刘倩；黄维；崔寰；陈敬贤；王明丽
目的 对聚乙醇(PEG)衍生物化学修饰重组人干扰素-αlb(rhIFN-αlb)的条件进行优化.方法 以3种不同的第2代PEG衍生物对rhIFN-αlb进行修饰,SDS-PAGE分析PEG及修饰产物的表观相对分子质量.对反应pH值、温度、时间、修饰剂用量等修饰条件进行优化,并对修饰产物进行初步分离纯化和活性检测.结果 PEG的电泳表观相对分子质量大于其理论值;PEG20000的修饰率(92.1%)高于PEG5000和PEG10000;修饰剂用量和pH值是主要影响因素,佳pH为9.0,rhIFN-αlb与PEC20000的佳摩尔比为1:10,时间和温度影响甚微.单点修饰产物保留了14.4%的体外活性,多点修饰产物无活性.结论 选择了合适的PEG衍生物并优化了修饰条件,为进一步深入研究奠定了基础.
作者：杨宇峰；黄静；徐帆洪；吴腾捷；吴自荣；楼觉人 刊期： 2008年第04期
目的 构建携带人次级淋巴组织趋化因子(6Ckine)和y-干扰素(IFNy)融合基因的重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,并在真核细胞中表达.方法 RT-PCR法分别从人淋巴结和外周血单个核细胞中扩增人6Ckine cDNA和IFNT cDNA,分两步先后将6Ckine cDNA和IFN7 cDNA连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,二者之间以Xba I酶切位点相连,应用AdMax腺病毒包装系统在HEK293细胞内同源重组,构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,经扩增和纯化后感染真核细胞HepG2,并检测6Ckine/IFNy融合蛋白的表达.结果 所构建的重组腺病毒Ad-6Ckine/IFNy经扩增和纯化后,滴度为1.26×10/10IFU/ml.PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,所携带的6Ckine/IFNy融合基因能在真核细胞中得到表达,表达形式为分泌型.结论 已成功构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,并在真核细胞中表达,为进一步研究肿瘤的基因和免疫治疗奠定了基础.
作者：薛刚；程莹；曹永宽；刘然义；田伏洲；黄文林 刊期： 2008年第04期
遵照为成员国提供健康政策指导原则的要求,WHO正在定期发布一系列有关疫苗和联合疫苗的新立场性文件,这些疫苗是指可预防对全球公共健康造成危害的疾病的疫苗.这些文件主要针对大规模免疫接种.
作者：刘长暖；盛军 刊期： 2008年第04期
本文介绍了化学发光免疫分析技术的基本原理、分类及其在兽医学、医学和食品分析上的应用研究进展.
作者：高荣；赵一泽；赵建增 刊期： 2008年第04期
目的 观察小鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植后,在异基因肝移植模型大鼠胸腺、脾脏及骨髓中的迁徙、定居情况及对淋巴细胞增殖的抑制作用,以探讨MSCs诱导异基因移植免疫耐受的可能性.方法 体外分离、纯化并培养小鼠MSCs;将小鼠肝组织块埋人大鼠肝脏切口,建立异基因肝移植大鼠模型;经尾静脉移植DAPI标记的小鼠MSCs,通过激光共聚焦显微镜观察24 h及5 d时,MSCs在模型大鼠胸腺、脾脏及骨髓内的迁徙及定居;采用体外淋巴细胞增殖实验检测小鼠MSCs对异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果 MSCs移植后,24 h即散在分布于胸腺、脾脏及骨髓内,5 d时集中在血管周围;经MSC8治疗后,大鼠胸腺和脾脏淋巴细胞增殖均受到抑制,与未经治疗的模型大鼠相比,差异有显著意义.结论 小鼠MSCs可迁徙至异基因肝移植大鼠免疫器官内,并具有抑制淋巴细胞增殖的作用.
