鲁学萍；杜惠芬；李克生；连晓雯；刘红亮；袁明；叶文华
目前,我国狂犬病暴露后接种疫苗者依从性较低,发病率较高,狂犬病的防治形势严峻.如果在保证有效性和安全性的前提下,采用减少接种次数的接种方案,能够提高狂犬病的防治效果,减轻医疗负担.研究发现,一些狂犬病疫苗采用Zagreb方案进行狂犬病暴露后接种,能够提供安全、高效的持久保护.本文对我国狂犬病暴露后预防的现状及疾病负担,Zagreb方案的研究、使用情况及其与被动免疫制剂同时使用的免疫效果等作一简要综述.
作者：王传林 刊期： 2011年第07期
目的 制备肠炎沙门菌(Sdmonella enteritidis,SE)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并鉴定其生物学特性.方法 分别用热酚水法和水饱和冷酚法提取SE LPS抗原,免疫BALB/c小鼠,制备LPS单克隆抗体.采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,考马斯亮蓝染色法测定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其分子结构,Western blot分析其反应原性,间接ELISA法分析其特异性.结果 热酚水法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为3.413 mg/ml和46μg/ml,水饱和冷酚法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为2.248 mg/ml和31 μg/ml;提取的LPS呈现明显的梯度型条带;制备的2株抗LPS单抗(1D3和2E5)均能与提取的LPS发生特异性反应;制备的LPS除了与伤寒沙门菌A～F多价血清发生交叉反应外,与其他各种肠道菌单价或多价血清均未发生反应.结论 热酚水法和水饱和冷酚法均可制备出活性、纯度均较好的LPS,但水饱和冷酚法操作简单,且提取的样品纯度高,特异性和反应原性良好,可用于肠炎沙门菌特异性抗原位点单抗的制备及免疫学检测.
作者：鲁学萍；杜惠芬；李克生；连晓雯；刘红亮；袁明；叶文华 刊期： 2011年第07期
胰高血糖素样肽-1(Glueagon-like peptide-1,GLP-1)类似物具有独特的血糖浓度依赖性的控制血糖效果,为2型糖尿病患者提供了新的用药选择.新药研发多以人体内源性GLP-1及其天然类似物Exen出n-4为基础.本文对GLP-l和Exendin-4的结构、重要位点、改构策略、修饰方式、新剂型以及GLP-1类似物新药研发的进展作一综述.
作者：闫荣；杨子义 刊期： 2011年第07期
果糖基转移酶(Fructosyltransferase,EC 2.4.1.9)也称β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,EC 2.4.1.26),其为一种水解酶,具有转移活力及广泛的受体活性,能以蔗糖、乳糖为原料,合成蔗果三糖、乳果糖等低聚糖.蔗果低聚糖又称为低聚果糖,是一种优良的食品配料,具有益生元生理功效.低聚果糖主要由蔗果二糖、蔗果三糖和蔗果四糖组成,一般以蔗糖为原料,利用从各种微牛物或植物中获得的酶,通过果糖基转移反应进行生产.
作者：张欣英；李群良；姚评佳；魏远安 刊期： 2011年第07期
目的 分析重组半乳糖苷凝集素AAL抑制烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的侵染活性及与TMV衣壳蛋白(CP)的体外结合活性,为进一步明确AAL的生物学功能提供理论依据.方法 将含AAL基因的重组表达质粒pET-22baal转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析纯化重组AAL.采用半叶法分析重组AAL抑制TMV的侵染活性;凝胶复性覆盖法分析重组AAL与TMV-CP的体外结合活性.结果 表达及纯化的重组AAL相对分子质量约为18 000;重组AAL具有与从杨树菇子实体中提取的AAL相近的抑制TMV侵染的活性,并可与TMV-CP体外结合.结论 重组AAL具有抗TMV的活性,其机理可能是通过与TMV-CP的互作抑制病毒侵染.
作者：祝雯；谢东扬 刊期： 2011年第07期
目的 观察高强度聚焦超声(High-intensity focused ultrasound,HIFU)联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶(Herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)的超声微泡(Ultrasound microbubble)治疗对兔VX2肝移植瘤中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达及微血管密度(Microvascular density,MVD)的影响,并探讨其机制.方法 复制兔VX2肝移植瘤模型,建模4周后,将荷瘤兔随机分为4组:对照组(A组),HIFU组(B组),超声辐照载基因微泡组(C组)和HIFU联合超声辐照载基因微泡组(D组).治疗后两周观察肿瘤大小,免疫组化法检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达及MVD,Real-time PCR检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF基因mRNA的转录水平.结果 治疗后2周,B、C、D组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,基因mRNA转录水平,MVD及肿瘤体积均明显低于A组(P＜0.05),且D组明显低于B组和C组(P＜0.05).结论 HIFU联合包裹HSV-TK基因的超声微泡治疗可抑制肿瘤生长及肿瘤血管新生,降低残余瘤区HIF-1α和VEGF基因的表达,提高HIFU的疗效.
