黄镇；王铭；陆伟；黄志伟；王茜；余晓书；冯晓异；者海燕；江超
目的 了解重庆地区5岁以内儿童腹泻病毒病原及流行病学特点.方法 收集重庆医科大学附属儿童医院2010年8～11月就诊的5岁以内腹泻患儿的粪便标本共500份,采用胶体金法检测A组轮状病毒(Rotavirus,RV),RT-PCR法检测B、C组RV、诺如病毒(Norovirus,NV)G Ⅰ和GⅡ、肠道腺病毒(Adenovirus,ADV)、札如病毒(Sapovirus,SLV)和星状病毒(Astrovirus,ASV),取NV和SLV阳性PCR产物测序,并对病毒基因进行分型.采用MEGA 5.05软件构建进化树,Kimura's two-parameter法计算遗传距离,邻接法(Neighbor-joining)boot-strap重复检验1 000次.结果 500份标本中,检测到A组RV阳性标本134份,阳性率为26.8％; NV GⅡ型阳性标本132份,阳性率为26.4％; ADV阳性标本31份,阳性率为6.2％; SLV阳性标本9份,阳性率为1.8％;ASV阳性标本1份,阳性率为0.2％；未检测到B、C组RV和NV GⅠ型.随机选择22份NV阳性标本进行测序及基因分型,其中GⅡ/4占绝对优势,其次为GⅡ/6、GⅡ/2、GⅡ/3和GⅡ/7.SLV可分为4个基因亚型,其中GⅠ/1为优势株,其次为GⅠ/2、GⅡ/1和GⅠV1.结论 重庆地区5岁以下儿童腹泻以病毒感染为主,RV是主要的病原体,其次为NV、ADV、SLV和ASV.
作者：任增志；孔元梅；王倩倩；黄爱龙；钟晓妮；许红梅 刊期： 2013年第04期
目的 探讨肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染患儿外周血中自然杀伤(Natural killer,NK)细胞比例、亚群、表面受体及免疫效应分子的变化.方法 将EV71阳性的急性期患儿按疾病严重程度分为重症病例组和普通病例组,同时设健康对照组.提取各组患儿外周血,采用流式细胞术检测外周血中NK细胞比例、NK细胞亚群、自然细胞毒受体NKp30和NKp46、激活性受体NKG2D、抑制性受体CD94和NKG2A、脱颗粒标记CD107a及免疫效应分子(PF、GrB和GNLY)阳性细胞所占NK细胞的比例.结果 重症病例组患儿外周血NK细胞比例较健康对照组明显减少(P＜0.01),普通病例组CD16+NK细胞亚群比例较健康对照组升高(P＜0.05),重症病例组较普通病例组低,但差异无统计学意义(P＞0.05)；重症病例组和普通病例组NKG2D阳性细胞百分率均较健康对照组低(P＜0.01),而CD94和NKG2A阳性细胞百分率均较健康对照组明显升高(P＜0.01),NKp30和NKp46阳性细胞率3组之间差异无统计学意义(P＞ 0.05)；重症病例组和普通病例组CD107a、PF、GrB、GNLY的阳性细胞百分率均较健康对照组明显降低(P＜0.01或P＜0.05).结论 EV71感染可能抑制宿主NK细胞的增殖、激活及其杀伤功能.重症病例组与普通病例组比较,NK细胞比例和CD16+NK细胞亚群降低,抑制性受体CD94表达增高,胞浆内CD107a、GrB和PF表达显著降低,可能与重症病例的发生有关.
