学术投稿

人工miRNA簇表达载体的构建及检测

李纪鹏;付汉江;秦宜德;郑晓飞

关键词:微RNAs, 遗传载体, 基因表达
摘要:目的 构建人工miRNA表达簇,并研究miRNA的加工对蛋白质表达水平的影响.方法 从miRNA表达库中扩增miR-34a及miR-424的前体序列,将上述两种miRNA串联,构建PGL-34a-424人工miRNA簇表达载体.通过RT-PCR的方法检测人工miRNA簇的表达情况.然后将miRNA前体突变,再用荧光素酶报告基因技术研究miRNA的加工对蛋白质表达的影响.结果 成功构建人工miRNA簇表达载体,荧光素酶实验显示miRNA的加工能够抑制蛋白的表达.结论 人工miRNA表达簇能够高效表达,miRNA的加工对蛋白质的表达有抑制作用.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 后腹腔镜CO2气腹手术时机体神经内分泌的改变

    目的 观察CO2气腹后腹腔镜手术患者神经内分泌的变化.方法 选择后腹腔镜患者23例,手术时间均在1 h左右,于气腹前10 min和气腹后30 min、1 h或拆气前以及放气后30 min、1 h分别采取静脉血测血清甲状腺激素、皮质醇、胰岛激素的变化.结果 CO2气腹术中皮质醇激素明显升高(P<0.05),甲状腺激素、胰岛激素术中有变化,但无统计学意义.结论 泌尿外科后腹腔镜手术期间患者皮质醇激素增高,提示后腹腔镜术中亦存在的应激反应,因此缩短手术时间、施行非气腹手术或降低气腹压是适宜的.

    作者:程宗三;梁朝朝;徐慧琴;张贤生;郝宗耀;周骏;樊松 刊期: 2010年第03期

  • 瑞芬太尼和丙泊酚联合靶控输注在小儿气管内全麻中的应用效果

    目的 比较小儿气管内全麻中靶控输注不同浓度瑞芬太尼联合丙泊酚靶控输注对患儿血流动力学、脑电双频指数及听觉诱发电位的影响.方法 瑞芬太尼血浆靶控输注浓度分别为2、 4 ng/ml(R2、R4).通过调节丙泊酚浓度使患儿维持在合适的麻醉深度,将患儿入室后(T0)、靶控输注后3 min(T1)、气管插管前(T2)、气管插管后(T3)和摘除扁桃体时(T4)的心率(HR)、平均动脉压(MAP)、脑电双频指数(BIS)和听觉诱发电位指数(AEPI)值纳入统计分析.结果 ① R2组患儿T3时点MAP、 HR、BIS和APEI与T0时点比较明显升高(P<0.05).② R4组患儿T3时点各项指标与T2时点比较差异无统计学意义(P>0.05).③ R2组患儿T4时点MAP、HR与T0时点比较略有下降,差异无统计学意义(P>0.05).④ R4组患儿T4时点MAP、 HR、BIS和APEI与T0时点比较,显著下降(P<0.05).⑤ R2组部分患者 HR>100次/min,与R4组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 靶控输注瑞芬太尼浓度4 ng/ml,同时复合靶控输注丙泊酚(浓度为1%),可以使BIS和AEPI值维持在临床麻醉状态下,同时能够维持术中血流动力学的相对平稳.

