宋英今；金宁一；张立树；李子建；金洪涛；郎守民
目的提高EGF-PE35KDEL融合蛋白的表达量.方法设计合成含优化密码子的EGF序列,定向克隆于pET28a-EGF-PE35KDEL的Nco Ⅰ和Nde Ⅰ位点,构建表达质粒pET28a-pBEGF-PE35KDEL.将两种表达质粒转化至BL21中,经IPTG诱导,比较表达量.结果优化密码子的EGF-PE35KDEL表达量要高于未优化的EGF-PE35KDEL.结论优化密码子能促进EGF-PE35KDEL的表达.
作者：李树民；李俊植 刊期： 2005年第02期
目的研究聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性.方法通过分子筛高效液Size exclusion HPLC)、毛舷细管等电聚焦(cIEF)、圆二色谱(cD)以及荧光光谱等方法检测单聚PEG-GH的纯度、等电点、二级结构以及分子构象;采用妊娠兔肝细胞放射受体分析法(RRA)检测单聚PEG-GH的体外受体亲和力,采用未成年去垂体大鼠体重增加法检测体内生物活性.结果分子筛高效液相图谱上仅出现一个峰,表明样品纯度很高,等电点范围为5.1～5.2,与未修饰的rhGH的等电点相一致;CD谱与荧光光谱均表明单个mPEG-ALD的修饰对rhGH的二级结构以及分子构象没有明显影响;与未修饰的rhGH相比,单聚PFG-GH体外受体亲和力明显降低;但体内作用时间更长,且更加有效.结论此结果为进一步研究和开发长效重组人生长激素提供了理论依据.
作者：魏练平；王荣海；戎隆富；宋礼华 刊期： 2005年第02期
用分光光度计进行比色分析中,常用直线拟合确定标准曲线的方程参数,但在生物制品的生化分析中常有偏离直线的情况发生,如用二次曲线拟合则可方便地进行数据处理,实际上也扩展了相应分析方法的测量范围.本文重点介绍了如何用二次曲线拟合处理微量蛋白测定的实验结果,并初步探讨了相关的理论基础.
作者：陈智勇；刘大为 刊期： 2005年第02期
目的从由蛇毒提取的短肽中筛选趋化活性成分.方法利用趋化小室和细胞微生理检测仪,从国内外12种蛇毒中筛选具有趋化活性的成分.结果从蝰蛇蛇毒中筛选出Knis2-2、Knis3-5、Knis5-3和Knis3-6;从长白黑眉蛇蛇毒中选出Chsv7-8.经进一步检测去除了活性弱的Chsv7-8和具有细胞毒作用的Knis5-3,得到Knis2-2、Knis3-5和Knis3-6三个活性成分.结论为进一步研制生物药剂奠定了基础.
作者：李旭；马莉；王晓辉；王福生 刊期： 2005年第02期
目的了解HIV抗体酶联免疫试剂批内和批间的精确性.方法用同一批试剂多次检测同一样品和不同批次试剂分别检测同一样品,分别计算其批内和批间的变异系数(CV),分析试剂的批内和批间的精确性.结果用1份样品对12家试剂的批内精确性分析结果显示,所有试剂的批内变异系数均在15%以内,符合要求,但不同试剂的变异系数不同,且有统计学差异.用5份样品对12家不同批次试剂的批间变异系数进行分析,在所得到的60个变异系数中,仅有3个变异系数小于或等于15%,大部分试剂的批间变异系数均在20%以上.结论HIV抗体酶联免疫试剂的批间精确性变异较大,其批间稳定性有待进一步提高.
作者：宋爱京；李秀华；李娟；张春涛；王佑春 刊期： 2005年第02期
目的克隆幽门螺杆菌粘附素基因hpaA,构建其原核表达系统并鉴定融合蛋白免疫原性.方法采用PCR技术从幽门螺杆菌总DNA中扩增hpaA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET30a的HpaA表达载体,在E.coliBL21DE3宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后经Western blot鉴定其免疫原性.结果所克隆的hpaA基因与报道的相应核苷酸序列同源性为94.8%～97.3%,氨基酸序列同源性为94.6%～97.7%,在134～139位存在一段KRTIQK结构,HpaA融合蛋白在pET30a载体中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的重组蛋白.结论成功构建HpaA原核表达系统,所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,可作为Hp疫苗的候选抗原.
