孔素娟；袁菲；于旭博；王晶；刘爱萍；刘方蕾；吴兵；侯亚莉；谢贵林
目的 分析以MF59为佐剂的脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)免疫恒河猴后诱导的细胞免疫应答.方法 将恒河猴分为4组:无佐剂低剂量组(IPVL-PBS组)、低剂量MF59佐剂组(IPVL-MF59组)、无佐剂高剂量组(IPVH-PBS组)和低剂量铝佐剂组(IPVL-AL组).高剂量组IPV每剂中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗原含量分别为30、32、42 DU,低剂量组IPV每剂中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗原含量分别为3、3.2、4.2DU,0.5ml/剂,其中MF59为0.25 ml/剂,氢氧化铝为0.5 mg/剂,均于第1、28、56天经恒河猴后腿肌肉注射,分别于免疫后第28、56、84天采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体效价;分别于免疫后第56和84天,取外周血,分离淋巴细胞,上流式细胞仪检测特异性抗原刺激下的Th1型细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-6)分泌水平,以及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例的分布情况.结果 恒河猴经3次免疫后,IPVL-MF59组血清中和抗体阳转率明显高于其他各组,达75％以上.恒河猴免疫后第56天,IPVL-MF59组IFNγ和TNF分泌水平明显高于IPVL-AL组(P均＜0.05),IL-6分泌水平明显高于IPVL-PBS和IPVH-PBS组(P均＜0.05);免疫后第84天,各组IL-2、IFNγ、TNF均稳定在同一水平,IL-4、IL-5分泌水平均明显高于第56天(P均＜0.05).免疫后第84天,IPVL-MF59组CD8+T淋巴细胞百分比均明显高于IPVH-PBS和IPVL-PBS组(P均＜0.05).结论 MF59佐剂能增强IPV诱导的TNF和IL-6的分泌水平,增强Th1和Th2类反应.
作者：张雪梅；徐婧雯；吴忠香；王葳；徐小宁；董少忠 刊期： 2014年第10期
目的 建立柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测.方法 以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体.以抗CA16多抗作为包被抗体,经HRP酶标记的单抗作为酶标抗体,建立CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围,并进行准确度、精密度、稳定性及特异性验证.用建立的方法检测CA16疫苗原液制备过程样品中CA16抗原含量.结果 以抗CA16多抗为包被抗体,针对74株不同基因型的CA16的ELISA检测结果均为阳性,该抗CA16单抗的广谱性较好.该方法的线性范围为23.4 ～ 750 ng/ml,R2＞0.99,小检出量为23.4 ng/ml;样品回收率在89％～108％之间,CV＜15％,准确度和精密度较好;抗体包被板干燥后于37 cc放置6d,CV＜20％,稳定性较好;PV纯化样品、EV71收获液、Vero细胞样品中抗原的A值均小于cutoff值,特异性较好.随着CA16疫苗制备过程的不断进行,中间品1～4比活分别为0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐渐上升趋势.结论建立了CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度高,稳定性及特异性较好,为CA16疫苗的研制及工艺开发奠定了基础.
作者：马淑花；郭会杰；吴蕴怡；郝春生；宋冬梅；王潇潇；杨永娟；李秀玲 刊期： 2014年第10期
目的 比较3种A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中磷含量测定方法的差异,为今后方法的选择及进一步优化提供参考.方法 对《中国药典》三部(2010版)附录中的磷测定法(方法1)、高分子结合物含量测定法(方法2)、文献中的磷测定法(方法3)这3种方法的标准曲线、测定磷酸二氢钾对照品中磷含量、测定A群多糖、A群衍生物、A群结合物中磷含量以及标准曲线增加两个低浓度点的差异进行比较.结果 不同人员采用同一方法绘制的标准曲线的斜率(b)的变异系数(CV)均小于10％,相关系数(r2)均在0.995以上,CV值在0～0.23％之间,其中方法2标准曲线b值的CV值小于1％,且r2值与其他两种方法相比更稳定;3种方法测定同一份磷酸二氢钾对照品的结果与理论值相比,相对误差均在10％以下,其中方法2的相对误差小,为5.73％;3种方法测定A群多糖、A群衍生物、A群结合物中磷含量的CV值均小于10％;3种方法的标准曲线增加两个低浓度点后,b值及r2值的CV值均小于10％,与原标准曲线近似.结论 3种方法测定磷含量的标准曲线均具有良好的线性,不同操作人员的测定结果无明显差异,其中方法2测定A群脑膜炎球菌多糖、A群脑膜炎球菌多糖衍生物及A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中的磷含量时,稳定性较好,操作简便易行.
