王克珍；买制刚；蒋宏伟；丁新荣；杨俊生；庄秋娟
2008年2月7日,浙江省松阳县裕溪乡裕溪村一条本地犬咬人后自毙,其脑组织被送至丽水市疾病预防控制中心检测.犬伤者孝某某,女,80岁,右脚而被咬伤,属二级暴露,于被咬当日在当地防保站接种狂犬病疫苗(辽宁成大生物股份有限公司产品,批号20070902-5),按照0、4、7、14、28的程序进行全程接种,未接种狂犬病免疫球蛋白.
作者：叶茂华；雷永良；王晓光 刊期： 2008年第12期
目的 研究风疹疫苗病毒松叶株(Matsuba)传代病毒E2基因的遗传特征及其基因稳定性.方法 将Matsuba株毒种RV14在原代兔肾细胞上连续传代至第23代,取第14、16、17、18和23代病毒,利用RT-PCR方法扩增其E2蛋白基因,并与pUC18质粒连接后测序,对各代病毒及参考株的E2基因序列进行比对分析.结果 Matsuba株E2基因全长846 bp,传至23代时仍有很高的同源性,第14、16、17、18和23代与一致序列的核苷酸同源性分别为100%、100%、99.8%、99.8%和99.6%,氨基酸同源性分别为100%、100%、100%、99.3%和99.2%.Matsuba株E2基因与参考株核苷酸序列同源性为91.0～98.7%.Matsuba株各代病毒核苷酸、氨基酸序列高度保守,各关键功能区未发生变异.结论 风疹病毒Matsuba疫苗株E2基因遗传特性稳定,为在分子水平保证Matsuba株毒种及其生产疫苗的安全性提供了依据.
作者：高雪军；可美毓；刘晨鸣；赵雅静；魏至栋；朱莉萍 刊期： 2008年第12期
目的 构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达.方法 经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达.结果 融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24 h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267 bp的目的 基因片段.结论 已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白.
作者：何永林；朱道银；伊正君；杨春；徐蕾；王瑜伟 刊期： 2008年第12期
目的 观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞巾增殖的影响.方法 分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度.结果 病毒感染Vero细胞后48 h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达(州).Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72 h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)IgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96 h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)IgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现存接种后48～96 h,3组MOI病毒高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)igCCID50/ml.结论 不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MOI(0.001)制备疫苗.
作者：石慧颖；张冲；李懿；杨永娟；宋冬梅；陈明；宁海京；刘宇；赵敏；支惠；沈心亮 刊期： 2008年第12期
目的 制备泰乐菌素(Tylosin)单克隆抗体,并建立泰乐菌素竞争ELISA检测方法.方法 用羰基二咪唑将半抗原泰乐菌素分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备泰乐菌素免疫抗原Tylosin-BSA和检测抗原Tylosin-OVA,用紫外光谱扫描检测Tylosin-BSA偶联物,辣根过氧化物酶标记Tylosin-OVA偶联物.采用杂交瘤技术,制备特异性抗泰乐菌素单克隆抗体,建立泰乐菌素竞争ELISA检测方法.结果 筛选出2株稳定分泌抗泰乐菌素单抗的杂交瘤细胞株3FA和2G10,2G10分泌的单抗腹水效价为6×10-4,抗体类型为IgG1型,轻链为k链,在酸、碱及热条件下均较稳定.选择该单抗建立了泰乐菌素竞争ELISA检测方法.该方法灵敏度达50 ng/ml,标准曲线线性关系良好(r=0.982 7),且特异性、稳定性较好,准确性、精密性较高.结论 已成功制备了泰乐菌素单克隆抗体,并建立了竞争ELISA检测方法,可用于动物源性食品中残留泰乐菌素含量的检测.