作者：艾志国；周世骥；徐越；唐勇；刘长安；李生伟 刊期： 2011年第07期
目的 探讨GST-人S100A2融合蛋白(GST-hS100A2)对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用.方法 将重组质粒pGST-moluc-hS100A2和pGST-moluc转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot鉴定后采用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠分离纯化.以制备的GST-hS100A2融合蛋白分别处理HCT116和SW480细胞,以GST处理的细胞和空白细胞作为对照,分别用MTT法检测细胞增殖活力,Hochest33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,划痕愈合法检测细胞迁移能力,Transwell小室试验检测细胞侵袭能力.结果 融合蛋白GST-hS100A2能以剂量依赖和时间依赖的方式抑制HCT116和SW480细胞的增殖,并可明显促进两种细胞凋亡,阻滞HCT116细胞周期,抑制HCT116细胞迁移和两种细胞的侵袭能力.结论 GST-hS 100A2对人结肠癌HCT116和SW480细胞具有一定的抑制作用,有可能成为结肠癌分子治疗的新靶标.
作者：徐兰兰；游莉；郭元元；邹正渝；黎玉叶；孙双双；罗进勇；周兰 刊期： 2011年第07期
目的 应用微量细胞病变法检测原料血浆中肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体水平,以确定可供EV71免疫球蛋白生产用的原料血浆筛选标准.方法 建立检测EV71中和抗体效价的微量细胞病变法,检测3批质控血浆,验证该方法的重复性;并对1 238份原料血浆进行检测.结果 微量细胞病变法检测高(1:400)、低(1:50)效价质控血浆EV71中和抗体效价的变异系数分别为22.7%和27.3%;约40%的原料血浆中和抗体效价＜1:8,约60%的中和抗体效价≥1:8.结论 微量细胞病变法可用于原料血浆中EV71中和抗体的检测,约23%的献浆员的EV71中和抗体效价达1:32以上,可用于EV71免疫球蛋白的生产.
作者：侯继锋；孙思才；王敏力；王威 刊期： 2011年第07期
目的 克隆酿酒酵母甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase,FDH)基因,在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白,并进行酶学性质分析.方法 以酿酒酵母基因组DNA为模板,采用温度梯度PCR法扩增fdh基因,重叠PCR技术校正fdh中的移码突变,构建重组表达质粒pET-28a-fdh,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,分别采用37℃IPTG诱导、15℃IPTG诱导和37℃乳糖自诱导表达,镍金属螯合亲和层析纯化重组FDH蛋白,并分析重组FDH的酶学性质.结果 成功克隆了1 100 bp的fdb基因,碱基突变纠正了基因缺失和置换引起的编码错误;表达的重组FDH相对分子质量约为43 000,37℃乳糖诱导表达的重组FDH主要以可溶形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋门比活为7.69 U/mg;重组FDH的适反应温度和pH分别为30℃和7.5,热稳定性较好,米氏常数分别为:KmNAD+=49μmol/L,Km甲酸=4.5 mmol/L.结论 已在大肠杆菌中表达并纯化了重组FDH蛋白,为进一步研究酿酒酵母FDH,利用其构建NAD(P)H辅酶再生体系奠定了基础.
作者：倪敏君；范立强；王怡；张锐；赵健；李素霞 刊期： 2011年第07期
核转录因子KB(Nuclearfactor-kappa B,NF-KB)存在于多种组织细胞中,具有广泛的生物学活性,参与多种生理、病理过程中的基因调控.通过抑制以NF-KB为核心的信号转导途径,可能为防治某些疾病开辟新途径.本文就NF-KB的生物学特性、激活及其抑制剂的研究进展作一综述.
作者：朱妮 刊期： 2011年第07期
目的 探讨干扰素(Interferon,IFN)对ICR乳鼠感染肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的保护作用.方法 将FY23-EV71感染经重组人IFNα1b和IFNk1预处理的Vero和KMB17细胞,微量滴定法检测病毒滴度;取ICR乳鼠分为PBS对照组、EV71对照组和IFN保护组,临床观察2周,取乳鼠组织,观察病理学变化,并检测病毒含量.结果 两种IFN对KMB17细胞和Vero细胞感染EV71均有保护作用,且IFNα1b的保护作用优于IFNk1;IFN保护组乳鼠较EV71对照组乳鼠在临床表现、体重、病理变化和组织病毒含量等方面均表现出对EV71感染的保护作用.结论 IFN能抑制EV71的增殖,并对病毒致病性和组织嗜性有一定的影响.
