安卓玲；李鹏飞；迟小华；张茜；马萍；刘丽宏
目的 探讨橘红素对人胃癌AGS细胞增殖和周期的作用及其机制.方法 采用MTT法观察橘红素对人AGS胃癌细胞增殖的作用;流式细胞仪检测橘红素对细胞周期的影响;Western blot检测橘红素对Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1和ERK、p-ERK蛋白表达的影响.结果 橘红素可明显抑制AGS胃癌细胞的增殖(P<0.01),呈时间和剂量依赖性.橘红素作用于AGS细胞24 h,S期细胞百分比明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);作用48和72 h,S期阻滞消失,G2/M期细胞百分比增高(P<0.05,P<0.01).作用48 h,橘红素可上调Cyclin B1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),对Cyclin D1和Cyclin E1蛋白表达无明显影响;对ERK蛋白表达无影响,可降低p-ERK蛋白的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性.结论 橘红素可明显抑制人AGS胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期和G2/M期,主要机制可能是通过抑制ERK磷酸化和上调CyclinB1蛋白表达.
作者：董杨；季光；施建蓉；曹爱丽；谢建群；吴大正 刊期： 2012年第06期
目的 探讨薯蓣皂苷(Dioscin,Dio)对人肾癌786-0细胞缝隙连接(Gap junction,GJ)功能的影响及其作用机制.方法 MTT法测Dio对786-0细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞术结合荧光示踪法分析GJ功能变化,RT-PCR和Western blot分析连接蛋白基因表达.结果 0~2.5μmol·L-1 Dio处理786-0细胞48h不影响其存活率;用0、0.1、0.5、1和2 μmol·L-1 Dio处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,Dio能明显提高786-0细胞Calcein传递,流式细胞术分析对照组和实验组的绿色荧光细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)分别是0.13±0.01、0.23±0.01、0.30±0.01、0.56±0.02和1.15±0.02,各实验组G4/G3值明显高于对照组 (P<0.01);RT-PCR和Western blot分析结果显示,用0、0.1、0.5、1和2 μmol·L-1 Dio处理细胞48 h对其Cx43、Cx32和Cx26表达无明显影响.结论 体外较低浓度Dio能够有效促进786-0细胞GJ功能,且具有明显的剂量效应关系.但Dio促进GJ机制并不是通过上调Cx43、Cx32和Cx26蛋白表达途径.
作者：张广献；肖建勇；邵红伟；赖炫城；丘鹏翔；吴映雅；谭宇蕙；杜标炎 刊期： 2012年第06期
目的 克隆人中脑星形胶质来源的神经营养因子MANF(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophie factor)基因的启动子区域,并鉴定其转录活性.方法 利用TESS在线软件分析MANF基因上游序列中潜在的顺时作用元件.以HepG2细胞的总基因组为模板,通过PCR反应扩增了MANF基因5′非翻译区1 415 bp片段,并将此片段插入到不含有启动子的pEGFP-1载体中构建了pEGFP-1-MANF-5F重组质粒.用脂质体介导的方法将pEGFP-1-MANF-5F质粒转染到293T细胞,在倒置显微镜下观察绿色荧光的表达.同时,将上述MANF基因5′非翻译区1 415 bp片段插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,以构建质粒pGL3-MANF-5F,并通过共转染内参质粒pRL-TK到N2A细胞中,24 h后检测双荧光素酶的表达.结果 重组质粒pEGFP-1-MANF-5F转染293T细胞后,在细胞中可见绿色荧光蛋白; pGL3-MANF-5F重组质粒在N2A细胞中检测到双荧光素酶的活性,且在Tunicamycin诱导时表达明显升高;结论 已成功克隆了MANF基因的5′端非翻译区,并证实该区域具有启动子活性,且内质网应激可调节MANF的启动子活性,这为进一步研究MANF基因在疾病中的表达调控机制奠定了基础.
