刘朝阳；孟佳帆；程鹏飞
目的 构建抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,并对表达产物进行鉴定.方法 采用脂质体法将抗人CD4嵌合抗体质粒pHDC4稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压筛选抗人CD4嵌合抗体稳定表达株,经细胞工厂扩大培养.收集培养上清,经Protein A亲和层析纯化目的抗体,激光共聚焦显微镜观察抗体基因在细胞内的表达,并分别进行质谱分析、蛋白质N-末端测序和平衡解离常数(KD)的测定.结果 构建的抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株的抗体表达水平为4.29 ～ 10.52 μg/ml;BCA测得纯化回收后的抗体表达水平为12.68 mg/L;激光共聚焦检测显示,抗CD4嵌合抗体稳定表达细胞株可稳定表达人的恒定区和鼠的可变区；质谱分析表明,其含有鼠源性和人源性成分；蛋白质N-末端氨基酸测序表明,其轻链与亲本抗体N-末端氨基酸序列完全一致；其KD为2.67×10-9M.结论 成功构建了抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,其表达的抗人CD4嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合特异性和亲和力.
作者：胡迪超；张爱华；杨晓明 刊期： 2013年第04期
目的 构建WT1 (Wilms' tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录.方法 设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录.采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度.结果 各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确；重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录；各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6 ～ 883.9 μg/ml之间.结论 成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础.
作者：彭霞；樊卫平；张凯；苑晓娟；刘玲玲；王亮 刊期： 2013年第04期
目的 观察鼠疫噬菌体对感染鼠疫小鼠的治疗作用,以寻找治疗鼠疫感染的新方法.方法 小鼠经皮下感染141株鼠疫菌建立鼠疫感染模型后,用效价为10-11的鼠疫噬菌体对短期治疗组在感染后3、6、12和24 h给予100μl/次的注射治疗,对长期治疗组在感染后1 ～7d连续注射鼠疫噬菌体,100 μl/次,1次/d.同时,设阴性对照组(不感染,只治疗,观察噬菌体对小鼠的毒性)和阳性对照组(仅感染,不治疗).结果 阴性对照组小鼠治疗14d后全部存活,处死后剖检未检出鼠疫菌.各治疗组小鼠在治疗第5天存活率为100％,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；长期腹腔治疗组效果明显,鼠疫噬菌体在小鼠体内存活时间长,效价不降低.结论 鼠疫噬菌体对感染小鼠急性感染期的治疗有一定效果,长期腹腔注射治疗效果较好,为其进一步应用于抗感染治疗提供了实验依据.
作者：张珊瑚；祁芝珍；张青雯；赵海红；辛有全；金泳；仇杰 刊期： 2013年第04期
目的 观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制.方法 分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P＜0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P＜0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响.结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用.
作者：李化光；刘华；孙洁；刘肃；张林西；王文；郭佳；赵琛；赵增虎 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58型截短型L1 (Truncated L1,tL1)蛋白与结核分枝杆菌早期分泌型抗原靶蛋白-6(Early secreted antigenic target-6,ESAT-6)融合蛋白,并制备其抗血清.方法 利用PCR技术分别从HPV基因组DNA和ESAT-6-18T质粒DNA中扩增tL1和ESAT-6基因,构建重组原核表达质粒ESAT-6-tL1-pET-21a,分别转化E.coli BL21(DE3)和Rosetta,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白ESAT-6-tL1经镍离子亲和层析柱纯化后免疫昆明小鼠,ELISA检测血清抗体效价.结果 PCR扩增出750 bp的tL1基因片段和320 bp的ESAT-6基因片段,测序结果与GenBank登录的序列一致；重组表达质粒ESAT-6-tL1-pET-21a经双酶切鉴定,构建正确；表达的ESAT-6-tL1融合蛋白相对分子质量约40 000,在E.coli Rosetta中的表达形式为包涵体,纯化后纯度为85％,免疫小鼠血清抗体效价为1:4 000.结论 成功表达了ESAT-6-tL1融合蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研制检测HPV58的抗体奠定了基础.
