黄琦；秦新月
目的 构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒.方法 将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经Pac Ⅰ酶切线性化,共转染293AD细胞,进行同源重组,包装出重组腺病毒rAd5v-cVP2,按Karber法计算重组腺病毒的病毒滴度(TCID50).电镜下观察重组腺病毒的形态;RT-PCR及Western blot法检测CPV VP2基因mRNA的转录及蛋白的表达水平.结果 重组穿梭质粒pacAd5-cVP2经酶切及测序证明构建正确;包装出的重组腺病毒rAd5v-cVP2的病毒滴度可稳定在108.25 TCID50/ml;电镜下观察可见典型的腺病毒外型特征;重组腺病毒感染的293AD细胞可检测到VP2基因的转录和表达.结论 已成功构建了CPV VP2蛋白重组人5型腺病毒.
作者：杨洋；宫婷；米立娟；赵敬慧；陈奇；钱方；刘晔；张守峰；扈荣良 刊期： 2013年第05期
目的 建立人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法.方法 根据GenBank中登录的人IFITM1、2、3及β-actin基因序列,分别设计4对特异性引物,以质粒pVAX 1-IFITM 1、2、3和pMD 18-T-β-actin为模板,分别进行PCR及实时荧光定量PCR扩增,优化实时荧光定量PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线及扩增曲线,建立实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的重复性、灵敏度及特异性.结果 各质粒的PCR及实时荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均可见大小与理论值相符的特异性条带.IFITM1、2、3和β-actin的佳荧光定量PCR引物浓度分别为0.2、0.5、0.4和0.5μl,佳退火温度为55℃.各质粒标准曲线的循环数与起始模板拷贝数的相关性均较好(R2分别为0.998、0.990、0.990和0.995),扩增效率分别为106.284％、101.030％、104.929％和101.962％.IFITM1、2、3基因不同拷贝数的试验内CV为0.14％～0.72％,试验间CV为0.77％ ～ 1.58％;灵敏度分别为2.52×100、1.3×100和3.7×101 copies;该方法未扩增出鸡肝脏及禽流感病毒H3N2 cDNA,可特异性扩增B型流感病毒cDNA,各标准质粒的溶解曲线约在同一温度出现1个单峰.结论 已成功建立了IFITM1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法具有较高的重复性、灵敏度及特异性,为进一步研究IFITM1、2、3的功能及其基因表达与肿瘤发生发展的相关性奠定了基础.
作者：袁森；田明尧；崔鹤馨；靖杰；刘昊；刘存霞；任静强；姜庆利；薛斐 刊期： 2013年第05期
目的 用新型复合型填料Capto Core 700层析介质纯化鸡胚流感疫苗,以降低卵清蛋白的残留水平.方法 用Capto Core700进一步纯化鸡胚培养的不同亚型的流感病毒纯化后原液及超滤浓缩液,参考《中国药典》三部(2010版)检测纯化前、后样品中总蛋白含量、血凝素含量及卵清蛋白残留量.结果 卵清蛋白残留量较纯化前降低约10倍,血凝素和总蛋白含量基本保持不变.结论 Capto Core700新型填料可有效去除鸡胚流感疫苗中的卵清蛋白残留量,从而提高产品质量.
作者：马志宇；陈美丽；张萌；刘静；贾重来；罗亮；解红艳 刊期： 2013年第05期
目的 建立负载Ag+ D72树脂色谱柱分离纯化花生四烯酸(Arachidonic acid,AA或ARA)的工艺.方法 采用负载Ag+ D72树脂色谱柱对微生物油脂中的ARA进行分离纯化,确定佳分离纯化参数,利用气相色谱法检测ARA的含量.结果 负载Ag+ D72树脂的大饱和吸附量约为9 mg/g干树脂,在吸附温度0℃、不饱和脂肪酸甲酯上样质量浓度5 mg/ml,5％丙酮正己烷溶液(体积比)洗脱、解吸温度30℃、洗脱流速2ml/min的条件下,ARA的纯度达89.4％,收率达79.3％.结论 负载Ag+ D72树脂色谱柱可有效分离纯化微生物油脂中的ARA,为进一步生产高纯度的ARA,进而规模化生产ARA产品提供了参考.
作者：齐佳；于长青 刊期： 2013年第05期
目的 构建携带血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达.方法 将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC (rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达.结果 重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108 pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白).结论 已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路.
