台桂香；徐桂月；张鹏宇；劳凤学；王奭骥；崔雪玲；杨煜；土田邦博；柳忠辉
目的研究HBV表面抗原亚单位微球疫苗及DNA微球疫苗鼻腔免疫的效果,为新型鼻腔疫苗的研制提供实验基础.方法选取HBV表面抗原亚单位疫苗及HBV DNA疫苗作为模型,以壳聚糖作为载体,通过沉淀/凝聚法制备壳聚糖微球疫苗,分别通过鼻腔、腹腔及肌肉免疫小鼠,在不同时间点收集小鼠血清,用ELISA检测血清中抗HBV IgG,分析不同免疫途径的免疫效果.结果在HBV亚单位微球疫苗免疫组中,腹腔与鼻腔免疫效果差异无显著意义;而在HBV DNA疫苗免疫组中,肌肉免疫后12周IgG达到峰值,随后开始出现下降趋势;而微球疫苗则在16周才达峰值,且鼻腔免疫组要高于肌肉免疫组.结论鼻腔免疫可作为亚单位疫苗及DNA疫苗的免疫途径,且相对于DNA疫苗而言,壳聚糖微球具有保护作用及缓释作用.
作者：胡云章；李菁；刘国栋；胡凝珠 刊期： 2005年第02期
目的构建编码HIV-1多表位抗原基因(MEG)与p24基因嵌合的核酸疫苗,并评价其免疫效果.方法将编码HIV-1多表位抗原基因(MEG)与p24基因插入到真核表达载体pVAXI中,构建HIV-1治疗性重组核酸疫苗质粒.通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV-1特异性抗体,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV-1特异性T淋巴细胞增殖反应.结果构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI-MEGp24免疫恒河猴后,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应,并诱导产生抗HIV-1特异性抗体.结论所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应.
作者：宋英今；金宁一；张立树；李子建；金洪涛；郎守民 刊期： 2005年第02期
目的提高EGF-PE35KDEL融合蛋白的表达量.方法设计合成含优化密码子的EGF序列,定向克隆于pET28a-EGF-PE35KDEL的Nco Ⅰ和Nde Ⅰ位点,构建表达质粒pET28a-pBEGF-PE35KDEL.将两种表达质粒转化至BL21中,经IPTG诱导,比较表达量.结果优化密码子的EGF-PE35KDEL表达量要高于未优化的EGF-PE35KDEL.结论优化密码子能促进EGF-PE35KDEL的表达.
作者：李树民；李俊植 刊期： 2005年第02期
目的建立重组羧肽酶原B复性方法及活性羧肽酶B的纯化方法.方法重组大肠杆菌发酵后,表达的羧肽酶原B包涵体经洗涤、变性,采用凝胶过滤的方法对其进行复性及纯化.所得的复性液经Trypsin酶解后,采用DEAE-FF阴离子交换层析进行羧肽酶B的分离纯化,并采用SDS-PAGE检测纯度.结果经凝胶过滤后得到了复性和纯化的羧肽酶原B包涵体,在蛋白终浓度相同的情况下,复性效率比稀释复性提高了50%,经DEAE离子交换柱一步纯化,得到了活性羧肽酶B,纯度达到90%以上.以Hippuryl-L-arg为底物测活,得到的活性酶的比活为150 u/mg.结论所建立复性方法及纯化方法为进一步的研究奠定了基础.
作者：张晓彦；袁勤生 刊期： 2005年第02期
目的制备MUC1核心肽多克隆抗体,用于靶向MUC1肿瘤治疗的研究.方法以8R-MUC1核心肽6重复序列重组蛋白(8R-MUCPT)为抗原免疫家兔,以ELISA法确定抗MUC1多克隆抗体效价,以Western blot和ELISA阻断试验鉴定抗体特异性.结果MUC1核心肽多克隆抗体效价为1:256 000,能与MUC1核心肽特异性结合.结论利用原核表达的8R-MUCPT蛋白,可有效地诱导免疫动物产生MUC1核心肽特异性抗体,为MUC1核心肽靶向肿瘤特异性免疫研究提供了有力的实验材料.
作者：唐艳；李慧；张培因；卫红飞；王莉；李大鹏；于永利；王丽颖 刊期： 2005年第02期
目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达.方法利用RT-PCR技术,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP-1成熟肽基因片段,再将rhOP-1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-2中,构建表达质粒pCCBC/OP-1,并转化到大肠杆菌JM109(DE3)中,在发酵过程中不添加任何诱导剂.表达产物经SDS-PAGE分析.结果扩增的目的基因序列与文献报道一致.表达的目的蛋白相对分子质量为140D0,表达量达到菌体蛋白的40%.结论克隆了人OP-1成熟肽基因,并实现了rhOP-1的非诱导高效表达.