作者：张云涛；路东；席仲兴；杨福军；张甲菊；谢雍 刊期： 2008年第12期
目的 探讨骨桥蛋白反义基因(ANOPN)对乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长及肺转移的影响.方法 构建人骨桥蛋白反义基因真核表达质粒pcDNA3.1-ANOPN,将质粒pcDNA3.1-ANOPN、空载体pcDNA3.1(+)和等量的脂质体分别转染人乳腺癌细胞系MDA-MA-231,将转染细胞分别命名为MDA-ANOPN、MDA-veet和MDA,接种至裸鼠,观察肿瘤的生长、转移情况,并用免疫组化法检测肿瘤组织切片中OPN的表达.结果 重组质粒pcDNA3.1-ANOPN经酶切、PCR及测序,证明构建正确.MDA.ANOPN组裸鼠出瘤时间、肿瘤体积及重量较MDA-vect和MDA组均显著降低,肿瘤肺转移灶数量减少,OPN表达较低.结论 ANOPN可抑制裸鼠移植瘤的牛长及肺转移.
作者：于杰；姜伟栋；葛立本；王旭东 刊期： 2008年第12期
目的 建立具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法.方法 利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,在重组人源抗狂犬病病毒单抗样品高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭.经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电印迹后在PVDF膜上去封闭处理效果进行比较.结果 用该方法去封闭后的抗体样品N-端焦谷氨酸去除效果较好,可顺利进行N-端氨基酸序列测定;而电印迹后在PVDF膜上二去封闭处理,N-端焦谷氨酸不能充分去除,无法进行N-端氨基酸序列测定.结论 该方法适于具有焦谷氨酸封闭N-端的单抗的N-端氨基酸序列分析.
作者：魏敬双；程立均；贾茜 刊期： 2008年第12期
纳豆激酶是一种具有强烈溶栓功能的碱性丝氨酸蛋白酶,近年来,国内外学者对其进行了广泛的研究.本文介绍了纳豆激酶的理化性质、主要生物学活性、溶栓机理及其生物学活性体外检测方法的研究进展.
作者：丁有学；刘兰；袁力勇 刊期： 2008年第12期
目的 观察左旋卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3表达的影响.方法 将SD大鼠随机分成3组:空白对照组、缺血组和左旋卡尼汀组.缺血组及左旋卡尼汀组给予异丙肾上腺素建立心肌缺血模型,左旋卡尼汀组提前经腹腔注射左旋卡尼汀.原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡的心肌细胞,免疫组化法测定Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达.结果 左旋卡尼汀组与缺血组相比,心肌组织Bcl-2蛋白表达率显著升高,细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达率显著降低.结论 左旋卡尼汀在异丙肾上腺素所致的心肌缺血大鼠模型中,对缺血缺氧心肌有保护作用,其机制可能是通过调节Bcl-2和Caspase-3介导的细胞凋亡而实现的.
作者：荆翠平；陈丽娟；刘磊；于景文 刊期： 2008年第12期
目的 制备高中和活性的鼠抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体,并进行鉴定.方法 用重组TNF-α免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗TNF-α单抗,纯化后,用间接ELISA法和微量细胞病变MTT法柃测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸铵洗脱法测定单抗的相对亲和力指数,并进行类及亚类、细胞染色体核型、特异性及稳定性检测.结果 筛选出7株分泌抗TNF单克隆抗体的细胞株,其中6株具有较高的中和活性和良好的稳定性,其细胞上清及腹水的中和效价分别为1:40～1:160和(1～3)×10-4 7株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为K,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,5H10株与其余6株有不同的抗原表位,相对亲和力指数为0.4～1.5 mol/L.结论 已成功制备具有高中和活性的鼠抗TNF-α单克隆抗体,为抗人TNF-α嵌合抗体的构建奠定了基础.
作者：李萍；蒋琳；马亚茹；鱼轲；郭敏；陆俭 刊期： 2008年第12期
microRNA是一种长约22 nt的非编码性小RNA,通过与靶基因的3'非翻译区(3'-UTR)结合来调控靶基因的表达.microRNAs的功能涉及多种生物学过程,与细胞分化、器官形成、肿瘤发生等密切相关.近年来发现,microRNAs在免疫细胞的产生、发育以及免疫应答过程中有着重要的作用.本文主要对microRNAs在免疫系统中的发展及对免疫功能调控的新研究进展作一综述.
