张悦鸣；段跃强；罗德炎；姚惠娟；王希良；李志奎
目的 观察不同剂量南极磷虾粉及其与钙联合对骨质疏松模型大鼠的作用.方法 将大鼠随机分为10组,即虾粉低、中、高剂量组、钙组、联合低、中、高剂量组、氟化钠组、假手术组、模型对照组,每组10只,通过切除双侧卵巢建立骨质疏松模型,假手术组仅切除卵巢附近部分脂肪组织.各实验组分别灌胃低、中、高剂量虾粉、钙、低、中、高剂量虾粉+钙、氟化钠,假手术组与模型对照组正常饮食.12周后,经腹动脉取血,分离血清,检测钙离子浓度及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性;取股骨观察骨密度及生物力学差异,并检测骨灰分含量;取胫骨检测骨氟含量.结果 虾粉低、中、高剂量组及联合低、中、高剂量组大鼠血钙浓度随虾粉剂量的增加逐渐降低,虾粉高剂量组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),而联合低、中、高剂量组大鼠血钙浓度高于模型对照组;虾粉低、中、高剂量组ALP活性均高于模型对照组(P＜0.05),且随着虾粉剂量的增加,ALP活性增强.联合低、中、高剂量组大鼠骨密度均高于模型对照组(P均＜0.05),且优于低、中、高剂量虾粉组;与模型对照组相比,虾粉低剂量组及联合中、高剂量组均可明显增加骨大力学载荷值(P均＜0.05);与模型对照组相比,低、中、高剂量虾粉组随虾粉剂量增加骨氟含量增多,与钙联合应用后,降低了骨氟含量(P均＜0.01),联合低、中、高剂量组与相同剂量的虾粉组相比,骨氟含量均降低;虾粉低、中、高剂量组与模型对照组相比,骨灰分含量升高(P均＞0.05).结论 使用虾粉治疗骨质疏松时,低剂量效果佳;若虾粉与钙联合治疗,中剂量虾粉加钙改善骨质疏松效果佳.
作者：蔡维望；张俊忠；佟加贝；成航；葛鲁娜；李俊玲；王世立 刊期： 2013年第05期
目的 分析钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)基因多态性与西门塔尔杂交牛胴体和肉质性状的相关性.方法 选取95头西门塔尔杂交牛,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(Restriction fragment length polymor-phism-polymerase chain reaction,RFLP-PCR)对CAST基因外显子1(Exon1)和外显子5(Exon5)区域的片段的多态性进行检测,并对突变位点与西门塔尔肉牛胴体和肉质性状的相关性进行分析.结果 在所分析的片段中,仅引物4扩增的片段(Exon1)存在一个G→C碱基的置换突变(E1 256 g＞c),为同义突变;该突变位点为Ras Ⅰ酶的自然酶切位点,酶切后存在GG、GC和CC 3种基因型,CC基因型与西门塔尔牛的净肉率性状显著相关(P＜0.05),而对其他胴体和肉质性状无显著影响.结论 CAST基因Exon1处存在的突变位点与西门塔尔肉牛的净肉率显著相关,因此该位点将有助于筛选与牛肉质相关的辅助选择标记,该基因将为鉴定与肉质相关的功能基因提供参考.
作者：沈冰蕾；刘博洋；赵志辉；杨润军 刊期： 2013年第05期
目的 制备并鉴定玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)抗独特型单抗Ab2β-1D5.方法 将ZEN单抗1G4与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合后,以ZEN单抗Fab片段作为包被抗原,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞.经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,制备腹水型单抗,并经Protein G亲和层析柱进行纯化.间接ELISA法检测ZEN抗独特型单抗的抗体效价及特异性;间接竞争ELISA法检测ZEN抗独特型单抗类型、灵敏度及其与ZEN毒素间的相关性.结果 共获得6株稳定分泌ZEN抗独特型单抗的杂交瘤细胞株,腹水型抗体效价为1∶1.2×105～ 1∶2.0×105;6株单抗均为β型抗独特型抗体(Ab2β),其中Ab2β-1D5抗体灵敏度高,对ZEN的IC50值达10.09 ng/ml,其与ZEN毒素呈线性相关(r=0.990);ZEN抗独特型单抗与莱克多巴胺、重金属铅、铬及虾过敏原单抗均无交叉反应,特异性良好.结论 已成功制备玉米赤霉烯酮抗独特型单抗,该抗体与ZEN间存在“内影像”关系,可以替代ZEN毒素标准品,用于建立ZEN的无毒免疫学检测技术.
