魏东；李恪梅；王秉翔；王国治
目的 提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T( Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体.方法 采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度；SDS-PAGE检测其纯度；间接ELISA法检测其反应特性.将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水.结果 纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml；相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02％和93.77％；纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合.共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10240.结论 已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础.
作者：付海英；崔衢；吴静；李勇；施雨露；王艳玲；李一 刊期： 2011年第11期
目的 建立重组复杂蛋白快速表达体系.方法 利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析.结果 通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库；X-Fc融合蛋白和人FⅧ均在宿主细胞中获得了高表达,X-Fc融合蛋白的表达量为220 mg/L,人FⅧ在有血清培养条件下的酶活性为2 IU/ml,且细胞株表达稳定,易于扩大培养.结论 已成功建立了基于CHO细胞定点整合的重组复杂蛋白快速表达体系,该体系在克隆效率和时间上具有很大优势,可实现蛋白的有效快速表达.
作者：何太平；杨波；谭晓晶；唐菁燕；雷韬；宋春雷；聂艳桃；徐珑 刊期： 2011年第11期
目的 观察甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转时限.方法 选择2009年9月16～27日我院收治的甲型H1N1流感确诊病例38例,经同一名医生进行咽拭子采集,采用RT-PCR方法检测甲型通用、甲1通用、季节性流感、甲型H1N1亚型4个病毒亚型,以甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型均阴转作为判定病毒核酸阴转的标准.结果 38例甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转的时限短1d,长14d,平均4.5d；病毒核酸阴转时间主要集中在第3、4、5天,第5天与第4天相比,甲型通用、甲1通用和甲型H1N1的阴转比例均明显增加(P＜0.05)；发病36 h内接受抗病毒治疗者,病毒核酸阴转平均时间为4.1d;37～72 h接受抗病毒治疗者,病毒核酸阴转平均时间为5.2d；有3例甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型病毒核酸未同时阴转.结论 甲型H1N1流感抗病毒治疗1周,大部分患者病毒核酸阴转,不具有传染性；尽早(36 h内)接受抗病毒治疗,可以缩短病毒核酸阴转时间；甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型具有较好的一致性,对三者未同时阴转的情况,应注意是否同时合并其他甲型流感病毒亚型感染.
作者：崔文玉；闫世明；赵云虹；杨光绪；张智勇；于关成 刊期： 2011年第11期
目的 应用生物信息学方法分析Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶(New Delhi metallo-β-1actamase 1,NDM1)的基本性质,并与常见的β内酰胺类抗生素进行分子对接,在理论上研究NDM1对β内酰胺类抗生素和抑制剂的水解活性.方法 应用EMBOSS 6.3.1.1软件包的程序分析NDM1的基本性质,并分别利用SWISS-MODEL同源建模和PHYRE 2.0折叠识别法构建NDM1的空间结构,再运用Arguslab 4.0软件的dock模块进行β内酰胺类抗生素与NDM1分子对接.结果 NDM1共270个氨基酸残基,理论等电点为6.3,包含1个跨膜区,α螺旋占27％,β折叠占34.5％；与抗生素对接能量由低到高依次为氨苄西林、头孢拉啶、阿莫西林、头孢唑林、甲氧西林、美罗培南、亚胺培南、氨曲南、克拉维酸.结论 NDM1对氨苄西林催化效率高,对氨曲南催化效率低,克拉维酸对NDM1无抑制作用.
作者：曾建涛；李泉 刊期： 2011年第11期
肺炎球菌表面黏附素A(Pneumococcal surface adhesin A,PsaA)为脂蛋白,属于ABC型转运蛋白复合物(ATPbinding cassette transporter),存在于各型肺炎球菌中,是其重要的毒力因子和黏附因子,编码基因高度保守,具有转运Mn2+及黏附功能.肺炎球菌表面膜蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)是与其毒力相关的一种重要的表面抗原,在目前发现的所有临床分离的肺炎球菌中几乎均存在,其编码基因变异性较大.PsaA和PspA均为肺炎球菌的保护性抗原和新型肺炎球菌疫苗的研发热点之一.本文就这两种蛋白的结构、功能、免疫学特性及应用的研究进展作一综述.
作者：唐玉龙 刊期： 2011年第11期
钩端螺旋体病(钩体病)为一种分布广泛的人兽共患病,呈世界范围流行,我国为该病的高发地区之一.接种安全、有效的疫苗是预防钩体病的有效手段.为研究人用钩体疫苗免疫小鼠的佳剂量,为进一步研究疫苗的安全性及有效性提供依据,本文采用上海生物制品研究所生产的三价钩体疫苗(包括黄疸出血型、流感伤寒型、秋季型,每型菌不少于1.5×108条/ml,剂量5ml)免疫小鼠,筛选佳免疫剂量,为下一步多种疫苗联合接种的研究奠定基础.
