌保护和脑保护的影响

    目的:探讨右美托咪定对老年心脏瓣膜置换术患者心肌保护和脑保护的影响。方法选取拟行心脏瓣膜置换术老年患者110例为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组各55例,观察组给予右美托咪定微量泵静脉注入,并维持至手术结束,对照组给予生理盐水输注,比较两组不同时点心肌保护指标和脑保护指标。结果 T5、T6、T7、T8时点,观察组肌钙蛋白Ⅰ( cTnI)、心型脂肪酸结合蛋白( H-FABP)明显低于对照组,T6、T7、T8时点,肌酸激酶同工酶( CK-MB)明显高于对照组;T3、T4、T6时点时,观察组动脉血浆特异性烯醇化酶( NSE)、S-100β蛋白明显低于对照组;T3、T4时点时,观察组颈内静脉血氧饱和度( SjvO2)明显高于对照组,Ca-jvO2明显低于对照组;T3、T4时点时,观察组血氧饱和度( PaO2)明显高于对照组,脑氧摄取率( ERO2)明显低于对照组。结论右美托咪定有助于下调 cTnI、H-FABP、NSE、S-100β蛋白、ERO2表达,上调 CK-MB、Sj-vO2、PaO2表达,从而起到心肌保护和脑保护作用。

    作者:张玉辉;高亚坤;肖连波;杨明;周继梧 刊期: 2015年第16期

  • 脾多肽注射液对脑卒中合并肺感染患者疗效及对血清中IL-18和IL-35的影响

    目的:观察注射用脾多肽注射液对脑卒中合并肺感染患者的治疗效果及对血清中白细胞介素( IL)-18和IL-35水平的影响。方法脑卒中合并肺感染患者126例随机分为观察组、对照组各63例。对照组在常规治疗脑卒中的同时依据药敏培养结果加用抗生素。观察组在对照组治疗基础上加用脾多肽注射液。于治疗前、后检测血清中IL-18和IL-35的表达。结果治疗10 d后,观察组总有效率明显高于对照组。观察组治疗后血清中IL-18的表达下降值、IL-35的表达升高值明显高于对照组。结论注射用脾多肽注射液对脑卒中合并肺感染的治疗效果理想,同时能有效地下调血清中IL-18的表达,上调血清中IL-35的表达,优化内环境。

    作者:李万春;赖学章;孟晏莉 刊期: 2015年第16期

  • NINJ2基因多态性与血管性认知功能障碍的相关性

    目的:探讨神经损伤诱导蛋白(NINJ2)基因 rs11833579、rs12425791位点多态性与血管性认知功能障碍(VCI)遗传易感性的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术( PCR-RFLP)对112例VCI患者( VCI组)、108例脑梗死后无认知功能障碍患者( NCI组)及113例健康者(对照组)的NINJ2 rs11833579、rs12425791位点进行基因型检测,比较基因型和等位基因频率在各组是否存在差异并进行关联性分析。结果①rs11833579位点:三组间基因型、等位基因分布差异均无统计学意义(χ2=1.942,P>0.05;χ2=1.343,P>0.05);多元 Logistic 回归校正危险因素后,VCI组及NCI组AA+AG 基因型对患病风险无明显影响。②rs12425791位点:三组基因型、等位基因分布差异有统计学意义(χ2=27.036,P<0.05;χ2=19.816,P<0.05);多元Logistic 回归校正危险因素后,VCI组及NCI组AA+AG 基因型与 VCI、脑梗死的发病呈相关关系(OR=1.785,95%CI 1.008~3.159,P<0.05;OR=1.864,95%CI 1.061~3.274,P<0.05)。结论 NINJ2 rs12425791基因多态性与 VCI、脑梗死发病显著相关。 NINJ2 rs12425791可能是VCI、脑梗死的共同易感基因。