作者：贾彦琼；黄建芳；向军俭；邓宁；唐勇；骆敏儿；王宏 刊期： 2013年第05期
目的 探讨人骨形态发生蛋白9(Human bone morphogenetie protein 9,hBMP9)对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制.方法 用重组腺病毒AdBMP9分别感染MG63和U2OS细胞,并设空白对照组(不加任何处理因素)和AdGFP感染对照组,免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)和Western blot法检测感染后两种细胞中hBMP9的表达水平;MTT和台盼蓝拒染活细胞计数法检测细胞的增殖活力;Hoechst/PI荧光双染法检测细胞的凋亡情况;划痕愈合试验检测细胞的迁移能力;ICC法检测Wnt/ β-catenin信号途径中β-catenin的表达.结果 AdBMP9感染的两种细胞中hBMP9的表达水平均明显高于空白对照组和AdGFP感染组(P＜0.05);hBMP9表达的上调可抑制MG63和U2OS细胞的增殖,且呈时间依赖性(P＜0.01),并使两种细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01),迁移能力明显下降(P＜0.01),β-catenin的表达量明显减少(P＜0.01).结论 hBMP9可能通过下调Wnt/β-catenin信号途径活性,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡.
作者：吴丽美；叶立伟；武睿；段亮；张昀源；陈娴；王海燕；周兰 刊期： 2013年第05期
目的 纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性.方法 将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测.结果 透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9％,11.6;16.7％,11.2;16.7％,18.6.结论 成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性.该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础.
作者：于保锋；刘志贞；张悦红；解军；程牛亮；王建华；牛勃 刊期： 2013年第05期
目的 构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒.方法 将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经Pac Ⅰ酶切线性化,共转染293AD细胞,进行同源重组,包装出重组腺病毒rAd5v-cVP2,按Karber法计算重组腺病毒的病毒滴度(TCID50).电镜下观察重组腺病毒的形态;RT-PCR及Western blot法检测CPV VP2基因mRNA的转录及蛋白的表达水平.结果 重组穿梭质粒pacAd5-cVP2经酶切及测序证明构建正确;包装出的重组腺病毒rAd5v-cVP2的病毒滴度可稳定在108.25 TCID50/ml;电镜下观察可见典型的腺病毒外型特征;重组腺病毒感染的293AD细胞可检测到VP2基因的转录和表达.结论 已成功构建了CPV VP2蛋白重组人5型腺病毒.
作者：杨洋；宫婷；米立娟；赵敬慧；陈奇；钱方；刘晔；张守峰；扈荣良 刊期： 2013年第05期
目的 动态检测小鼠感染附红细胞体后CD4+T淋巴细胞相关细胞因子的变化情况,探讨CD4+T淋巴细胞发挥的免疫学效应.方法 将小鼠随机分为实验组(纯化的附红细胞体)和对照组(生理盐水),均经腹腔免疫接种,0.5ml/只.分别于感染后第3、5、7、9d,经小鼠尾尖采血,镜下观察附红细胞体形态并进行PCR鉴定.建模成功后,分别于感染后第3、5、7、9d无菌取小鼠脾脏,采用RT-PCR法检测小鼠脾脏中IL-4、IL-17、IFNγ基因的转录水平.结果 各时间点感染小鼠的红细胞均出现不同程度的变形,边缘被附红体附着,PCR扩增产物可见602 bp的特异条带.实验组小鼠脾脏IL-4、IL-17、IFNγ均有不同程度的表达,IL-17在感染在第3天上调,5d达到高峰,7d开始下降;IFNγ在感染第3天表达上调,5d明显下降,7d表达上升,9d达到高峰;IL-4始终处于低表达状态.实验组小鼠脾脏IL-4、IL-17、IFNγ的转录水平均高于对照组(P＜0.01),IL-17和IFNγ的表达呈相互抑制状态,IL-4呈被抑制状态.结论 附红细胞体感染后,IL-17在早期发挥了促进炎症发生和抵抗感染的免疫学作用;IFNγ在感染后期发挥保护炎性反应,避免炎性反应过度发生的免疫学效应;IL-4在此感染过程中作用不明显.