作者：郑丽舒；衣作安；李武平；张成海；王刚；侯云德 刊期： 2005年第02期
目的建立重组NK4融合基因工程菌的发酵工艺.方法采用锥形瓶、发酵罐发酵,对工程菌生长和表达条件如pH、诱导时间及诱导剂浓度等方面进行优化.确定其佳诱导表达条件,在15 L自控发酵罐中进行分批补料培养.结果在15 L发酵罐进行工程菌发酵,菌体收获量湿重可达24.6g/L±0.98g/L,目的蛋白的表达量保持在菌体总蛋白的50%左右,发酵时间为11 h.结论建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺.
作者：常冰梅；王勇；解军；张悦红；程牛亮；牛勃；胡晓年；向前 刊期： 2005年第02期
目的利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用Oligod T为逆转录引物,逆转录合成eDNA第一链,然后分别采用VL和VH框架区的PCR引物,扩增VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)DNA片段,利用事先合成的存在于VL下游引物和VH上游引物的部分人工连接子重叠互补序列,将VL和VH的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE),形成单链抗体基因.后将此基因重组进表达载体pBAD/gⅢ/C中,经L-arabinose(左旋阿拉伯糖)诱导表达并初步鉴定.结果构建出700bp左右的单链基因,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白分子.结论经因特网查询表明,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区Ⅰ A亚组;轻链属于小鼠k轻链可变区Ⅱ亚组,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性.本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础.
作者：张爱华；彭夫望；闭兰；张智；王志友；史良如 刊期： 2005年第02期
目的在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段(sTRAIL)基因,并研究其包涵体的复性.方法应用RT-PCR法从正常人外周血单核细胞中获得sTRAIL的编码基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,于大肠杆菌DH5α中通过温控诱导表达;将包涵体进行变性和复性处理后,采用离子交换层析纯化表达产物,并经Dot blot及MIT试验鉴定.结果通过温度诱导,目的基因主要以包涵体形式高效表达,包涵体蛋白经梯度透析法复性可获得具有抗肿瘤活性的重组人sTRAIL.结论已获得大量纯化重组人sTRAIL,为开发新型抗肿瘤制剂奠定基础.
作者：田生和；全家妩 刊期： 2005年第02期
目的建立国产冻干风疹减毒活疫苗的免疫动力学模型,并对其免疫持久性进行预测.方法采用队列研究的方法,对国产冻干风疹减毒活疫苗接种者的血凝抑制抗体(HI)滴度进行5年的追踪观察,利用观察数据建立免疫动力学模型,并利用该模型对其免疫持久性进行预测.结果接种国产冻干风疹减毒活疫苗5年后,HI抗体的几何平均滴度(GMT)由接种后第1月的157.6下降到31.2.按照模型预测,到初免后第6年时,其GMT为12.3,已接近1:8临界水平.结论国产冻干风疹疫苗抗体的保护性水平理论上可维持6年,加强免疫应在初免后第6年进行.这个预测结果与国家所建议的6～8月龄时初免,到学龄前进行加强的免疫程序相一致.
作者：罗凤基；董春明 刊期： 2005年第02期
乳铁转运蛋白(Lactoferrin,LF)是一种具有抑菌、杀菌及抗病毒作用的蛋白,广泛存在于各种粘膜表面.乳铁蛋白除了具有抗菌活性以外,其他功能及其保健作用也引起多方关注.本文就近年来对LF的研究进展作一综述.
作者：苑玉和；黄秉仁 刊期： 2005年第02期
目的了解HSP70基因在不同癌组织中的表达情况.方法采用人的HSP70基因探针P17与从人食管癌及宫颈癌组织中提取的RNA进行Northern blot.结果食管癌和宫颈癌组织中出现的杂交信号均比正常组织强.结论HSP70基因在癌组织中有高表达.HSP70可能在癌变过程中起着重要的作用.
作者：赵桢；王晓涛；陈兰英；陈建南 刊期： 2005年第02期
目的建立定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)的方法,并用该方法检测Vero细胞乙脑疫苗中HCP含量.方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺,制备Vero细胞HCP及其免疫血清,经过DEAE Protein A SepharoseCL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCP IgG.通过对检测条件的优化,确立了酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白的方法,并用该方法对Vero细胞乙脑疫苗的收获物、中间产品及纯化样品收样前杂蛋白中HCP进行定量分析.结果该方法可以检测Vero细胞疫苗加入保护剂前任何阶段产品中HCP含量.结论ELISA法可以相对定量检测Vero细胞HCP的含量.