    作者:贾少坤;王雁;隋爱华 刊期: 2015年第16期

  • 血浆CysC及BNP水平对冠心病患者经皮冠状动脉介入术预后的评估价值

    目的:探讨经皮冠状动脉介入治疗( PCI)术前血浆胱抑素C( CysC)和B型脑钠肽( BNP)水平对冠心病PCI术后患者预后评估中的价值。方法选择2012年1月至2014年1月行PCI术的冠心病患者75例,以PCI术前血浆CysC和BNP均值为界值分为低水平组(≤均值)和高水平组(>均值),比较CysC、BNP各组的一般临床特征、冠状动脉病变特点、PCI术中情况及住院期间和随访期间(1年)主要心血管事件( MACE包括非致死性再次心肌梗死、靶血管血运重建、心脏性死亡)发生情况。结果75例患者的血浆 CysC 水平为(1.37±0.41) mg/L, BNP 水平为(324.09±31.64)ng/L,且两者水平呈正相关(r=0.552,P<0.05);CysC、BNP不同水平组的年龄、性别、体重指数、血压、高血压、高血脂、糖尿病、吸烟、饮酒、梗死位置、Killip分级、hs-CRP、红细胞计数、红细胞体积、血红蛋白、白蛋白、尿酸及心率的差异均无统计学意义(P>0.05),CysC、BNP高水平组的 CTnI、CK-MB、LVEDD和hs-CRP水平均高于低水平组,但LVEF低于低水平组(P<0.05)。 CysC、BNP不同水平组的病变支数、梗死相关动脉及住院期和随访期的非致死性再次心肌梗死、心脏性死亡发生率均无统计学意义(P>0.05),与低水平组相比,CysC、BNP高水平组 PCI后ST段持续升高例数、总MACE发生率较高,PCI成功率和无MACE存活率较低,且CysC高水平组的PCI后TIMI血流<3级的例数较高( P<0.05)。结论冠心病患者术前血浆CysC及BNP水平与PCI效果及预后相关,且术前两者较高水平者的PCI效果及预后较差。

    作者:鲍东来;黄伟剑;单培仁;黄周青;姜昌浩;陈智理;宗金波 刊期: 2015年第16期

  • 他汀类药物对老年冠心病患者动脉粥样硬化程度的影响

    目的:探讨他汀类药物对老年冠心病患者动脉粥样硬化程度的影响。方法选取128例老年冠心病患者为研究对象,所有患者均未合并高血压、心衰等其他心血管疾病,其中59例患者已服用过他汀类药物,归为观察组,其余69例患者未服用过他汀类药物,归为对照组。比较两组的一般资料、实验室检查结果以及中臂踝脉搏波速度(ba-PWV)、心-踝血管指数(CAVI)、踝肱指数(ABI)、桡动脉反射波增强指数(rAI)等动脉粥样硬化指标。结果观察组的TC与LDL-C均显著低于对照组( P<0.05)。观察组的ba-PWV、CAVI、ABI和 rAI等动脉粥样硬化程度指标均显著低于对照组(P<0.05)。结论他汀类药物可改善冠心病老年患者的动脉粥样硬化程度,可能据此改善患者的预后。

    作者:赖诚民;陈勇 刊期: 2015年第16期

  • 自体免疫细胞联合TP化疗方案对老年晚期非小细胞肺癌患者生存的影响

    目的:探讨自体免疫细胞联合紫杉醇+顺铂( TP)化疗方案对老年晚期非小细胞肺癌( NSCLC)患者生存的影响。方法选取2008年4月至2011年4月来该院接受治疗的老年晚期NSCLC患者65例,将其随机分为对照组和观察组,对照组采用 TP化疗方案,观察组采用树突细胞-杀伤细胞( DC-CIK)联合TP化疗方案进行治疗。疗程结束后,流式检测治疗前后患者外周血 CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD16+CD56+、CD4+CD25+细胞的比例,比较对照组和观察组治疗前后的机体免疫功能变化;采用电化学发光免疫分析法测定两组患者治疗前后外周血血清癌胚抗原( CEA)和细胞角蛋白19可溶性片段(CYFRA21-1)水平;比较两组患者治疗后的累积生存率。结果治疗后观察组淋巴细胞比例改善明显优于对照组(P<0.05);治疗后观察组外周血血清CEA和CYFRA21-1含量与治疗前和对照组治疗后相比显著下降(P<0.05);观察组累积生存率明显高于对照组( P<0.05)。结论自体免疫细胞联合紫杉醇+TP化疗方案能够显著改善老年晚期 NSCLC 患者免疫功能,有效降低血清肿瘤标志物水平,提高生存率。

