田博；丁志芬
动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种血管疾病,它以血管平滑肌细胞增生和血脂在粥样硬化斑块沉积为特征.粥样斑块的形成与脂代谢紊乱、低密度脂蛋白(LDL)、胆固醇酯转运蛋白(CETP)、CD40-CD40配体及肺炎衣原体(Cpn)感染等多种因素有关.目前,有些药物虽有一定疗效,但仅仅是暂时抑制AS病情的发展,不能有效治疗AS,所以研制LDL疫苗、CETP疫苗、CD40疫苗、Cpn疫苗等是非常有效的手段,将有助于抑制动脉硬化的发生与发展,减少这些疾病对人类的危害.
作者：任丽丽；于洪涛 刊期： 2005年第02期
目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达.方法利用RT-PCR技术,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP-1成熟肽基因片段,再将rhOP-1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-2中,构建表达质粒pCCBC/OP-1,并转化到大肠杆菌JM109(DE3)中,在发酵过程中不添加任何诱导剂.表达产物经SDS-PAGE分析.结果扩增的目的基因序列与文献报道一致.表达的目的蛋白相对分子质量为140D0,表达量达到菌体蛋白的40%.结论克隆了人OP-1成熟肽基因,并实现了rhOP-1的非诱导高效表达.
作者：潘红春；刘红；王伯初；杨红涛；陈喜文；周玲 刊期： 2005年第02期
目的了解HSP70基因在不同癌组织中的表达情况.方法采用人的HSP70基因探针P17与从人食管癌及宫颈癌组织中提取的RNA进行Northern blot.结果食管癌和宫颈癌组织中出现的杂交信号均比正常组织强.结论HSP70基因在癌组织中有高表达.HSP70可能在癌变过程中起着重要的作用.
作者：赵桢；王晓涛；陈兰英；陈建南 刊期： 2005年第02期
目的研究家兔肋软骨生长板软骨细胞增殖的特点,为软骨性疾病提供治疗措施.方法取家兔肋软骨,分别切取静止期和肥大期软骨组织,经消化制成细胞悬液,采用流式细胞仪检测软骨细胞的增殖特点.结果静止带软骨细胞中G0/G1期细胞占比例大,而肥大带软骨细胞中S期细胞数明显高于静止带软骨细胞,且不同的区带内的软骨细胞都有凋亡的存在.结论此结果有助于软骨疾病治疗的研究.
作者：王欣；赵轶卓；郭丽；颜炜群 刊期： 2005年第02期
目的利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用Oligod T为逆转录引物,逆转录合成eDNA第一链,然后分别采用VL和VH框架区的PCR引物,扩增VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)DNA片段,利用事先合成的存在于VL下游引物和VH上游引物的部分人工连接子重叠互补序列,将VL和VH的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE),形成单链抗体基因.后将此基因重组进表达载体pBAD/gⅢ/C中,经L-arabinose(左旋阿拉伯糖)诱导表达并初步鉴定.结果构建出700bp左右的单链基因,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白分子.结论经因特网查询表明,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区Ⅰ A亚组;轻链属于小鼠k轻链可变区Ⅱ亚组,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性.本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础.
作者：张爱华；彭夫望；闭兰；张智；王志友；史良如 刊期： 2005年第02期
目的表达胸腺素α1(Thymosin alpha1,Tα1)三串体,并进行纯化及生物学活性鉴定.方法使用大肠杆菌偏爱密码子,人工合成Tα1三串体(Tα1③)基因,在表达载体pET-22b(+)中克隆,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经DEAE-Sepharose FF阴离子柱纯化Tα1③蛋白,采用Western blot鉴定表达产物,MIT法检测其生物学活性.结果获得了纯化的Tα1③蛋白,相对分子质量约为10 000,并具有Tα1③的生物学活性.结论利用基因串联表达小分子多肽是一种可行的方法.
作者：宫照龙；徐义辉；展瑞；高昱；蒋作君 刊期： 2005年第02期
目的克隆幽门螺杆菌粘附素基因hpaA,构建其原核表达系统并鉴定融合蛋白免疫原性.方法采用PCR技术从幽门螺杆菌总DNA中扩增hpaA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET30a的HpaA表达载体,在E.coliBL21DE3宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后经Western blot鉴定其免疫原性.结果所克隆的hpaA基因与报道的相应核苷酸序列同源性为94.8%～97.3%,氨基酸序列同源性为94.6%～97.7%,在134～139位存在一段KRTIQK结构,HpaA融合蛋白在pET30a载体中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的重组蛋白.结论成功构建HpaA原核表达系统,所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,可作为Hp疫苗的候选抗原.