作者：李秀东；刘雅娟；陈强；宋祥福；张红梅；陈玉丙 刊期： 2008年第04期
目的 检测流感亚单位疫苗的裂解剂残留量,并观察其安全性.方法 制备3批流感亚单位疫苗,采用比色法检测其裂解剂Tween-80和CTAB的残留量,通过动物实验观察其安全性.结果 制备的3批疫苗样品,Tween-80的残留量平均在68.3～72.μg/ml之间,CTAB残留量平均在36.3～38.7μg/ml之间.在安全性试验中,豚鼠未出现过敏反应,小鼠和豚鼠未出现异常毒性反应.结论 制备的流感亚单位疫苗的裂解剂残留量符合拟定规程要求,安全性良好.
作者：张艳；戚凤春；张雪梅；赵大鹏；范洪学 刊期： 2008年第04期
目的 利用Vero细胞微载体技术规模化培养轮状病毒.方法 利用5 L生物反应器进行Vero细胞的微载体培养,待细胞密度达1.5×106个/ml时,以0.05 MOI接种轮状病毒P[2]G3株,于37℃连续培养6 d后收获病毒,期间每天取样观察细胞病变(CPE),并检测病毒感染性滴度.结果 在轮状病毒规模化培养的初期,其病毒滴度逐渐升高,至48 h达到高.在上清中,病毒的滴度为5.5CCID50/ml;在细胞裂解产物中,病毒的滴度为3.75CCID50/ml.结论 Vero细胞微载体规模化培养轮状病毒可提高病毒的滴度.
作者：张永欣；刘馨；张光明；徐婧雯；李国良；李桂兰；孙明波；衡燮；姬光；孙茂盛 刊期： 2008年第04期
目的 观察旋毛虫感染对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞生长的作用.方法 用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种HCT-8细胞,荷瘤20 d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量,计算抑瘤率,并检测T淋巴细胞亚群.结果 各实验组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、未长瘤小鼠比例、小鼠死亡率和抑瘤率均显著高于对照组;先接虫后荷瘤组抑瘤效果优于先荷瘤后接虫组.结论 旋毛虫对BALB/c小鼠体内的人结肠癌HCT-8细胞的生长有一定的抑制作用.
作者：李霞；张国才；张西臣；李建华；杨举；宫鹏涛；徐鹏 刊期： 2008年第04期
作者： 刊期： 2008年第04期
目的 克隆Neurturin(NTN)基因,并在Vero舯细胞中表达.方法 用RT-PCR方法扩增hNTN cDNA,并克隆至pcDNA3真核表达载体中,经Lipofectamine2000转染Vero细胞,挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及免疫荧光分析鉴定,并对转染后细胞的形态及生长状况进行分析.结果 重组质粒 pcDNA3/hNTN转染Vero细胞后获得了稳定表达克隆,且有目的 蛋白表达,转染后细胞形态和生长特性发生了一定改变.结论 获得了稳定表达NTN蛋白的Vero细胞株,为其移植并进行帕金森病猴基因治疗动物实验奠定了基础.
作者：马开利；孙茂盛；施锐；张莹；杨芳；奎翔；谭振国；李鸿钧 刊期： 2008年第04期
目的 对9V型肺炎链球菌补体结合蛋白C3-BP进行纯化及免疫效果分析.方法 通过三氧醋酸沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等方法,从9V型肺炎链球菌培养上清中提取C3-BP,Lowry法检测其浓度,SDS-PAGE检测其纯度及大小,Westem blot检测其补体C3结合活性.将纯化蛋白免疫NIH小鼠,ELJSA法测定小鼠血清IgG抗体,MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增殖情况,活菌攻击,检测其交叉保护效果.结果 经纯化的表面蛋白C3-BP,其相对分子质量约为90 000,为单链蛋白,浓度为0.21 mg/ml,纯度为90.7%,具有与补体C3结合的特性.免疫小鼠后,抗体滴度达到1:38 802.免疫组小鼠脾脏与胸腺淋巴细胞代谢活性明显增强,与对照组相比,二者刺激指数之间差异有显著意义.9V型C3-BP免疫小鼠后,不仅对9V型肺炎链球菌株有保护作用,对2型、6B型和14型肺炎链球菌菌株也有保护作用.结论 摸索出了一种纯化肺炎链球菌表面蛋白C3-BP的方法,纯化的C3-BP具有不依赖血清型的交叉保护作用,而且体液免疫及细胞免疫效果良好.