作者：王倩倩；许红梅 刊期： 2013年第04期
目的 观察柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因核酸疫苗对E.tenella感染雏鸡的免疫保护效果.方法 取14日龄雏鸡,随机分为7组:pVAX 1-Serpin高剂量组(100 μg/只)、pVAX1-Serpin中剂量组(50 μg/只)、pVAX1-Serpin低剂量组(25μg/只)、pVAX1组(50μg/只)、E.tenella卵囊组(15日龄时,口服5 000个卵囊/只,不加强免疫)、未免疫攻虫对照组(0.1 ml PBS)和未免疫未攻虫对照组(0.1 ml PBS),除E.tenella卵囊组外,均经胸肌注射免疫,21日龄时加强免疫1次,28日龄时,除未免疫未攻虫对照组外,均经口感染1×104个E.tenella孢子化卵囊.攻虫后第8天剖杀,计算各组的存活率、平均增重、相对增重率、盲肠病变减少率、卵囊减少率及抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI).结果 未免疫攻虫对照组和pVAX1组的存活率分别为75％和70％,其余各组的存活率均为100％.pVAX1-Serpin高、中剂量组、E.tenella卵囊组和未免疫未攻虫对照组的平均增重2均较未免疫攻虫对照组显著增加(P＜0.05),其中pVAX1-Serpin高剂量组相对增重率2达95.26％;E.tenella卵囊组、pVAX1-Serpin高、中剂量组的盲肠病变记分明显低于pVAX1组和未免疫攻虫对照组(P＜0.05),前两组病变减少率较高；各免疫组卵囊产量均较未免疫攻虫对照组显著下降(P＜0.05),pVAX1-Serpin高剂量组卵囊减少率达67.04％;各免疫攻虫组ACI值均高于未免疫攻虫对照组,其中E.tenella卵囊组高(181.23),pVAX1-Serpin高剂量组次之(166.26),而pVAX1-Serpin中、低剂量组和pVAX1组均小于160.结论 高剂量pVAX1-Serpin对鸡E.tenella感染具有一定的免疫保护作用.
作者：李文超；顾有方；杜玲；宫鹏涛；李建华；张西臣 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达并纯化牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2蛋白.方法 采用PCR法从牛Ⅱ型链球菌基因组DNA中扩增van B2基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-van B2,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 PCR扩增获得597 bp的van B2基因片段；重组表达质粒pET-28a-van B2经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组van B2蛋白相对分子质量约为29 000,主要以可溶性形式表达；纯化的重组蛋白纯度为70％,可被小鼠抗牛链球菌血清Ⅱ型多克隆抗体特异性识别.结论 原核表达并纯化了牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白,为van B2基因的耐药性研究奠定了物质基础.
作者：刘燕；布日额；李艳军；白靓；锡林高娃；郭闯 刊期： 2013年第04期
目前流感疫苗血凝素含量常用的检测方法是单向免疫扩散法(Single-radial immunodiffusion,SRID).为了解决大流行流感发生初期无法获得参考品的情况,提高流感血凝素检测方法的灵敏度、重复性、准确性,人们从物理化学和免疫化学两个方面对SRID的替代方法进行了探索性研究.本文对近1 0年来对流感疫苗血凝素含量测定方法的研究进展作一简要综述.
作者：刘朝阳；孟佳帆；程鹏飞 刊期： 2013年第04期
《中国药典》三部是对生物制品质量标准和检定方法的技术规范,是生物制品生产、供应、使用和监管共同遵守的法定依据.《中国药典》三部的前身是《中国生物制品规程》,自第一部生物制品国家标准《生物制品法规》(1952年版)颁布以来,历经《生物制品制造及检定规程》(1959年版),《生物制品规程》(1979年版),《中国生物制品规程》(1990年版、1995年版、2000年版),2002年10月,第八届药典委员会成立后,《中国生物制品规程》并入药典,设为药典三部.
作者：王晓娟；曹琰；郭中平 刊期： 2013年第04期
目的 探讨穿心莲内酯(Andrographolide,AP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中NF-κB信号通路的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:空白对照组、LPS组和AP+ LPS组.AP+ LPS组腹腔内注射10 mg/kg的AP,空白对照组腹腔内注射等体积的NS,2次/d,连续3d,第3天注射后2h,LPS组和AP+ LPS组气管内雾化吸入LPS(1 mg/kg),空白对照组气管内雾化吸入等剂量的NS,12 h后处死小鼠,开胸取肺,10％甲醛溶液固定,随后进行石蜡切片及常规HE染色,光镜下观察各组小鼠肺组织的病理学变化；免疫组化法观察肺组织中血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达；Western blot法检测肺组织中磷酸化抑制蛋白IκB (Phospho-inhibitor of κB,p-IκBα)和p-NF-κB (P65)蛋白的表达.结果 LPS组小鼠肺损伤明显,有明显的炎症反应；AP+ LPS组小鼠肺损伤明显减轻,炎症细胞浸润明显减少.与LPS组相比,AP+ LPS组小鼠肺组织中VCAM-1蛋白的表达明显抑制；p-IκBα和p-NF-κB(P65)蛋白的表达明显降低(P＜0.05).结论 AP可通过抑制磷酸化的IκBα的降解及P65单体的磷酸化来调节NF-κB通路,从而减轻小鼠肺损伤的炎症变化.