作者：范胜涛；王丽春；赵红玲；李薇；李龙；刘龙丁；李琦涵 刊期： 2011年第07期
目的 制备磺胺二甲嘧(Sulfadimidine,SM2)啶单克隆抗体,并对其进行鉴定.方法 经小鼠腹腔免疫SM2-BSA抗原,采用常规技术进行细胞融合,间接竞争ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法进行亚克隆,硫酸铵-辛酸法纯化抗体,并鉴定其抗体效价、杂交瘤细胞染色体数量、相对分子质量、抗体亚型、亲和力和特异性.结果 筛选到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3D7,细胞培养液上清和抗体效价分别为1:6.4×102和1:1.28×105;纯化后3D7抗体效价＞1:128 000,杂交瘤细胞染色体平均数为50±2对,分泌的抗体属于IgG1亚类,相对分子质量为164280,亲和常数为6.09×108M-1,与6种磺胺类药物及青霉素、庆大霉素和泰乐霉素交叉反应IC5o大于1 mg/ml,交叉反应率小于0.01%.结论 已成功制备了SM2单克隆抗体,该抗体能满足建立免疫学检测方法的需要.
作者：王颖；安宇；李研东；沈庆丰；杜承；柳增善；罗云波 刊期： 2011年第07期
目的 检测人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因沉默对卵巢癌细胞株A2780生长抑制和凋亡的影响,并探讨其与p53、p21基因表达激活的相关性.方法 设计合成针对hTERT基因的shRNA干扰质粒,与可表达荧光蛋白的pGenesil-1.1质粒连接,构建重组质粒pG1、pG2和阴性质粒pGCR,转染A2780细胞,采用荧光定量RT-PCR检测转染细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot检测细胞hTERT、P53和P21蛋白的表达,TRAP法检测细胞的端粒酶活性,CCK-8法检测细胞的生长,流式细胞术分析细胞周期,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 酶切及测序结果证实重组质粒pG1、pG2和pGCR构建正确,质粒pG1和pG2转染可明显下调A2780细胞hTERT的表达水平和端粒酶活性,而上调细胞P53和P21蛋白的表达水平;沉默hTERT基因表达能够引起A2780细胞的生长抑制和G0-G1期细胞比例明显下降,并出现明显的细胞凋亡.结论 针对hTERT基因的shRNA干扰质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌A2780细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关.
作者：罗祎；姚珍薇；杨雅莹；易永芬 刊期： 2011年第07期
目的 原核表达、纯化麻风分枝杆菌热休克蛋白65(Heat shock protein 65,HSP65),并制备其多克隆抗血清.方法 以含hsp65基因的真核表达质粒pCMV4.65为模板,PCR扩增hsp65基因,克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-hsp65,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清,Western blot分析重组蛋白的反应原性.结果 重组表达质粒pET-28a-hsp65经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度约为1.0 mg/ml;制备的HSP65多克隆抗血清效价可达1:12 800;重组蛋白具有良好的反应原性.结论 已成功表达、纯化了麻风分枝杆菌重组HSP65蛋白,并制备了HSP65多克隆抗体,为进一步研究以HSP65为基础的亚单位疫苗和核酸疫苗奠定了基础.
作者：吴娟；范小勇；曲勍；马辉；许艳；罗玉萍；Douglas B.Lowire 刊期： 2011年第07期
目的 分析三江白猪脂肪型脂肪酸结合蛋白(Adipocyte fatty acid-binding protein,A-FABP)基因的多态性及其多态性片段序列.方法 采用PCR-RFLP检测100头三江白猪A-FABP基因第1内含子区的遗传多态性,并对多态性片段进行序列分析.结果 在Bsu36 Ⅰ-RFLP和Bsm Ⅰ-RFLP位点上均发现了多态性,基因型分别为DD、Dd、dd和Bb、bb型.等位基因D的频率为0.67,等位基因B的频率为0.21.在BsmⅠ-RFLP和Bsu36 Ⅰ-RFLP位点上,多态信息量(Polypeptide information content,PIC)分别为0.277和0.336,为中度多态(0.25＜PIC＜0.5).BsmⅠ-RFLP和Bsu36Ⅰ-RFLP变异的酶切位点分别在5006和4624位,均发生了C到G的突变,测序结果与GenBank中登录的序列(X16039)的同源性为99.6%.结论 在三江白猪AFABP基因的Bsm Ⅰ和Bsu36 Ⅰ酶切位点上存在多态性,多态性片段的碱基发生了突变.