作者：张利；陆鹏；王涛；沈玉先 刊期： 2012年第06期
目的 探讨山姜素能否通过活化孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达及对CYP3A4 mRNA的实际诱导作用.方法 在人结肠癌LS174T细胞中,用瞬时共转染报告基因实验研究山姜素(1～50 μmol·L-1)对PXR介导的CYP3A4基因的转录激活;用荧光定量RT-PCR方法检测其对CYP3A4 mRNA的实际诱导.结果 10 μmol·L-1浓度山姜素能够通过活化PXR诱导CYP3A4的转录(1.63倍);10和20 μmol·L-1山姜素能够明显上调CYP3A4 mRNA(2.28倍和1.65倍)的表达.结论 PXR途径也许是山姜素诱导CYP3A4基因表达的调控因素之一.
作者：窦薇；丁丽丽；张晶晶；王峥涛 刊期： 2012年第06期
目的 使用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测糖尿病肾病病人体内左卡尼汀(L-carnitine,LC)、乙酰左卡尼汀(acetyl-L-carnitine,ALC)、丙酰左卡尼汀(propionyl-L-carnitine,PLC)含量的变化,观察左卡尼汀口服液对2型糖尿病肾病患者的治疗作用以及其与药物代谢之间的关系.方法 40例早期及临床糖尿病肾病患者随机分为治疗组、对照组(各20例),两组均给予糖尿病常规治疗,治疗组加用左卡尼汀口服液(1 g,Bid),疗程为4周.观察治疗前、后2组患者GLU、TG、CHO、LDL-C、HDL-C、BUN、Cr、UA、尿PRO的变化以及体内卡尼汀群的经时变化和代谢情况.结果 (1)治疗组给药4周后,与治疗前和对照组比较GLU、TG、CHO、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高(P<0.01或P<0.05);(2)治疗组用药4周后血BUN与用药前比较明显下降(P<0.05),尿PRO与治疗前和对照组同期比较均明显改善(P<0.01);(3)血浆LC、ALC、PLC浓度与给药前和对照组同期比较浓度明显升高(P<0.01),血浆LC浓度给药4周比给药2周明显升高(P<0.01).结论 左卡尼汀口服液用于2型糖尿病肾病患者的治疗,能明显提高患者体内卡尼汀群的血药浓度,明显改善GLU、TG、CHO、LDL-C、HDL-C、BUN、PRO等临床指标.
作者：孙振龙；王晨静；曲海军；朱莉；荆凡波；王春波 刊期： 2012年第06期
目的 探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对突触融合蛋白Syntaxin1(SYX1)在哮喘大鼠肺组织中表达水平的调节及相互作用.方法 30只健康Wistar大鼠按随机原则分为对照组、哮喘组、哮喘+地塞米松组,每组10只.通过卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发建立哮喘大鼠模型,采用免疫组织化学、逆转录PCR及蛋白免疫印迹检测3组间HSP70及SYX1基因和蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测HSP70与SYX1的相互关系.结果 与对照组比较,哮喘组HSP70及SYX1基因和蛋白表达水平均增加,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05);与哮喘组比较,哮喘组+地塞米松组HSP70及SYX1基因与蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05),但与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05,P＞0.05).免疫共沉淀结果显示在哮喘大鼠肺组织中HSP70与SYX1存在相互作用.结论 HSP70及SYX1在哮喘肺组织中表达水平均明显增高,HSP70通过调节SYX1表达水平及相互作用共同参与哮喘的发病机制,且其表达受地塞米松的抑制,为临床寻找药物干预新的靶点提供了理论依据.
作者：魏小敏；费广鹤；荣学本；李静 刊期： 2012年第06期
目的 观察腺苷A1受体激活在钙调磷酸酶(CaN)通路上对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用及机制.方法 体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,以Iso 10 μmol·L-1诱导心肌细胞肥大,观察腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenylIsopropyl) adenosine(R-PIA)1 μmol·L-1对其作用,进一步探讨钙调神经磷酸酶特异性抑制剂环孢菌素A(CSA)1 μmol·L-1、PKA抑制剂cAMP三乙胺盐(RP-cAMPS)1 μmol·L-1、百日咳毒素(PTX)5 mg·L-1存在时,腺苷A1受体的激活对心肌细胞肥大的影响.通过Lowry法测心肌细胞蛋白含量;RT-PCR法检测心肌细胞心钠素(ANP)的mRNA表达;Western blot法测心肌细胞CaN的相对表达水平;以Fluo-3/AM为荧光探针,共聚焦显微镜下测量心肌细胞[Ca2+]i瞬变.结果 10 μmol·L-1 Iso可以诱导心肌细胞肥大,腺苷A1受体激动剂R-PIA可以使其蛋白含量降低、ANP的mRNA表达减少、CaN相对表达降低、[Ca2+]i荧光强度减小,CSA、RP-cAMPS有类似抑制作用,PTX预处理的情况下,R-PIA对Iso诱导的心肌肥大的抑制作用消失.结论 腺苷A1受体可以通过钙调磷酸酶通路抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制与降低细胞内[Ca2+]i浓度及CaN表达有关.
