薛正莲；张珂
目的 研制静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH4)[Enterovirus 71 human immunoglobulin( pH 4)for intravenous injection,EV71-IVIG],用于治疗重症手足口病.方法 采用细胞病变抑制法检测原料血浆的抗EV71中和抗体效价(EV71 neutralizing antibody titer,EV71-NT),确定EV71抗体血浆的筛选标准；从健康人血浆中筛选中和效价较高的EV71血浆,按《中国药典》三部(2010版)的生产工艺连续制备3批EV71-IVIG;以乳鼠模型评价EV71-IVIG的治疗效果,并以细胞病变抑制法检测EV71-IVIG对EV71临床分离株及CA16病毒的中和活性.结果 从90批原料血浆中筛选出约3.8吨EV71抗体血浆,制备的3批EV71-IVIG符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白(pH 4)”的质量标准,EV71-NT为国内普通IVIG的4～5倍.0.5 mg EV71-IVIG即可充分保护经10 LD50EV71攻击的乳鼠,存活率达100％.EV71-IVIG对近几年流行的EV71临床分离株有较高的中和活性.结论 已成功研制EV71-IVIG,为重症手足口病患者的治疗提供了新的用药选择.
作者：刘兰军；杨春；武志强；秦婷婷；李小姣；刘瑞熙；刘波；张雪梅；杨汇川 刊期： 2013年第01期
目的 探讨疏水层析纯化重组汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)层析图谱与蛋白含量及HBsAg含量的相关性.方法 采用疏水层析纯化8批HP-HBsAg小量试验样品和5批小量验证试验样品及5批酿酒酵母表达的HBsAg对照试验样品,采用Lowry法和电化学发光法(Electrochemiluminescent immunoassay,ECLIA)分别检测纯化样品中蛋白含量和HBsAg含量,并计算HBsAg的回收率；通过几何法封闭紫外监测图谱特征峰图形,用数字求积仪采用积分法求出各封闭特征峰的图形面积,并进行分析；取小量验证试验1批样品的层析主峰和副峰收液进行电镜观察.结果 8批HP-HBsAg小量试验和5批HP-HBsAg小量验证试验HBsAg的平均回收率分别为70％和54％.HP-HBsAg疏水层析图谱由两部分构成:穿透峰和目标峰(HBsAg峰),目标峰可见高低不同的两个峰(主峰与副峰)；对照图谱中有穿透峰和目标峰.对目标峰进行量化分析,主峰、副峰与目标峰的面积比值分别与其所对应的收集量、蛋白含量和HBsAg含量比值相关.电镜观察可见小量验证试验样品主峰收液中HBsAg颗粒大小均一,副峰收液中HBsAg颗粒大小不均一.结论 疏水层析纯化重组HP表达的HBsAg效果良好,通过峰形之间面积比值,可获得峰形所对应的收集量、蛋白量和HBsAg量比值,为HBsAg的进一步纯化提供了参考.
作者：许宁；张德有；马锐；冯潇磊；张旭；杨旭琴；李彩梅；柳蔷；沈永才；李津 刊期： 2013年第01期
目的 比较去冷沉淀血浆(Cryoprecipitate-reduced plasma,CRP)中系列凝血因子、纤维蛋白原(Fibrinogen,Fib)和血管性血友病因子裂解蛋白酶(A disintegrin-like and metalloprotease with thrombospondin-1 repeats 13,ADAMTS-13)水平的变化.方法 用140人份新鲜冰冻血浆(Fresh frozen plasma,FFP)制备CRP,采用Biggers一期法测定FFP和CRP中FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FX、FⅪ、FⅫ的促凝活性；免疫比浊法测定Fib和血管性血友病因子抗原因子活动度(vWF:Ag)水平；荧光共振能量转移法(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)测定70人份FFP和CRP中的ADAMTS13活性及抗原含量.结果 与FFP比较,CRP中FⅧ:C、FⅤ:C、FⅦ:C、FⅨ:C、FX:C、FⅪ:C、Fib、vWF:Ag水平均明显下降,且差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.001)；FⅡ:C、FⅫ:C、ADAMTS13抗原含量和活性差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CRP可代替FFP用于血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)的治疗,而不适用于FⅧ、Fib及vWF缺乏患者的补充治疗.