    作者:郭凤林;方才;胡利国;黄祥;李传耀 刊期: 2010年第03期

  • 超声测量胎儿多项生物指标预测巨大儿的临床价值

    目的 探讨B超测量胎儿多项生物学指标预测巨大儿的价值.方法 分析492例巨大儿B超测量的双顶径(BPD)、股骨长(FL)、头围(HC)、腹围(AC)、胸径(BD)等单因素与巨大儿体重的相关性,相关因素进行主成分回归分析得主成分回归方程,将此方程预测胎儿体重的结果及Hadlock3公式预测胎儿体重的结果与胎儿实际出生体重相比较.结果 单因素中BPD、BD、AC均有较高的相关性,相关系数分别为0.149、0.337、0.380(P<0.05).主成分回归方程预测体重和新生儿出生体重相对误差在±200 g以内,占75.61%,Hadlock3公式预测体重和新生儿出生体重相对误差在±200 g以内,占20.73%.结论 单因素中BPD、BD、AC与体重均有较高的相关性,AC与体重的相关性高于BPD、BD;主成分回归分析得出的回归方程比Hadlock3公式预测巨大儿体重有更高的精确度.

    作者:陈先侠;唐志霞;高淑萍;许超;曹云霞 刊期: 2010年第03期

  • GRIM-1蛋白在肺癌组织中的表达及其临床意义

    目的 研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(GRIM-1)蛋白在肺癌和癌旁组织中的表达和定位,探讨其临床意义.方法 应用免疫组化法和Western印迹法检测33例肺癌组织及相应癌旁组织中GRIM-1蛋白的表达情况,并分析其表达水平与临床病例参数的联系.结果 GRIM-1蛋白在肺癌组织和癌旁组织中均有不同程度的表达,表达主要定位于细胞浆中.GRIM-1蛋白在癌旁组织中阳性率为84.85%(28/33),而在肺癌组织中阳性率为63.64%(21/33),两者之间的差异有显著性(P<0.01).GRIM-1在肺癌组织中阳性表达与临床病理分期之间有关(P<0.01),Ⅰ~Ⅱ期GRIM-1阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期中的表达,而与患者性别、年龄、吸烟指数、组织分型均无关(P>0.05).GRIM-1蛋白在肺癌组织中的表达量(0.89±0.09)低于癌旁组织(1.58±0.18),两组间差异有显著性(P<0.01).结论 肺癌组织中GRIM-1蛋白表达随肿瘤临床分期升高而下降,提示GRIM-1作为凋亡促进基因,在肺癌的发生发展过程中可能起着较为重要的作用.

    作者:徐轲;江子丰;刘荣玉 刊期: 2010年第03期

  • 食管癌和肺癌术后乳糜胸的诊治

    目的 总结食管癌和肺癌术后乳糜胸的诊治经验.方法 对24例术后并发乳糜胸进行回顾性分析,采取保守治疗10例,手术治疗14例.结果 20例治愈,4例死亡.结论 乳糜胸应根据胸腔引流合理选择保守治疗或手术治疗.

    作者:张仁泉;刘伟;王云海;潘华光;于在诚;胡旭;柴惠平 刊期: 2010年第03期

  • 18氟-氟代脱氧葡萄糖对HepG2肝癌细胞凋亡及rad51基因表达的影响

    目的 研究18F-FDG对HepG2肝癌细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 将处于对数生长期的肝癌细胞分为实验组和对照组,以不同浓度18F-FDG处理HepG2肝癌细胞,用MTT法、流式细胞术和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测细胞增殖与凋亡、活性氧含量、rad51及p53基因表达的情况.结果 18F-FDG能诱导HepG2肝癌细胞凋亡,抑制其增殖,且随着18F-FDG浓度增大,凋亡细胞增加,活性氧产量增加,p53基因与rad51基因表达增强.结论 18F-FDG能诱导HepG2肝癌细胞凋亡,且凋亡率随药物活度浓度增大而增大.