作者：欧霞；Yuri Kusov；郭莉莉；米锴；吴晋元；尹娜；张光明；李鸿钧；孙茂盛 刊期： 2013年第05期
目的 动态检测小鼠感染附红细胞体后CD4+T淋巴细胞相关细胞因子的变化情况,探讨CD4+T淋巴细胞发挥的免疫学效应.方法 将小鼠随机分为实验组(纯化的附红细胞体)和对照组(生理盐水),均经腹腔免疫接种,0.5ml/只.分别于感染后第3、5、7、9d,经小鼠尾尖采血,镜下观察附红细胞体形态并进行PCR鉴定.建模成功后,分别于感染后第3、5、7、9d无菌取小鼠脾脏,采用RT-PCR法检测小鼠脾脏中IL-4、IL-17、IFNγ基因的转录水平.结果 各时间点感染小鼠的红细胞均出现不同程度的变形,边缘被附红体附着,PCR扩增产物可见602 bp的特异条带.实验组小鼠脾脏IL-4、IL-17、IFNγ均有不同程度的表达,IL-17在感染在第3天上调,5d达到高峰,7d开始下降;IFNγ在感染第3天表达上调,5d明显下降,7d表达上升,9d达到高峰;IL-4始终处于低表达状态.实验组小鼠脾脏IL-4、IL-17、IFNγ的转录水平均高于对照组(P＜0.01),IL-17和IFNγ的表达呈相互抑制状态,IL-4呈被抑制状态.结论 附红细胞体感染后,IL-17在早期发挥了促进炎症发生和抵抗感染的免疫学作用;IFNγ在感染后期发挥保护炎性反应,避免炎性反应过度发生的免疫学效应;IL-4在此感染过程中作用不明显.
作者：韩喜彬；杨蕾芳；魏文红；席会娟；朱亚琴；马明妍；巴彩凤 刊期： 2013年第05期
目的 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠可溶性IL-5α受体(Soluble IL-5 receptor α,sIL-5Rα)蛋白,并对其抗原性进行鉴定.方法 应用Vector NTI AdvanceⅡ软件优化小鼠IL-5Rα基因胞外区密码子后合成序列,将sIL-5Rα克隆至pFastbacI中,构建重组穿梭质粒pFastbacI-sIL-5Rα,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,采用Reed-Muench法检测扩增后病毒滴度;将P3、P4代病毒以0.05 MOI感染sf9细胞,SDS-PAGE鉴定sIL-5Rα蛋白的表达,表达产物应用阳离子交换层析法进行纯化,并对纯化的sIL-5Rα蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα经PCR鉴定,证明构建正确;P3代重组杆状病毒的病毒滴度为1.7× 107pfu/ml;表达及纯化的sIL-5Rα蛋白在相对分子质量约43 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠IL-5Rα多克隆抗体发生特异性反应.结论 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠可溶性IL-5Rα受体蛋白,为进一步研究其生物学功能及在哮喘模型动物中的治疗作用奠定了实验基础.
作者：张悦鸣；段跃强；罗德炎；姚惠娟；王希良；李志奎 刊期： 2013年第05期
目的 研究阿昔莫司对巨噬细胞RAW264.7三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)及其上游调控因子肝脏X受体α(Liver X receptor,LXRα)的影响,探讨其促进胆固醇逆转运(Reverse cholesterol transport,RCT)、抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的可能机制.方法 体外培养RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组(不含阿昔莫司)和不同浓度的阿昔莫司干预组(分别含5、10、25 μg/ml阿昔莫司),作用24 h后,采用RT-PCR法检测各组细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组细胞中ABCA1和LXRα蛋白的表达;闪烁计数法检测各组细胞内胆固醇的流出.结果 阿昔莫司呈浓度依赖性地增加RAW264.7细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平(P＜0.05或P＜0.01)及细胞内胆固醇的流出率(P＜0.01).结论 阿昔莫司可通过LXRα途径上调巨噬细胞ABCA1的表达,促使细胞内胆固醇流出,从而延缓AS的发生发展.