作者：马莉；孙盼；林方昭；刁戈；李剑平；张红抑；刘建强；张心声；柏则蓉；周静宇；黎美君；李长清 刊期： 2013年第01期
目的 探讨脂联素对巨噬细胞ATP结合盒转运子A1 (ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)及其上游调控因子肝脏X受体α(Liver X receptor α,LXRα)表达的影响及其在胆固醇逆转运(Reverse cholesterol transport,RCT)和抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)中可能的作用机制.方法 以不同浓度的脂联素(0、1、5、10 μg/ml)体外培养巨噬细胞RAW264.7 24 h,RT-PCR法检测细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中ABCA1和LXRα蛋白的表达水平,闪烁计数法检测细胞内胆固醇的流出情况.结果 脂联素能显著上调RAW264.7细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平(P＜0.05),且呈浓度依赖性；脂联素能浓度依赖性地增加细胞内胆固醇的流出(P＜0.05).结论 脂联素可通过LXRα途径上调巨噬细胞ABCA1基因的转录和翻译水平,促进胆固醇逆转运,延缓AS的发生、发展.
作者：艾青；马康华 刊期： 2013年第01期
新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-lactamase-1,NDM-1)是新近发现的由细菌产生的一种能够水解碳青霉烯类的金属β-内酰胺酶.NDM-1具有强大的水解作用,几乎能抵抗目前使用的所有抗生素,已严重威胁人类健康.本文对NDM-1携带菌的流行现状、NDM-1的基因排布特点、蛋白结构特点及酶活性中心的新研究进展作一综述.
作者：夏力亮；孙洋 刊期： 2013年第01期
目的 建立前列腺特异抗原(Prostate specific antigen,PSA)光激发化学发光免疫(Light induced chemiluminescent immunoassay,LICA)定量检测方法.方法 用PSA多克隆抗体包被受体微粒,PSA单克隆抗体标记生物素,两者与链霉亲和素包被的供体微粒共同组成检测试剂检测PSA,优化测定条件并对方法进行验证.分别采用本方法与Roche公司电化学发光免疫分析法对82份临床标本进行检测,并进行比较分析.结果 本方法的分析灵敏度为0.31 ng/ml;批内变异系数为4.66％ ～6.75％,批间变异系数为5.68％ ～ 8.42％;回收率为95.1％～105.2％.两种方法具有较好的相关性,其R2为0.981 5.结论 建立的均相化学发光免疫测定方法能够用于血清PSA的定量测定,且其性能指标符合临床要求.
作者：刘志永；任杰；李婵；李晓蕾；陈新瑛；李会强 刊期： 2013年第01期
目的 对COL1A1和COL1A2基因突变检测为阴性的成骨不全症患者进行隐性致病基因LEPRE1的筛查.方法 采集成骨不全患者外周血样,提取基因组DNA,PCR扩增LEPRE1基因,直接测序法进行突变检测；采用PolyPhen、Align GVGD和SIFT突变功能预测软件分析突变对蛋白功能的影响.结果 检测到1例成骨不全症患者在LEPRE1基大第5号外显子发生碱基GGA＞ AGA,发现甘氨酸被精氨酸替换的1个杂合突变位点(c.1045G＞A,p.Gly349Arg)；其母亲和外祖父有相同杂合突变,家庭其他成员和200份健康对照样本未检测到该突变；PolyPhen、Align GVGD和SIFT软件预测结果表明,p.Gly349Arg突变很可能影响蛋白的正常功能.结论 LEPRE1基因c.1045G＞A突变很可能是成骨不全症潜在的致病突变位点.