    作者:司原;王明明;张伍魁;谢强;谢吉奎 刊期: 2010年第03期

  • 结核感染对儿童支气管哮喘吸入糖皮质激素疗效的影响

    目的 观察结核感染对儿童支气管哮喘吸入糖皮质激素(ICS)疗效的影响,为人工结核感染辅助治疗儿童哮喘提供依据.方法 62例有结核感染的哮喘患儿作为观察组,58例结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)皮试阴性哮喘患儿为对照组,两组均使用储雾罐吸入丙酸氟替卡松,有哮喘急性发作时,加用沙丁胺醇气雾剂,病情较重时加用强的松口服.观察组另外加用抗结核药物治疗.比较两组治疗效果.结果 治疗3、6个月后沙丁胺醇、强的松平均个人使用剂量观察组小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);呼吸道感染次数、急诊次数、3个月后两组差异无统计学意义(P>0.05),6个月后,观察组明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);住院次数两组差异无统计学意义(P>0.05);两组潮气量(VT/KG)、达峰时间比(TPTEF/TE)、达峰容积比(VPTEF/VE)3个月后均有增加,但差异无统计学上意义(P>0.05),6个月后观察组增加明显好于对照组,差异有统计学上意义(P<0.05).结论 支气管哮喘合并结核感染患儿吸入ICS治疗,临床疗效优于无结核感染的哮喘患儿,为人工结核感染辅助治疗儿童支气管哮喘提供科学依据.

    作者:罗厚江;潘家华;倪陈;计明红;陈云龙;王珅;陈伟 刊期: 2010年第03期

  • 电视胸腔镜辅助下小切口肺癌手术探讨

    目的 探讨电视胸腔镜辅助小切口行肺癌根治术的临床价值.方法 对16例肺癌患者在电视胸腔镜辅小切口行肺切除术及肺门纵隔淋结清扫.结果 16例肺癌手术顺利,出血少,均未输血,术后恢复快.结论 电视胸腔镜辅助小切口行行肺癌根治术安全可行,创伤小,符合肺癌手术原则,长期疗效有待随访观察.

    作者:刘晓;于在诚;胡旭 刊期: 2010年第03期

  • 保和丸及保和丸加虎杖对大鼠非酒精性脂肪肝的影响

    目的 研究保和丸及保和丸加虎杖方对非酒精性脂肪肝大鼠的防治作用.方法 用高脂乳剂灌胃诱导大鼠非酒精性脂肪肝模型,并给予保和丸及保和丸加虎杖方干预,9周后观察肝组织病理变化,酶标仪法测定观察指标的变化.结果 与模型组相比,保和丸及保和丸加虎杖方能明显改善非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞的脂肪变程度,使脂滴减少,炎症减轻.明显降低丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、丙二醛(MDA)水平,使高密度脂蛋白(HDL)、超氧化物歧化酶(SOD)水平升高.结论 保和丸及保和丸加虎杖方能显著减轻高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠脂质过氧化反应,降低血清脂质,因而具有防治脂肪肝的作用.

    作者:王毓洁;金涌;王凤娟;彭飞 刊期: 2010年第03期

  • MSCT在活体肾移植术前评估及筛选供肾者中的应用价值

    目的 探讨多层螺旋CT在活体肾移植术前评估及筛选供肾者中的应用价值.方法 13例亲属活体供肾者在取肾前行多排螺旋CT肾皮质期、实质期、排泄期扫描,成像方法包括容积再现技术(VR)、大密度投影(MIP)、血管分析(GVA)、多平面重建(MPR)等.结果 7例显示双侧肾动脉均为单支肾动脉,3例显示左肾双支动脉,2例显示右肾双支动脉,1例左肾为三支肾动脉;12例显示双肾均为单支静脉引流,1例右侧双支肾静脉;肾盂结构及输尿管显示清晰.MSCT结论与术中所见完全一致.结论 MSCT能清晰显示供体肾动、静脉及肾盂结构,输尿管解剖、变异及与下腔静脉关系,可为临床评估及筛选供肾提供可靠依据.