作者：单璞；王建华 刊期： 2008年第04期
目的 研究WHO指定流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上的适应性,为用Vero细胞制备流感疫苗奠定基础.方法 优化不同培养基、胰酶浓度、pH值等培养病毒的条件及收毒时间,将流感疫苗生产用毒株在Vem细胞上连续传代,并进行血凝效价检测及RT-PCR分析.结果 在病毒维持液为F12+DMEM、pH为7.5、胰酶含量为1.5μg/ml、培养3 d收获病毒时,可获得较高的病毒血凝效价,连续传4代,病毒血凝效价降为0,RT-PCR检测结果为阴性.结论 WHO推荐的流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代,病毒血凝效价逐渐降低.
作者：罗振武；邱丰；魏晓露；余磊；张云昆；姚石宝；郭自全；唐成丽；姜述德；廖国阳；李卫东 刊期： 2008年第04期
目的 构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白.方法 以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coli DH5a,经温控诱导表达,并经Ni2+ -NTA亲和层析纯化,目的 蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组质粒pBV220-PGDH-Hia6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确.经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量高,约占菌体总蛋白的30%.Western blot验证了表达蛋白的特异性.纯化后目的 蛋白纯度大于95%.结论 已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白.
作者：李美宁；冯燕；常冰梅；解军；张悦红；殷云勤；程牛亮 刊期： 2008年第04期
人免疫缺陷病毒(Human immunedeficiency virus,HIV)是引起人类获得性免疫缺陷综合征(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)即艾滋病的病原体.
作者：王晓娟 刊期： 2008年第04期
目的 研究赤子爱胜蚓组织中1种脱氧核糖核酸酶(EWD3)的主要生化性质.方法 采用Lowry法测定酶的蛋白含量,SDS-PAGE和MALDI-TOF方法测定相对分子质量,毛细管等点聚焦电泳法测定等电点,并测定EWD3酶的酸、碱稳定性、温度稳定性、激动剂和抑制剂对酶活性的影响及酶促反应米氏常数Km值.结果 EWD3酶的蛋白含量为2.1 mg/ml,相对分子质量为63 460,等电点为6.20,Km值为1.52 mg/ml,适pH值为4.4～5.2,不耐高温.Mg2+、Ca2+、Mn2+、10和20 mmnol/L EDTA对EWD3酶活性有抑制作用.这些参数与已发现的各种DNases相比有明显差异.结论 蚯蚓组织中已发现的脱氧核糖核酸酶EWD3具有特殊的酶学特征.
作者：康慧芳；樊慧杰；王晓媛；姚建强；杨利军；牛勃 刊期： 2008年第04期
目的 在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68～410 aa)重组蛋白.方法 采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202～1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性.结果 PCR法扩增出约1 000 bp的目的 片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在.经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.结论 所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础.
作者：王宪灵；张卫军；邹全明；曾明；罗萍；郭刚 刊期： 2008年第04期
目的 表达HPV16型MuE6/E7嵌合蛋白,并检测其免疫原性及抗肿瘤活性.方法 将构建的重组MuE6/E7蛋白的表达载体转化大肠杆菌BL21(λDE3)进行诱导表达,表达的包涵体蛋白经分离、纯化、变性及复性后,通过离子交换和分子筛层析进行纯化.纯化蛋白经SDS-PAGE、Western blot、HPLC和质谱分析鉴定,并免疫C57BL/6小鼠,检测其免疫原性和抗肿瘤活性.结果 重组 MuE6/E7蛋白相对分子质量约为21000,表达量约为23.06%,表达形式为包涵体,经复性、纯化后,纯度达97.17%.免疫3针后,小鼠可产生高滴度的HPV特异性抗体,并且与注射剂量呈正相关.免疫小鼠能抵抗,TC-1肿瘤细胞的攻击,并可延长TC-1致瘤小鼠的存活期.结论 已表达并纯化了重组MuE6/E7蛋白,其对TC-1致瘤小鼠具有一定的免疫治疗作用,为进一步研制HPV治疗性疫苗奠定了基础.