作者：徐超；任秀智；王延宙；韩金祥；王子强；鲁艳芹 刊期： 2013年第01期
目的 对表达谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,EC4.1.1.15,简称GAD或GDC)的重组大肠杆菌的发酵条件进行优化.方法 通过单因素试验优化表达GAD的重组大肠杆菌B3C1的诱导剂IPTG添加时间、IPTG浓度、诱导时间、诱导温度,再经响应面分析法优化工程菌的发酵条件(氯化钠、胰化蛋白胨、酵母粉、摇床转速、初始pH值、培养时间、接种量、装液量).结果 工程菌的佳诱导条件为:IPTG添加时间为工程菌接种后4h,IPTG浓度为0.8 mmol/L,诱导时间为4h,诱导温度为35℃；工程菌的佳发酵条件为:酵母粉1.01％,氯化钠0.6％,胰化蛋白胨1.5％,培养时间11.25h,摇床转速250 r/min,初始pH值6.5,接种量3.0％,装液量11.70 ml.工程菌在该条件下发酵培养,GAD酶活达1 227.33 U,比优化前提高了12.29％.结论 已成功对表达GAD的重组大肠杆菌的发酵条件进行了优化,为其工业化生产奠定了基础.
作者：薛正莲；张珂 刊期： 2013年第01期
目的 分析Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响,以探讨脑胶质瘤浸润性生长的机理.方法 从U87细胞中扩增Ezrin基因CDS区片段,克隆至表达载体pEGFP-C1中,构建Ezrin基因表达质粒pEGFP-C1/Ezrin.将pEGFP-C1/Ezrin、Ezrin基因shRNA质粒shRNA-Ezrin-2和pEGFP-C1以脂质体LipofectimineTM 2000介导分别转染U87细胞,Western blot分析转染细胞中Ezrin蛋白的表达；划痕试验检测转染细胞的迁移情况.结果 克隆的Ezrin基因与GenBank中登录的Homo sapiens ezrin (EZR),transcript variant 1,mRNA序列同源性达99％；该基因编码的氨基酸序列与ezrin[ Homo sapiens] (Sequence ID:reflNP_003370.21,Length:586)的一致性为99％,在第S66P、K258R、P265L和K577R位发生变异,读码框正确.pEGFP-C1/Ezrin转染的U87细胞中Ezrin蛋白的相对表达量(1.17)高于shRNA-Ezrin-2转染组(0.47)和pEGFP-C1转染组(0.82).划痕试验显示,shRNA-Ezrin-2转染组有少量细胞迁移至划痕处,pEGFP-C1/Ezrin转染组细胞几乎占满划痕处.结论 Ezrin基因敲低可阻止U87细胞迁移,其过表达可促进细胞迁移,表明U87细胞浸润性生长与Ezrin基因的表达有关.
作者：刘乃杰；秦治刚；孙利波；金星一；叶保国；张金男；朱庆三 刊期： 2013年第01期
目的 分离白血病K562细胞株中CD34+细胞群,并分析其生物学特征,为从干细胞角度治疗白血病提供实验依据.方法 采用免疫磁性分选法分离K562细胞中CD34+细胞群,台盼蓝拒染法检测细胞活性；流式细胞术检测CD34+细胞比例及细胞周期；单细胞克隆培养检测CD34+细胞自我更新能力；RT-PCR法检测CD34+细胞分化相关指标促红细胞生成素( Erythropoietin,EPO)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)基因mRNA的转录水平；并检测CD34+细胞耐药蛋白P-gp (P-glycoprotein)的表达.结果 免疫磁性分选法可有效分离出CD34+细胞群,细胞活性为99％～ 100％；分离的CD34+细胞含量占细胞总数的78.5％～85.3％,细胞大部分处于静止状态,G0/G1期细胞比例达80％左右,显著高于分离前的K562细胞；CD34+细胞群具有形成混合集落的能力；与K562细胞相比,CD34+细胞EPO和GM-CSF基因mRNA的转录水平明显下降(P＜0.01),P-gp表达阳性.结论 成功从K562细胞株中分离了CD34+细胞群,其具有自我更新和多向分化的能力,表明其具有白血病干/祖细胞的生物学特点.