作者：丁瑜；张学峰；张嘉保 刊期： 2008年第12期
目的 建立篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺.方法 利用7.5 L篮式生物反应器和片状载体培养Vero细胞,接种乙型脑炎病毒P3V2株毒种,根据葡萄糖的消耗量,分析细胞的生长情况及调节病毒培养时的灌流速度,每24 h取样,检测病毒滴度.收获的病毒液经纯化后,制备乙脑灭活疫苗,检测各项指标.结果 Vero细胞培养至96 h,葡萄糖消耗量达高峰,细胞密度达峰值;接种病毒后72 h,葡萄糖消耗量达高峰,灌流量为7 L/d,连续收获7～9 d,共可收获(40±5)L病毒液;96 h病毒滴度达高峰,为10.0 LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到<中国药典>三部(2005版)要求.结论 已建立了篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺.
作者：张晋；张月兰；赵玉秀；王辉；马乐；马可；牛志彬；梁宏阳 刊期： 2008年第12期
目的 表达并纯化百日咳毒素(PT)S1亚单位截短片段S146,以其制备抗体,初步建市榆测PT的双抗体夹心ELISA法.方法 PCR扩增S146基因,亚克隆至载体pUC18,鉴定正确后,插入表达载体pET16b,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用镍离子亲和层析柱纯化,复性后的蛋白免疫家兔,制备抗血清,纯化后作为包被抗体,建立检测PT的双抗体夹心ELISA法,并检测其特异性.结果 表达的重组蛋白相对分子质量约为19 000,主要存在于破菌沉淀中,表达量占菌体总蛋白的44%;纯化后蛋白纯度为94.5%;家兔抗血清可特异性识别天然PTSI;建立的双抗体夹心ELISA法特异性良好.结论 已成功表达、纯化了PTS1亚单位截短片段S146,并以纯化的抗S146抗体作为包被抗体,初步建立了检测PT的双抗体夹心ELISA法,为研制特异性检测试剂和提供一种疫苗的质量控制方法奠定了基础.
作者：杨瑜；朱为；应通峰；黄帼英；徐帆洪；瞿爱东 刊期： 2008年第12期
目的 观察在不同温度保存条件下噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子的稳定性.方法 将噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子样品分为两组,一组添加等体积的80%甘油,另一组不添加甘油,分别于不同温度条件下存放不同时间后取样,用妹噬斑法检测滴度.结果 在37℃和25℃条件下保存,噬菌体疫苗种子滴度下降较快,在4℃和-20℃条件下保存噬菌体疫苗种子滴度下降相对较慢;37℃、25℃及4℃条件下保存,添加甘油并无明显的保护作用,而在-20℃条件下保存,添加甘油有明显的保护作用.结论 噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子可在4℃条件下短期保存,-20℃条件下长期保存,并可添加甘油作为保护剂.
作者：王海漩；段金梅；胡凝珠；任万军；兰芸；胡云章 刊期： 2008年第12期
目的 探讨姜黄素对HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 分别用10、20、40 μmol/L姜黄素处理HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖,光镜观察细胞形态,TUNEL技术检测细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测CytochromeC和Caspase-9蛋白的表达,Westem blot法检测XIAP蛋白的表达.结果 姜黄素对HeLa细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量依赖性;部分细胞呈现典型的凋亡形态学改变;姜黄素作用后,Cytochrome C和Caspase-9蛋白的表达显著增强,XIAP蛋白的表达显著下降,且均呈剂量依赖性.结论 姜黄素能抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,Cytochrome C和Caspase-9的表达上调及XIAP的表达下调可能参与凋亡过程.
作者：黄谟婉；马英 刊期： 2008年第12期
目的 观察国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性.方法 观察组200例和对照组50例暴露后,按照0、3、7、14、28 d免疫程序,分别接种国产、进口冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).观察组接种疫苗后,观察全身和局部反应情况.采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测观察组和对照组接种后的血清中和抗体水平.结果 观察组疫苗接种后,局部红肿、硬结、疼痛、瘙痒发生率分别1.4%、0.8%、17.1%和2.4%;全身反应发热、皮疹、头痛、疲劳乏力和其他反应发生率分别为1.2%、0.4%、2.4%、4.2%和0.3%,且在第7天完全消失.观察组与对照组疫苗首剂接种后7 d,抗体阳转率分别为加.3%和37.0%,14 d分别为95.5%和97.7%,差异无统计学意义;且首剂接种后45 d,抗体阳转率均为100%.观察组和对照组疫苗首剂接种后7、14、45 d,血清中和抗体GMT差异无统计学意义,14、45 d血清中和抗体GMT均大于0.5 IU/ml.结论 国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)接种反应轻微,并具有良好的免疫原性.