    作者:丁作鹏;邓克学;赵英明 刊期: 2010年第03期

  • 雷洛昔芬对蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾脏的保护作用

    目的 探讨雷洛昔芬对蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾脏的保护作用及机制.方法 大鼠随机分为正常组、模型组及雷洛昔芬干预组.模型组和雷洛昔芬组给予尾静脉注射多柔比星(4 mg/kg),1周后重复,制备蛋白尿慢性肾纤维化模型,雷洛昔芬组于首次注射多柔比星2周后给予雷洛昔芬[3 mg/(kg·d)]灌胃.在首次多柔比星注射后第4、7、10周末测定24 h尿蛋白排出量;于首次注射多柔比星后第7、10周末处死部分大鼠留取肾组织进行病理形态学和免疫组化检查.结果 ①雷洛昔芬组在第4、7、10周末24 h尿蛋白排出量均明显低于同时点模型组(P<0.01);② 10周末雷洛昔芬组肾小管-间质损伤指数(TII)明显低于同时点模型组(P<0.05);③ 雷洛昔芬组肾组织α平滑肌肌动蛋白明显低于同时点模型组(P<0.05),纤维连接蛋白表达具有同样的变化趋势.结论 雷洛昔芬具有抑制肾纤维化的作用,可能与抑制肌成纤维细胞的生物学作用有关.

    作者:唐超;张伯科;周琪;沈雯雯;梁维龙;阚春明 刊期: 2010年第03期

  • 豹皮樟总黄酮血清对TGF-β1干预的大鼠肝星状细胞的作用及部分机制

    目的 研究豹皮樟总黄酮(TFLC)血清对转化生长因子β1(TGF-β1)干预的大鼠肝星状细胞(HSC)的作用并探讨作用机制.方法 健康成年SD大鼠随机分为4组:正常组、TFLC高(4 g/kg)、中(2 g/kg)、低(1 g/kg)剂量组,给药4 d后取大鼠血清作用于TGF-β1干预的HSC,MTT法检测HSC的增值、半定量RT-PCR法检测HSC中α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Smad3、Smad7及CTGFmRNA的表达.Western-blot方法检测HSC中CTGF蛋白的表达.结果 各剂量组TFLC血清均能明显抑制TGF-β1干预的HSC的增值,下调α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Smad3、CTGF mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达,且明显降低CTGF蛋白的表达.结论 TFLC血清可抑制HSC的活化增值及胶原分泌,其机制可能与阻断HSC中的Smads信号传导通路进而下调CTGF的表达有关.

    作者:孙玲;李俊;黄成;代坤坤;凡晓燕 刊期: 2010年第03期

  • 皮质下缺血性血管病伴抑郁症状的脑局部血流速度变化的研究

    目的 探讨皮质下缺血性血管病(SIVD)的脑局部血流速度(CBFV)变化和抑郁症状的关系.方法 采用神经心理学量表对57例SIVD患者进行评定,以汉密尔顿抑郁量表20分为标准进行分组,对SIVD伴发抑郁组(SIVD-D)和不伴发抑郁组(SIVD-ND)进行比较观察;对所有受试对象使用经颅多普勒超声(TCD)测量CBFV.结果 SIVD-D组两侧MCA和ACA的CBFV较SIVD-ND组均显著降低(P<0.05);SIVD-D组左侧MCA和ACA的CBFV较右侧差异均有显著性(P<0.05);SIVD-D组两侧PCA的CBFV与SIVD-ND组比较差异无显著性(P>0.05).结论 SIVD合并有抑郁症状者存在MCA和ACA的CBFV减低,且左侧较右侧减低更为显著.