作者：潘红春；刘红；王伯初；杨红涛；陈喜文；周玲 刊期： 2005年第02期
目的了解HIV抗体酶联免疫试剂批内和批间的精确性.方法用同一批试剂多次检测同一样品和不同批次试剂分别检测同一样品,分别计算其批内和批间的变异系数(CV),分析试剂的批内和批间的精确性.结果用1份样品对12家试剂的批内精确性分析结果显示,所有试剂的批内变异系数均在15%以内,符合要求,但不同试剂的变异系数不同,且有统计学差异.用5份样品对12家不同批次试剂的批间变异系数进行分析,在所得到的60个变异系数中,仅有3个变异系数小于或等于15%,大部分试剂的批间变异系数均在20%以上.结论HIV抗体酶联免疫试剂的批间精确性变异较大,其批间稳定性有待进一步提高.
作者：宋爱京；李秀华；李娟；张春涛；王佑春 刊期： 2005年第02期
目的建立重组NK4融合基因工程菌的发酵工艺.方法采用锥形瓶、发酵罐发酵,对工程菌生长和表达条件如pH、诱导时间及诱导剂浓度等方面进行优化.确定其佳诱导表达条件,在15 L自控发酵罐中进行分批补料培养.结果在15 L发酵罐进行工程菌发酵,菌体收获量湿重可达24.6g/L±0.98g/L,目的蛋白的表达量保持在菌体总蛋白的50%左右,发酵时间为11 h.结论建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺.
作者：常冰梅；王勇；解军；张悦红；程牛亮；牛勃；胡晓年；向前 刊期： 2005年第02期
目的制备干扰素α2b脂质体,分析其理化性质.方法采用旋转逆相蒸发法制备干扰素α2b脂质体,通过正交试验进行制备条件的优选,电镜观察其粒径大小,酶联免疫分析法测定包封率,并观察脂质体的稳定性.结果干扰素α2b脂质体平均粒径为98.6nm,高包封率为78.23%,脂质体存放于4℃及-20℃稳定性良好.结论本试验方法制备的脂质体包封率高,理化性质较稳定.
作者：王玉梅；郭桥；李秀芝；迟春萍；王志武 刊期： 2005年第02期
目的克隆幽门螺杆菌粘附素基因hpaA,构建其原核表达系统并鉴定融合蛋白免疫原性.方法采用PCR技术从幽门螺杆菌总DNA中扩增hpaA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET30a的HpaA表达载体,在E.coliBL21DE3宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后经Western blot鉴定其免疫原性.结果所克隆的hpaA基因与报道的相应核苷酸序列同源性为94.8%～97.3%,氨基酸序列同源性为94.6%～97.7%,在134～139位存在一段KRTIQK结构,HpaA融合蛋白在pET30a载体中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的重组蛋白.结论成功构建HpaA原核表达系统,所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,可作为Hp疫苗的候选抗原.
作者：郑丽舒；衣作安；李武平；张成海；王刚；侯云德 刊期： 2005年第02期
目的了解HSP70基因在不同癌组织中的表达情况.方法采用人的HSP70基因探针P17与从人食管癌及宫颈癌组织中提取的RNA进行Northern blot.结果食管癌和宫颈癌组织中出现的杂交信号均比正常组织强.结论HSP70基因在癌组织中有高表达.HSP70可能在癌变过程中起着重要的作用.
作者：赵桢；王晓涛；陈兰英；陈建南 刊期： 2005年第02期
目的从由蛇毒提取的短肽中筛选趋化活性成分.方法利用趋化小室和细胞微生理检测仪,从国内外12种蛇毒中筛选具有趋化活性的成分.结果从蝰蛇蛇毒中筛选出Knis2-2、Knis3-5、Knis5-3和Knis3-6;从长白黑眉蛇蛇毒中选出Chsv7-8.经进一步检测去除了活性弱的Chsv7-8和具有细胞毒作用的Knis5-3,得到Knis2-2、Knis3-5和Knis3-6三个活性成分.结论为进一步研制生物药剂奠定了基础.
作者：李旭；马莉；王晓辉；王福生 刊期： 2005年第02期
目的建立简单有效的木瓜凝乳蛋白酶分离纯化方法,并研究其酶学性质.方法采用离子交换层析直接将木瓜凝乳蛋白酶分离纯化,通过温度、葡萄糖、盐酸胍及其他因素研究酶学性质.结果木瓜凝乳蛋白酶有较高的热稳定性,盐酸胍对其有抑制作用,葡萄糖对其有激活作用.结论离子交换层析是简单有效的分离纯化木瓜凝乳蛋白酶的方法,木瓜凝乳蛋白酶值得进一步开发利用.
作者：邓静；吴华昌；赵树进 刊期： 2005年第02期
目的通过比较不同培养基对疫苗株产生菌毛的影响,获得一种有利于细菌生长和菌毛产生,而且费用低廉的培养基.方法通过测定培养物的密度,观察疫苗菌株的生长规律,用斑点ELJSA和全菌ELIsA检测菌毛抗原的表达情况.结果LB培养基既有利于疫苗株的生长,又有利于细菌菌毛的表达.结论LB培养基可以用于疫苗株中试和大规模培养.