作者：朱攀；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
目的 评价近年重组人粒细胞集落刺激因子(Recombinant human grenulocyte colony-stimulatiny factor,rhG-CSF)的生物学活性及其检测方法的应用情况.方法 采用mNFS-60细胞/MTT比色法对41批不同来源的rhG-CSF进行生物学活性检测,对中国食品药品检定研究院与各生产企业的检测结果进行比较,评价中国食品药品检定研究院检测rhG-CSF生物学活性结果的可信性.结果 37批国产rhG-CSF的生物学活性检测结果均符合《中国药典》三部(2010版)质量要求,4批进口rhG-CSF的生物学活性均符合进口拟定质量标准(JS20070016)要求.中国食品药品检定研究院与各企业的rhG-CSF生物学活性检测结果差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 近年上市的rhG-CSF生物学活性达到《中国药典》三部(2010版)质量要求；该制品的生物学活性检测方法在全国范围内应用情况良好.
作者：刘兰；史新昌；饶春明 刊期： 2013年第04期
目的 制备甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),为研制HAV VLPs疫苗奠定基础.方法 利用RT-PCR法从HAV HM175-clone4株中扩增P1-2A、P2和P3基因片段.将P1-2A和P3基因亚克隆至pFastBacDual载体,构建重组表达质粒pFastBacDual-P1-P3,转化大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-P1-P3,转染昆虫细胞sf-9进行重组杆状病毒的包装.重组杆状病毒vAcP1P3扩增后,感染昆虫细胞Tn-5,培养72 h后,收获表达产物,经原位免疫荧光、EIA、Western blot法及透射电镜检测HAV VLPs的表达.表达产物经超滤及蔗糖密度梯度离心纯化.结果 重组表达质粒和重组穿梭质粒分别经双酶切和PCR鉴定证明构建正确.第2、3、4代重组杆状病毒的滴度分别为1.58×105、2.13×107、3.98×107 TCID50/ml.vAcP1P3转染sf-9细胞72 h后,可见HAV蛋白的表达；vAcP1P3转染Tn-5细胞后,表达的HAV抗原主要存在于沉淀中,且含量明显高于野生型杆状病毒沉淀样品(P＜0.001)；Wentern blot结果表明,与野生型杆状病毒组相比,HAV VLPs样品中VP3的含量相对较少,HAV VLPs样品可见相对分子质量约30 700的VP1片段及相对分子质量约27 700的VP3片段；透射电镜观察可见大小约50 nm的VLPs颗粒,略大于天然HAV颗粒.纯化的HAV蛋白主要存在于40％ ～ 50％的蔗糖梯度中,提示有VLPs形成.结论 成功制备了HAV VLPs,为甲肝新型疫苗的研制奠定了基础.
作者：沈智俊；吴杰；解庭波；吕宏亮；王云；陈新文；严家新 刊期： 2013年第04期
《中国药典》三部是对生物制品质量标准和检定方法的技术规范,是生物制品生产、供应、使用和监管共同遵守的法定依据.《中国药典》三部的前身是《中国生物制品规程》,自第一部生物制品国家标准《生物制品法规》(1952年版)颁布以来,历经《生物制品制造及检定规程》(1959年版),《生物制品规程》(1979年版),《中国生物制品规程》(1990年版、1995年版、2000年版),2002年10月,第八届药典委员会成立后,《中国生物制品规程》并入药典,设为药典三部.
作者：王晓娟；曹琰；郭中平 刊期： 2013年第04期
目的 构建仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库,并进行初步筛选.方法 用仙台病毒Tianjin株免疫小鼠,制备脾细胞悬液,提取小鼠脾细胞总RNA,RT-PCR扩增鼠抗体轻链(κ链)和重链Fd基因,将轻链基因和噬菌粒p3MH经Sac Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后纯化回收,经T4 DNA连接酶连接,电转化E.coli XL1-Blue,构建轻链库；将重链Fd段基因和轻链库p3MH-κ经Spe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,纯化回收并连接,电转化E.coli XL1-Blue,获得噬菌体抗体库,计算重组率和抗体库滴度.以仙台病毒Tianjin株重组蛋白HN2为抗原进行初步筛选,制备噬菌体抗体,并进行测序.结果 构建的免疫噬菌体抗体库库容为1.18×107,重组率为90％,制备的噬菌体抗体滴度为1011 pfu/ml；经初步筛选,噬菌体富集了约63.6倍,获得2株与重组蛋白HN2有结合活性的阳性克隆,经NCBIBLAST进行同源性分析,显示为鼠源性抗体,经IMGT分析,显示轻链基因与VK9亚群基因的同源性为94.87％,重链基因与VH7亚群基因的同源性为97.85％.结论 成功构建了仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库,为该病毒株的诊断、疾病治疗及致病机制等研究奠定了基础.