作者：王亚玉；易彬樘；卢娟；闫永平 刊期： 2011年第11期
目的 研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白.方法 用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价；采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型；按本公司静脉注射人免疫球蛋白( Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较.结果 筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5％,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49％,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)“血液制品生产用人血浆规程”要求；甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主；制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白制检规程”要求.结论 成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义.
作者：杨汇川；张燕；高阳；何建琴；吕加成；刘素芳；王焰；吴强；杨春；张雪梅 刊期： 2011年第11期
目的 建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测.方法 用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性；在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFTT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值；并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证；用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性.结果 狂犬病病毒抗原AG:CTN-1 =4∶1为适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00 ～ 33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r＞0.99),低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU.该方法检测人血白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应；试验内变异系数在6.68％～7.84％之间；回收率在97.25％ ～104.50％之间；试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P＞0.05).该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性；与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P＞0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801.结论 已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查.
作者：王伟伟；王远征；张国强；马昱 刊期： 2011年第11期
目的 观察注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性作用.方法 将SD大鼠随机分为4组,分别经皮下注射RCT-18 129、37、11 mg/(kg·d)和0.9％ NaCl注射液,每2d给药1次.雄鼠连续给药5周、雌鼠连续给药2周后,按雌雄1∶1的比例合笼交配,合笼期为2周,计算交配率.雄鼠继续给药至交配成功,雌鼠继续给药至妊娠第6天.实验过程中观察动物的一般反应、体重及摄食量变化.确定雌鼠受精后处死雄鼠,解剖检查睾丸和附睾等生殖器官.于妊娠第15天解剖孕鼠,综合评价妊娠及胚胎形成和早期发育等情况.结果 RCT-18高、中、低剂量组雌性和雄性大鼠均未出现明显的母体毒性反应.各组大鼠各脏器均未见肉眼可见的异常.各剂量RCT-18对大鼠的交配率、妊娠率、生殖系统脏器重量和系数以及早期胚胎发育均无明显影响.结论 RCT-18对SD大鼠的生育力及早期胚胎发育无明显毒性作用.
作者：宋翼升；杨红忠；张立将；由振强；周国亮；潘水珍；谢方；黄敏；王文祥；房健民；宣尧仙 刊期： 2011年第11期
目的 观察卡介菌多糖核酸对过敏性鼻炎合并哮喘的临床治疗效果.方法 将98例2001年初～2009年初在吉林市中心医院耳鼻喉科就诊的过敏性鼻炎合并哮喘患者随机分为治疗1组、治疗2组及对照组,3组均给予相同的过敏哮喘基础治疗,治疗1组再经肌肉注射卡介菌多糖核酸(BCG polysaccharide and nucleic acid,BCG-PSN)注射液,疗程3个月；治疗2组再经肌肉注射BCG-PSN,疗程6个月；对照组只进行基础治疗,不给予BCG-PSN.观察疗程结束后1年内3组患者过敏性鼻炎及哮喘的发作情况,根据哮喘的发作次数及程度判断疗效.结果 疗程结束后0～6个月内,治疗1组和治疗2组的过敏性鼻炎及哮喘的临床症状明显好转,显效率和总有效率均明显高于对照组(P＜0.05或P＜ 0.01)；疗程结束后7～ 12个月,治疗2组的显效率和总有效率均明显高于对照组(P均＜0.05).BCG-PSN治疗中未见明显不良反应.结论 BCG-PSN治疗过敏性鼻炎合并哮喘疗效确切,安全可靠,远期疗效与疗程有关.
作者：王敏；何巍；王伟善；周欣 刊期： 2011年第11期
目的 探讨不同培养条件下乳腺癌MCF-7细胞的分裂特点,建立快速、有效的乳腺癌干细胞富集方法.方法 将MCF-7细胞分别采用完全培养基静置培养(A组)、完全培养基摇动培养(B组)、细胞因子静置培养(C组)和细胞因子摇动培养(D组)12、24、36 h,倒置相差显微镜下观察各组细胞分裂情况,计算克隆形成率,采用流式细胞术检测CD44+/CD24-/low细胞亚群的比例变化.结果 B组和C组培养12h,棒状分裂细胞约占30％;24 h后分别约占50％和60％；36 h后形成大的细胞克隆.D组培养12 h,棒状分裂细胞约占50％;24 h后约占80％,可见多个细胞克隆；36 h后克隆细胞数减少.D组培养12 h,CD44+/CD24-/low细胞亚群比例(8.05％)为B组(0.99％)的8倍,C组(3.80％)的2.1倍；培养24 h,D组(15.24％)为B组(4.83％)的3倍,C组(2.30％)的6倍；培养36 h,D组CD44+/CD24-/low细胞亚群比例降至9.68％,约为B组(0.95％)和C组(1.03％)的9倍.结论 在细胞因子摇动培养条件下,MCF-7细胞分裂加快,分裂象增多,细胞系中CD44+/CD24-/low亚群比例增加较快,干细胞池增加明显,表明无血清摇动悬浮培养为富集乳腺癌干细胞的快速、有效的方法.
