艾青；马康华
目的 分析麻腮风联合减毒活疫苗的渗透压摩尔浓度,为提高该疫苗的质量标准提供参考.方法 按照《中国药典》三部(2010版)附录渗透压摩尔浓度测定法,采用冰点下降法测定市售31批麻腮风联合减毒活疫苗的渗透压摩尔浓度.结果 31批麻腮风联合减毒活疫苗的渗透压摩尔浓度存在一定差异,在620 ～ 774 mOsmol/kg之间.结论 在麻腮风联合减毒活疫苗成品质量标准中增加渗透压摩尔浓度的检测十分必要.
作者：丁锐；纪宏；胡琴；陈思；刘奕明；周长明 刊期： 2013年第01期
硫柳汞是一种在疫苗等生物制品中广泛使用的防腐剂,自上世纪末开始,关于含硫柳汞疫苗的安全性问题一直存在争议.本文对人用疫苗中应用硫柳汞的安全性相关研究、权威机构的立场、去汞行动的措施及存在的问题作一综述.
作者：何鹏 刊期： 2013年第01期
目的 探讨联氨基姜黄素( Hydrazinocurcumin,HG)脂质体纳米颗粒(Liposome nanoparticles,NPs)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响.方法 采用薄膜分散-超声法制备HC-NPs,透射电镜检测纳米颗粒的粒径大小.将4T1细胞分为PBS组、NPs组和HC-NPs组,分别加入10％(v/v)PBS、10％ (v/v)NP、10％(v/v)HC-NPs,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖活力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化；刘氏染色法检测细胞的形态;Transwell试验检测4T1细胞侵袭和迁移能力；Western blot检测转导和转录激活因子STAT3及细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移相关蛋白的表达水平.结果 透射电镜下可见HC-NPs为150 nm左右的脂质体颗粒.HC-NPs对4T1细胞的增殖抑制率明显高于NPs组(P＜0.01)；与PBS组和NPs组相比,HC-NPs可使细胞形态不规则,诱导细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),明显抑制细胞侵袭和迁移(P＜0.01)及STAT3的激活,下调CyclinD1、c-Myc、Bcl-2 、Survivin、MMP-9的表达,同时上调Bax的表达(P＜0.05).结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制4T1细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.
作者：田文霞；张曦文；党微旗；唐浩；王林；曹红；陈婷梅 刊期： 2013年第01期
目的 原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC )F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体.方法 以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XLl-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性.结果 重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确；F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35％,纯化的重组蛋白纯度可达92％；制备的抗血清效价达1:2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性.结论 已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础.
作者：倪宏波；郎秀艳；邵光喜；周玉龙；焉秋龙；刘银冰；宫大庆；王春仁 刊期： 2013年第01期
目的 探讨脂联素对巨噬细胞ATP结合盒转运子A1 (ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)及其上游调控因子肝脏X受体α(Liver X receptor α,LXRα)表达的影响及其在胆固醇逆转运(Reverse cholesterol transport,RCT)和抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)中可能的作用机制.方法 以不同浓度的脂联素(0、1、5、10 μg/ml)体外培养巨噬细胞RAW264.7 24 h,RT-PCR法检测细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中ABCA1和LXRα蛋白的表达水平,闪烁计数法检测细胞内胆固醇的流出情况.结果 脂联素能显著上调RAW264.7细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平(P＜0.05),且呈浓度依赖性；脂联素能浓度依赖性地增加细胞内胆固醇的流出(P＜0.05).结论 脂联素可通过LXRα途径上调巨噬细胞ABCA1基因的转录和翻译水平,促进胆固醇逆转运,延缓AS的发生、发展.
作者：艾青；马康华 刊期： 2013年第01期
目的 建立三氯醋酸(Trichloroacetic acid,TCA)沉淀法测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量,并进行验证及初步应用.方法 采用Na125I标记结合TCA沉淀蛋白的方法测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量,对建立的方法进行线性、精密度及回收率验证；将2μg/kg 125I-rhIL-12单剂量皮下注射食蟹猴,分别于注射后4、8、24、32、48、72、96、120、144和168 h收集尿和粪,用建立的方法测定放射性,计算排出放射性占注入放射性的百分比.结果 125I-rhIL- 12的效价与未标记对照品效价无显著差异；在0.02 ～ 200 ng-当量范围内,不同组织/体液中125I-rhIL-12的加入量与总放射性及TCA沉淀放射性之间线性关系良好,变异系数(CV)多小于20％；125I-rhIL- 12原形主要在TCA沉淀部分.125I-rhIL-12经皮下注射食蟹猴后,放射性主要经尿排泄,少量经粪排泄,皮下注射后168 h,可排泄完全.结论 125I与rhIL-12在体内结合稳定,TCA沉淀法可用于测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量.