作者：韩喜彬；杨蕾芳；魏文红；席会娟；朱亚琴；马明妍；巴彩凤 刊期： 2013年第05期
目的 构建抗菌肽PR-39(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)重组腺病毒表达质粒.方法 从含抗菌肽PR-39核心编码区的质粒中扩增PR-39基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组穿梭质粒,经PmeⅠ酶切线性化后,转化感受态AdEasier细胞,构建重组腺病毒质粒,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度检测.将重组腺病毒感染鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2,通过荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的表达,RT-PCR法检测PR-39基因的转录水平.结果 重组腺病毒穿梭质粒pAd-Trace-TO4-PR-39经Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组腺病毒质粒pAdPR-39经Pac Ⅰ酶切鉴定,证明目的基因已整合到腺病毒基因组中;第4代重组腺病毒AdPR-39的病毒滴度为1010 IU/ml;感染重组腺病毒AdPR-39的C3H10T1/2细胞可表达RFP; PR-39基因在C3H10T1/2细胞内成功转录.结论 已成功构建携带RFP的PR-39重组腺病毒表达质粒,在鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中可高效表达.
作者：刘涛；姚海；刘铭；李平；左国伟；王信；张健 刊期： 2013年第05期
目的 在缺氧环境下,探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-lα,HIF-1α)与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌细胞SGC-7901中的相互作用.方法 将质粒β-catenin-micRNA转染SGC-7091细胞,筛选稳定转染细胞株SGC-7901-β-catenin-micRNA.将SGC-7901细胞分为对照组、脂质体组和阴性对照组,对照组:常氧培养48 h;脂质体组:常氧培养24 h后,加入10μl脂质体,培养24 h;阴性对照组:常氧培养24 h后,转染阴性对照质粒,培养24 h;设稳定转染细胞株为干扰组,常氧培养48 h.采用倍增时间试验、平板克隆形成试验及流式细胞术检测各组细胞倍增时间、平板克隆集落数及细胞周期的变化.另取SGC-7901细胞,分为对照组、缺氧组、双重缺氧组;对照组:常氧培养48 h;缺氧组:常氧培养32 h,物理缺氧培养16 h;双重缺氧组:常氧培养24 h,化学缺氧培养8h后,再同时物理缺氧培养16h.同时取稳定转染细胞株,分为对照干扰组、缺氧干扰组和双重缺氧干扰组.对照干扰组:常氧培养48 h;缺氧干扰组:常氧培养32 h,物理缺氧培养16 h;双重缺氧干扰组:常氧培养24 h,化学缺氧培养8h后,再同时物理缺氧培养16h.采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中HIF-1α、β-catenin的mRNA及蛋白的表达水平.结果 与对照组、脂质体组、阴性对照组比较,干扰组倍增时间延长,平板克隆集落数减少,细胞阻滞在G1期比例增加,S期减少,差异均有统计学意义(p＜0.05).缺氧组与对照组、双重缺氧组与缺氧组、缺氧干扰组与对照干扰组及双重缺氧干扰组与缺氧干扰组相比,HIF-1α、β-catenin的mRNA及蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P均＜0.05).缺氧干扰组与缺氧组及双重缺氧干扰组与双重缺氧组比较,β-catenin、HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 HIF-1α激活可调控Wnt/β-catenin通路,但也受控于Wnt/β-catenin通路,二者之间相互影响,相互调节.