作者：闫文星；陈玉丙；张红梅；国春龙；王铁君 刊期： 2011年第11期
目的 建立第6代百日咳疫苗效力国家标准品.方法 选用百日咳菌株(沪64-21),发酵罐培养,收获的百日咳菌液经脱毒灭活后,分装冻干,作为备选品,按《中国药典》三部(2010版)进行无菌试验、血清学试验、水分含量及百日咳特异性毒性检测.以WHO标准品PWIS和中国百日咳疫苗效力国家标准品3号、5号为标准,经5个实验室进行协作标定,并考察其效力稳定性.结果 该备选标准品的各项检测指标均符合国家标准品的规定；经协作标定45次,分别以国家标准品3号、5号和WHO标准品为标准进行量值溯源,标定结果差异无统计学意义(P＞0.05)；终合并效价为13 IU/ml (95％ CI=12.23～13.26 IU/ml)；保存期内标准品的效力稳定.结论 该备选标准品各项指标均符合要求,可作为新的第6代百日咳疫苗效力国家标准品使用.
作者：骆鹏；沈立濛；孙琦；徐永革；祖俊；徐颖华；王丽婵；卫辰；侯启明；史峥；郁佳俊；叶娟；郭玉芬；高慧；潘海龙；刘玲；杨邦玲；张庶民 刊期： 2011年第11期
目的 评价梯形微板法在ABO反定型中的应用.方法 采用梯形微板进行血型抗原抗体免疫学反应,利用高科技摄像数码分析技术进行凝集判别,确定血型,分析该方法的准确性、可靠性、重复性和脂血抗干扰性,同时以U型微板法作平行对照.结果 梯形微板法的准确性为99.97％,可靠性较高,重复性为100％,且能有效避免脂血的干扰,各项指标均优于U型微板法.结论 梯形微板法在ABO反定型鉴定中是一项准确性高、稳定性好的检测手段,更适合于血站系统的大批量标本的结果处理.
作者：杜雪宁；刘芳兰；王振卿；张来玉 刊期： 2011年第11期
目的 探讨普洱茶水提物对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响.方法 以佛波酯处理THP-1细胞48 h,分化得到巨噬细胞,以其为炎症细胞模型,用不同浓度的普洱茶水提物(125、250 μg/ml)与终浓度为100 EU/ml的脂多糖的混合物作用于巨噬细胞,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量.结果 普洱茶水提物能有效抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌,且浓度为250 μg/ml的普洱茶水提物对TNF-α分泌的抑制作用强于浓度为125 μg/ml的普洱茶水提物,呈剂量依赖性.结论 普洱茶水提物对巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌具有抑制作用.这种效果与已知的绿茶抗炎的主要成分EGCG无关.
作者：李春磊；王宣军；宋爽；李冬青；师思；郝淑美；盛军 刊期： 2011年第11期
目的 建立重组戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于HE疫苗中HEV抗原含量的检测.方法 以重组HEV病毒样颗粒作为免疫原,免疫母鸡,制备抗HEV-IgY多克隆抗体,纯化后作为包被抗体,HRP标记的抗HEV单克隆抗体作为检测抗体,建立HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行验证.用建立的方法检测3批HE疫苗成品的HEV抗原含量,计算HEV抗原对氢氧化铝的吸附率.结果 建立的ELISA方法线性范围为2～128 ng/ml,低定量限为2 ng/ml;该方法检测冻干甲肝减毒活疫苗、重组人白介素-2( IL-2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人血白蛋白、小牛血清及健康人血清均无交叉反应；该方法检测3个浓度的HEV抗原内部参考品的回收率在95. 13％～104.50％之间,试验内及试验间变异系数均＜15％；包被抗HEV-IgY的酶标板于37℃放置5d,其检测HEV抗原内部参考品的A 450值及敏感性均未发生显著变化；3批HE疫苗成品中HEV抗原对氢氧化铝的吸附率均大于95％,符合相关质控要求.结论 已成功建立了HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,可用于HEV抗原含量的检测.