作者：李淑穗；李若冰；李茹冰；李健；陈新；孙智平；张宜俊；傅泳航 刊期： 2013年第01期
目的 探讨血管紧张素-( 1-7)[ Angiotensin-( 1-7),Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)在大鼠心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)中信号转导的影响及其机制.方法 原代分离培养并鉴定新生SD大鼠的CFs,将细胞分为8组:空白对照组、AngⅡ组、Ang-( 1-7)组、AngⅡ+Ang-( 1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组、AngⅡ+Ang-(1-7)+ PAO组、Ang-(1-7)+ PAO组和AngⅡ+PAO组,Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达；免疫沉淀捕捉分析法检测蛋白酪氨酸磷酸酶-1(Src-homology domain 2 containing protein tyrosine phosphatase-1,SHP-1)的酶活性；实时荧光定量PCR检测转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-31)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白( CollagenⅢ,ColⅢ)基因mRNA的转录水平.结果 AngⅡ可增加细胞内p-ERK1/2的表达水平和p-ERK/ERK值(磷酸化的p-ERK1/2与总的ERK1/2的比值),Ang-(1-7)通过与Mas受体结合可拮抗AngⅡ引起的上述效应；Ang-( 1-7)通过与Mas受体结合而激活胞内SHP-1的活性,并可拮抗AngⅡ所致的SHP-1活性降低；抑制SHP-1的活性后,Ang-( 1-7)拈抗AngⅡ诱导的p-ERK1/2表达水平和p-ERK/ERK值增高的效应被抑制.Ang-( 1-7)对TGF-β1、Col Ⅰ和ColⅢ基因mRNA的转录水平无显著影响,但可抑制AngⅡ所诱导的上述基因mRNA转录水平的增加.结论 Ang-( 1-7)通过与Mas受体结合而激活SHP-1,该效应与Ang-(1-7)拮抗AngⅡ诱导的p-ERK1/2的表达水平和p-ERK/ERK值增高密切相关；Ang-( 1-7)可抑制AngⅡ所诱导的TGF-β1、Col Ⅰ和ColⅢ基因表达上调,这些现象可能体现了一种Ang-(1-7)拮抗AngⅡ所致的不良效应的保护性机制.
作者：考国营；范晋奇；张晓歌；崔坤；谭利；苏立；殷跃辉 刊期： 2013年第01期
目的 构建人肝细胞生长因子(Human hepatocyte growth factor,hHGF)真核表达质粒,并检测其在人骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达及其对细胞生长的影响.方法 采用密度梯度法从人骨髓中分离BMSCs,流式细胞术检测细胞表型,成脂及成骨诱导其分化.PCR扩增hHGF基因,定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建重组表达质粒pEGFP-N 1-hHGF,通过电穿孔法转染BMSCs,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR及Western blot法检测hHGF基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTT法检测hHGF对BMSCs增殖活力的影响.结果 BMSCs高表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45；BMSCs在体外有向成脂及成骨细胞诱导分化的能力.酶切及基因测序证实,重组表达质粒pEGFP-N 1-hHGF构建正确；转染后48 h观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达；RT-PCR法和Western blot检测到hHGF基因在BMSCs中表达；转染hHGF基因的BMSCs增殖活力明显高于空白对照组和空载体转染组(P＜0.05).结论 成功构建了hHGF基因真核表达质粒,转染人BMSCs后获得表达,表达的hHGF可促进BMSCs增殖.
作者：崔洁；蒋明德；梅浙川；陈丽；曾维政；郑淑梅；王钊 刊期： 2013年第01期
目的 探讨他莫昔芬( Tamoxifen,TAM)对子宫内膜癌RL-95-2细胞增殖及let-7g表达的影响.方法 采用免疫荧光染色法检测RL-95-2细胞中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的表达；用不同浓度的TAM(1×10-11,1×10-9、1×10-7、1×10-5、1×10-4 mol/L)处理RL-95-2细胞48和72 h,CCK-8法检测细胞的增殖活力；用1×10-7 mol/L的TAM处理RL-95-2细胞72 h,流式细胞术检测细胞周期的变化；用不同浓度的TAM处理RL-95-2细胞72 h,实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞中let-7g的表达,借助生物信息学软件预测let-7g的靶标基因,并对其生物学功能进行分析.结果 RL-95-2细胞中ER呈阳性表达；1×10-7mol/L的TAM处理RL-95-2细胞48 h及1×10-9～1×10-5 mol/L的TAM处理细胞72 h,具有促进细胞增殖的作用,并使let-7g的表达量增加,1×10-7mol/L的TAM作用为显著；TAM促使细胞从G0/G1期进入S期；let-7g作用的可能靶标基因为UHRF2、RB1、GAS7、PLA GL2、NAB1和ZNF282.结论 适宜浓度的TAM对人子宫内膜癌RL-95-2细胞具有促增殖作用,并使细胞从G0/G1期进入S期,该作用可能部分是通过上调let-7g的表达而实现的.
