张国辉；郑东旖；时念民；艾星；白云骅
目的 建立适合大规模生产的无细胞百日咳疫苗(Acellular pertussis vaccine,APV)纯化新工艺,使疫苗主要成分的比例稳定可控.方法 复苏百日咳菌种并传代培养,在大罐发酵培养收获前,调整菌液的pH值至弱酸性,再通过离心获得上清液,经超滤浓缩和脱盐处理,使用阳离子交换层析进行目的组分的分离纯化,纯化产物经SDS-PAGE分离并经Western blot鉴定,确定佳纯化条件.用建立的层析纯化新工艺连续纯化3批APV,检测各项指标,验证该工艺的重复性.结果 收获前菌液pH值调至5.8～6.0,可使疫苗主要保护抗原在上清液中的含量明显提高；采用强阳离子交换层析的方法,从目的蛋白的捕获到多组分的分离提纯可一步完成,各目的蛋白组分的纯度均可达85％以上,回收率可达90％以上；建立的纯化新工艺具有良好的重复性.结论 初步建立了可线性放大、适合APV大规模生产的层析纯化新工艺,为疫苗质量标准的提高奠定了基础.
作者：吴腾捷；张斌；张青；郑丽华；瞿爱东 刊期： 2013年第01期
目的 优化肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)在Vero细胞中的培养条件.方法 分别采用吸附法和直接接种法将EV71接种于Vero细胞中进行增殖,检测病毒滴度；选择佳接种方法接种病毒,考察血清浓度、收毒方式、病毒接种量(MOI)和收毒时间对病毒滴度的影响.结果 将MOI为0.02～0.2的病毒直接接种于不含血清的培养基中,培养60 h,胞外收毒,可获得较高的病毒滴度.结论 优化了EV71在Vero细胞中的培养条件,为EV71的大规模培养及其疫苗研发奠定了基础.
作者：陈丽；江元翔；夏德镇；杨志建；张高峡 刊期： 2013年第01期
目的 探讨疏水层析纯化重组汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)层析图谱与蛋白含量及HBsAg含量的相关性.方法 采用疏水层析纯化8批HP-HBsAg小量试验样品和5批小量验证试验样品及5批酿酒酵母表达的HBsAg对照试验样品,采用Lowry法和电化学发光法(Electrochemiluminescent immunoassay,ECLIA)分别检测纯化样品中蛋白含量和HBsAg含量,并计算HBsAg的回收率；通过几何法封闭紫外监测图谱特征峰图形,用数字求积仪采用积分法求出各封闭特征峰的图形面积,并进行分析；取小量验证试验1批样品的层析主峰和副峰收液进行电镜观察.结果 8批HP-HBsAg小量试验和5批HP-HBsAg小量验证试验HBsAg的平均回收率分别为70％和54％.HP-HBsAg疏水层析图谱由两部分构成:穿透峰和目标峰(HBsAg峰),目标峰可见高低不同的两个峰(主峰与副峰)；对照图谱中有穿透峰和目标峰.对目标峰进行量化分析,主峰、副峰与目标峰的面积比值分别与其所对应的收集量、蛋白含量和HBsAg含量比值相关.电镜观察可见小量验证试验样品主峰收液中HBsAg颗粒大小均一,副峰收液中HBsAg颗粒大小不均一.结论 疏水层析纯化重组HP表达的HBsAg效果良好,通过峰形之间面积比值,可获得峰形所对应的收集量、蛋白量和HBsAg量比值,为HBsAg的进一步纯化提供了参考.
作者：许宁；张德有；马锐；冯潇磊；张旭；杨旭琴；李彩梅；柳蔷；沈永才；李津 刊期： 2013年第01期
目的 探讨脂联素对巨噬细胞ATP结合盒转运子A1 (ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)及其上游调控因子肝脏X受体α(Liver X receptor α,LXRα)表达的影响及其在胆固醇逆转运(Reverse cholesterol transport,RCT)和抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)中可能的作用机制.方法 以不同浓度的脂联素(0、1、5、10 μg/ml)体外培养巨噬细胞RAW264.7 24 h,RT-PCR法检测细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中ABCA1和LXRα蛋白的表达水平,闪烁计数法检测细胞内胆固醇的流出情况.结果 脂联素能显著上调RAW264.7细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平(P＜0.05),且呈浓度依赖性；脂联素能浓度依赖性地增加细胞内胆固醇的流出(P＜0.05).结论 脂联素可通过LXRα途径上调巨噬细胞ABCA1基因的转录和翻译水平,促进胆固醇逆转运,延缓AS的发生、发展.