作者：孔素娟；袁菲；于旭博；王晶；刘爱萍；刘方蕾；吴兵；侯亚莉；谢贵林 刊期： 2014年第10期
目的 分析重组H21G蛋白的化学修饰方法及化学修饰与免疫原性之间的相关性.方法 应用琥珀酸酐和己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)分别修饰重组H21G蛋白制备衍生物,赖氨酸单位减少率法测定重组H21G蛋白琥珀酰化物的琥珀酰化率;2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)法测定重组H21G蛋白衍生物的-AH衍生率;SDS-PAGE及HPLC法分析重组H21G蛋白各衍生物的纯度及分子量分布.用各衍生物分别经皮下免疫小鼠,免疫浓度为25 μg/ml,共免疫3次,于末次免疫后2周,经小鼠眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血清IgG含量.采用非还原型SDS-PAGE分析重组H21G蛋白衍生物在制备初期、制备后4℃储存2周及6个月的稳定性.结果 随着重组H21G蛋白与琥珀酸酐质量比(10∶1、10∶3、10∶4和10∶5)的提高,琥珀酰化率也逐渐升高,但质量比为10∶4和10∶5时无明显差异.重组H21G蛋白ADH衍生l和2h的衍生率无明显差异.质量比为10∶4及10∶5的琥珀酰化物与原蛋白分子量分布差异较大;ADH衍生后,原蛋白的分子量分布也发生改变.重组H21G蛋白与琥珀酸酐质量比高于10∶3时,对蛋白的降解作用明显,当质量比达到10∶5时,重组H21G蛋白几乎不再以单体形式存在;而ADH衍生l和2h对蛋白聚合作用无明显差异,均产生了二聚体和多聚体.重组H21G蛋白及其衍生物免疫小鼠后表现明显的剂次加强效应,且ADH衍生的产物的免疫原性高于琥珀酰化产物.琥珀酰化产物的稳定性较差,目标蛋白均明显降解,而ADH衍生的产物在4℃储存6个月后未见明显聚合或降解.结论 重组H21G蛋白经ADH衍生的产物免疫原性及稳定性均优于琥珀酰化产物.
作者：李燕婷；范锋锋；吴朝今；罗树权；方红春；胡浩；于旭博；谢贵林；赵志强 刊期： 2014年第10期
目的 评价甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在动物体内诱导的中和抗体水平及其过敏原性.方法 将昆明小鼠随机分为7组,分别经腹腔注射3批甲型H1N1流感病毒裂解疫苗(剂量分别为15、30、45 μg/0.5 ml)、3批季节性H1N1流感病毒裂解疫苗(剂量分别为15、30、45 μg/0.5 ml)和PBS(阴性对照),每只0.5ml,间隔21d加强免疫1次,分别于免疫前、初次免疫后21 d及加强免疫后14 d采血,分离血清,采用固定病毒-稀释血清法检测小鼠血清中和抗体滴度.将豚鼠随机分为4组,分别经腹腔注射上述3批甲型H1N1流感病毒裂解疫苗和PBS(阴性对照)各0.5ml,隔日注射1次,共3次,第1次注射后第14和21 d,分别经静脉注射同一批号的疫苗1.0ml攻击,观察豚鼠的过敏反应.结果 初次免疫后21 d,甲型H1N1流感病毒裂解疫苗15、30、45 μg剂量组免疫小鼠血清中和抗体滴度分别为免疫前和阴性对照组的47.9、113.5和319.9倍,且呈剂量依赖性;加强免疫后14 d,甲型H1N1流感病毒裂解疫苗各剂量组中和抗体滴度比初次免疫后21d均明显升高,也呈剂量依赖性,且均高于与相应剂量的季节性H1N1流感病毒裂解疫苗.甲型H1N1流感病毒裂解疫苗各剂量组豚鼠均无过敏反应发生.结论 甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在昆明小鼠体内可诱导产生保护性中和抗体,对豚鼠无过敏反应.