作者：刘祖翠；魏莎莉；陈国庆；陈渝；刘革力 刊期： 2013年第01期
目的 比较去冷沉淀血浆(Cryoprecipitate-reduced plasma,CRP)中系列凝血因子、纤维蛋白原(Fibrinogen,Fib)和血管性血友病因子裂解蛋白酶(A disintegrin-like and metalloprotease with thrombospondin-1 repeats 13,ADAMTS-13)水平的变化.方法 用140人份新鲜冰冻血浆(Fresh frozen plasma,FFP)制备CRP,采用Biggers一期法测定FFP和CRP中FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FX、FⅪ、FⅫ的促凝活性；免疫比浊法测定Fib和血管性血友病因子抗原因子活动度(vWF:Ag)水平；荧光共振能量转移法(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)测定70人份FFP和CRP中的ADAMTS13活性及抗原含量.结果 与FFP比较,CRP中FⅧ:C、FⅤ:C、FⅦ:C、FⅨ:C、FX:C、FⅪ:C、Fib、vWF:Ag水平均明显下降,且差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.001)；FⅡ:C、FⅫ:C、ADAMTS13抗原含量和活性差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CRP可代替FFP用于血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)的治疗,而不适用于FⅧ、Fib及vWF缺乏患者的补充治疗.
作者：马莉；孙盼；林方昭；刁戈；李剑平；张红抑；刘建强；张心声；柏则蓉；周静宇；黎美君；李长清 刊期： 2013年第01期
新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-lactamase-1,NDM-1)是新近发现的由细菌产生的一种能够水解碳青霉烯类的金属β-内酰胺酶.NDM-1具有强大的水解作用,几乎能抵抗目前使用的所有抗生素,已严重威胁人类健康.本文对NDM-1携带菌的流行现状、NDM-1的基因排布特点、蛋白结构特点及酶活性中心的新研究进展作一综述.
作者：夏力亮；孙洋 刊期： 2013年第01期
目的 探讨骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)9-2双表达定向诱导多潜能干细胞C3H10向成骨细胞分化的情况.方法 将C3H10细胞分为4组:BMP9-2、BMP2、BMP9和GFP组,将4种重组腺病毒分别感染C3H10细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、定量测定及钙茜素红染色,观察BMP9-2双表达对C3H10细胞成骨分化的定向诱导作用.结果 BMP9-2双表达能诱导C3H10细胞ALP的表达,其染色活性高于BMP2组1.6倍,BMP9组2.5倍,GFP组4倍；其BMP9-2双表达定量表达A520值在病毒感染后5、7、9d均高于BMP2、BMP9和GFP组；BMP9-2双表达能诱导C3H10细胞钙盐的沉积,感染14 d后,钙茜素红染色可见钙化结节,其染色活性高于BMP2组1.4倍,BMP9组1.3倍,GFP组5.2倍.结论 BMP9-2双表达能定向诱导C3H10细胞成骨分化,其成骨活性强于单一成骨诱导因子BMP2和BMP9.
作者：陈聪；罗庆；田雯；迭小红；康权 刊期： 2013年第01期
目的 优化猪源枯草芽孢杆菌喷雾干燥工艺,提高菌体喷雾干燥后的存活率.方法 应用SAS V 8.0统计分析软件中的二次正交旋转组合设计方案进行试验设计,分析各因素对Y值的效应关系；应用优化的喷雾干燥工艺进行3次重复喷雾干燥试验,验证预测结果的准确性；并检测芽孢率对菌体喷雾干燥存活率的影响.结果 优化的喷雾干燥工艺中各条件的佳参数为:出口温度90℃,入口温度150℃,保护剂浓度20％,入料速度1 200 ml/h；应用优化的喷雾干燥工艺进行3次重复喷雾干燥试验,菌体平均存活率为75.7％,与预测值(77％)基本相符；芽孢率对菌体喷雾干燥存活率影响较大.结论 优化了猪源枯草芽孢杆菌的喷雾干燥工艺,为其工业化生产奠定了基础.