作者：王凌云；孙美平；张雪春；徐若辉；邹艳杰；左永波；齐华 刊期： 2008年第12期
目的 研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株VP7基因的遗传特征,为疫苗的质量控制和发展提供依据.方法 将LLR株轮状病毒毒种LLR38在原代牛肾细胞上连续传至49代.提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR扩增VP7基因片段,将其克隆人质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析.结果 LLR株VP7基闪全长1 062 bp,含编码326个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF).各代次病毒的VP7基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBanK中LLR参考株(L11602)同源性分别为99.9%和99.7%.与14株G10血清型RV毒株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.3%～87.4%和92.7%～94.9%;与不同血清型RV代表株间,VP7基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为62.2%～76.8%和72.9%～83.1%;在A、B、C 3个重要抗原表位,LLR株与同一血清型RV代表株B223氨基酸同源性高达97.5%,而与不同血清型仅为42.5%～62.5%.结论 轮状病毒LLR疫苗株VP7基因具有良好的遗传稳定性,与来自不同国家同一型别的RV株VP7蛋白氨基酸序列之间无明显差异,在遗传上密切相关,从VP7基因分子水平证明LLR株毒种及其制备的疫苗是安全可靠的.
作者：赵雅静；高雪军；刘晨鸣；魏至栋；冯德杰；朱莉萍 刊期： 2008年第12期
目的 应用生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒.方法 用7 L、75 L和550 L生物反应器逐级放大培养Veto细胞,每天取样进行细胞计数.在550 L生物反应器巾培养脊髓厌质炎病毒,观察细胞病变,并检测病毒感染性滴度.结果 一级细胞培养(灌流培养法)、二级细胞培养(循环培养法)和三级细胞培养(批培养法)的平均细胞密度分别为2.79×106、2.38×106和1.04×106个/ml,一级培养的细胞倍增数高;病毒培养体积达350 L,病毒收获液滴度大于7.625 IgCCID50/ml.结论 通过三级放大工艺,可大规模培养脊髓灰质炎病毒.
作者：衡燮；李桂兰；奚光跃；温嘉纳；沈伟；何秀莲；唐成丽；廖国阳；姜述德；孙明波 刊期： 2008年第12期
鲍特百日咳杆菌分泌腺苷酸环化酶毒素,该毒素能够将其催化基团转运到真核细胞中,并由真核细胞的钙调蛋白激活,产生大量的cAMP.因此,腺苷酸环化酶毒素既可作为表位运输的工具,又有助于研究细菌毒素蛋白进入真核细胞的机制.本文就百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素的研究进展作一综述.
作者：吴丽洁；徐颖华；张庶民 刊期： 2008年第12期
目的 克隆人3型副流感病毒(HPIV-3)HN基因,构建原核表达质粒,并检测表达蛋白的免疫原性.方法 从呼吸道感染患儿呼吸道分泌物中提取HPIV-3 RNA,用套式RT-PCR扩增HN基因,克隆至pGEM-T载体上,进行核苷酸序列分析,并用生物信息软件分析HN蛋白的二级结构,构建截短的HN基因原核表达载体pET-28a-HN,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测后,进行纯化和复性.并以此蛋白免疫昆明小鼠,检测小鼠血清中HN抗体效价.结果 扩增出的HPIV-3的HN基因核苷酸序列与参考序列的同源性为95%,氨基酸序列同源性为97%,有16处发生了突变.截短的HN基因的原核表达载体经酶切鉴定及测序,证明构建正确.重组HN蛋白的表达量占菌体总蛋白的30%以上,且具有良好的反应原性.复性的重组HN蛋白免疫的小鼠可产生高效价的抗HN抗体.结论 原核表达的截短的HN蛋白具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生较高水平的抗体应答.
作者：白慕群；安静；安红；包红；周旭 刊期： 2008年第12期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