作者：管弦；朱涛；王导新 刊期： 2013年第04期
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用.方法 多糖蛋白结合物原液的混合液经HC1水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测.筛选样品的水解条件；对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用.结果 确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1h.载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰；重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5％；准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90％ ～ 110％之间.HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当；成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4 μg/剂).结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定.
作者：李冶珊；刘梅影；陈敬；林海涛；王平 刊期： 2013年第04期
目的 优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件.方法 采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度.结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5；转染后4h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养.在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45％,相对荧光强度可达9×105 RFU/106 cells.结论 优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础.
作者：黎美香；陈先金；王晓慧；王亚玉；袁凤媚；汪才坤；谢秋玲 刊期： 2013年第04期
目的 观察鼠疫噬菌体对感染鼠疫小鼠的治疗作用,以寻找治疗鼠疫感染的新方法.方法 小鼠经皮下感染141株鼠疫菌建立鼠疫感染模型后,用效价为10-11的鼠疫噬菌体对短期治疗组在感染后3、6、12和24 h给予100μl/次的注射治疗,对长期治疗组在感染后1 ～7d连续注射鼠疫噬菌体,100 μl/次,1次/d.同时,设阴性对照组(不感染,只治疗,观察噬菌体对小鼠的毒性)和阳性对照组(仅感染,不治疗).结果 阴性对照组小鼠治疗14d后全部存活,处死后剖检未检出鼠疫菌.各治疗组小鼠在治疗第5天存活率为100％,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；长期腹腔治疗组效果明显,鼠疫噬菌体在小鼠体内存活时间长,效价不降低.结论 鼠疫噬菌体对感染小鼠急性感染期的治疗有一定效果,长期腹腔注射治疗效果较好,为其进一步应用于抗感染治疗提供了实验依据.
作者：张珊瑚；祁芝珍；张青雯；赵海红；辛有全；金泳；仇杰 刊期： 2013年第04期
目的 在毕赤酵母中表达全长甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)(1-34)与人血清白蛋白(Human serum albumn,HSA)的融合蛋白PTH(1-34)-HSA,并检测其活性.方法 在质粒pPIC9K-PTH(1-34)2-HSA的基础上设计引物,引入6His标签及肠激酶酶切位点,从该质粒中扩增6His-EK-PTH(1-34)-HSA基因,插入pPIC9K载体中,构建重组表达质粒pPIC9K-6His-EK-PTH(1-34)-HSA,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达；表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白通过两步亲和层析纯化和肠激酶酶切,获得全长的PTH(1-34)-HSA融合蛋白；检测融合蛋白对UAMS-32P成骨细胞增殖活力、碱性磷酸酶活性以及RANKL和OPG基因转录水平的影响.结果 重组表达质粒经测序证实构建正确；表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白相对分子质量约70 000,可与PTH抗体和HSA抗体特异性结合,发酵 获得的融合蛋白的浓度为200 mg/L;纯化的融合蛋白可与抗PTH、HSA和6His标签抗体特异性结合,经肠激酶酶切后,该蛋白失去了与6His抗体反应的能力,保持了与PTH和HSA抗体结合的能力；酶切后的全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白保持了PTH的生物活性,能促进UAMS-32P成骨细胞的增殖活力,提高细胞的碱性磷酸酶的活性,上调细胞RANKL基因的转录水平以及抑制OPG基因的转录水平.结论 成功在毕赤酵母中表达了全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白,有望提高PTH的成药性.