作者：邢玲；杨育红；王洪新；鲁美丽 刊期： 2012年第06期
目的 作为模型细胞之一,小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)是药理学、药效学研究的重要工具和对象.然而,由于巨噬细胞增殖能力较弱,代谢标记细胞内蛋白一直是巨噬细胞生物学中的一个难题.因此,本研究以SILAC(stable isotope labeling with amino acids in cell culture)方法标记BMM.方法 小鼠骨髓细胞的分离,以M-CSF诱导6 d并制备BMM,同时,SILAC标记细胞内蛋白;进而,裂解细胞并收集蛋白质,以SDS-PAGE进行初步分离,经胶内酶解成肽段,再通过质谱分析测定,统计得其标记效率.结果 小鼠骨髓细胞在分化6 d时点成熟BMM可占细胞总数的0.965.以70 ku条带为研究对象,d 6、8和d 10鉴定到重链赖氨酸标记蛋白数分别为18、12和13个.其中,有8个蛋白在该3个时点中均被检出.统计结果表明3个时点的重链赖氨酸蛋白标记效率分别为(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%和(90.40±0.02)%,达到了SILAC研究的要求.结论 该方法解决了BMM的SILAC标记问题,可为以巨噬细胞为研究对象的药理学研究提供有效的研究手段.
作者：王通；郭嘉慧；陈智鹏；银兴峰；马文心；崔毅峙 刊期： 2012年第06期
肼是化学合成工业及制药领域的重要中间产物,也是肼类药物的共同代谢产物.肼具有肝、肾、中枢神经等多器官毒性,严重威胁人类健康.随着生命科学技术的发展,代谢组学能够全面、整体地获得机体受到外源性刺激后体内内源性小分子代谢物的扰动信息.代谢组学已用于发现与肼损伤相关的具有特殊生物功能的可能生物标志物.该文总结了近年来基于代谢组学方法对肼引发损伤相关的小分子代谢物的研究进展,以期为肼损伤的机制研究、早期发现及治疗提供研究思路.
作者：安卓玲；李鹏飞；迟小华；张茜；马萍；刘丽宏 刊期： 2012年第06期
该文主要对近5年来有关人参皂苷Rg1(Rg1)的非心血管和神经系统药理活性的研究进展进行了综述.重点概括了Rg1增强♂性功能和雌激素样作用、免疫调节与抗炎作用、抗癌和调节葡萄糖代谢的作用,与其抗肝、肾纤维化作用的研究现状,并对其作用机制进行了分析,为深入研究与开发利用人参皂苷Rg1提供参考.
作者：李文娜；肖苑；黄燮南 刊期： 2012年第06期
目的 研究不同间隔时间冰片处理对大鼠栀子苷脑内浓度的影响,以指导临床用药.方法 冰片分别灌胃5、15、30 min后静脉注射栀子苷,不同时间点取血取脑,样本预处理后采用HPLC检测栀子苷浓度,采用3P97计算血-药和脑-药参数,并获取脑靶相关参数.结果 栀子苷在血浆和脑组织分布符合二室开放模型,冰片处理后可提高栀子苷脑-药动力学的Cmax和AUC,延长MRT,缩短Tmax.其中冰片15 min组对栀子苷脑内相对生物利用度和脑靶指数的提高作用明显.结论 冰片处理后可提高栀子苷入脑量和入脑速度,冰片灌胃15 min后血脑屏障开放明显.