作者：郑丽舒；衣作安；李武平；张成海；王刚；侯云德 刊期： 2005年第02期
目的制备MUC1核心肽多克隆抗体,用于靶向MUC1肿瘤治疗的研究.方法以8R-MUC1核心肽6重复序列重组蛋白(8R-MUCPT)为抗原免疫家兔,以ELISA法确定抗MUC1多克隆抗体效价,以Western blot和ELISA阻断试验鉴定抗体特异性.结果MUC1核心肽多克隆抗体效价为1:256 000,能与MUC1核心肽特异性结合.结论利用原核表达的8R-MUCPT蛋白,可有效地诱导免疫动物产生MUC1核心肽特异性抗体,为MUC1核心肽靶向肿瘤特异性免疫研究提供了有力的实验材料.
作者：唐艳；李慧；张培因；卫红飞；王莉；李大鹏；于永利；王丽颖 刊期： 2005年第02期
目的建立国产冻干风疹减毒活疫苗的免疫动力学模型,并对其免疫持久性进行预测.方法采用队列研究的方法,对国产冻干风疹减毒活疫苗接种者的血凝抑制抗体(HI)滴度进行5年的追踪观察,利用观察数据建立免疫动力学模型,并利用该模型对其免疫持久性进行预测.结果接种国产冻干风疹减毒活疫苗5年后,HI抗体的几何平均滴度(GMT)由接种后第1月的157.6下降到31.2.按照模型预测,到初免后第6年时,其GMT为12.3,已接近1:8临界水平.结论国产冻干风疹疫苗抗体的保护性水平理论上可维持6年,加强免疫应在初免后第6年进行.这个预测结果与国家所建议的6～8月龄时初免,到学龄前进行加强的免疫程序相一致.
作者：罗凤基；董春明 刊期： 2005年第02期
目的探讨对不同种灭菌设备及灭菌工艺进行验证的方法.方法采用多种温度检测记录仪进行检测,并对记录结果进行比较分析.结果不同种灭菌设备及灭菌工艺,验证要点不同,验证结果差异较大.结论热力灭菌效果应依据验证要点不同,采取相应的验证方法.
作者：张可畏；刘晔；王鹏；刘志强；商林；张双庆；庄茂欣；郑晓丽 刊期： 2005年第02期
目的提高EGF-PE35KDEL融合蛋白的表达量.方法设计合成含优化密码子的EGF序列,定向克隆于pET28a-EGF-PE35KDEL的Nco Ⅰ和Nde Ⅰ位点,构建表达质粒pET28a-pBEGF-PE35KDEL.将两种表达质粒转化至BL21中,经IPTG诱导,比较表达量.结果优化密码子的EGF-PE35KDEL表达量要高于未优化的EGF-PE35KDEL.结论优化密码子能促进EGF-PE35KDEL的表达.
作者：李树民；李俊植 刊期： 2005年第02期
目的在发现和克隆新的激活素受体相互作用蛋白3(ActRIP3)基因的基础上,探讨ActRIP3在海马神经细胞介导激活素信号传导的作用.方法利用GST-ActRIP3融合蛋白免疫家兔制备抗ActRIP3抗体,采用RT-PCR及免疫组化染色分析ActRIP3在脑组织中的表达与分布,采用pcDNA-ActRIP3与CAGA-lux质粒共转染海马神经细胞,分析信号传导作用.结果RT-PCR及免疫组化染色显示ActRIP3在海马神经细胞中高表达,构建的pcDNA-ActRIP3表达载体在体外培养海马神经细胞中可有效表达ActRIP3蛋白,过表达ActRIP3可促进激活素诱导的海马神经细胞特异信号传导.结论ActRIP3具有促进激活素信号传导作用,是介导激活素作用于海马神经细胞的关键性信号传导蛋白.
作者：台桂香；徐桂月；张鹏宇；劳凤学；王奭骥；崔雪玲；杨煜；土田邦博；柳忠辉 刊期： 2005年第02期
目的构建重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株,并对表达产物进行评价.方法由外周血白细胞总RNA经RT-PCR克隆获得HLF基因结构cDNA,测序后克隆人酵母表达载体获得质粒pPIC9K-HLF,线性化后电转化入毕赤酵母,经G418-YPD筛选多拷贝后进行甲醇诱导表达.结果获得基因与GenBank中的人HLF01基因基本相符.2株多拷贝菌株诱导表达产物均能与人HLF抗体反应,具有抑制大肠杆菌生长的作用.结论获得了能分泌有活性HLF的重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株.