作者：李俊毅；彭林；唐存多；邬敏辰；金坚 刊期： 2013年第04期
目的 通过改良维持液的缓冲体系,改进aG株狂犬病病毒的培养条件,制备高滴度的病毒原液.方法 在传统病毒维持液的基础上,补加缓冲盐和碳酸氢钠,在相同的条件下,分别用传统维持液和改良维持液培养病毒,收获2次病毒液,混合,经300 KD膜包超滤、Sepharose 4FF纯化后,制成病毒原液,采用ELISA法检测抗原含量,按《中国药典》三部(2010版)方法检测病毒滴度、效力、宿主DNA和宿主细胞蛋白残留量,用便携式pH计检测pH值.结果 改良维持液制备的病毒原液的抗原含量、病毒滴度及效力均高于对照维持液；两种维持液制备的病毒原液的宿主蛋白和宿主细胞DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)要求；改良维持液的缓冲能力明显增强,对病毒培养过程中pH值的控制明显优于对照维持液.结论 改良维持液培养狂犬病病毒制备的病毒原液滴度较高,可改进传统aG株狂犬病病毒生产的病毒原液滴度较低的现状.
作者：曹金良 刊期： 2013年第04期
目的 构建大鼠结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)基因miRNA表达质粒,并建立稳定转染大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)系.方法 根据大鼠CTGF基因mRNA序列,设计并合成3对寡聚单链DNA X191-1、X191-2和X191-3及1对阴性对照序列DNA X191-4,将4对寡聚单链DNA退火成双链后,分别与载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR连接,构建CTGF基因miRNA重组表达质粒,分别转染HSC-T6细胞,荧光显微镜观察细胞的转染效率,RT-PCR检测转染细胞中CTGF基因mRNA的转录水平；取干扰效率高的重组质粒及阴性对照质粒,分别转染HSC-T6细胞,经杀稻瘟菌素持续加压筛选.结果 经测序鉴定,重组表达质粒构建正确,插入片段的碱基序列与设计相符；细胞的瞬时转染效率约为50％；3组干扰质粒转染的HSC-T6细胞中,CTGF基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组(P＜0.01),其中X191-2质粒对CTGF基因转录的干扰效率高；获得了稳定转染的HSC-T6细胞.结论 成功构建了CTGF基因miRNA表达质粒,并获得了稳定转染的肝星状细胞系,为进一步研究肝纤维化的形成机制及其治疗奠定了基础.
作者：阳宏；李孝生；向颖；邢旎旎；沈艳 刊期： 2013年第04期
目的 观察链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的雄性大鼠高血糖对子代生长发育及代谢的影响.方法 将健康雄性SD大鼠随机分为对照组(CON)和STZ组,STZ组经腹腔注射STZ(35 mg/kg)建立雄性大鼠糖尿病模型,CON组经腹腔注射pH4.2的枸橼酸钠缓冲溶液.两组雄鼠分别与健康SD雌鼠按1:2比例交配.雌鼠分娩后,称量两组子代出生体重,并连续监测体重变化和进食量；采用自动血糖仪和血糖试纸检测空腹血糖水平；18和22周时进行葡萄糖耐量试验(Glucose tolerance test,CTT)和胰岛素耐量试验(Insulin tolerance test,ITT)；计算肝重/体重指数；全自动生化分析仪检测血脂水平.结果 STZ组子代出生体重和后期体重及每日进食量均始终显著低于CON组(P＜0.05或P＜0.01)；第18周,STZ组与CON组子代葡萄糖耐量及胰岛素耐量差异均无统计学意义(P＞0.05)；第22周时,STZ组子代葡萄糖耐量在第15、30、60 min显著高于CON组(P＜0.05),胰岛素耐量在各检测时间点均显著高于CON组(P＜0.05)；STZ组与CON组子代肝重/体重指数差异无统计学意义(P＞0.05)；STZ组子代血清中甘油三酯含量明显低于CON组(P＜0.05).结论 父代高血糖对子代的出生体重和生长趋势有显著影响,且能显著改善子代的胰岛素耐量.