作者：艾青；马康华 刊期： 2013年第05期
目的 克隆B型肉毒毒素轻链Bont-B基因,使其在大肠杆菌内表达,并对表达的重组蛋白进行纯化.方法 设计并人工合成Bont-B基因,克隆入表达载体pMD 19-T中,构建质粒pMD 19-T-Bont-B,经酶切后与pET-28a载体连接,构建重组表达质粒pET-28a-Bont-B,将重组表达质粒转化感受态大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析后,经金属螯合层析Cu2+柱进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度.结果 重组表达质粒pET-28a-Bont-B经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约50 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的6％;纯化后的重组蛋白纯度可达90％以上.结论 已成功克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中原核表达了Bont-B轻链基因,为制备抗Bont-B轻链单克隆抗体及研究肉毒中毒机制和治疗奠定了基础.
作者：刘雪；张国利；陈萍；田园；岳玉环；吴广谋；张亮；冯越；朱平 刊期： 2013年第05期
目的 观察阿苯达唑(Albendazole,ABZ)对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及其对Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制.方法 用不同终浓度的ABZ(0.5、1.0、2.0及4.0mg/ml)处理SW480细胞24、48、72 h,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),CCK-8法检测ABZ对SW480细胞增殖活力的影响,并计算增殖抑制率及IC50.用不同终浓度的ABZ(1.0、2.0 mg/ml)处理SW480细胞,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2 mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,0.5、1.0、2.0及4.0 mg/ml ABZ处理组A值均明显降低(P＜0.05),随着作用浓度的增加及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强,且呈时间-剂量依赖性,2.0 mg/ml ABZ处理组24、48、72 h的IC50值分别为3.18、1.96和1.03 mg/ml;与对照组比较,1.0、2.0mg/mlABZ处理组细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低(P＜0.05).结论 ABZ能抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并显著促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2表达有关.
作者：刘劲松；刘俊 刊期： 2013年第05期
目的 探讨人骨形态发生蛋白9(Human bone morphogenetie protein 9,hBMP9)对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制.方法 用重组腺病毒AdBMP9分别感染MG63和U2OS细胞,并设空白对照组(不加任何处理因素)和AdGFP感染对照组,免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)和Western blot法检测感染后两种细胞中hBMP9的表达水平;MTT和台盼蓝拒染活细胞计数法检测细胞的增殖活力;Hoechst/PI荧光双染法检测细胞的凋亡情况;划痕愈合试验检测细胞的迁移能力;ICC法检测Wnt/ β-catenin信号途径中β-catenin的表达.结果 AdBMP9感染的两种细胞中hBMP9的表达水平均明显高于空白对照组和AdGFP感染组(P＜0.05);hBMP9表达的上调可抑制MG63和U2OS细胞的增殖,且呈时间依赖性(P＜0.01),并使两种细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01),迁移能力明显下降(P＜0.01),β-catenin的表达量明显减少(P＜0.01).结论 hBMP9可能通过下调Wnt/β-catenin信号途径活性,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡.
作者：吴丽美；叶立伟；武睿；段亮；张昀源；陈娴；王海燕；周兰 刊期： 2013年第05期
目的 调查输注单采血小板发生输血不良反应相关因素,为制定预防措施提供依据.方法 收集广东省东莞市某医院2012年5～6月间,输注单采血小板后引发输血不良反应临床病例13例作为研究组,同时随机选择同期输注单采血小板未发生输血不良反应的临床病例16例作为对照组,根据受血者和献血者的基本信息设计调查方案.受血者基本信息包括:性别、年龄、输血史、药物史及外周血细胞变化(包括输血前后白细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞、单核细胞的绝对值之差以及血小板回收率和输血后血浆球蛋白含量);献血者基本信息包括:性别、年龄、献血次数、血小板输注前保存时间、血小板采集机型、循环量、献血前白细胞计数、献血过程中有无献血不良反应.对收集数据进行统计学分析.结果 研究组输注单采血小板发生输血不良反应的受血者的年龄、性别、输血史、药物史、血小板回收率、输血前后白细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞、单核细胞的绝对值之差、输血后血浆球蛋白含量与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);研究组血小板输注前保存时间、献血者性别、年龄、献血次数、血小板采集机型、循环量、献血前白细胞计数与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 输注单采血小板发生输血不良反应与受血者和献血者自身因素、受血者外周血细胞数量变化及血浆球蛋白含量无关.推测导致输注单采血小板而发生输血不良反应的主要因素为异源血浆蛋白的输入,推荐临床对已发生输血不良反应需再次输注血小板的患者应选择洗涤血小板.