作者：黄玉兰；黄大鹏；李祥辉 刊期： 2011年第07期
作者依据病毒性肝炎的特点,采用非特异性免疫治疗方法,采集自体干细胞,经体外培养,生物定向诱导,生成全新的免疫活性细胞,回植于患者体内,观察对病毒性肝炎的治疗效果,现将结果简要报道如下.
作者：唐杰；王桂荣；关佳倩 刊期： 2011年第07期
目的 探讨ERK1/2、PI3K-Akt途径在雌激素17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制.方法 分别用E2、雌激素受体抑制剂ICI182780(ICI)、ERK1/2抑制剂PD98059(PD)和PI3K-Akt抑制剂LY294002(LY)单独或联合处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率,Western blot法检测细胞ERα、ERβ、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 E2可促进FRO细胞增殖及ERα、Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达;ICI可抑制Bcl-2蛋白的表达,对Bax蛋白的表达无明显影响;PD和LY可抑制E2对FRO细胞的上述作用.结论 E2可通过激活ERK1/2、PI3K-Akt通路,增加Bcl-2/Bax的比值,促进FRO细胞增殖.
作者：吴婷婷；贾朝莉；龙方懿；刘智敏 刊期： 2011年第07期
目的 探讨诺帝对CasKi细胞增殖、细胞周期及中心体Aurora-A、γ-tubulin和P53蛋白表达的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的诺帝处理CasKi细胞,MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术分析细胞周期,间接免疫荧光检测中心体的变化,RT-PCR检测细胞Aurora-A基因mRNA的表达,Western blot法检测细胞γ-tubulin、Aurora-A和P53蛋白的表达.结果 诺帝能明显抑制CasKi细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,且呈明显的剂量和时间依赖性;细胞中心体内γ-tubulin荧光信号明显减弱,Aurora-A基因mRNA的表达量及γ-tubulin和Aurora-A蛋白的表达量明显下降,而P53蛋白的表达量明显升高,且呈剂量依赖性.结论 诺帝可能通过下调Aurora-A,上调P53,发挥其抑制CasKi细胞增殖、阻滞细胞周期,并阻止中心体扩增,限制细胞无序增殖的作用.
作者：巫静娴；赵涌；卞修武 刊期： 2011年第07期
目的 分析血清中可溶性主要组织相容性复合体I类链相关蛋白A(Soluble major histocompatibility complexclass Ⅰ chain-related protein A,sMICA)与妇科恶性肿瘤的相关性.方法 应用ELISA法检测59例确诊为妇科恶性肿瘤患者和98名健康对照者血清中sMICA的水平,应用ROC曲线对检测结果进行分析与评价.结果 病例组患者血清中sMlCA平均水平[(1.04±1.33)ng/ml]明显高于健康对照组[(0.29±0.30)ng/ml)],且差异有统计学意义(P＜0.000 1).ROC曲线下面积为0.816,sMICA的临床诊断界点为0.302ng/ml.结论 血清中sMICA水平与妇科恶性肿瘤的发生密切相关,有望作为临床妇科肿瘤诊断的一种新型肿瘤标志物.
作者：谭茵；黄颖烽；杨劭宇；罗宏图；周泰成 刊期： 2011年第07期
目的 原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)膜表面蛋白5(Membrane surface protein 5,MSP5),并分析其免疫原性.方法 pQE-MSP5/B121(DE3)阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物经MagneHisTM蛋白纯化系统纯化后,进行SDS-PAGE分析.将纯化的MSP5蛋白免疫小鼠,以生理盐水免疫作为阴性对照,ELISA法检测血清抗体水平,淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群分类.结果 表达的重组MSP5蛋白相对分子质量约为23 000;纯化蛋白的纯度为83.2%,浓度为1.087 mg/ml;纯化的MSP5蛋白可刺激小鼠产生特异性抗体;免疫组小鼠淋巴细胞增殖水平明显高于阴性对照组(P＜0.05);免疫组小鼠CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例高于阴性对照组,CD8+比例低于阴性对照组.结论 已成功表达并纯化了牛边缘无浆体MSP5,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及建立准确可靠的诊断方法奠定了基础.
作者：倪宏波；姜海芳；周玉龙；王春仁；宫大庆；钱爱东 刊期： 2011年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