作者：艾青；马康华 刊期： 2013年第01期
目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标签的表达PLCε基因shRNA的重组腺病毒质粒Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究膀胱癌的基因治疗奠定基础.方法 将干扰质粒pGenesil-PLCε及阴性对照质粒pGenesil-NP的表达启动子U6及shRNA序列克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的穿梭质粒pAdTrack,经酶切及测序鉴定正确后,将重组穿梭质粒经PmeI线性化,转化感受态AdEasier.重组pAdEasy-U6-PLCε质粒经PacI线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-PLCε,经大量扩增后测定病毒滴度,RT-PCR及Western blot检测T24细胞内PLCε的表达情况.结果 酶切及测序鉴定证实pAdTrack-U6-PLCε及重组pAdEasy-U6-PLCε质粒构建正确,并成功转染至HEK-293细胞,重组腺病毒Ad-U6-PLCε滴度达1.5×1012,经重组腺病毒感染的T24细胞内PLCε mRNA及蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结论 已成功构建针对PLCε基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究PLCε对膀胱癌发生发展的作用奠定了基础.
作者：张彦懿；欧俐苹；刘琪；陶佳；吴小侯；罗春丽 刊期： 2013年第01期
目的 探讨血管紧张素-( 1-7)[ Angiotensin-( 1-7),Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)在大鼠心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)中信号转导的影响及其机制.方法 原代分离培养并鉴定新生SD大鼠的CFs,将细胞分为8组:空白对照组、AngⅡ组、Ang-( 1-7)组、AngⅡ+Ang-( 1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组、AngⅡ+Ang-(1-7)+ PAO组、Ang-(1-7)+ PAO组和AngⅡ+PAO组,Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达；免疫沉淀捕捉分析法检测蛋白酪氨酸磷酸酶-1(Src-homology domain 2 containing protein tyrosine phosphatase-1,SHP-1)的酶活性；实时荧光定量PCR检测转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-31)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白( CollagenⅢ,ColⅢ)基因mRNA的转录水平.结果 AngⅡ可增加细胞内p-ERK1/2的表达水平和p-ERK/ERK值(磷酸化的p-ERK1/2与总的ERK1/2的比值),Ang-(1-7)通过与Mas受体结合可拮抗AngⅡ引起的上述效应；Ang-( 1-7)通过与Mas受体结合而激活胞内SHP-1的活性,并可拮抗AngⅡ所致的SHP-1活性降低；抑制SHP-1的活性后,Ang-( 1-7)拈抗AngⅡ诱导的p-ERK1/2表达水平和p-ERK/ERK值增高的效应被抑制.Ang-( 1-7)对TGF-β1、Col Ⅰ和ColⅢ基因mRNA的转录水平无显著影响,但可抑制AngⅡ所诱导的上述基因mRNA转录水平的增加.结论 Ang-( 1-7)通过与Mas受体结合而激活SHP-1,该效应与Ang-(1-7)拮抗AngⅡ诱导的p-ERK1/2的表达水平和p-ERK/ERK值增高密切相关；Ang-( 1-7)可抑制AngⅡ所诱导的TGF-β1、Col Ⅰ和ColⅢ基因表达上调,这些现象可能体现了一种Ang-(1-7)拮抗AngⅡ所致的不良效应的保护性机制.
作者：考国营；范晋奇；张晓歌；崔坤；谭利；苏立；殷跃辉 刊期： 2013年第01期
目的 通过转录机器(RNA聚合酶)σE因子过量表达实现全局转录扰动,筛查迟钝爱德华菌(Edwardsiella tarda,Etarda)毒力相关基因.方法 从E.tarda EIB202中PCR扩增RNA聚合酶σE因子编码基因rpoE,连接到载体pACYC184上,构建rpoE基因过量表达菌株；在克隆rpoE基因时引入突变,使该基因表达失活,构建移码突变失活菌株.感染模式生物斑马鱼,检测各菌株半数致死剂量(LD50),RT-PCR法检测各菌株rpoE及其下游调控基因degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO mRNA的转录水平.结果 重组质粒pACYC 184-rpoE经双酶切及测序证实构建正确；在102、103、104和105 CFU/g注射浓度下,空载体转染菌株和rpoE基因过量表达菌株的毒力差异无统计学意义(P＞0.05)；与空载体转染菌株相比,rpoE基因过量表达菌株rpoE基因mRNA的转录水平上调9.5倍；与rpoE基因移码突变失活菌株相比,rpoE基因过量表达菌株rpoE基因下游调控基因degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO分别上调6.9、2.64、2.85、2.38、1.34倍.结论 成功构建了E.tarda rpoE基因过量表达菌株以及移码突变失活菌株,初步确定degP 、fkpA、plsB、lpxD、yfiO 5个基因与E.tarda毒力相关.