作者：陈子杨；吴业红；张健锋；常军亮；时成波；贾媛；郭立君；李春晖 刊期： 2011年第11期
目的 构建抗肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)单链抗体(Single chain fragment variable,scFv)的原核高效表达体系,并优化表达条件.方法 在引物中添加编码6×His的核苷酸片段,使目的蛋白C-末端带有6×His标签.从质粒pCANTAB 5E-scFv中PCR扩增scFv基因,连接至pBV220载体,连接产物分别转化至E.coli BL21(DE3)和DH5α中,42℃诱导表达,并对诱导时间、培养基pH值和类型进行优化,Western blot分析表达产物的反应原性.结果 PCR扩增出的scFv基因片段长度约770 bp,且序列正确；重组表达质粒pBV220-scFv经酶切鉴定证明构建正确；在E.coli BL21( DE3)中可获得表达,在E.coli DH5α中不表达；表达的重组scFv相对分子质量约为28 000,以包涵体形式存在于胞浆中,表达量约占菌体总蛋白的15％,且可与抗His-Tag抗体发生特异性反应；工程菌的佳诱导表达条件为:以E.coli BL21 (DE3)为宿主菌,在pH7.4的LB培养基中,42℃诱导5h.结论 将scFv的表达载体更换为pBV220,可提高scFv的表达量,在优化表达条件下,scFv的表达水平进一步提高.
作者：杨利军；张栋；王惠珍；牛勃；杨涛 刊期： 2011年第11期
目的 探讨DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中ALK2基因mRNA的转录；分别以腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞,并设空白对照组,通过MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力.结果 MDA-MB-231细胞中内源性表达ALK2.腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞36 h后,荧光表达量一致,约为70％.MDA-MB-231/DN-ALK2细胞中高表达DN-ALK2.与MDA-MB-231/RFP组相比,MDA-MB-231/DN-ALK2组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P＜0.05),穿膜细胞数也明显减少(P＜0.05)；而MDA-MB-231/RFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DN-ALK2可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭.
作者：孙笑笑；王科；冯红蕾；罗进勇；王虹；张彦 刊期： 2011年第11期
目的 观察马蹄香(Valeviana jatamansi Jones)对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性,以评价其安全性.方法 给小鼠灌服5 000、7 500、10 000 mg/kg的马蹄香,对照组灌胃1％羧甲基纤维素钠(CMC),观察小鼠的中毒症状,记录小鼠的死亡数,采用Red-Munchen法计算半数致死量(LD50),并检查小鼠组织和脏器的病理变化；对大鼠分别灌服4 000、1 000和200 mg/kg的马蹄香,连续给药14 d,对照组灌胃CMC水溶液,给药后观察14 d,检测大鼠体重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化情况.结果 急性毒性试验结果显示,灌胃马蹄香后,小鼠短时间内出现活动减少,而后趋于正常,病理学检测未发现小鼠组织或脏器有明显异常改变,LD50＞ 10 000 mg/kg；亚急性毒性试验结果显示,马蹄香各剂量组大鼠的增重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 马蹄香具有较好的安全性.
作者：孙远；付玉；刘冰；李鹏；田秀丽；王珊；宋宇；夏咸柱；王承宇 刊期： 2011年第11期
目的 构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的重组腺病毒,并检测其免疫原性.方法 从质粒pMD19T-simple-NA中扩增NA基因,克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中,经同源重组获得重组腺病毒质粒,转染Ad-293细胞,包装出重组腺病毒Ad-NA,RT-PCR和免疫荧光法检测NA基因在Vero细胞中的转录和表达.CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒,免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗NA抗体滴度.结果 重组腺病毒质粒经Pac Ⅰ酶切鉴定表明带有目的基因的穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中；NA基因在Vero细胞中成功转录和表达；重组腺病毒可刺激小鼠产生抗NA抗体,初免后4周,抗体水平达高,为1∶100000.结论 成功构建了表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白的重组腺病毒,其可刺激小鼠产生有效的免疫应答,为甲型H1N1流感病毒基因工程疫苗的研发奠定了基础.
作者：严敏；孙茂盛；王文举；谢天宏；李太华；李鸿钧 刊期： 2011年第11期
辅助性T细胞17(T helper cells 17,Th17)是新近发现的一种辅助性T细胞,该类细胞在机体的抗微生物免疫中起非常重要的作用,也与很多自身免疫性疾病的发生有一定的关系,如过敏、糖尿病、类风湿性关节炎等.Th17细胞是与Th1及Th2细胞不同的T细胞亚类,可分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22等细胞因子.本文就Th17细胞的基本生物学功能、与感染性疾病及自身免疫性疾病发生的相关性作一综述.
作者：史利军；袁维峰；李刚 刊期： 2011年第11期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