作者：喻斌；阮鸣；董小平；金路；瞿红霞 刊期： 2012年第06期
目的 通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins dimer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制.方法 免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化.结果 TNF-α(10 μg·L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50 μmol·L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平.结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关.
作者：丁伟斌；梁统；周克元 刊期： 2012年第06期
高血压血管平滑肌重构伴随Rho/Rho激酶通路的激活,抑制Rho激酶可逆转血管平滑肌增生以及血压升高.同时,在高血压中有容积调节性氯通道开放,这与Rho激酶通路激活有关.该文就高血压过程中Rho激酶与容积调节性氯通道的关系做一综述.
作者：马明明；关永源 刊期： 2012年第06期
脑缺血损伤涉及多种病理过程,其中兴奋性毒性是关键机制之一.谷氨酸是脑内主要的兴奋性递质,谷氨酸及其受体的病理变化是引起兴奋性毒性的重要病理基础.该文综述了脑缺血后谷氨酸异常释放、谷氨酸受体表达变化及受体后信号传导等病理机制,及以上述机制为靶点的药物研究进展.
作者：宋文婷；徐立；刘建勋 刊期： 2012年第06期
目的 研究黄芩苷神经元跨膜转运的特点,部分阐释黄芩苷发挥神经系统保护作用的物质性基础.方法 以PC12细胞为研究对象,使用高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)法检测黄芩苷孵育细胞内的物质含量及相关代谢产物.结果 100 mg·L-1黄芩苷给药30 min后,胞内黄芩苷浓度达峰值,8 h后胞内已测不出黄芩苷;在50~400 mg·L-1的给药浓度下,胞内黄芩苷含量与给药剂量呈正相关;抑制剂Verapamil与Nimodipine对黄芩苷转运有明显影响;同时胞内检测出黄芩素、6-甲氧基-黄芩苷两种结构类似物.结论 黄芩苷能够浓度依赖性的跨膜入胞,此过程受相关抑制剂影响,并产生代谢产物.
作者：赵爽；雷帆；李慧颖；王玉刚；柴玉爽；杜力军 刊期： 2012年第06期
目的 分析中药注射剂(traditional Chinese medicine injection,TCMI)对腘窝淋巴结免疫细胞与致敏相关的三类10余种表面分子表达的影响,探讨其用于评价TCMI致敏的可行性.方法 选用♀ BALB/c小鼠,选取临床上报道有过敏病例发生的痰热清等11种TCMI,后肢足趾部注射免疫动物1次,5 d后处死动物,流式细胞术检测注射侧腘窝淋巴结效应T细胞、B细胞、抗原提呈细胞及早期活化分子CD69+ 、MHCⅡ、协同刺激分子CD86+、CD40+等3类10余种表面分子的变化.结果 痰热清、苦碟子、脉络宁注射液引起三类表面分子明显变化,具有较大的致敏潜能.柴胡、炎琥宁、刺五加等注射液所致的相应变化不明显.结论 对免疫细胞三类表面分子变化的综合考察可以初步判断TCMI致敏潜能的强弱,结果与现有不良反应报道具有一致性.
作者：黄路芬；董燕；王青；周联；王培训 刊期： 2012年第06期
目的 探究海参粘多糖(hGAG)对MDA-MB-231乳腺癌细胞介导的凝血过程的影响及其作用机制.方法 采用MDA-MB-231乳腺癌细胞为模型,观察经不同浓度的hGAG处理后的肿瘤细胞对血浆复钙时间的影响;采用S-2222发光底物检测凝血因子Xa(FXa)的生成;以Fluo-4/AM为荧光探针,在荧光酶标仪下检测细胞Ca2+的变化;流式细胞仪检测细胞表面组织因子(TF),采用real-time PCR和Western blot的方法分别对TF的mRNA和蛋白水平进行测定;并观察hGAG对AKT、MAPK、NF-κB等信号通路的影响.结果 hGAG 0.01～1 μmol·L-1可以呈剂量依赖性的方式延长肿瘤细胞诱导的血浆复钙时间,并降低FXa的生成,对Ca2+无明显影响,而能够下调TF的mRNA和蛋白表达,抑制p38的磷酸化而对其它信号通路无明显影响.结论 hGAG通过下调TF的表达及p38的磷酸化而抑制MDA-MB-231细胞诱导的凝血过程.