    作者:汪永全;郑慧;孙中武;蒋大磊 刊期: 2010年第03期

  • 橙皮苷对刀豆蛋白A致小鼠免疫性肝损伤的保护作用

    目的 研究橙皮苷(HDN)对小鼠免疫性肝损伤的保护作用.方法 采用尾静脉一次性注射给予一定剂量的ConA(20 mg/kg),造成急性肝损伤模型,造模8 h后采血,并处死动物,剖腹取肝,制备肝匀浆.测定不同剂量的橙皮苷对肝损伤谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、白细胞介素-1(IL-1)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量、肝匀浆中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响;同时对肝组织进行病理学检查.结果 HDN能降低小鼠免疫性肝损伤血清ALT、AST、TNF-α、IFN-γ和IL-1的水平,降低肝匀浆中MDA、NO的含量,升高GSH的含量增强SOD的活性,减轻ConA对肝组织的病理损伤.结论 HDN对ConA致小鼠免疫性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与他清除自由基,增强机体抗脂质过氧化能力及降低IL-1、TNF-α和IFN-γ等炎性细胞因子的表达有关.

    作者:李晓冬;李俊;李荣;黄艳;吴芙蓉;陶辉 刊期: 2010年第03期

  • PKA参与ATP对大鼠背根神经节神经元电压门控性钙通道的抑制

    目的 探讨ATP对大鼠背根神经节(DRG)神经元的电压门控性钙通道(VGCC)的抑制效应及其信号转导途径.方法 在急性分离的大鼠DRG神经元上应用全细胞膜片钳技术记录ATP诱导的电流以及VGCC电流;应用钙离子成像技术检测胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.结果 ATP能够可逆性地抑制DRG神经元的VGCC电流和VGCC介导的[Ca2+]i升高.用PKA抑制剂H-89预处理DRG神经元,ATP对VGCC电流及其介导的[Ca2+]i升高的抑制被反转;而用PKC抑制剂bisindolylmaleimide(Bis)预处理DRG神经元,ATP对VGCC介导的[Ca2+]i升高的抑制效应则无影响.结论 在大鼠DRG神经元中,PKA参与了ATP对该神经元VGCC的抑制.

    作者:解敏;刘悦雁;雷洁;王元银;王烈成 刊期: 2010年第03期

  • Wy14643对缺氧/复氧损伤的原代大鼠肝细胞PPARα表达的影响

    目的 研究Wy14643对缺氧/复氧损伤的原代大鼠肝细胞PPARα表达的影响.方法 建立SD大鼠肝细胞原代培养及缺氧/复氧的模型.将原代大鼠肝细胞分为6组(n=8):Ⅰ组为正常组;Ⅱ组为缺氧/复氧组;Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组在缺氧前2 h加入Wy14643使培养液终浓度为100、30、10 μmol/L;Ⅵ组为对照组,氧前2 h加入等体积二甲基亚砜(DMSO).对肝细胞进行缺氧4 h,复氧10 h的处理后,用RT-PCR检测PPARαmRNA的表达;收集细胞培养液,测定上清液中的谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)的活性.结果 与Ⅰ组组比较,PPARαmRNA的表达在Ⅱ组中明显降低(P<0.01),Wy14643处理组(Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组)上调了PPARαmRNA的表达(P<0.01或P<0.05);与Ⅰ组相比较,Ⅱ组的ALT、AST明显增高(P<0.01).在Wy14643处理组(Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组)中,肝细胞上清液中的ALT、AST活性明显降低,并且呈剂量依赖性(P<0,01).结论 Wy14643对原代肝细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,可能与上调PPARα的表达有关.

    作者:陈珂;李元海;徐四七;胡胜红;张磊 刊期: 2010年第03期

  • 中药药浴联合窄谱UVB治疗寻常型银屑病

    目的 了解中药药浴联合窄谱紫外线(NB-UVB)治疗寻常型银屑病的疗效.方法 治疗组中药药浴后采用NB-UVB全身照射,对照组单独采用NB-UVB分别每周3次共20次.结果 单独治疗组总有效率70%,联合治疗组总有效率96.7%(χ2=17.69,P<0.01).两组不良反应结果比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 中药药浴联合NB-UVB治疗寻常型银屑病疗效好,同时降低NB-UVB的副作用,为全身性泛发性银屑病的治疗提供了很好的方法.