    作者:岳恺 刊期: 2015年第16期

  • 脾切断流术对老年肝硬化门静脉高压症患者血清HGF、TGF-β1和肝功能的影响

    目的:检测老年肝硬化门静脉高压症患者行脾切断流术后血清干细胞生长因子(HGF)、转化生长因子(TGF)-β1和肝功能指标的水平。方法采用酶联免疫分析方法测定86例老年肝硬化门静脉高压症患者血清 HGF 和 TGF-β1水平,同期的30例健康体检者作为对照组。采用全自动生化分析仪测定肝功能生化指标,包括总胆红素(TBIL)、转氨酶(AST、ALT)、胆碱酯酶(CHE)、前白蛋白(PA)。对比患者术前及术后血清因子水平和肝功能生化指标的变化。结果与正常对照组相比,血清指标HGF和TGF-β1在门静脉高压症患者中的表达显著增高( P<0.05)。手术治疗组患者和保守治疗组患者的血清HGF含量在术后显著升高,TGF-β1水平含量在术后显著降低,与术前相比差异显著( P<0.05)。术后1~12 w手术治疗组和保守治疗组患者血清HGF水平逐渐升高,TGF-β1水平逐渐降低,且手术治疗组血清水平与保守治疗组差异显著(P<0.05)。结论脾切断流术可以提升老年肝硬化门静脉高压症患者血清HGF水平,降低TGF-β1水平,改善患者肝功能。

    作者:许日昊 刊期: 2015年第16期

  • 雌激素受体基因与微小RNA在冠心病中的相关性

    目的:探讨微小RNA miR-18a和miR-22与雌激素受体基因(ESR)1在冠心病(CAD)中表达的相关性。方法从 GEO数据库中获取110例冠心病患者和112正常人的芯片数据集,通过高通量分析方法,确定异常表达基因,并采用TargetScan对该基因进行分析,预测对其进行调控的微小RNA;收集30例正常组织为对照组,30例CAD为实验组,用实时荧光定量PCR方法检测ESR1、miR-18a、miR-22的mRNA相对表达量。结果通过对芯片数据进行分析,一共发现390个在CAD中异常表达的基因,分子网络分析显示 ESR1是其中的关键节点基因,并预测ESR1可能是miR-18a和miR-22调控的靶点基因;30对临床样本的检测结果显示,miR-18a水平和ESR1水平呈负相关关系,而miR-22的表达与ESR1表达量之间并无明显的相关性。结论 CAD中有显著表达异常的基因及micro RNA可为将来相关的治疗研究提供数据和理论支持。

    作者:马波江;曹晔;朱艳 刊期: 2015年第16期

  • 不同碘营养状态对老年大鼠甲状腺病理改变的影响

    目的:研究不同碘营养状态下老年大鼠甲状腺的病理改变的影响。方法选择20只20月龄正常 Wistar大鼠,随机分成对照组( NC组)和高碘组( HI组)。选择20只20月龄低碘甲状腺功能低下模型Wistar大鼠24只,随机分成低碘模型组( LI组)和低碘恢复组( LI-AI组),进行相应碘浓度饲养后检测四组大鼠甲状腺组织重量、三碘甲腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)和促甲状腺素(TSH)水平,同时检测甲状腺微粒体抗体( TMAb)和甲状腺球蛋白抗体( TGAb)水平,切片染色观察各组大鼠甲状腺组织的病理改变及CD4+淋巴细胞浸润情况。结果高碘和低碘营养状态均可造成老年大鼠的甲状腺肿大现象,降低其血清中四碘甲状腺原氨酸和三碘甲腺原氨酸水平,提高促甲状腺素( TSH)水平及 TMAb、TGAb水平。高碘引起老年大鼠甲状腺滤泡结构破坏,而低碘主要造成滤泡上皮细胞增生。高碘和低碘均可造成滤泡大小改变及严重的 CD4+T淋巴细胞浸润。对低碘大鼠进行适量补充碘可以缓解低碘造成的甲状腺肿大、甲状腺内激素改变、甲状腺自有抗体水平、组织损伤和CD4+淋巴细胞浸润情况。结论不同碘营养状态对老年大鼠甲状腺的病理改变具有重要作用。