作者：李霞；李晓绵；石立莹；李梅 刊期： 2013年第04期
目的 构建大鼠结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)基因miRNA表达质粒,并建立稳定转染大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)系.方法 根据大鼠CTGF基因mRNA序列,设计并合成3对寡聚单链DNA X191-1、X191-2和X191-3及1对阴性对照序列DNA X191-4,将4对寡聚单链DNA退火成双链后,分别与载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR连接,构建CTGF基因miRNA重组表达质粒,分别转染HSC-T6细胞,荧光显微镜观察细胞的转染效率,RT-PCR检测转染细胞中CTGF基因mRNA的转录水平；取干扰效率高的重组质粒及阴性对照质粒,分别转染HSC-T6细胞,经杀稻瘟菌素持续加压筛选.结果 经测序鉴定,重组表达质粒构建正确,插入片段的碱基序列与设计相符；细胞的瞬时转染效率约为50％；3组干扰质粒转染的HSC-T6细胞中,CTGF基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组(P＜0.01),其中X191-2质粒对CTGF基因转录的干扰效率高；获得了稳定转染的HSC-T6细胞.结论 成功构建了CTGF基因miRNA表达质粒,并获得了稳定转染的肝星状细胞系,为进一步研究肝纤维化的形成机制及其治疗奠定了基础.
作者：阳宏；李孝生；向颖；邢旎旎；沈艳 刊期： 2013年第04期
目的 优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件.方法 采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度.结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5；转染后4h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养.在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45％,相对荧光强度可达9×105 RFU/106 cells.结论 优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础.
作者：黎美香；陈先金；王晓慧；王亚玉；袁凤媚；汪才坤；谢秋玲 刊期： 2013年第04期
目前流感疫苗血凝素含量常用的检测方法是单向免疫扩散法(Single-radial immunodiffusion,SRID).为了解决大流行流感发生初期无法获得参考品的情况,提高流感血凝素检测方法的灵敏度、重复性、准确性,人们从物理化学和免疫化学两个方面对SRID的替代方法进行了探索性研究.本文对近1 0年来对流感疫苗血凝素含量测定方法的研究进展作一简要综述.
作者：刘朝阳；孟佳帆；程鹏飞 刊期： 2013年第04期
目的 在大肠杆菌中融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)TB10.4蛋白与呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白.方法 从MTB标准菌株H37Rv全基因组中扩增TB10.4(N/X)和TB10.4(N/B)基因,分别插入原核表达载体pET-28a和pET-30a中,构建重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4(N/B)/pET-30a;从F/18T/DH5α菌株中扩增F1(B/X)基因,与TB10.4(N/B)/pET-30a质粒连接,构建重组表达质粒TB10.4-F1/pET-30a;将质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a分别转化感受态E.coliBL21 (DE3),IPTG诱导表达；表达的重组蛋白进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组TB10.4和TB10.4-F1蛋白相对分子质量约为13 000和59 000,可与鼠抗His单抗特异性结合.结论 成功在大肠杆菌中表达了重组融合蛋白TB10.4-F1,为进一步研究其免疫原性及保护性奠定了基础.