作者：刘赴平；何子毅；祁妙华；刘仁强；韩忠朝 刊期： 2013年第05期
近年来国内外以干细胞为主的细胞治疗研究发展迅速,在治疗退行性疾病、缺血性心脑血管疾病、肝硬化及糖尿病等领域已开展了多项临床试验研究,但作为新型治疗性产品,干细胞产品在治疗的安全性和有效性方面还存在若干风险因素.本文对常见的干细胞种类、特性以及与临床应用相关的内在和外在风险因素进行了综述,旨在以现有的理论和技术条件,探讨治疗性干细胞产品基本的质量控制要求和策略.
作者：袁宝珠 刊期： 2013年第05期
目的 构建表达肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因的重组腺病毒质粒,并进行鉴定.方法 以质粒pEGFP-N2-hepaCAM为模板,PCR扩增hepaCAM基因,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV上,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将重组腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-hepaCAM经Pme Ⅰ线性化,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中进行同源重组.重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM经Pme Ⅰ线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒AdI-hepaCAM,经大量扩增后,检测病毒滴度.RT-qPCR及Westernblot检测感染的BIU-87细胞内hepaCAM的表达.结果 酶切鉴定证实重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM构建正确,重组腺病毒AdI-hepaCAM滴度可达1.6×1012pfu/ml,与空载体腺病毒组比较,经重组腺病毒感染的BIU-87细胞中hepaCAM mRNA及蛋白的表达均明显升高(P＜0.05).结论 已成功构建携带hepaCAM的重组腺病毒载体AdI-hepaCAM,为研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞增殖的调控提供依据.
作者：陶佳；王秋菊；范砚茹；杜红飞；宋学东；罗春丽；吴小侯 刊期： 2013年第05期
目的 比较鱼精蛋白1 (Protamines 1,PRM1)在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 通过实时荧光定量PCR法检测53例结肠腺癌及正常结肠组织中PRM1基因mRNA水平,并分析PRM1 mRNA检测对于结肠腺癌诊断的敏感性;SP免疫组化染色法检测组织中PRM1蛋白的表达水平.结果 结肠腺癌组织中PRM1基因mRNA水平明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P＜0.05),总体阳性率为96.23％(51/53);结肠腺癌组织高表达PRM1,且能够分泌入腺腔.结论 结肠腺癌细胞在基因及蛋白水平均高表达PRM1,PRM1 mRNA检测对结肠腺癌的诊断具有参考价值.
作者：侯文佳；陈芳芳；任平；张海燕；冯野 刊期： 2013年第05期
目的 构建抗菌肽PR-39(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)重组腺病毒表达质粒.方法 从含抗菌肽PR-39核心编码区的质粒中扩增PR-39基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组穿梭质粒,经PmeⅠ酶切线性化后,转化感受态AdEasier细胞,构建重组腺病毒质粒,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度检测.将重组腺病毒感染鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2,通过荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的表达,RT-PCR法检测PR-39基因的转录水平.结果 重组腺病毒穿梭质粒pAd-Trace-TO4-PR-39经Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组腺病毒质粒pAdPR-39经Pac Ⅰ酶切鉴定,证明目的基因已整合到腺病毒基因组中;第4代重组腺病毒AdPR-39的病毒滴度为1010 IU/ml;感染重组腺病毒AdPR-39的C3H10T1/2细胞可表达RFP; PR-39基因在C3H10T1/2细胞内成功转录.结论 已成功构建携带RFP的PR-39重组腺病毒表达质粒,在鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中可高效表达.
作者：刘涛；姚海；刘铭；李平；左国伟；王信；张健 刊期： 2013年第05期
目的 纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性.方法 将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测.结果 透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9％,11.6;16.7％,11.2;16.7％,18.6.结论 成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性.该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础.