作者：田博；丁志芬 刊期： 2005年第02期
目的研究家兔肋软骨生长板软骨细胞增殖的特点,为软骨性疾病提供治疗措施.方法取家兔肋软骨,分别切取静止期和肥大期软骨组织,经消化制成细胞悬液,采用流式细胞仪检测软骨细胞的增殖特点.结果静止带软骨细胞中G0/G1期细胞占比例大,而肥大带软骨细胞中S期细胞数明显高于静止带软骨细胞,且不同的区带内的软骨细胞都有凋亡的存在.结论此结果有助于软骨疾病治疗的研究.
作者：王欣；赵轶卓；郭丽；颜炜群 刊期： 2005年第02期
目的在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)活性域片段.方法从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA,利用RT-PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA,将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌K802,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFAD,经双酶切得到OCIF活性域编码片段,将其插入pMAL-c2载体中,转化大肠杆菌TB1.筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达.结果所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子质量60 000处出现一条特殊条带,与预期的相对分子质量一致.Western blot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应.结论已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达.表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用.
作者：张兴群；王梁华；焦炳华；袁勤生 刊期： 2005年第02期
目的构建重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株,并对表达产物进行评价.方法由外周血白细胞总RNA经RT-PCR克隆获得HLF基因结构cDNA,测序后克隆人酵母表达载体获得质粒pPIC9K-HLF,线性化后电转化入毕赤酵母,经G418-YPD筛选多拷贝后进行甲醇诱导表达.结果获得基因与GenBank中的人HLF01基因基本相符.2株多拷贝菌株诱导表达产物均能与人HLF抗体反应,具有抑制大肠杆菌生长的作用.结论获得了能分泌有活性HLF的重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株.
作者：张述；王革非；王贞慧；张裕平；吴海祥；熊春发；余永恒 刊期： 2005年第02期
目的表达胸腺素α1(Thymosin alpha1,Tα1)三串体,并进行纯化及生物学活性鉴定.方法使用大肠杆菌偏爱密码子,人工合成Tα1三串体(Tα1③)基因,在表达载体pET-22b(+)中克隆,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经DEAE-Sepharose FF阴离子柱纯化Tα1③蛋白,采用Western blot鉴定表达产物,MIT法检测其生物学活性.结果获得了纯化的Tα1③蛋白,相对分子质量约为10 000,并具有Tα1③的生物学活性.结论利用基因串联表达小分子多肽是一种可行的方法.
作者：宫照龙；徐义辉；展瑞；高昱；蒋作君 刊期： 2005年第02期
目的构建编码HIV-1多表位抗原基因(MEG)与p24基因嵌合的核酸疫苗,并评价其免疫效果.方法将编码HIV-1多表位抗原基因(MEG)与p24基因插入到真核表达载体pVAXI中,构建HIV-1治疗性重组核酸疫苗质粒.通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV-1特异性抗体,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV-1特异性T淋巴细胞增殖反应.结果构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI-MEGp24免疫恒河猴后,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应,并诱导产生抗HIV-1特异性抗体.结论所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应.
作者：宋英今；金宁一；张立树；李子建；金洪涛；郎守民 刊期： 2005年第02期
目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达.方法利用RT-PCR技术,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP-1成熟肽基因片段,再将rhOP-1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-2中,构建表达质粒pCCBC/OP-1,并转化到大肠杆菌JM109(DE3)中,在发酵过程中不添加任何诱导剂.表达产物经SDS-PAGE分析.结果扩增的目的基因序列与文献报道一致.表达的目的蛋白相对分子质量为140D0,表达量达到菌体蛋白的40%.结论克隆了人OP-1成熟肽基因,并实现了rhOP-1的非诱导高效表达.
作者：潘红春；刘红；王伯初；杨红涛；陈喜文；周玲 刊期： 2005年第02期
目的探索Sabin 1型脊髓灰质炎病毒在人胚肺二倍体细胞适应过程中5'端非编码区序列变异及其与病毒感染性滴度的关系.方法将Sabin 1型脊髓灰质炎病毒疫苗株在人胚肺二倍体细胞KMB17中连续传11代,检测连续传代后感染性滴度,并检测11个代次5'端非编码区序列.结果随着传代次数的增加,感染性滴度逐渐升高,在第7代达到高,为8.125LgTCID50/ml.在传代过程中,从第3代起5'端非编码区742个核苷酸只出现1个位点发生变异,第639位由A变为G.结论Sabin 1型脊髓灰质炎病毒经KMB17细胞传11代,已适应KMB17细胞.Poliovirus 5'端非编码区与毒力直接相关的第480位核苷酸未发生回复突变.
作者：李华；胡凝珠；瞿素；刘国栋；谢忠平；姬秋彦；胡云章 刊期： 2005年第02期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