作者：余黎；安静；韩平；周旭 刊期： 2008年第04期
目的 建立一种敏感、特异、快速的实时荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒基因YMDD突变株的方法,为临床治疗提供指导.方法 设计引物和TaqMan-MGB探针,利用TaqMan-MGB探针技术,建立实时荧光定量PCR法.检测临床HBV-YMDD变异标本36份和野生型HBV标本20份,并将其YMDD变异结果与DNA测序结果进行比较.结果 该方法检测灵敏度为101拷贝/μl;特异性为100%;低检测限度为101DNA拷贝/30μl反应体系;实时荧光PCR方法测得YMDD野生株20份,变异株36份,与DNA测序结果完全一致,符合率为100%.结论 应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测YMDD变异株基因,具有灵敏、特异和精确等优点,对临床监测拉米夫定耐药具有重要意义.
作者：陈建；王缦；陈华；王卓莹；华兵 刊期： 2008年第04期
目的 构建表达抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)及其突变体K4-S4的工程菌,并表达目的 蛋白.方法 采用重叠延伸PCR法设计和扩增抗菌肽DS4及K4-S4基因,定向克隆入载体pUC-18中,经酶切、测序鉴定,重组至表达载体pGEX-4T-1中,构建抗菌肽DS4及K4-S4基因表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE鉴定.结果 构建的抗菌肽DS4及K4-S4基因工程菌所表达的目的 蛋白,经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量34 000的特异性目的 条带,37℃诱导5 h的蛋白表达量高,且多数以包涵体形式存在.结论 已成功构建抗菌肽DS4及K4-S4工程菌,并表达目的 蛋白,为进一步研究其功能和应用奠定了基础.
作者：张庆华；韩跃武；谢俊秋；卢天龙；任惠子；冯惟萍 刊期： 2008年第04期
目的 评价人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)pp65 IgC-亲和力指数(Aviaity index,AI)快速诊断试剂的临床应用价值.方法 以自制的截短pp65重组蛋白作为诊断试剂,对本室血清库中保存的标本,采用ELISA间接法检测其特异性IgG抗体,分析该试剂的灵敏度、特异性和准确度.检测临床收集的89份患者血清标本(其中5例被明确诊断为HCMV活动性感染)的pp65 IgG抗体,并与意大利DIESSE公司IgG检测试剂盒结果进行比较.同时,对pp65 IgG阳性标本,运用尿素变性ELISA间接法检测其AI值,与意大利DIESSE公司IgM检测试剂盒结果进行比较,评价AI检测在HCMV感染诊断中的价值.结果 用pp65快速诊断试剂检测阳性、阴性血清特异性IgG抗体,均与原确认结果相同,灵敏度、准确度和特异性均达100%.两种诊断试剂IgG抗体检测结果,差异无显著意义.pp65诊断试剂对pp65 IgG阳性标本的AI值进行检测,AI＜60%标本共41份,阳性率为46.07%,较参比试剂IgM检测阳性率(23.59%)高;5份明确诊断HCMV活动性感染的患者血清标本中,pp65诊断试剂与参比试剂检测IgG抗体,各有4份阳性,一致率为100%,pp65诊断试剂检测AI值为阳性的标本有3份,其中,参比试剂检测ISM为阳性的仅有1份.临床明确诊断为HCMV肺炎的患者血清标本,诊断试剂检测AI值为可疑阳性,但参比试剂检测HCMV IgM抗体为阴性.结论 pp65 IgG-AI快速诊断试剂可初步诊断HCMV感染,简单快速,重复性好,具有良好的临床应用前景.
作者：刘倩；黄维；崔寰；陈敬贤；王明丽 刊期： 2008年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