作者：刘洪兰；张俊文 刊期： 2013年第05期
目的 探讨JY佐剂对人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV) 18型L1蛋白病毒样颗粒(Virus-likeparticle,VLP)黏膜免疫效果的影响,并观察鼻腔反复免疫后与HPV58、11和6型的免疫交叉反应.方法 用含或不含JY佐剂的HPV18 L1 VLP分别经肌肉和鼻腔免疫BALB/c小鼠,并设PBS对照组,于第0、3、6周各免疫1次,免疫后第2、5、8周采血,ELISA法检测血清IgG抗体滴度;于第8周分离脾淋巴细胞并收集呼吸道灌洗液,采用IFNγELISPOT试剂盒检测细胞免疫效果,ELISA法检测黏膜免疫效果;鼻腔免疫各组取5只小鼠,继续免疫10次,每次间隔3周,收集第14、20、26、32和38周的血清,ELISA法检测HPV18 L1蛋白与HPV58、11和6型的免疫交叉反应.结果 免疫3次后,不含或含有佐剂的HPV18 L1蛋白经肌肉免疫后的血清IgG抗体滴度(均为104.6)高于经鼻腔免疫后的血清IgG抗体滴度(分别为101.9和102.8).含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后呼吸道灌洗液中sIgA抗体浓度(30.06 μg/ml)明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(23.47 μg/ml)(P＜0.01),但肌肉免疫组未检测到sIgA抗体.含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫诱导的细胞斑点数明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(P＜0.01),不含佐剂与含佐剂的HPV18 L1蛋白肌肉免疫组诱导的细胞斑点数差异无统计学意义(P＞0.05).HPV18 L1免疫小鼠后的血清与HPV58、11和6型之间均有交叉反应,在第32周血清特异性IgG抗体滴度高.结论 HPV18 L1 VLP经肌肉免疫后,其血清抗体水平高于鼻腔免疫组,但该蛋白鼻腔免疫后细胞免疫反应和黏膜sIgA抗体水平均高于肌肉免疫组;JY佐剂能增强HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后的小鼠细胞反应及黏膜sIgA抗体应答,但肌肉免疫组佐剂作用不明显;HPV18 L1蛋白反复鼻腔免疫后,可拓宽抗原保护谱.
作者：麻粉莲；袁武梅；张骞；郑文芝；赵智慧；郑丽舒 刊期： 2013年第05期
目的 构建携带血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达.方法 将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC (rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达.结果 重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108 pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白).结论 已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路.
作者：欧霞；Yuri Kusov；郭莉莉；米锴；吴晋元；尹娜；张光明；李鸿钧；孙茂盛 刊期： 2013年第05期
目的 比较鱼精蛋白1 (Protamines 1,PRM1)在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 通过实时荧光定量PCR法检测53例结肠腺癌及正常结肠组织中PRM1基因mRNA水平,并分析PRM1 mRNA检测对于结肠腺癌诊断的敏感性;SP免疫组化染色法检测组织中PRM1蛋白的表达水平.结果 结肠腺癌组织中PRM1基因mRNA水平明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P＜0.05),总体阳性率为96.23％(51/53);结肠腺癌组织高表达PRM1,且能够分泌入腺腔.结论 结肠腺癌细胞在基因及蛋白水平均高表达PRM1,PRM1 mRNA检测对结肠腺癌的诊断具有参考价值.
作者：侯文佳；陈芳芳；任平；张海燕；冯野 刊期： 2013年第05期
目的 原核表达并纯化人胎盘泌乳素(Human placenta lactogen,hPL).方法 从正常产妇新鲜胎盘组织中提取组织总RNA,PCR扩增hPL基因,将其亚克隆至pQE-30载体,构建重组表达质粒,转化感受态大肠杆菌M15(pREP4),经IPTG诱导表达.表达产物经Sephacryl S-200层析柱纯化,纯化产物经SDS-PAGE和western blot鉴定其纯度和特异性.结果 重组菌pQE-hPL/M15(pREP4)经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约23 000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的67％;纯化后目的蛋白纯度可达90％以上;纯化蛋白和hPL包涵体均可与羊抗hPL多克隆抗体特异性结合,具有较强的特异性和抗原性.结论 已成功制备了纯度较高的hPL蛋白,为基因工程制备抗体提供了抗原.