作者：于保锋；刘志贞；张悦红；解军；程牛亮；王建华；牛勃 刊期： 2013年第05期
目的 在缺氧环境下,探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-lα,HIF-1α)与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌细胞SGC-7901中的相互作用.方法 将质粒β-catenin-micRNA转染SGC-7091细胞,筛选稳定转染细胞株SGC-7901-β-catenin-micRNA.将SGC-7901细胞分为对照组、脂质体组和阴性对照组,对照组:常氧培养48 h;脂质体组:常氧培养24 h后,加入10μl脂质体,培养24 h;阴性对照组:常氧培养24 h后,转染阴性对照质粒,培养24 h;设稳定转染细胞株为干扰组,常氧培养48 h.采用倍增时间试验、平板克隆形成试验及流式细胞术检测各组细胞倍增时间、平板克隆集落数及细胞周期的变化.另取SGC-7901细胞,分为对照组、缺氧组、双重缺氧组;对照组:常氧培养48 h;缺氧组:常氧培养32 h,物理缺氧培养16 h;双重缺氧组:常氧培养24 h,化学缺氧培养8h后,再同时物理缺氧培养16h.同时取稳定转染细胞株,分为对照干扰组、缺氧干扰组和双重缺氧干扰组.对照干扰组:常氧培养48 h;缺氧干扰组:常氧培养32 h,物理缺氧培养16 h;双重缺氧干扰组:常氧培养24 h,化学缺氧培养8h后,再同时物理缺氧培养16h.采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中HIF-1α、β-catenin的mRNA及蛋白的表达水平.结果 与对照组、脂质体组、阴性对照组比较,干扰组倍增时间延长,平板克隆集落数减少,细胞阻滞在G1期比例增加,S期减少,差异均有统计学意义(p＜0.05).缺氧组与对照组、双重缺氧组与缺氧组、缺氧干扰组与对照干扰组及双重缺氧干扰组与缺氧干扰组相比,HIF-1α、β-catenin的mRNA及蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P均＜0.05).缺氧干扰组与缺氧组及双重缺氧干扰组与双重缺氧组比较,β-catenin、HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 HIF-1α激活可调控Wnt/β-catenin通路,但也受控于Wnt/β-catenin通路,二者之间相互影响,相互调节.
作者：刘洪兰；张俊文 刊期： 2013年第05期
目的 在大肠杆菌中表达并纯化人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的融合蛋白TB10.4-F1,检测其免疫原性.方法 将重组工程菌TB10.4/pET28a/BL21和TB 10.4-F1/pET30a/BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达形式;表达的融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1经His TrapTM HP层析柱进行亲和层析一步纯化后,免疫BALB/c小鼠.小鼠分为TB10.4(30 μg/只)、TB10.4-F1(30 μg/只)及PBS(200μl)组,分别于0、2、4周免疫小鼠,于每次免疫前1d经尾部取血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中特异性的IgG水平;于末次免疫2周后摘眼球取血,分离血清,ELISA法检测特异性IgG水平及中和抗体滴度.结果 表达的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1的相对分子质量分别约13 300和59 600,均以包涵体形式表达,表达量分别占菌体总蛋白的53.9％和12％;纯化后的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1纯度分别可达95％和80％;与TB10.4组相比,TB10.4-F1组IgG水平明显升高,IgG1/IgG2a值明显降低,但仍大于1;TB10.4-F1组小鼠血清中RSV特异性中和抗体滴度可达log102.699.结论 融合蛋白TB10.4-F1免疫原性强,能激发出较为平衡的Th1/Th2反应,并产生抗HRSV的中和抗体.融合蛋白TB10.4-F1有望成为预防HRSV感染的候选疫苗.
作者：王瑞博；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第05期
目的 优化重组免疫毒素IL-6(T23)-PE38KDEL在大肠杆菌中的自诱导表达条件,以提高菌体浓度及可溶性目的蛋白的表达量.方法 采用摇瓶培养,利用单因素和正交试验对工程菌自诱导的培养条件(接种量、诱导时间、诱导温度、装瓶量)和培养基组分(有机氮源、无机氮源、碳源、有机酸)进行优化,检测菌体浓度、可溶性目的蛋白的表达量及质粒稳定性.结果 确定适自诱导培养条件为装瓶量20ml/250ml、接种量2％,28℃诱导25 h;适自诱导培养基组分为:蛋白胨2％、酵母浸粉0.5％、Na2HPO425 mmol/L、KH2PO425 mmol/L、硫酸铵25 mmol/L、葡萄糖0.05％、甘露醇1％、乳糖0.6％、苹果酸钠20 mmol/L、MgSO40.5 mmol/L.此时可溶性目的蛋白的表达量和菌体浓度分别为LB培养基(IPTG诱导)的1.76和2.12倍,质粒稳定性由87％提高至98％.结论 优化了重组免疫毒素IL-6(T23)-PE38KDEL在大肠杆菌中的自诱导表达条件,为其工业化生产奠定了基础,也为自诱导在其他重组蛋白药物生产中的应用提供了参考.
作者：丛楠；卢士英；任洪林；李岩松；翟新新；柳增善 刊期： 2013年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