作者：王晓波；叶江；宋姗姗；王克平；张惠展 刊期： 2013年第01期
目的 探讨骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)9-2双表达定向诱导多潜能干细胞C3H10向成骨细胞分化的情况.方法 将C3H10细胞分为4组:BMP9-2、BMP2、BMP9和GFP组,将4种重组腺病毒分别感染C3H10细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、定量测定及钙茜素红染色,观察BMP9-2双表达对C3H10细胞成骨分化的定向诱导作用.结果 BMP9-2双表达能诱导C3H10细胞ALP的表达,其染色活性高于BMP2组1.6倍,BMP9组2.5倍,GFP组4倍；其BMP9-2双表达定量表达A520值在病毒感染后5、7、9d均高于BMP2、BMP9和GFP组；BMP9-2双表达能诱导C3H10细胞钙盐的沉积,感染14 d后,钙茜素红染色可见钙化结节,其染色活性高于BMP2组1.4倍,BMP9组1.3倍,GFP组5.2倍.结论 BMP9-2双表达能定向诱导C3H10细胞成骨分化,其成骨活性强于单一成骨诱导因子BMP2和BMP9.
作者：陈聪；罗庆；田雯；迭小红；康权 刊期： 2013年第01期
目的 构建人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1 (Breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)基因siRNA慢病毒载体,并进行鉴定.方法 针对人BCAR1基因靶序列设计并合成4条siRNA序列(PLVT350、PLVT351、PLVT352、PLVT353)及1条阴性对照序列(PLVT4),分别退火后,插入经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的慢病毒载体pMagic 4.1中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,经PCR和DNA测序筛选阳性克隆,提取重组干扰质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞,进行慢病毒包装,浓缩后,采用梯度稀释法测定病毒滴度.将重组慢病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察感染效率,实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效果好的重组慢病毒感染肺癌A549细胞,Western blot检测BCAR1蛋白的表达水平.结果 成功构建了4种人BCAR1基因慢病毒干扰质粒,PLVT350、PLVT351、PLVT352和PLVT353的病毒滴度分别为3.45×108、2.13×108、3.01×108和2.47 × 108 TU/ml;慢病毒感染3d后,A549细胞的感染效率均达90％以上；除PLVT350外,其他3个均为有效靶点,PLVT351、PLVT352和PLVT353的沉默率分别为82％、73％和82％,BCAR1基因的表达量显著低于未转染和PLVT4组A549细胞(P＜0.001);PLVT351感染的A549细胞中BCAR1蛋白的表达水平明显低于未感染和PLVT4组A549细胞(P＜0.01).结论 成功构建了人BCAR1基因siRNA慢病毒载体,并建立了稳定表达的A549细胞株,为进一步探索BCAR1基因在肺癌中的相关功能及其分子机制奠定了基础.
作者：黄伟；范小青；王如文；邓波；蒋耀光；赵云平；郭伟 刊期： 2013年第01期
目的 比较去冷沉淀血浆(Cryoprecipitate-reduced plasma,CRP)中系列凝血因子、纤维蛋白原(Fibrinogen,Fib)和血管性血友病因子裂解蛋白酶(A disintegrin-like and metalloprotease with thrombospondin-1 repeats 13,ADAMTS-13)水平的变化.方法 用140人份新鲜冰冻血浆(Fresh frozen plasma,FFP)制备CRP,采用Biggers一期法测定FFP和CRP中FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FX、FⅪ、FⅫ的促凝活性；免疫比浊法测定Fib和血管性血友病因子抗原因子活动度(vWF:Ag)水平；荧光共振能量转移法(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)测定70人份FFP和CRP中的ADAMTS13活性及抗原含量.结果 与FFP比较,CRP中FⅧ:C、FⅤ:C、FⅦ:C、FⅨ:C、FX:C、FⅪ:C、Fib、vWF:Ag水平均明显下降,且差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.001)；FⅡ:C、FⅫ:C、ADAMTS13抗原含量和活性差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CRP可代替FFP用于血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)的治疗,而不适用于FⅧ、Fib及vWF缺乏患者的补充治疗.