作者：曲影；张小楠；聂彩霞；姬朝光；刘柱；刘永茂 刊期： 2013年第05期
目的 探讨凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27(Interleukin-27,IL-27)表达的影响.方法 分别将小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW细胞)和小鼠腹腔巨噬细胞分为6组:空白对照组、LPS刺激组、凋亡细胞刺激组、LPS+凋亡细胞刺激组、IFNγ+LPS刺激组及IFNγ+ LPS+凋亡细胞刺激组.用IL-27 p28启动子荧光素酶报告基因瞬时转染RAW细胞,检测各组细胞中IL-27 p28启动子荧光素酶活性;RT-PCR法检测各组RAW细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平,实时定量PCR法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27的表达水平.结果 瞬时转染的RAW细胞中,IFNγ+ LPS刺激组中IL-27 p28启动子荧光素酶活性明显高于空白对照组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P＜0.05);RAW细胞与腹腔巨噬细胞中,LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28基因mRNA的转录水平明显高于空白对照组、LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+ LPS+凋亡细胞刺激组(P＜0.05);LPS刺激组和IFNγ+ LPS刺激组细胞中IL-27的表达水平明显高于LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+ LPS+凋亡细胞刺激组.结论 巨噬细胞在摄取凋亡细胞后,IL-27 p28亚基的表达水平下降,从而导致IL-27的表达水平下降,为进一步研究其机制及临床应用奠定了理论基础.
作者：黄琦；秦新月 刊期： 2013年第05期
目的 建立人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法.方法 根据GenBank中登录的人IFITM1、2、3及β-actin基因序列,分别设计4对特异性引物,以质粒pVAX 1-IFITM 1、2、3和pMD 18-T-β-actin为模板,分别进行PCR及实时荧光定量PCR扩增,优化实时荧光定量PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线及扩增曲线,建立实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的重复性、灵敏度及特异性.结果 各质粒的PCR及实时荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均可见大小与理论值相符的特异性条带.IFITM1、2、3和β-actin的佳荧光定量PCR引物浓度分别为0.2、0.5、0.4和0.5μl,佳退火温度为55℃.各质粒标准曲线的循环数与起始模板拷贝数的相关性均较好(R2分别为0.998、0.990、0.990和0.995),扩增效率分别为106.284％、101.030％、104.929％和101.962％.IFITM1、2、3基因不同拷贝数的试验内CV为0.14％～0.72％,试验间CV为0.77％ ～ 1.58％;灵敏度分别为2.52×100、1.3×100和3.7×101 copies;该方法未扩增出鸡肝脏及禽流感病毒H3N2 cDNA,可特异性扩增B型流感病毒cDNA,各标准质粒的溶解曲线约在同一温度出现1个单峰.结论 已成功建立了IFITM1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法具有较高的重复性、灵敏度及特异性,为进一步研究IFITM1、2、3的功能及其基因表达与肿瘤发生发展的相关性奠定了基础.
作者：袁森；田明尧；崔鹤馨；靖杰；刘昊；刘存霞；任静强；姜庆利；薛斐 刊期： 2013年第05期
目的 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠可溶性IL-5α受体(Soluble IL-5 receptor α,sIL-5Rα)蛋白,并对其抗原性进行鉴定.方法 应用Vector NTI AdvanceⅡ软件优化小鼠IL-5Rα基因胞外区密码子后合成序列,将sIL-5Rα克隆至pFastbacI中,构建重组穿梭质粒pFastbacI-sIL-5Rα,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,采用Reed-Muench法检测扩增后病毒滴度;将P3、P4代病毒以0.05 MOI感染sf9细胞,SDS-PAGE鉴定sIL-5Rα蛋白的表达,表达产物应用阳离子交换层析法进行纯化,并对纯化的sIL-5Rα蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα经PCR鉴定,证明构建正确;P3代重组杆状病毒的病毒滴度为1.7× 107pfu/ml;表达及纯化的sIL-5Rα蛋白在相对分子质量约43 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠IL-5Rα多克隆抗体发生特异性反应.结论 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠可溶性IL-5Rα受体蛋白,为进一步研究其生物学功能及在哮喘模型动物中的治疗作用奠定了实验基础.