作者：张述；王革非；王贞慧；张裕平；吴海祥；熊春发；余永恒 刊期： 2005年第02期
目的建立重组羧肽酶原B复性方法及活性羧肽酶B的纯化方法.方法重组大肠杆菌发酵后,表达的羧肽酶原B包涵体经洗涤、变性,采用凝胶过滤的方法对其进行复性及纯化.所得的复性液经Trypsin酶解后,采用DEAE-FF阴离子交换层析进行羧肽酶B的分离纯化,并采用SDS-PAGE检测纯度.结果经凝胶过滤后得到了复性和纯化的羧肽酶原B包涵体,在蛋白终浓度相同的情况下,复性效率比稀释复性提高了50%,经DEAE离子交换柱一步纯化,得到了活性羧肽酶B,纯度达到90%以上.以Hippuryl-L-arg为底物测活,得到的活性酶的比活为150 u/mg.结论所建立复性方法及纯化方法为进一步的研究奠定了基础.
作者：张晓彦；袁勤生 刊期： 2005年第02期
目的研究人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中高效表达及工程菌高密度发酵条件.方法将hEPO基因中大部分大肠杆菌稀有密码子替换成使用频率较高的密码子,人工合成hEPO全基因,然后将其插入表达载体PBV220中,转化大肠杆菌DH5α,挑选构建正确的PBV220-hEPO/DH5α菌落,经升温诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物;观察改变培养基、培养时间、pH及溶氧量等条件对表达产物的影响.结果经酶切分析,DNA测序鉴定,人工合成的hEPO基因已正确构建到表达载体中.通过高密度发酵培养,终菌体密度达A500=30(相当于菌体35g/L),hEPO表达量达30%左右.结论人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中得到高效表达,并确定了该工程菌高密度发酵的适宜条件.
作者：葛永红；严君喜；陈智勇；谢觉林；张雪艳 刊期： 2005年第02期
目的建立定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)的方法,并用该方法检测Vero细胞乙脑疫苗中HCP含量.方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺,制备Vero细胞HCP及其免疫血清,经过DEAE Protein A SepharoseCL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCP IgG.通过对检测条件的优化,确立了酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白的方法,并用该方法对Vero细胞乙脑疫苗的收获物、中间产品及纯化样品收样前杂蛋白中HCP进行定量分析.结果该方法可以检测Vero细胞疫苗加入保护剂前任何阶段产品中HCP含量.结论ELISA法可以相对定量检测Vero细胞HCP的含量.
作者：田博；丁志芬 刊期： 2005年第02期
目的在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)活性域片段.方法从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA,利用RT-PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA,将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌K802,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFAD,经双酶切得到OCIF活性域编码片段,将其插入pMAL-c2载体中,转化大肠杆菌TB1.筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达.结果所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子质量60 000处出现一条特殊条带,与预期的相对分子质量一致.Western blot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应.结论已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达.表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用.
作者：张兴群；王梁华；焦炳华；袁勤生 刊期： 2005年第02期
目的探索Sabin 1型脊髓灰质炎病毒在人胚肺二倍体细胞适应过程中5'端非编码区序列变异及其与病毒感染性滴度的关系.方法将Sabin 1型脊髓灰质炎病毒疫苗株在人胚肺二倍体细胞KMB17中连续传11代,检测连续传代后感染性滴度,并检测11个代次5'端非编码区序列.结果随着传代次数的增加,感染性滴度逐渐升高,在第7代达到高,为8.125LgTCID50/ml.在传代过程中,从第3代起5'端非编码区742个核苷酸只出现1个位点发生变异,第639位由A变为G.结论Sabin 1型脊髓灰质炎病毒经KMB17细胞传11代,已适应KMB17细胞.Poliovirus 5'端非编码区与毒力直接相关的第480位核苷酸未发生回复突变.
作者：李华；胡凝珠；瞿素；刘国栋；谢忠平；姬秋彦；胡云章 刊期： 2005年第02期
目的通过比较不同培养基对疫苗株产生菌毛的影响,获得一种有利于细菌生长和菌毛产生,而且费用低廉的培养基.方法通过测定培养物的密度,观察疫苗菌株的生长规律,用斑点ELJSA和全菌ELIsA检测菌毛抗原的表达情况.结果LB培养基既有利于疫苗株的生长,又有利于细菌菌毛的表达.结论LB培养基可以用于疫苗株中试和大规模培养.
作者：王令春；郑继平；李淑琴；展德文；方门忠；张兆山 刊期： 2005年第02期
目的构建编码HIV-1多表位抗原基因(MEG)与p24基因嵌合的核酸疫苗,并评价其免疫效果.方法将编码HIV-1多表位抗原基因(MEG)与p24基因插入到真核表达载体pVAXI中,构建HIV-1治疗性重组核酸疫苗质粒.通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV-1特异性抗体,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV-1特异性T淋巴细胞增殖反应.结果构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI-MEGp24免疫恒河猴后,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应,并诱导产生抗HIV-1特异性抗体.结论所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应.
作者：宋英今；金宁一；张立树；李子建；金洪涛；郎守民 刊期： 2005年第02期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