作者：赵杨；王生；陶丽；王爱云；陈文星；郑仕中；陆茵 刊期： 2012年第06期
成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)是介于平滑肌细胞(smooth muscle)和成纤维细胞(fibroblast)之间的一种细胞.它被公认为在伤口愈合和各种组织纤维化的过程中起关键作用.该文从信号转导角度介绍了纤溶酶系统(plasminogen system)与成肌纤维细胞细胞凋亡之间的联系,通过对纤溶酶系统的调节,可以影响到人体各处组织中MF的凋亡和分化,进而缓解甚至治疗相应的疾病.新的研究结果表明,PAI-1的小分子抑制剂和他汀类药物可以通过纤溶酶系统来影响MF的凋亡,它们有望成为治疗组织纤维化的新药.
作者：宋辉；王明席；许瑞安 刊期： 2012年第06期
目的 研究川芎嗪衍生物H168抑制肝星状细胞(HSC-T6)增殖的机制.方法 MTS比色法观察H168对HSC-T6细胞增殖的影响;流式细胞仪检测H168对细胞周期的影响;应用Western blot和Real time PCR方法观察H168对p21/p27蛋白及mRNA表达的影响.结果 MTS结果显示H168具有明显的抑制HSC-T6增殖的作用,随着药物浓度的增大,对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,呈现量效关系.流式细胞周期检测发现H168作用24 h后,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少;Western blot结果显示H168通过促进p21/p27蛋白表达抑制细胞的增殖;进一步采用Real time PCR研究发现,H168能够从mRNA水平促进p21/p27表达.结论 H168能抑制HSC-T6细胞的增殖,这主要是通过促进p21/p27蛋白和mRNA的表达而抑制HSC-T6细胞增殖.
作者：张雪娇；倪春艳；张峰；陆茵；郑仕中 刊期： 2012年第06期
目的 观察富氢液对大鼠全脑缺血/再灌注损伤后海马线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)及细胞凋亡的影响.方法 96只成年健康♂SD大鼠,体质量250～300 g,随机分为6组(n=16):假手术组(S)、缺血/再灌注组(IR)、生理盐水组(NS)、富氢液组(H)、苍术苷组(A)、富氢液+苍术苷组(HA).采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,缺血15 min后恢复灌注,S组仅分离椎动脉和颈总动脉,不进行阻闭.H组和HA组于再灌注即刻腹腔注射富氢液 5 ml·kg-1,其余组腹腔注射等容量生理盐水.A组和HA组于再灌注前10 min侧脑室注射苍术苷15 μl,NS组和H组侧脑室注射等容量生理盐水.再灌注后24 h取海马组织,分离海马细胞线粒体,通过紫外分光光度仪检测海马mPTP的开放情况,Western blot法测海马线粒体和胞质细胞色素C(Cyt C)水平,免疫组化法观察Bcl-2、Bax在海马CA1区表达,并计算Bcl-2和Bax表达的比值(Bcl-2/Bax),透射电镜观察海马CA1区线粒体超微结构.结果 与S组比较,其余5组mPTP 吸光度的改变值升高,Bcl-2和Bax表达上调,线粒体Cyt C表达下调,胞质Cyt C表达上调(P<0.05);与IR组比较,H组mPTP吸光度的改变值降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,线粒体Cyt C表达上调,胞质Cyt C表达下调(P<0.05);与H组比较,HA组mPTP吸光度的改变值升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调,线粒体Cyt C表达下调,胞质Cyt C表达下调(P<0.05);IR组与NS组间上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).透射电镜结果显示富氢液可以改善全脑缺血后线粒体超微结构的改变,苍术苷可部分取消富氢液的上述改变.结论 富氢液能有效减轻大鼠全脑缺血/再灌注损伤,减少Cyt C易位至胞质,从而抑制大鼠脑缺血/再灌注后细胞凋亡,其机制与抑制海马细胞mPTP的开放有关.
作者：崔耀梅；程慧娴；曾宪明；曾秋婷；高玮；段满林；徐建国 刊期： 2012年第06期
中国药理学通报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国药理学会