作者：刘宇；李丹；王岩；吴博；王爽；朱丹丹；史同瑞；朱战波 刊期： 2013年第01期
目的 建立人源化抗表皮生长因子受体(Epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体的质控方法.方法 采用体外细胞生长抑制试验测定人源化抗EGFR单抗的生物学活性；质谱法和还原型SDS-PAGE法测定其准确相对分子质量；去封闭后用Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列；SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)法测定其纯度；反向液相色谱( RP-HPLC)法测定其肽图；定量PCR法和狭缝杂交法测定其外源性DNA残留量；其余项目按《中国药典》三部(2010版)要求进行.结果 人源化抗EGFR单抗原液和成品的相对生物学活性分别为(100±20)％和(94±14)％；质谱法测得该单抗参考品轻、重链的相对分子质量分别为23 370.75和50 341.00,相对误差分别为0.005％和0.006％;还原型SDS-PAGE测得该单抗轻、重链的相对分子质量为27 000和53 400;轻、重链N-末端氨基酸序列均与理论一致；单抗原液的还原型SDS-PAGE纯度为98.5％; SEC-HPLC原液纯度为(98.39±0.05)％和成品SEC-HPLC纯度为(98.17±0.04)％；肽图图谱与理化参考品一致；定量PCR测得其外源DNA残留量小于100 pg/剂量；其他各项指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求及其他相关要求.结论 初步建立了人源化抗表皮生长因子受体单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制.
作者：陶磊；饶春明；王兰；韩春梅；李响；高凯；王军志 刊期： 2013年第01期
目的 优化肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)在Vero细胞中的培养条件.方法 分别采用吸附法和直接接种法将EV71接种于Vero细胞中进行增殖,检测病毒滴度；选择佳接种方法接种病毒,考察血清浓度、收毒方式、病毒接种量(MOI)和收毒时间对病毒滴度的影响.结果 将MOI为0.02～0.2的病毒直接接种于不含血清的培养基中,培养60 h,胞外收毒,可获得较高的病毒滴度.结论 优化了EV71在Vero细胞中的培养条件,为EV71的大规模培养及其疫苗研发奠定了基础.
作者：陈丽；江元翔；夏德镇；杨志建；张高峡 刊期： 2013年第01期
目的 分离白血病K562细胞株中CD34+细胞群,并分析其生物学特征,为从干细胞角度治疗白血病提供实验依据.方法 采用免疫磁性分选法分离K562细胞中CD34+细胞群,台盼蓝拒染法检测细胞活性；流式细胞术检测CD34+细胞比例及细胞周期；单细胞克隆培养检测CD34+细胞自我更新能力；RT-PCR法检测CD34+细胞分化相关指标促红细胞生成素( Erythropoietin,EPO)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)基因mRNA的转录水平；并检测CD34+细胞耐药蛋白P-gp (P-glycoprotein)的表达.结果 免疫磁性分选法可有效分离出CD34+细胞群,细胞活性为99％～ 100％；分离的CD34+细胞含量占细胞总数的78.5％～85.3％,细胞大部分处于静止状态,G0/G1期细胞比例达80％左右,显著高于分离前的K562细胞；CD34+细胞群具有形成混合集落的能力；与K562细胞相比,CD34+细胞EPO和GM-CSF基因mRNA的转录水平明显下降(P＜0.01),P-gp表达阳性.结论 成功从K562细胞株中分离了CD34+细胞群,其具有自我更新和多向分化的能力,表明其具有白血病干/祖细胞的生物学特点.
作者：刘俊；张先平；蔡世忠；徐春燕；王亚平；林雪梅 刊期： 2013年第01期
目的 研制静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH4)[Enterovirus 71 human immunoglobulin( pH 4)for intravenous injection,EV71-IVIG],用于治疗重症手足口病.方法 采用细胞病变抑制法检测原料血浆的抗EV71中和抗体效价(EV71 neutralizing antibody titer,EV71-NT),确定EV71抗体血浆的筛选标准；从健康人血浆中筛选中和效价较高的EV71血浆,按《中国药典》三部(2010版)的生产工艺连续制备3批EV71-IVIG;以乳鼠模型评价EV71-IVIG的治疗效果,并以细胞病变抑制法检测EV71-IVIG对EV71临床分离株及CA16病毒的中和活性.结果 从90批原料血浆中筛选出约3.8吨EV71抗体血浆,制备的3批EV71-IVIG符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白(pH 4)”的质量标准,EV71-NT为国内普通IVIG的4～5倍.0.5 mg EV71-IVIG即可充分保护经10 LD50EV71攻击的乳鼠,存活率达100％.EV71-IVIG对近几年流行的EV71临床分离株有较高的中和活性.结论 已成功研制EV71-IVIG,为重症手足口病患者的治疗提供了新的用药选择.