作者：赵大鹏；李晓波；郭雪；任琦；王亚军；支百惠；李晓辕；吴业红；曹宇 刊期： 2014年第10期
随着生物技术的不断发展和进步,人们对生物药物尤其是疫苗的安全性要求越来越高.为了使与传染源相关的风险降到低,生产过程中不使用人或动物来源成分(如牛血清、白蛋白等)已经成为各国生物制药的发展趋势,我国对生物药物安全性的要求也逐步与国际接轨.辅料作为药品的重要组成部分,其来源及质量直接影响终产品的质量、安全及有效性.
作者：马海燕；王世聪；郄正刚 刊期： 2014年第10期
目的 评价RNA抽提试剂的裂解缓冲液(lysis buffer,LB)对流感病毒(influenza virus,FIu-V)RNA的稳定作用.方法 将流感病毒临床分离株A/Zhongshan/085/2009(H 1N1)进行102稀释,加入RNA抽提试剂的LB后,分别置4和-20℃保存7、15、30和45 d,以未经LB处理的Flu-V稀释物作为对照.提取各样品核酸后,分别采用实时RT-PCR(靶序列长105 bp)和普通RT-PCR(扩增子长527 bp)进行检测.结果 经LB处理的样品,在4和-20℃保存45 d,均能检测到特异性扩增信号;在4℃保存30 d,-20℃保存45 d,均可用于较长核酸片段的扩增分析.而未经LB处理的样品,在-20 c℃也可稳定45 d,用于该两种RT-PCR的检测,但在4℃仅7d时能检测到527 bp的靶序列,30 d时,两种RT-PCR方法均未检测到靶序列.结论 LB可延缓流感病毒RNA的降解,具有用作流感病毒核酸检测样品稳定剂的潜能.
作者：朱远峰；刘洪波；吴衍恒 刊期： 2014年第10期
目的 优化酶标板法检测甘油三酯(triglyceride,TG)净含量的方法,进行验证,并将其应用于监测人血白蛋白层析纯化工艺中样品的脂类含量,对工艺优化提供指导.方法 建立酶标板上快速检测TG含量方法,通过两步酶反应的吸光度值的差值计算TG净含量.确立该方法的标准曲线范围,并进行准确度和精密度进行验证.采用该方法监测层析工艺中样品的TG净含量,优化人血白蛋白层析纯化工艺.结果 该方法检测TG的线性范围在78～2 500 μg/ml之间,游离甘油(free glycerin,FG)的线性范围在8.13～ 260 μg/ml之间,R2均为0.997.各样品检测结果CV均＜4％,回收率在102％～ 107％之间,准确度较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次和由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的结果,CV均＜3％,精密度较好.在人血白蛋白层析纯化工艺中采用去脂剂可将白蛋白样品中的残余脂类去除.结论 优化后的甘油三酯净含量检测方法为人血白蛋白层析纯化工艺的优化提供了指导,在血液制品工艺研发过程中具有重要的应用价值.