作者：刘俊；张先平；蔡世忠；徐春燕；王亚平；林雪梅 刊期： 2013年第01期
目的 建立测定单唾液酸四己糖神经节苷脂钠(Monosialotetrahexosylganglioside sodium salt,GM1)注射液含量的反相高效液相色谱法(Reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC),为GM1注射液的质量控制提供参考.方法 色谱条件:色谱柱:Hypersil ODS C18(4.6 mm× 250 mm,5μm)；流动相:乙腈-水(0.03％的三乙胺加磷酸至pH=7.5)(77:23)；检测波长:205 nm;流速:1.0 ml/min;进样体积:10 μl;理论塔板数按GM1峰计算不低于2 000.以峰面积对浓度进行线性回归,确定该法的线性范围,并对该法进行精密性、稳定性、重复性及加样回收率验证；应用建立的方法测定3批GM1注射液的含量.结果 GM1在50 ～ 800 μg/ml浓度范围内线性关系良好,r=0.999 2；该方法日内日间精密性及重复性均良好,对照品溶液在8h内基本稳定,样品的平均加样回收率为99.74％;用建立的方法检测3批样品中的GM1含量分别为96.80％、98.06％和97.32％.结论 建立了测定GM1注射液含量的RP-HPLC法,该方法准确、简便、快速、可靠,能有效控制GM1注射液的质量.
作者：何丹；杨林；张景勍 刊期： 2013年第01期
目的 原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC )F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体.方法 以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XLl-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性.结果 重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确；F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35％,纯化的重组蛋白纯度可达92％；制备的抗血清效价达1:2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性.结论 已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础.
作者：倪宏波；郎秀艳；邵光喜；周玉龙；焉秋龙；刘银冰；宫大庆；王春仁 刊期： 2013年第01期
目的 建立适合大规模生产的无细胞百日咳疫苗(Acellular pertussis vaccine,APV)纯化新工艺,使疫苗主要成分的比例稳定可控.方法 复苏百日咳菌种并传代培养,在大罐发酵培养收获前,调整菌液的pH值至弱酸性,再通过离心获得上清液,经超滤浓缩和脱盐处理,使用阳离子交换层析进行目的组分的分离纯化,纯化产物经SDS-PAGE分离并经Western blot鉴定,确定佳纯化条件.用建立的层析纯化新工艺连续纯化3批APV,检测各项指标,验证该工艺的重复性.结果 收获前菌液pH值调至5.8～6.0,可使疫苗主要保护抗原在上清液中的含量明显提高；采用强阳离子交换层析的方法,从目的蛋白的捕获到多组分的分离提纯可一步完成,各目的蛋白组分的纯度均可达85％以上,回收率可达90％以上；建立的纯化新工艺具有良好的重复性.结论 初步建立了可线性放大、适合APV大规模生产的层析纯化新工艺,为疫苗质量标准的提高奠定了基础.
作者：吴腾捷；张斌；张青；郑丽华；瞿爱东 刊期： 2013年第01期
硫柳汞是一种在疫苗等生物制品中广泛使用的防腐剂,自上世纪末开始,关于含硫柳汞疫苗的安全性问题一直存在争议.本文对人用疫苗中应用硫柳汞的安全性相关研究、权威机构的立场、去汞行动的措施及存在的问题作一综述.
作者：何鹏 刊期： 2013年第01期
重组抗体在哺乳动物细胞中的高效表达有赖于高效表达载体的构建、抗体基因序列的优化、抗体稳定细胞株的筛选、表达宿主细胞的改造及细胞培养工艺的优化等.本文对上述问题的研究进展进行综述.