作者：王令春；郑继平；李淑琴；展德文；方门忠；张兆山 刊期： 2005年第02期
目的构建重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株,并对表达产物进行评价.方法由外周血白细胞总RNA经RT-PCR克隆获得HLF基因结构cDNA,测序后克隆人酵母表达载体获得质粒pPIC9K-HLF,线性化后电转化入毕赤酵母,经G418-YPD筛选多拷贝后进行甲醇诱导表达.结果获得基因与GenBank中的人HLF01基因基本相符.2株多拷贝菌株诱导表达产物均能与人HLF抗体反应,具有抑制大肠杆菌生长的作用.结论获得了能分泌有活性HLF的重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株.
作者：张述；王革非；王贞慧；张裕平；吴海祥；熊春发；余永恒 刊期： 2005年第02期
目的研究人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中高效表达及工程菌高密度发酵条件.方法将hEPO基因中大部分大肠杆菌稀有密码子替换成使用频率较高的密码子,人工合成hEPO全基因,然后将其插入表达载体PBV220中,转化大肠杆菌DH5α,挑选构建正确的PBV220-hEPO/DH5α菌落,经升温诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物;观察改变培养基、培养时间、pH及溶氧量等条件对表达产物的影响.结果经酶切分析,DNA测序鉴定,人工合成的hEPO基因已正确构建到表达载体中.通过高密度发酵培养,终菌体密度达A500=30(相当于菌体35g/L),hEPO表达量达30%左右.结论人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中得到高效表达,并确定了该工程菌高密度发酵的适宜条件.
作者：葛永红；严君喜；陈智勇；谢觉林；张雪艳 刊期： 2005年第02期
目的研究家兔肋软骨生长板软骨细胞增殖的特点,为软骨性疾病提供治疗措施.方法取家兔肋软骨,分别切取静止期和肥大期软骨组织,经消化制成细胞悬液,采用流式细胞仪检测软骨细胞的增殖特点.结果静止带软骨细胞中G0/G1期细胞占比例大,而肥大带软骨细胞中S期细胞数明显高于静止带软骨细胞,且不同的区带内的软骨细胞都有凋亡的存在.结论此结果有助于软骨疾病治疗的研究.
作者：王欣；赵轶卓；郭丽；颜炜群 刊期： 2005年第02期
用分光光度计进行比色分析中,常用直线拟合确定标准曲线的方程参数,但在生物制品的生化分析中常有偏离直线的情况发生,如用二次曲线拟合则可方便地进行数据处理,实际上也扩展了相应分析方法的测量范围.本文重点介绍了如何用二次曲线拟合处理微量蛋白测定的实验结果,并初步探讨了相关的理论基础.
作者：陈智勇；刘大为 刊期： 2005年第02期
目的建立国产冻干风疹减毒活疫苗的免疫动力学模型,并对其免疫持久性进行预测.方法采用队列研究的方法,对国产冻干风疹减毒活疫苗接种者的血凝抑制抗体(HI)滴度进行5年的追踪观察,利用观察数据建立免疫动力学模型,并利用该模型对其免疫持久性进行预测.结果接种国产冻干风疹减毒活疫苗5年后,HI抗体的几何平均滴度(GMT)由接种后第1月的157.6下降到31.2.按照模型预测,到初免后第6年时,其GMT为12.3,已接近1:8临界水平.结论国产冻干风疹疫苗抗体的保护性水平理论上可维持6年,加强免疫应在初免后第6年进行.这个预测结果与国家所建议的6～8月龄时初免,到学龄前进行加强的免疫程序相一致.
作者：罗凤基；董春明 刊期： 2005年第02期
目的在发现和克隆新的激活素受体相互作用蛋白3(ActRIP3)基因的基础上,探讨ActRIP3在海马神经细胞介导激活素信号传导的作用.方法利用GST-ActRIP3融合蛋白免疫家兔制备抗ActRIP3抗体,采用RT-PCR及免疫组化染色分析ActRIP3在脑组织中的表达与分布,采用pcDNA-ActRIP3与CAGA-lux质粒共转染海马神经细胞,分析信号传导作用.结果RT-PCR及免疫组化染色显示ActRIP3在海马神经细胞中高表达,构建的pcDNA-ActRIP3表达载体在体外培养海马神经细胞中可有效表达ActRIP3蛋白,过表达ActRIP3可促进激活素诱导的海马神经细胞特异信号传导.结论ActRIP3具有促进激活素信号传导作用,是介导激活素作用于海马神经细胞的关键性信号传导蛋白.
作者：台桂香；徐桂月；张鹏宇；劳凤学；王奭骥；崔雪玲；杨煜；土田邦博；柳忠辉 刊期： 2005年第02期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