作者：周志军；李陶敬；邹炜；胡勇；李策生 刊期： 2014年第10期
目的 建立甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 以甲型副伤寒沙门菌体脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为包被抗原,HRP标记的羊抗小鼠IgG作为二抗,TMB作为显色剂,建立检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法,优化间接ELISA法的试验条件,并进行验证.取2批甲型副伤寒结合物原液,分别经NIH小鼠大腿内侧皮下各免疫3次,间隔14 d,第2、3次免疫后7d采血,按建立的间接ELISA法检测血清中甲型副伤寒沙门菌抗体水平,计算抗体阳转率.结果 抗原的适包被浓度为2 μg/ml,血清适稀释倍数为1∶80,酶标二抗的适稀释比例为1∶6000;包被抗原与血清的适反应时间为2h,血清与酶标二抗的适反应时间为lh,封闭液室温下适封闭时间为2h.用建立的方法检测20只小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清,血清稀释500倍阳性检出率仍不低于80％;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清的试验内和试验间变异系数分别为4.6％和7.5％,检测阴性血清样品的试验内和试验间变异系数分别为9.4％和13.9％,均低于15％;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清和甲型副伤寒结合物原液免疫阳性血清的结果为阳性,检测乙型副伤寒结合物小鼠免疫阳性血清、伤寒Vi多糖结合物小鼠免疫阳性血清及阴性血清的结果为阴性.两批甲型副伤寒结合物原液免疫小鼠在第2针免疫后7d的血清阳转率均为10％,第3针免疫后7d的血清阳转率均为100％.结论 建立的检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法灵敏度较高,精密性良好,特异性较强,可用于评价甲型副伤寒结合疫苗的免疫原性.
作者：吴凯；樊会兰；赵志宏；白梅；陈磊；包南艳；张胜祥；李生迪 刊期： 2014年第10期
目的 改进水痘-带状疱疹减毒活疫苗毒种(Oka株)的制备方法,提高毒种的病毒滴度及稳定性,延长保存时限.方法 分别采用原法(病毒吸附感染法)和改进的方法(病毒混合感染法)制备水痘-带状疱疹病毒Oka株工作种子批,采用蚀斑法检测病毒滴度及-70℃保存0、1、6、12个月的稳定性,并各制备出3批疫苗进行全面检定.结果 采用病毒混合感染法和病毒吸附感染法制备的毒种病毒滴度分别为6.6和6.5 lgPFU/ml,病毒混合感染法制备的毒种在-70℃以下保存12个月,病毒滴度无明显下降;病毒吸附感染法制备的毒种-70℃以下保存6个月,病毒滴度下降明显.两中方法制备的水痘减毒活疫苗成品的各项检定结果均符合要求,病毒滴度及37℃稳定性无明显差异.结论 采用病毒混合感染法制备的毒种提高了病毒滴度和-70℃保存的稳定性.
作者：单雪峰；王斐；戴长河；杨曼白；郭静；李晴；双慧；赵红丹；曲成 刊期： 2014年第10期
目的 利用NBS 14 L篮式生物反应器大规模培养乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),并对病毒收获液进行灭活和纯化,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供参考.方法 用NBS 14 L篮式生物反应器,以片状载体FibralCel DISK I为载体,进行Vero细胞高密度培养,分别按0.0l、0.1和0.3 MOI接种JEV(P3V2)毒种,灌流培养,收获3批病毒液,检测病毒滴度;分别使用不同浓度的甲醛(100、200、400 ng/ml)于4、25℃和不同浓度的β-丙内酯(β-丙内酯∶病毒液分别为1∶2000、1∶4000、1∶8000)于4℃对病毒收获液进行灭活,取灭活后的病毒液,接种昆明小鼠,验证病毒灭活效果;用截留相对分子质量为10万的超滤器对病毒收获液进行超滤浓缩,用Sepharose 4FF层析柱对病毒浓缩液进行层析纯化.结果 共培养3批Vero细胞,平台期密度约为1.6× 107个/ml.3批病毒收获液的滴度分别为8.4、8.1和7.9 lgLD50/ml.以甲醛为灭活剂,作用浓度为200 ng/ml,温度为4℃时,作用7d可完全灭活病毒,且免疫原性合格;以β-丙内酯为灭活剂,作用浓度为1∶4000,温度为4℃时,作用12h可完全灭活病毒,且免疫原性合格.3批病毒浓缩液病毒液经Sepharose 4FF层析柱层析纯化后,蛋白去除率达99％以上,抗原回收率在95％以上,Vero细胞蛋白质残留量和DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)的相关规定.结论 成功实现了JEV的大规模生物反应器培养,层析纯化后病毒的抗原回收率较高,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供了参考.