    作者:林国书;王红艳;骆娣凤;唐明俊;李永江;杨森;张学军 刊期: 2010年第03期

  • 人巨细胞病毒感染老龄小鼠的外周血T细胞亚群检测与分析

    目的 在人巨细胞病毒(HCMV) 感染的BALB/c小鼠模型基础上,研究小鼠细胞免疫应答状态.方法 建立先天性潜伏感染的老龄小鼠(平均月龄≥18个月)模型,分别为HCMV先天性潜伏感染组(A)、先天性潜伏感染再激活组(B)及正常对照组(C),每组小鼠数均为6只.分别取各组小鼠外周血白细胞进行病毒分离、PCR和RT-PCR检测HCMV UL83基因DNA和相应mRNA来验证模型小鼠感染状态.采用流式细胞术对小鼠外周血T细胞亚群进行检测.结果 A组和B组小鼠病毒分离出HCMV,C组为阴性.A组小鼠可以用PCR检测出HCMV UL83 DNA,但RT-PCR检测不出相应的mRNA;B组小鼠用PCR、RT-PCR均可检测出相应产物;而C组均为阴性.A、B、C三组小鼠外周血中CD3+细胞构成比值分别为0.3305、0.0658和0.4318,组间差异有显著性(P<0.01);A、B、C三组中CD4+细胞的构成比值依次为0.6608、0.5998、0.6578,B组与A组及C组差异均有显著性(P<0.01),而在A组和C组间差异无显著意义(P>0.05);CD8+细胞比在A、B、C三组中的构成比值依次为0.2327、0.1150、0.1862,组间差异均有显著性(P<0.01);CD4+CD8+细胞在A、B、C三组中的比值依次为0.0990、0.1682、0.1192,组间差异有显著性(P<0.05).结论 HCMV先天性潜伏感染及 HCMV先天性潜伏感染再激活均可使老龄小鼠的细胞免疫功能降低,尤以后者显著.表明HCMV对先天性潜伏感染再激活老龄小鼠的细胞免疫状态有明显的抑制作用.

    作者:吴琼;赵俊;王明丽 刊期: 2010年第03期

  • 腹腔镜辅助中低位直肠癌前切除术的临床应用

    目的 探讨腹腔镜辅助中低位直肠癌前切除术的操作要点和治疗效果.方法 回顾性分析32例腹腔镜中低位直肠癌前切除与41例开腹中低位直肠癌前切除的临床资料,比较两组手术及术后情况.结果 腹腔镜组术中失血量、术后胃肠功能恢复时间、镇痛泵使用时间和切口感染率均小于开腹组,差异有统计学意义(P<0.05),手术时间、淋巴结清扫数、切除肠管近远端长度、吻合口瘘发生率差异无统计学意义(P>0.05).结论 腹腔镜中低位直肠癌前切除手术具有与开腹手术相同的技术安全性和肿瘤学安全性,且具有手术创伤小、出血量少、术后康复快等特点,可推广应用.

    作者:宁忠良;朱志强;梁伟;姚寒辉;黄强 刊期: 2010年第03期

  • 不同节段胸交感神经链切断术中掌温检测的临床意义

    目的 探讨掌温检测在不同节段胸交感神经链切断术中的应用价值.方法 对28例手汗症患者施行不同节段胸交感神经链切断术,分别于术前和术后5 min进行掌温检测.结果 全组患者术后手掌多汗症状立即消失,掌温均升高.单纯T3、T4切断以及T3+T4、T3+T5联合切断组术后5 min掌温升高显著(P<0.05);T4+T5、T2+T3、T2+T4联合切断组术后5 min掌温升高不明显.结论 掌温检测是判断胸交感神经链切断成功的有效方法,单纯T3或T4交感神经链切断术治疗手汗症具有操作简单、安全有效、创伤小、并发症少等特点.

    作者:徐世斌;马冬春;魏大中;梅新宇;柳常青 刊期: 2010年第03期

安徽医科大学学报杂志

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