作者：胡迪超；张爱华；杨晓明 刊期： 2013年第01期
目的 分析北京市朝阳区部分社区老年人肺炎疫苗接种率及其影响因素,以提高老年人肺炎疫苗的接种率,降低社区老年人肺炎球菌感染的危害.方法 通过整群抽样的方法,选取北京市朝阳区年龄≥60岁的部分社区老年人进行问卷调查,收集调查对象的基本信息、健康状况、就医行为及疫苗接种情况,分析社区老年人肺炎疫苗接种率的影响因素.结果 调查数据显示社区老年人的肺炎疫苗接种率为2.1％,经多因素Logistic回归分析,年龄、受教育程度及健康状况是肺炎疫苗接种率的主要影响因素(P＜0.05).结论 应通过多种措施提高老年人等优先人群肺炎疫苗的接种率；干预过程中应重视受教育程度较低、身体素质较好以及年龄相对较轻的老年人
作者：张国辉；郑东旖；时念民；艾星；白云骅 刊期： 2013年第01期
目的 构建人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1 (Breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)基因siRNA慢病毒载体,并进行鉴定.方法 针对人BCAR1基因靶序列设计并合成4条siRNA序列(PLVT350、PLVT351、PLVT352、PLVT353)及1条阴性对照序列(PLVT4),分别退火后,插入经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的慢病毒载体pMagic 4.1中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,经PCR和DNA测序筛选阳性克隆,提取重组干扰质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞,进行慢病毒包装,浓缩后,采用梯度稀释法测定病毒滴度.将重组慢病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察感染效率,实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效果好的重组慢病毒感染肺癌A549细胞,Western blot检测BCAR1蛋白的表达水平.结果 成功构建了4种人BCAR1基因慢病毒干扰质粒,PLVT350、PLVT351、PLVT352和PLVT353的病毒滴度分别为3.45×108、2.13×108、3.01×108和2.47 × 108 TU/ml;慢病毒感染3d后,A549细胞的感染效率均达90％以上；除PLVT350外,其他3个均为有效靶点,PLVT351、PLVT352和PLVT353的沉默率分别为82％、73％和82％,BCAR1基因的表达量显著低于未转染和PLVT4组A549细胞(P＜0.001);PLVT351感染的A549细胞中BCAR1蛋白的表达水平明显低于未感染和PLVT4组A549细胞(P＜0.01).结论 成功构建了人BCAR1基因siRNA慢病毒载体,并建立了稳定表达的A549细胞株,为进一步探索BCAR1基因在肺癌中的相关功能及其分子机制奠定了基础.
作者：黄伟；范小青；王如文；邓波；蒋耀光；赵云平；郭伟 刊期： 2013年第01期
目的 分析麻腮风联合减毒活疫苗的渗透压摩尔浓度,为提高该疫苗的质量标准提供参考.方法 按照《中国药典》三部(2010版)附录渗透压摩尔浓度测定法,采用冰点下降法测定市售31批麻腮风联合减毒活疫苗的渗透压摩尔浓度.结果 31批麻腮风联合减毒活疫苗的渗透压摩尔浓度存在一定差异,在620 ～ 774 mOsmol/kg之间.结论 在麻腮风联合减毒活疫苗成品质量标准中增加渗透压摩尔浓度的检测十分必要.
作者：丁锐；纪宏；胡琴；陈思；刘奕明；周长明 刊期： 2013年第01期
目的 比较高效液相色谱法( HPLC)和紫外分光光度法检测亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量的效果.方法 分别采用HPLC法和紫外分光度法检测亚单位流感疫苗中间体和成品中壬苯醇醚-9的含量,并取中间体进行SDS-PAGE分析.结果 紫外分光光度法测定亚单位流感疫苗成品和中间体的壬苯醇醚-9含量比HPLC法高10％以上,测定中间体3壬苯醇醚-9含量的结果差异更显著；SDS-PAGE分析显示中间体1、2、3的核蛋白(NP)含量差异显著,大多数存在于中间体3中.结论 HPLC法可代替紫外分光光度法检测亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9的含量.
作者：田文莉；杨江山；万亚芬；祁骥；杨旭 刊期： 2013年第01期
目的 优化猪源枯草芽孢杆菌喷雾干燥工艺,提高菌体喷雾干燥后的存活率.方法 应用SAS V 8.0统计分析软件中的二次正交旋转组合设计方案进行试验设计,分析各因素对Y值的效应关系；应用优化的喷雾干燥工艺进行3次重复喷雾干燥试验,验证预测结果的准确性；并检测芽孢率对菌体喷雾干燥存活率的影响.结果 优化的喷雾干燥工艺中各条件的佳参数为:出口温度90℃,入口温度150℃,保护剂浓度20％,入料速度1 200 ml/h；应用优化的喷雾干燥工艺进行3次重复喷雾干燥试验,菌体平均存活率为75.7％,与预测值(77％)基本相符；芽孢率对菌体喷雾干燥存活率影响较大.结论 优化了猪源枯草芽孢杆菌的喷雾干燥工艺,为其工业化生产奠定了基础.
作者：刘宇；李丹；王岩；吴博；王爽；朱丹丹；史同瑞；朱战波 刊期： 2013年第01期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