作者：马莉；孙盼；林方昭；刁戈；李剑平；张红抑；刘建强；张心声；柏则蓉；周静宇；黎美君；李长清 刊期： 2013年第01期
目的 探讨Apg-2基因沉默对pMIGR1空载体感染的BaF3-MIGR1细胞及稳定表达Bcr-Abl融合基因的BaF3-P210细胞增殖的影响,为进一步研究Apg-2在Bcr-Abl阳性的CML细胞中的作用奠定基础.方法 针对Apg-2基因609 ～ 629、845 ～ 865和2 110 ～2 130核苷酸合成3条shRNA序列Hspa41、Hspa42、Hspa43,同时合成阴性对照序列HspaHK,电穿孔转染BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞,经G418筛选稳定抑制细胞株,RT-PCR和Western blot 检测细胞中Apg-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平；Am-blue法检测细胞增殖；甲基纤维素法检测细胞克隆形成能力；流式细胞技术检测细胞周期的变化.结果 转染的3条shRNA质粒中,shRNA-Hspa42的干扰效果佳.Apg-2表达抑制后,BaF3-P210细胞的增殖与克隆形成能力均明显下降(P＜0.05),处于G1期细胞的百分率明显升高(P＜0.05),处于S期的细胞百分率明显下降(P＜0.05)；而BaF3-MIGR1细胞的增殖与克隆形成能力均明显增强(P＜0.05),处于S期的细胞百分率明显升高(P＜0.05).结论 干扰Apg-2基因的表达可抑制Bcr-Abl阳性细胞BaF3-P210的增殖,而对Bcr-Abl阴性细胞BaF3-MIGR1的增殖起促进作用.
作者：陈熙；钟梁；肖青；李春莉；李亚娟；王海霞；冯文莉 刊期： 2013年第01期
目的 原核表达中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sarbood virus,CSBV)结构蛋白,并制备其抗血清.方法 采用RT-PCR法扩增CSBV结构蛋白基因片段,克隆至pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Gluthathione-Sepharose 4B亲和层析纯化后,免疫小鼠,制备抗血清,并进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,以可溶性形式表达；纯化后纯度可达95％以上；制备的抗血清可识别天然CSBV结构蛋白.结论 成功在大肠杆菌中表达了CSBV结构蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研究囊状幼虫病病毒与宿主的相互作用及开发血清学诊断方法奠定了基础.
作者：沈克飞；张邑帆；曹兰；王瑞生；杨金龙；杨柳；戴荣国 刊期： 2013年第01期
目的 观察FTY720对聚乙烯颗粒诱导的破骨细胞前体细胞RAW264.7分化的影响,探讨其防治人工关节无菌性松动的可能性.方法 构建破骨细胞-成骨细胞(RAW264.7-MC3T3)小室共培养体系及破骨细胞-骨片体系,用FTY720干预受聚乙烯磨损颗粒刺激的RAW264.7细胞的分化,倒置显微镜观察分化细胞的形态；抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatas,TRAP)染色法对破骨细胞进行计数；扫描电镜观察破骨细胞的一般形态及骨吸收效应；ELISA法检测共培养体系中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(Lnterleukin-6,IL-6)的分泌水平；RT-PCR检测破骨细胞表面核因子KB受体活化子(Receptor activator of NFKB,RANK)和TRAP基因mRNA的转录水平.结果 聚乙烯颗粒组RAW264.7细胞体积增大,胞质丰富,胞体边缘不齐呈云雾状,细胞核较多；FTY720组TRAP(+)细胞数明显低于聚乙烯颗粒组(P＜0.01)；破骨细胞呈圆形,细胞间可通过纤维样足突连接,骨片上有破骨细胞附着生长,FTY720组骨吸收陷窝和骨吸收面积均明显低于聚乙烯颗粒组(P＜0.01)；聚乙烯颗粒组TNF-α和IL-6的分泌水平均明显增加(P＜0.01),FTY720组TNF-α和IL-6的分泌受到抑制；FTY720组破骨细胞表面TRAP和RANK基因mRNA的转录水平均明显低于颗粒组(P＜0.01).结论 FTY720能有效抑制破骨细胞前体细胞RAW264.7分化成熟,减少破骨细胞的形成及对骨片的溶解吸收,减少TNF-α、IL-6等炎性因子的分泌,下调RANK、TRAP等破骨细胞特异细胞表型和功能基因mRNA的转录水平,有望成为防治人工关节无菌性松动的药物.