作者：苑志刚；刘岩；陈立新；韩慧丽；吴洋；李春艳；杨屹 刊期： 2014年第10期
目的 建立检测重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFN α2b)注射液中组氨酸含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法,并对方法进行验证及初步应用.方法 按设定的色谱条件对检测rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的HPLC法进行专属性、系统适应性、试验内和日间精密性、准确性验证,确定方法的线性范围和低检测限,并用建立的方法检测6批rhIFN α2b注射液中的组氨酸含量.结果 该方法专属性、系统适应性、试验内精密性、日间精密性和准确性良好;线性范围为6.0645 ～ 775 μg/ml(R2=0.999 8);低检测限为50 ng/ml;用建立的方法检测6批rhIFN α2b注射液中组氨酸含量与标示浓度接近.结论 建立的HPLC法准确可靠,可用于rhIFN α2b注射液中组氨酸含量的测定.
作者：陆春燕；李增礼；周乐春；王荣海；宋礼华 刊期： 2014年第10期
目的 优化轮状病毒基因重配株(UD株)在Vero细胞上培养的关键条件.方法 将轮状病毒基因重配株(UD株)分别以0.01、0.03、0.05和0.10 MOI接种Vero细胞,分别于接种病毒后6、12、24、36、48、72、84、96、108、120 h取样,观察细胞病变(CPE)情况,计算半数感染剂量(CCID50/ml).以0.05 MOI接种Vero细胞,分别加入含1、2、3、5、8和10 μg/ml胰蛋白酶的M199培养液,于接种病毒后12～ 48 h,观察CPE情况,检测病毒滴度.结果 以0.05 MOI接种Vero细胞后,维持液中胰蛋白酶浓度为5μg/ml,培养时间为48 h时,滴度达到高,为6.5 lgCCID50/ml,且对Vero细胞的分裂增殖无不良影响.结论 通过对Vero细胞培养轮状病毒关键条件的优化,获得了提高病毒滴度的有效方法,为使用Vero细胞培养轮状病毒制备轮状病毒减毒活疫苗奠定了基础.
作者：宋菲菲；郝洪吉；张艳红；陈旭；张晓雪；付作申 刊期： 2014年第10期
蛋白间相互作用在细胞的生命活动中起着关键作用,GST-pull down技术被广泛用于体外验证蛋白间的直接相互作用.GST-pull down技术既可用来验证已知蛋白间的相互作用,也可用来寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白.虽然该技术在体外验证蛋白间的相互作用上有着较强的特异性,但下结论时仍需慎重.本文就GST-pull down技术的原理及其应用及该技术在应用中需要注意的部分问题进行综述.