作者：张悦鸣；段跃强；罗德炎；姚惠娟；王希良；李志奎 刊期： 2013年第05期
目的 优化重组免疫毒素IL-6(T23)-PE38KDEL在大肠杆菌中的自诱导表达条件,以提高菌体浓度及可溶性目的蛋白的表达量.方法 采用摇瓶培养,利用单因素和正交试验对工程菌自诱导的培养条件(接种量、诱导时间、诱导温度、装瓶量)和培养基组分(有机氮源、无机氮源、碳源、有机酸)进行优化,检测菌体浓度、可溶性目的蛋白的表达量及质粒稳定性.结果 确定适自诱导培养条件为装瓶量20ml/250ml、接种量2％,28℃诱导25 h;适自诱导培养基组分为:蛋白胨2％、酵母浸粉0.5％、Na2HPO425 mmol/L、KH2PO425 mmol/L、硫酸铵25 mmol/L、葡萄糖0.05％、甘露醇1％、乳糖0.6％、苹果酸钠20 mmol/L、MgSO40.5 mmol/L.此时可溶性目的蛋白的表达量和菌体浓度分别为LB培养基(IPTG诱导)的1.76和2.12倍,质粒稳定性由87％提高至98％.结论 优化了重组免疫毒素IL-6(T23)-PE38KDEL在大肠杆菌中的自诱导表达条件,为其工业化生产奠定了基础,也为自诱导在其他重组蛋白药物生产中的应用提供了参考.
作者：丛楠；卢士英；任洪林；李岩松；翟新新；柳增善 刊期： 2013年第05期
目的 构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平.方法 化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183感受态细胞,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,经4轮扩增后检测病毒滴度.收集病毒后,以100 MOI感染K562细胞,RT-PCR法检测miR-10a基因的转录水平.结果 重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a经Pac Ⅰ酶切,证明带有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中,4轮扩增后腺病毒滴度为1.5×1011 pfu/ml,可高效感染K562细胞,感染效率达90％以上;重组腺病毒Ad-pre-miR-10a感染的K562细胞中miR-10a基因转录水平明显升高,过表达率为150.82％.结论 已成功构建重组腺病毒表达质粒pAd-pre-miR-10a,并可在K562细胞中高效表达,为进一步从体内和体外水平研究其抗白血病效应奠定了基础.
作者：齐杰玉；陶崑；王灿蔚；李秋红；邓一平 刊期： 2013年第05期
目的 对总三碘甲状腺原氨酸(Total triiodothyroxine,TT3)定量标记免疫分析试剂盒质量标准进行验证.方法 对具有代表性的6个厂家的TT3定量标记免疫分析试剂盒进行外观和物理检查后,进行线性、低检出限、准确性、精密度、质控品测定值、特异性和稳定性验证.结果 6个厂家的TT3定量标记免疫分析试剂盒外观和物理检查均达到要求;低检出限高为0.3 ng/ml;质控数据均呈3个梯度;准确性、精密度、特异性及稳定性良好.该类试剂盒基本满足此行业标准规定的要求,也基本符合此类试剂盒的现阶段的技术要点.结论 TT3定量标记免疫分析试剂盒质量标准的制定,对此类试剂盒的实验方法及质量标准进行了规范,进而促进产品质量的不断提高,也为该产品的检验检测、临床使用评价及监管提供了技术依据.
作者：沈舒；黄颖；刘艳；高尚先；张春涛 刊期： 2013年第05期
目的 观察阿苯达唑(Albendazole,ABZ)对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及其对Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制.方法 用不同终浓度的ABZ(0.5、1.0、2.0及4.0mg/ml)处理SW480细胞24、48、72 h,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),CCK-8法检测ABZ对SW480细胞增殖活力的影响,并计算增殖抑制率及IC50.用不同终浓度的ABZ(1.0、2.0 mg/ml)处理SW480细胞,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2 mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,0.5、1.0、2.0及4.0 mg/ml ABZ处理组A值均明显降低(P＜0.05),随着作用浓度的增加及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强,且呈时间-剂量依赖性,2.0 mg/ml ABZ处理组24、48、72 h的IC50值分别为3.18、1.96和1.03 mg/ml;与对照组比较,1.0、2.0mg/mlABZ处理组细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低(P＜0.05).结论 ABZ能抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并显著促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2表达有关.
作者：刘劲松；刘俊 刊期： 2013年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