作者：周园东；王信；李平；万睿；陈婷梅；张健 刊期： 2013年第01期
目的 原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC )F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体.方法 以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XLl-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性.结果 重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确；F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35％,纯化的重组蛋白纯度可达92％；制备的抗血清效价达1:2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性.结论 已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础.
作者：倪宏波；郎秀艳；邵光喜；周玉龙；焉秋龙；刘银冰；宫大庆；王春仁 刊期： 2013年第01期
目的 研制静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH4)[Enterovirus 71 human immunoglobulin( pH 4)for intravenous injection,EV71-IVIG],用于治疗重症手足口病.方法 采用细胞病变抑制法检测原料血浆的抗EV71中和抗体效价(EV71 neutralizing antibody titer,EV71-NT),确定EV71抗体血浆的筛选标准；从健康人血浆中筛选中和效价较高的EV71血浆,按《中国药典》三部(2010版)的生产工艺连续制备3批EV71-IVIG;以乳鼠模型评价EV71-IVIG的治疗效果,并以细胞病变抑制法检测EV71-IVIG对EV71临床分离株及CA16病毒的中和活性.结果 从90批原料血浆中筛选出约3.8吨EV71抗体血浆,制备的3批EV71-IVIG符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白(pH 4)”的质量标准,EV71-NT为国内普通IVIG的4～5倍.0.5 mg EV71-IVIG即可充分保护经10 LD50EV71攻击的乳鼠,存活率达100％.EV71-IVIG对近几年流行的EV71临床分离株有较高的中和活性.结论 已成功研制EV71-IVIG,为重症手足口病患者的治疗提供了新的用药选择.
作者：刘兰军；杨春；武志强；秦婷婷；李小姣；刘瑞熙；刘波；张雪梅；杨汇川 刊期： 2013年第01期
摘要:目的 构建UHRF2不同结构域缺失突变体,并在HEK293细胞中表达.方法 根据UHRF2不同结构域位置特征,构建5种不同结构域缺失突变体；以重组质粒pCMV-3xFlag-UHRF2为模板,PCR法直接扩增△UBL、△RING和△YDG+△RING编码基因,重叠PCR法扩增△PHD和△YDG编码基因,定向克隆至pCMV-3xFlag真核表达载体中,构建重组表达质粒,转染HEK293细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达.结果 UHRF2的结构域缺失体△UBL、△PHD的上游和下游及上下游合并、△YDG的上游和下游及上下游合并、△RING和△YDG+△RING的PCR产物分别可见2018、987、1152、2 272、1 232、629、1 827、2 163和1 287 bp的特异条带；UHRF2各结构域缺失体的重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确；重组质粒转染HEK293细胞表达的重组蛋白大小均与理论值相符.结论 成功在HEK293细胞中表达了UHRF2不同结构域缺失突变体,为进一步研究UHRF2各结构域的功能及其与其他蛋白质的相互作用位点奠定了基础.
作者：白露；王筱绘；胡斌；周丹琳；段昌柱 刊期： 2013年第01期
目的 对COL1A1和COL1A2基因突变检测为阴性的成骨不全症患者进行隐性致病基因LEPRE1的筛查.方法 采集成骨不全患者外周血样,提取基因组DNA,PCR扩增LEPRE1基因,直接测序法进行突变检测；采用PolyPhen、Align GVGD和SIFT突变功能预测软件分析突变对蛋白功能的影响.结果 检测到1例成骨不全症患者在LEPRE1基大第5号外显子发生碱基GGA＞ AGA,发现甘氨酸被精氨酸替换的1个杂合突变位点(c.1045G＞A,p.Gly349Arg)；其母亲和外祖父有相同杂合突变,家庭其他成员和200份健康对照样本未检测到该突变；PolyPhen、Align GVGD和SIFT软件预测结果表明,p.Gly349Arg突变很可能影响蛋白的正常功能.结论 LEPRE1基因c.1045G＞A突变很可能是成骨不全症潜在的致病突变位点.