作者：柴政斌；张更林；韩金祥 刊期： 2014年第10期
目的 评价脊髓灰质炎灭活疫苗(inactived polio vaccine,IPV)与口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral polio vaccine,OPV)不同序贯免疫程序的基础及加强免疫效果.方法 选择≥2月龄婴儿,分为4组:1剂IPV和2剂OPV序贯(I-O-O组);2剂IPV和1剂OPV序贯(I-I-O组);3剂IPV(I-I-I组);3剂OPV(O-O-O组),以O-O-O组为对照组,分别于2、3、4月龄各接种1剂,IPV每剂悬液0.5ml,经大腿前外侧中部肌肉注射,OPV每剂口服1 g糖丸.均采集免疫前、完成基础免疫后1个月、满18月龄后及I-O-O组接种第1剂IPV后1个月、I-I-O组接种第2剂IPV后1个月、I-I-I组加强免疫1剂IPV后1个月受试者的静脉血,分离血清,由北京市CDC脊髓灰质炎实验室采用WHO推荐的微量中和试验方法检测脊髓灰质炎中和抗体水平,计算各组抗体保护率及几何平均滴度(GMT).结果 各组研究对象的体重、性别构成比差异无统计学意义(P＞0.05),年龄差异有统计学意义(P＜0.05).免疫前各组脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体水平均低于1∶8,其中以Ⅲ型低.完成3剂基础免疫后,I-O-O和I-I-O组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体GMT在889.20～1193.99之间,I-I-I和O-O-O组在243.22～831.76之间;O-O-O组的Ⅰ型和Ⅲ型抗体保护率均为96.67％,I-O-O组的Ⅲ型为97.18％,其余均为100％.I-O-O组接种第1剂IPV后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体GMT分别为21.73、39.63和26.49,抗体保护率分别为88.10％、97.62％和84.52％; I-I-O组接种第2剂IPV后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体GMT分别为234.96、247.74和416.87,抗体保护率均为100％.基础免疫后1年,I-O-O、I-I-O和O-O-O组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体GMT均高于I-I-I组(P＜0.05),抗体保护率均为100％; I-I-I组加强1剂IPV后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体GMT均为1 819.70,抗体保护率均为100％.结论 序贯接种组抗体较单独接种IPV或OPV组高.基础免疫1年后抗体保护率仍较高,但I-I-I组需1年后加强1剂,以保持较高水平的抗体滴度.
作者：张丽文；许颖；邢海鹰；王海红；苑新海；朱宗龙 刊期： 2014年第10期
目的 研究沪191麻疹病毒疫苗株(S191)在原代鸡胚成纤维细胞中连续传代的基因稳定性,为评估和控制麻疹疫苗的免疫原性及安全性提供依据.方法 取S191的22代冻干主种子批在SPF原代鸡胚成纤维细胞上连续传代获得的23、26(用于生产的疫苗代次)、29、31和33代病毒液,提取病毒RNA,RT-PCR扩增后,进行全序列测定,并对病毒关键的保护性抗原进行核苷酸和氨基酸序列分析.结果 与22代全基因比较,核苷酸序列同源性:26代为99.96％,33代为99.92％;氨基酸序列同源性:26代为99.98％,33代为99.89％.26代疫苗病毒仅M蛋白第123位氨基酸由苏氨酸→赖氨酸,33代病毒有5个氨基酸差异.结论 26代S191麻疹疫苗疫苗病毒的基因结构高度稳定,疫苗可保持主种子病毒的免疫原性和安全性.
作者：徐闻青；许乐燕；杨文震；王兵；赵玉麟 刊期： 2014年第10期
目的 通过考察不同胶原包被条件对血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)与胶原结合的影响,建立vWF胶原结合法(vWF collagen binding assay,vWF:CBA)检测FⅧ制品中vWF活性.方法 将胶原Ⅲ分别按以下4组条件包被ELISA板:不同pH(2.8、4.0、5.2、6.4、7.4、8.8、9.8)的缓冲液,不同盐浓度(0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.6 mol/L NaCl)的缓冲液,不同胶原Ⅲ浓度(5、2.5、1、0.5、0.25、0.125 μg/ml),不同包被温度(4、25、37℃).以5个不同稀释度的vWF标准品为样品,进行vWF:CBA法测定,每种包被条件下绘制1条标准曲线,同时检测每种包被条件下方法的重复性.将标准曲线线性和方法重复性较好的几组条件做为佳包被条件,验证该包被条件下vWF:CBA法的特异性、重复性,获得标准曲线范围.结果 当胶原Ⅲ溶解于含0.15 mol/L NaCl,pH6.4的磷酸缓冲液中,在4℃条件下以2.5 μg/ml包被时,vWF与胶原的结合效率较高.将该包被条件下的vWF:CBA法用于测定冷沉淀上清及FⅧ制品中vWF活性,具有较好的特异性和重复性.结论 不同的包被条件对胶原结合法测定vWF活性具有较大的影响,因此,在采用胶原结合法测定FⅧ制品中vWF活性时,应对包被条件进行优化.