    作者:孙建伟;赖明华;李莉;郝杰;王国伟 刊期: 2015年第16期

  • 急诊PCI治疗急性ST段抬高型心肌梗死患者的预后影响因素

    目的:探讨不同因素对急性ST段抬高型心肌梗死( STEMI)患者行急诊经皮冠状动脉介入治疗( PCI)预后情况的影响。方法采用回顾性分析方法,对2010年1月至2014年8月入住该院确诊为STEMI死并行急诊 PCI 的317例患者的临床资料进行调查分析。结果再灌注时间<2 h患者即刻血流心肌梗死溶栓治疗(TIMI)3级患者比例、左室射血分数(LVEF)≥50%患者比例、ST回落≥50%患者比例高于2~6 h 的患者,出血或血肿发生率及死亡率均低于2~6 h患者( P<0.05)。替罗非班组患者即刻血流 TIMI 3级患者比例、LVEF≥50%患者比例、ST回落≥50%患者比例均高于对照组(P<0.05)。结论对于STEMI患者采用急诊PCI治疗时,采用早期灌注及应用替罗非班均可改善患者预后;多因素分析发现,急诊PCI治疗STEMI患者的预后危险因素有年龄、糖尿病史、既往心肌梗死史、TIMI血流分级、吸烟史、再灌注时间、并发心源性休克及并发恶性心律失常。

    作者:周志宏;邢波;林德洪 刊期: 2015年第16期

  • CDK2 shRNA慢病毒载体的构建及其基因沉默效应

    目的:构建CDK2 shRNA慢病毒载体,并在黑色素瘤细胞B16-F1中鉴定其基因沉默效应。方法体外构建3个慢病毒重组目的质粒pUL-CDK2-shRNAs和1个阴性对照慢病毒重组质粒pUL-NC-shRNA,转化感受态细胞,PCR鉴定后进一步测序验证;293T细胞中测定病毒滴度;用重组慢病毒感染B16-F1细胞测定其感染效率,RT-PCR和Western印迹检测其对 B16-F1细胞中CDK2的基因沉默效应。结果 PCR鉴定后进一步测序表明,成功构建了重组慢病毒质粒;病毒滴度为4.5×107~5.5×107 TU/ml;用重组慢病毒感染 B16-F1细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率可达90%;RT-PCR和Western印迹结果表明,与未感染组和NC-shRNA感染组细胞相比,CDK2-shRNA1、CDK2-shRNA2、CDK2-shRNA3感染的细胞中CDK2 mRNA和蛋白表达均受到不同程度抑制(P<0.05),以 CDK2-shRNA3感染组的抑制率高,RT-PCR和 Western Blot 检测其抑制率分别为78.5%±4.23%和70.5%±3.54%。结论利用RNAi技术成功构建了3种CDK2-shRNA重组慢病毒载体,均可有效感染B16-F1细胞并具有一定的基因沉默效应,其中以针对靶位点1012-1020的pUL-CDK2-shRNA3基因沉默效应强,为进一步研究CDK2基因沉默对黑色素瘤化疗敏感性的影响奠定了基础。

    作者:晋佳路;朱仁书;谢育媛;刘红春 刊期: 2015年第16期

中国老年学杂志

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主管:中国老年学学会

主办:中国老年学学会 吉林省卫生厅