作者：李靖娜；宋勇；李继斌；刘治国；陈笑宜；张琪娟；肖晓秋 刊期： 2013年第04期
目的 优化伤寒Vi多糖柱层析纯化工艺,以替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法.方法 采用DEAE离子交换层析柱,分别在缓冲液(20 mmol/L Tris-C1)pH值为6.0、7.0和8.0的条件下纯化1批伤寒Vi多糖粗糖,并与传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法进行比较.按《中国药典》三部(2010版)要求检测纯化样品的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小及内毒素含量,并计算样品的多糖回收率.采用优化的DEAE柱层析纯化工艺纯化3批伤寒Vi多糖粗糖,验证该工艺的稳定性.结果 DEAE离子交换柱缓冲液(20 mmol/L Tris-Cl)pH值为7.0和8.0时,可有效将伤寒Vi多糖的杂质与纯化产物分离,多糖回收率分别为36.52％和38.35％,明显高于传统工艺的多糖回收率(15.52％),且纯化产物的内毒素含量(10 EU/μg)明显低于传统工艺(200 EU/μg).以优化工艺(pH 7.0)纯化3批伤寒Vi多糖粗糖获得的6批精糖的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小、内毒素含量及多糖回收率差异较小,标准偏差均小于5％.结论 优化了伤寒Vi多糖柱层析的纯化工艺,该工艺稳定性良好,可替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法,应用于伤寒Vi多糖的纯化.
作者：黄镇；王铭；陆伟；黄志伟；王茜；余晓书；冯晓异；者海燕；江超 刊期： 2013年第04期
目的 观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制.方法 分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P＜0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P＜0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响.结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用.
作者：李化光；刘华；孙洁；刘肃；张林西；王文；郭佳；赵琛；赵增虎 刊期： 2013年第04期
目的 构建WT1 (Wilms' tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录.方法 设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录.采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度.结果 各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确；重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录；各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6 ～ 883.9 μg/ml之间.结论 成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础.
作者：彭霞；樊卫平；张凯；苑晓娟；刘玲玲；王亮 刊期： 2013年第04期
目的 观察吸附无细胞百白破、灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(Diphtheria-tetanusacellular pertussis-inactivated poliovirus-Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine containing a polyribosyl-ribitolphosphate-tetanus toxoid conjugate,DTacP-IPV//PRP ～T)的不良反应发生情况,以评价其安全性.方法 采用知情自愿原则,在虹口区4个街道选择100名出生60 ～ 74 d符合检测要求的婴儿,分别于2、3、4月龄接种五联疫苗,并进行4次现场和3次电话访视,记录不良反应的发生情况.结果 接种五联疫苗后,不良反应发生率前3位为轻度异常哭闹(25.8％)、轻度触痛(23.8％)和轻度食欲下降(23.2％),随着接种剂次增加,局部发红、肿胀的严重程度升高,而呕吐、嗜睡、食欲下降、易激惹的严重程度下降.结论 五联疫苗具有良好的安全性,严重不良反应的发生率较低.受主观影响较大的不良反应报告偏多,在日后的接种工作中需注意后续剂次接种后局部不良反应的发生情况,以减轻局部症状.
作者：杨彦基；钱晓华；王春艳；施雪华；区志莲；鲁依力 刊期： 2013年第04期
近年来,随着人们对环境和能源问题的关注,以酶为催化剂的绿色生物催化技术越来越受到重视,而酶的催化能力是影响酶能否进行工业化应用的重要因素,同时,因催化不同反应的需要,新酶开发显得十分迫切.杂合酶技术是基于已有酶资源来进行新酶的设计和开发的技术,其具有独特的优点,尤其是目前酶的表达克隆、分子筛选、人工进化、DNA序列改组和体外突变等技术已成为常规技术,为杂合酶的开发及生产奠定了基础.本文对杂合酶的构建策略、构建方法及发展前景作一综述,为其应用和开发提供参考.
作者：韩镇；解桂秋；高仁钧 刊期： 2013年第04期
目的 在大肠杆菌中融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)TB10.4蛋白与呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白.方法 从MTB标准菌株H37Rv全基因组中扩增TB10.4(N/X)和TB10.4(N/B)基因,分别插入原核表达载体pET-28a和pET-30a中,构建重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4(N/B)/pET-30a;从F/18T/DH5α菌株中扩增F1(B/X)基因,与TB10.4(N/B)/pET-30a质粒连接,构建重组表达质粒TB10.4-F1/pET-30a;将质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a分别转化感受态E.coliBL21 (DE3),IPTG诱导表达；表达的重组蛋白进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组TB10.4和TB10.4-F1蛋白相对分子质量约为13 000和59 000,可与鼠抗His单抗特异性结合.结论 成功在大肠杆菌中表达了重组融合蛋白TB10.4-F1,为进一步研究其免疫原性及保护性奠定了基础.
作者：王瑞博；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