作者：杜晞；叶生亮；王宗奎；曹海军；林方昭；袁靖；李长清 刊期： 2014年第10期
目的 筛选发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)疫苗候选株,为后续疫苗的研制奠定了基础.方法 取长成致密单层的Vero细胞,接种疫苗候选株,待细胞充分病变时,收获病毒培养液上清,经病毒滴度、抗体效价、抗原含量、交叉保护性及传代稳定性共5个评价指标筛选SFTSV疫苗生产用毒株,建立3级毒种库,并进行鉴定.结果 经首轮筛选获得3株次轮候选株,经次轮筛选确定JS-2011-013株为疫苗生产用毒株,建立的3级种子库经全面检定,均符合《中国药典》三部(2010版)要求.结论 已成功获得到SFTSV疫苗生产用毒株,为后续疫苗的研制奠定了基础.
作者：杨骏宇；焦永军；郭喜玲；许定花；王建梅；承静；陈小芳；金坚；姜东林 刊期： 2014年第10期
目的 克隆产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perqingens alpha-toxin,CPA)全基因,在大肠埃希菌(E.coli)中表达并纯化α毒素.方法 设计并合成CPA的全基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-CPA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化表达条件,并对重组蛋白进行纯化.结果 双酶切和测序鉴定结果表明,CPA基因以正确的阅读框架克隆入pET-28a载体中;表达的重组蛋白相对分子质量约为43 000,主要以可溶性形式表达,佳培养基为TB培养基,佳诱导温度为37 ℃,诱导时间为3h;纯化的重组蛋白纯度达95％以上,浓度为0.663 mg/ml,收率为5 mg/g湿菌.结论 成功在E.coli中表达了CPA,纯化后的CPA纯度较高,为进一步研究其结构、功能、致病机制及制备抗α毒素人源单链抗体奠定了基础.
作者：于佳；张国利；陈萍；田园；岳玉环；吴广谋；何苗；史飞；孙诗雯 刊期： 2014年第10期
目的 利用错配扩增和荧光PCR技术,建立一种针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组C区启动子(basal core promoter,BCP) 1762/1764突变位点的新型检测方法,并对该方法进行验证及临床评价.方法 根据NCBI登录的HBV A-H型基因序列(以GenBank号为AB033556.1的C基因型作为标准参考序列)合成野生型和突变型标准品序列,测序后连接至pMD-18T载体上,构建质粒标准品,设计引物、探针及合适的突变检测体系,确定检测的线性范围;对建立的方法进行灵敏度、重复性、特异性、稳定性验证;分别用本实验建立的ARMS-PCR法和基因Sanger测序法(金标准)检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本的基因位点是否发生突变,并分析ARMS-PCR法的灵敏度和特异度.结果 ARMS-PCR法能检测l×102～l×109 copies/ml的野生型和突变型质粒;野生型和突变型样本检测的Ct差值(△Ct)在7以上,且能检出低达1％突变含量的混合质粒和样本;该方法灵敏度较高,重复性、特异性、稳定性良好;其检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本1762/1764位点突变阳性率为41.7％,明显高于Sanger 测序法检测结果(P＜0.05).结论 建立的ARMS-PCR法能很好地用于评估乙肝患者患肝癌的风险,且较Sanger测序法检测精度更高,更适合于临床推广.
作者：程鹏飞；刘绪；余敏；冯杨；唐景峰 刊期： 2014年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