作者：徐超；任秀智；王延宙；韩金祥；王子强；鲁艳芹 刊期： 2013年第01期
目的 探讨他莫昔芬( Tamoxifen,TAM)对子宫内膜癌RL-95-2细胞增殖及let-7g表达的影响.方法 采用免疫荧光染色法检测RL-95-2细胞中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的表达；用不同浓度的TAM(1×10-11,1×10-9、1×10-7、1×10-5、1×10-4 mol/L)处理RL-95-2细胞48和72 h,CCK-8法检测细胞的增殖活力；用1×10-7 mol/L的TAM处理RL-95-2细胞72 h,流式细胞术检测细胞周期的变化；用不同浓度的TAM处理RL-95-2细胞72 h,实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞中let-7g的表达,借助生物信息学软件预测let-7g的靶标基因,并对其生物学功能进行分析.结果 RL-95-2细胞中ER呈阳性表达；1×10-7mol/L的TAM处理RL-95-2细胞48 h及1×10-9～1×10-5 mol/L的TAM处理细胞72 h,具有促进细胞增殖的作用,并使let-7g的表达量增加,1×10-7mol/L的TAM作用为显著；TAM促使细胞从G0/G1期进入S期；let-7g作用的可能靶标基因为UHRF2、RB1、GAS7、PLA GL2、NAB1和ZNF282.结论 适宜浓度的TAM对人子宫内膜癌RL-95-2细胞具有促增殖作用,并使细胞从G0/G1期进入S期,该作用可能部分是通过上调let-7g的表达而实现的.
作者：刘祖翠；魏莎莉；陈国庆；陈渝；刘革力 刊期： 2013年第01期
目的 探讨联氨基姜黄素( Hydrazinocurcumin,HG)脂质体纳米颗粒(Liposome nanoparticles,NPs)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响.方法 采用薄膜分散-超声法制备HC-NPs,透射电镜检测纳米颗粒的粒径大小.将4T1细胞分为PBS组、NPs组和HC-NPs组,分别加入10％(v/v)PBS、10％ (v/v)NP、10％(v/v)HC-NPs,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖活力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化；刘氏染色法检测细胞的形态;Transwell试验检测4T1细胞侵袭和迁移能力；Western blot检测转导和转录激活因子STAT3及细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移相关蛋白的表达水平.结果 透射电镜下可见HC-NPs为150 nm左右的脂质体颗粒.HC-NPs对4T1细胞的增殖抑制率明显高于NPs组(P＜0.01)；与PBS组和NPs组相比,HC-NPs可使细胞形态不规则,诱导细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),明显抑制细胞侵袭和迁移(P＜0.01)及STAT3的激活,下调CyclinD1、c-Myc、Bcl-2 、Survivin、MMP-9的表达,同时上调Bax的表达(P＜0.05).结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制4T1细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.
作者：田文霞；张曦文；党微旗；唐浩；王林；曹红；陈婷梅 刊期： 2013年第01期
目的 分析Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响,以探讨脑胶质瘤浸润性生长的机理.方法 从U87细胞中扩增Ezrin基因CDS区片段,克隆至表达载体pEGFP-C1中,构建Ezrin基因表达质粒pEGFP-C1/Ezrin.将pEGFP-C1/Ezrin、Ezrin基因shRNA质粒shRNA-Ezrin-2和pEGFP-C1以脂质体LipofectimineTM 2000介导分别转染U87细胞,Western blot分析转染细胞中Ezrin蛋白的表达；划痕试验检测转染细胞的迁移情况.结果 克隆的Ezrin基因与GenBank中登录的Homo sapiens ezrin (EZR),transcript variant 1,mRNA序列同源性达99％；该基因编码的氨基酸序列与ezrin[ Homo sapiens] (Sequence ID:reflNP_003370.21,Length:586)的一致性为99％,在第S66P、K258R、P265L和K577R位发生变异,读码框正确.pEGFP-C1/Ezrin转染的U87细胞中Ezrin蛋白的相对表达量(1.17)高于shRNA-Ezrin-2转染组(0.47)和pEGFP-C1转染组(0.82).划痕试验显示,shRNA-Ezrin-2转染组有少量细胞迁移至划痕处,pEGFP-C1/Ezrin转染组细胞几乎占满划痕处.结论 Ezrin基因敲低可阻止U87细胞迁移,其过表达可促进细胞迁移,表明U87细胞浸润性生长与Ezrin基因的表达有关.
作者：刘乃杰；秦治刚；孙利波；金星一；叶保国；张金男；朱庆三 刊期： 2013年第01期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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