作者：王瑞博；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
目的 探讨酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎(简称甲肝)和乙型肝炎(简称乙肝)抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用,并对皮下和鼻腔接种的免疫效果进行比较.方法 将酵母多糖与角鲨烯按一定比例混合,制成复合佐剂,将不同剂量的复合佐剂与HBsAg混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8、16周,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG抗体水平,筛选复合佐剂的佳免疫剂量.以复合佐剂的佳免疫剂量与甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、甲肝抗原对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8周检测小鼠血清中抗甲肝抗原IgG抗体水平.以复合佐剂佳免疫剂量分别与HBsAg和甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组和甲肝抗原对照组,经鼻腔免疫ICR小鼠,共免疫3次,间隔2周,分别于末次免疫后4、8周检测小鼠血清中抗HBsAg和甲肝抗原IgG抗体水平.在试验期间,对小鼠的健康状况进行观察,并对小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织进行病理分析.结果 酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对HBsAg的佳免疫剂量为2 mg酵母多糖+8μl角鲨烯,该组抗体水平明显高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P＜0.05)；复合佐剂对甲肝抗原也有较好的体液免疫增强作用,抗体水平显著高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P＜0.05)；复合佐剂通过鼻腔免疫,对HBsAg和甲肝抗原的体液免疫应答也有增强作用,但效果不如皮下免疫,甲肝抗原鼻腔免疫效果优于HBsAg(P＜0.05).在试验期内,小鼠均未出现异常反应,各器官均未发生病变.结论 酵母多糖-角鲨烯复合佐剂能显著增强甲肝和HBsAg抗原对小鼠的体液免疫应答,免疫效果优于铝佐剂；皮下免疫效果优于鼻腔免疫；在免疫剂量范围内,复合佐剂安全性良好.
作者：王丽萍；王越；王海漩；胡云章；胡凝珠 刊期： 2013年第04期
目的 观察吸附无细胞百白破、灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(Diphtheria-tetanusacellular pertussis-inactivated poliovirus-Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine containing a polyribosyl-ribitolphosphate-tetanus toxoid conjugate,DTacP-IPV//PRP ～T)的不良反应发生情况,以评价其安全性.方法 采用知情自愿原则,在虹口区4个街道选择100名出生60 ～ 74 d符合检测要求的婴儿,分别于2、3、4月龄接种五联疫苗,并进行4次现场和3次电话访视,记录不良反应的发生情况.结果 接种五联疫苗后,不良反应发生率前3位为轻度异常哭闹(25.8％)、轻度触痛(23.8％)和轻度食欲下降(23.2％),随着接种剂次增加,局部发红、肿胀的严重程度升高,而呕吐、嗜睡、食欲下降、易激惹的严重程度下降.结论 五联疫苗具有良好的安全性,严重不良反应的发生率较低.受主观影响较大的不良反应报告偏多,在日后的接种工作中需注意后续剂次接种后局部不良反应的发生情况,以减轻局部症状.
作者：杨彦基；钱晓华；王春艳；施雪华；区志莲；鲁依力 刊期： 2013年第04期
目的 观察双歧杆菌介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(Herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)/丙氧鸟苷(Gancyclovir,GCV)系统治疗大鼠膀胱癌的疗效,并初步探讨其可能的作用机制.方法 采用N-甲基亚硝基脲(N-methyl-nitrosourea,MNU)膀胱灌注法建立大鼠膀胱癌模型,将模型大鼠随机分为3组,分别经尾静脉注射生理盐水、携带空载体pGEX-5X-1的双歧杆菌和携带重组质粒pGEX-tk的双歧杆菌(含婴儿双歧杆菌4.4× 109个/ml),再联合腹腔灌注GCV(50 mg/kg)治疗,治疗结束后称量各组大鼠膀胱重量；TUNEL染色法检测各组大鼠膀胱组织细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot法检测各组大鼠膀胱肿瘤组织细胞色素C(Cyt-C)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.结果 治疗后,双歧杆菌重组质粒组大鼠膀胱重量明显低于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P＜0.001),膀胱组织细胞凋亡指数明显高于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P＜0.001),膀胱肿瘤组织Cyt-C和caspase-9基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显高于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P＜0.001).结论 双歧杆菌介导的HSV-tk/GCV治疗系统治疗大鼠膀胱癌疗效显著；该治疗系统可能通过以Cyt-C为中心的内源性凋亡途径导致膀胱癌细胞凋亡.