作者：刘兰军；杨春；武志强；秦婷婷；李小姣；刘瑞熙；刘波；张雪梅；杨汇川 刊期： 2013年第01期
目的 对表达谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,EC4.1.1.15,简称GAD或GDC)的重组大肠杆菌的发酵条件进行优化.方法 通过单因素试验优化表达GAD的重组大肠杆菌B3C1的诱导剂IPTG添加时间、IPTG浓度、诱导时间、诱导温度,再经响应面分析法优化工程菌的发酵条件(氯化钠、胰化蛋白胨、酵母粉、摇床转速、初始pH值、培养时间、接种量、装液量).结果 工程菌的佳诱导条件为:IPTG添加时间为工程菌接种后4h,IPTG浓度为0.8 mmol/L,诱导时间为4h,诱导温度为35℃；工程菌的佳发酵条件为:酵母粉1.01％,氯化钠0.6％,胰化蛋白胨1.5％,培养时间11.25h,摇床转速250 r/min,初始pH值6.5,接种量3.0％,装液量11.70 ml.工程菌在该条件下发酵培养,GAD酶活达1 227.33 U,比优化前提高了12.29％.结论 已成功对表达GAD的重组大肠杆菌的发酵条件进行了优化,为其工业化生产奠定了基础.
作者：薛正莲；张珂 刊期： 2013年第01期
目的 探讨Apg-2基因沉默对pMIGR1空载体感染的BaF3-MIGR1细胞及稳定表达Bcr-Abl融合基因的BaF3-P210细胞增殖的影响,为进一步研究Apg-2在Bcr-Abl阳性的CML细胞中的作用奠定基础.方法 针对Apg-2基因609 ～ 629、845 ～ 865和2 110 ～2 130核苷酸合成3条shRNA序列Hspa41、Hspa42、Hspa43,同时合成阴性对照序列HspaHK,电穿孔转染BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞,经G418筛选稳定抑制细胞株,RT-PCR和Western blot 检测细胞中Apg-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平；Am-blue法检测细胞增殖；甲基纤维素法检测细胞克隆形成能力；流式细胞技术检测细胞周期的变化.结果 转染的3条shRNA质粒中,shRNA-Hspa42的干扰效果佳.Apg-2表达抑制后,BaF3-P210细胞的增殖与克隆形成能力均明显下降(P＜0.05),处于G1期细胞的百分率明显升高(P＜0.05),处于S期的细胞百分率明显下降(P＜0.05)；而BaF3-MIGR1细胞的增殖与克隆形成能力均明显增强(P＜0.05),处于S期的细胞百分率明显升高(P＜0.05).结论 干扰Apg-2基因的表达可抑制Bcr-Abl阳性细胞BaF3-P210的增殖,而对Bcr-Abl阴性细胞BaF3-MIGR1的增殖起促进作用.
作者：陈熙；钟梁；肖青；李春莉；李亚娟；王海霞；冯文莉 刊期： 2013年第01期
摘要:目的 构建UHRF2不同结构域缺失突变体,并在HEK293细胞中表达.方法 根据UHRF2不同结构域位置特征,构建5种不同结构域缺失突变体；以重组质粒pCMV-3xFlag-UHRF2为模板,PCR法直接扩增△UBL、△RING和△YDG+△RING编码基因,重叠PCR法扩增△PHD和△YDG编码基因,定向克隆至pCMV-3xFlag真核表达载体中,构建重组表达质粒,转染HEK293细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达.结果 UHRF2的结构域缺失体△UBL、△PHD的上游和下游及上下游合并、△YDG的上游和下游及上下游合并、△RING和△YDG+△RING的PCR产物分别可见2018、987、1152、2 272、1 232、629、1 827、2 163和1 287 bp的特异条带；UHRF2各结构域缺失体的重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确；重组质粒转染HEK293细胞表达的重组蛋白大小均与理论值相符.结论 成功在HEK293细胞中表达了UHRF2不同结构域缺失突变体,为进一步研究UHRF2各结构域的功能及其与其他蛋白质的相互作用位点奠定了基础.
作者：白露；王筱绘；胡斌；周丹琳；段昌柱 刊期： 2013年第01期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