作者：殷祥瑞；唐伟；喻备；王亚荣 刊期： 2013年第04期
近年来,随着人们对环境和能源问题的关注,以酶为催化剂的绿色生物催化技术越来越受到重视,而酶的催化能力是影响酶能否进行工业化应用的重要因素,同时,因催化不同反应的需要,新酶开发显得十分迫切.杂合酶技术是基于已有酶资源来进行新酶的设计和开发的技术,其具有独特的优点,尤其是目前酶的表达克隆、分子筛选、人工进化、DNA序列改组和体外突变等技术已成为常规技术,为杂合酶的开发及生产奠定了基础.本文对杂合酶的构建策略、构建方法及发展前景作一综述,为其应用和开发提供参考.
作者：韩镇；解桂秋；高仁钧 刊期： 2013年第04期
目的 了解重庆地区5岁以内儿童腹泻病毒病原及流行病学特点.方法 收集重庆医科大学附属儿童医院2010年8～11月就诊的5岁以内腹泻患儿的粪便标本共500份,采用胶体金法检测A组轮状病毒(Rotavirus,RV),RT-PCR法检测B、C组RV、诺如病毒(Norovirus,NV)G Ⅰ和GⅡ、肠道腺病毒(Adenovirus,ADV)、札如病毒(Sapovirus,SLV)和星状病毒(Astrovirus,ASV),取NV和SLV阳性PCR产物测序,并对病毒基因进行分型.采用MEGA 5.05软件构建进化树,Kimura's two-parameter法计算遗传距离,邻接法(Neighbor-joining)boot-strap重复检验1 000次.结果 500份标本中,检测到A组RV阳性标本134份,阳性率为26.8％; NV GⅡ型阳性标本132份,阳性率为26.4％; ADV阳性标本31份,阳性率为6.2％; SLV阳性标本9份,阳性率为1.8％;ASV阳性标本1份,阳性率为0.2％；未检测到B、C组RV和NV GⅠ型.随机选择22份NV阳性标本进行测序及基因分型,其中GⅡ/4占绝对优势,其次为GⅡ/6、GⅡ/2、GⅡ/3和GⅡ/7.SLV可分为4个基因亚型,其中GⅠ/1为优势株,其次为GⅠ/2、GⅡ/1和GⅠV1.结论 重庆地区5岁以下儿童腹泻以病毒感染为主,RV是主要的病原体,其次为NV、ADV、SLV和ASV.
作者：任增志；孔元梅；王倩倩；黄爱龙；钟晓妮；许红梅 刊期： 2013年第04期
目的 通过改良维持液的缓冲体系,改进aG株狂犬病病毒的培养条件,制备高滴度的病毒原液.方法 在传统病毒维持液的基础上,补加缓冲盐和碳酸氢钠,在相同的条件下,分别用传统维持液和改良维持液培养病毒,收获2次病毒液,混合,经300 KD膜包超滤、Sepharose 4FF纯化后,制成病毒原液,采用ELISA法检测抗原含量,按《中国药典》三部(2010版)方法检测病毒滴度、效力、宿主DNA和宿主细胞蛋白残留量,用便携式pH计检测pH值.结果 改良维持液制备的病毒原液的抗原含量、病毒滴度及效力均高于对照维持液；两种维持液制备的病毒原液的宿主蛋白和宿主细胞DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)要求；改良维持液的缓冲能力明显增强,对病毒培养过程中pH值的控制明显优于对照维持液.结论 改良维持液培养狂犬病病毒制备的病毒原液滴度较高,可改进传统aG株狂犬病病毒生产的病毒原液滴度较低的现状.
作者：曹金良 刊期： 2013年第04期
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用.方法 多糖蛋白结合物原液的混合液经HC1水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测.筛选样品的水解条件；对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用.结果 确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1h.载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰；重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5％；准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90％ ～ 110％之间.HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当；成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4 μg/剂).结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定.
作者：李冶珊；刘梅影；陈敬；林海涛；王平 刊期： 2013年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
