学术投稿

pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒构建及其转染Bcap-37细胞后细胞凋亡的研究

王晓稼;郑树;吴金民;郁琳琳;耿礼义;方永明;蒋文智

关键词:HSP70蛋白, 反义核酸, 基因重组, 转染, 乳腺癌, 凋亡
摘要:目的构建人反义Hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As]并观察其对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡特性的影响.方法依照人hsp70mRNA全长序列,通过计算机分析,设计一对引物,在上游引物中带有1个BamHⅠ位点,经RT-PCR扩增、电泳、回收和纯化hsp70144-517片段,通过T-A克隆到pGEM-TEasy原核表达质粒中,经DNA测序和EcoRⅠ酶切图谱鉴定;EcoRⅠ酶切产物回收后亚克隆到pcDNA3.1(+)质粒中EcoRⅠ位点之间,利用BamH Ⅰ酶切图谱筛选反向插入重组质粒,经DNA测序得到pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒.以脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As转染到乳腺癌Bcap-37细胞中并克隆培养建株得到AsHsp-Bcap细胞.以DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞周期分析观察转染细胞的凋亡特性.结果本研究成功构建人反义hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As];转染到乳腺癌Bcap-37细胞后在DNA琼脂糖凝胶电泳上观察到细胞凋亡特征性DNA Ladder及流式细胞周期分析发现G1峰前有1个特征性Ap峰(亚二倍体峰).结论构建人反义重组质粒pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As对乳腺癌Bcap-37细胞有促进细胞凋亡的作用.
实用癌症杂志相关文献
  • 去磷酸化RB蛋白表达对阿霉素诱导MCF-7/S细胞凋亡的影响

    目的检测经阿霉素(ADR)处理的人乳腺癌MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)及去磷酸化RB蛋白表达的变化,以探讨ADR诱导细胞凋亡的可能机理.方法将体外培养的MCF-7/S细胞分为实验组(以不同浓度ADR处理细胞)及对照组(以等体积的生理盐水处理细胞);应用MTT比色法检测ADR对MCF-7/S细胞的抑制率(IR);应用流式细胞术检测实验组和对照组细胞的AR;采用S-P免疫组化染色法检测ADR作用后去磷酸化RB蛋白表达的变化.结果ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性,IC50为0.128 mg/L;0.25、2、5 μg/ml ADR处理的MCF-7/S细胞的AR分别为0.171、0.184、0.259,而对照组MCF-7/S细胞的AR为0.045,两者比较,有非常显著性差异(P<0.01);5 μg/ml ADR实验组MCF-7/S细胞的去磷酸化RB蛋白的表达量为986.8±207.4,而对照组为131.7±31.9,两者比较,有非常显著性差异(P<0.01);5 μg/ml ADR实验组MCF-7/S细胞的AR与其去磷酸化RB蛋白的表达量呈正相关(γ=0.998,P=0.037).结论ADR能抑制MCF-7/S细胞增殖并诱导其凋亡,其机理可能与去磷酸化RB蛋白表达水平上调有关.

    作者:王文武;姜浩;樊光华 刊期: 2005年第03期

  • 化学治疗对乳腺癌转移患者疼痛的治疗效果

    目的探讨化学治疗对乳腺癌转移患者疼痛的治疗效果.方法对37例伴有中度和重度疼痛的乳腺癌转移患者分别采用CMF、CAF或TA(泰素、阿霉素)等方案化疗并评价镇痛疗效.结果37例中21例(56.8%)疼痛完全缓解,16例(43.2%)疼痛部分缓解,总疼痛缓解率100.0%.肿瘤PR 13例中疼痛完全缓解11例(84.6%),而肿瘤SD 24例中10例疼痛完全缓解(41.7%),肿瘤PR与肿瘤SD者的疼痛完全缓解率比较有显著差异(x2=6.33,P<0.05).结论化疗对乳腺癌转移患者的疼痛治疗有显著疗效,化疗镇痛作用与肿瘤客观疗效密切相关,化疗应成为乳腺癌转移患者疼痛的首选治疗.

    作者:丁永为 刊期: 2005年第03期

  • 保留盆腔植物神经的直肠癌根治术32例临床分析

    目的探讨保留盆腔植物神经的直肠癌根治术对男性直肠癌患者术后排尿与性功能的影响.方法对32例男性直肠癌患者行保留盆腔植物神经的直肠癌根治术(保留组),其中5例为保留单侧盆腔植物神经术.以22例行传统直肠癌根治术(未明确保留盆腔植物神经)者作为对照(对照组).结果保留组术后有勃起、射精功能者分别占87.5%(28/32)、75.0%(24/32),其中保留双侧盆腔植物神经的27例术后有勃起、射精功能者分别为88.9%(24/27)、77.7%(21/27),5例保留单侧盆腔植物神经者,分别为80.0%(4/5)、60.0%(3/5);对照组有勃起、射精功能者分别为31.8%(7/22)、22.7%(5/22).盆腔植物神经保留组术后排尿功能正常者占84.4%(27/32),对照组排尿功能正常者占31.8%(7/22).结论保留盆腔植物神经的直肠癌根治术能够有效地保存男性直肠癌患者术后性功能和排尿功能.

    作者:曹家庆;黄俊;欧阳坚;陈嘉希;王梦龙 刊期: 2005年第03期

  • MADP-MXEP方案治疗复发与难治性非霍奇金淋巴瘤的近期及远期效果

    CHOP、CHEP方案治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)效果肯定,但部分患者达不到完全缓解,或缓解后复发,成为复发与难治性淋巴瘤,是临床治疗的难题.为了探索对经CHOP、CHEP方案一线治疗失败,或复发的病例的解救治疗.我们自1992年10月~2004年10月,采用氮芥(HN2)、阿糖胞苷(Ara-C)、氮烯咪胺(DTIC)、强的松(PDN)和米托蒽醌(MX)、足叶乙甙(VP-16)、PDN组成MADP-MXEP方案,治疗复发与难治性NHL19例,现报告如下.

    作者:陈建安;刘红兵;何琼华;陈立军;李星;宋文军 刊期: 2005年第03期

  • 鼻咽癌survivin基因和血管内皮生长因子表达的临床意义

    目的研究鼻咽癌survivin基因表达和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义.方法运用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测鼻咽癌组织中survivin、VEGF mRNA的表达情况.结果35例鼻咽癌组织中23例survivin表达阳性(65.7%),22例VEGF表达阳性(62.9%);14例鼻咽黏膜慢性炎症组织中2例survivin表达阳性(14.3%),3例VEGF表达阳性(21.4%).癌组织与炎症组织相比,survivin、VEGF两者均有表达,但具有显著性差别(P<0.05).鼻咽癌组织中survivin的表达与肿瘤的细胞分化及TNM分期有关,高分化者的表达率明显低于中低分化者(P<0.05),Ⅰ~Ⅱ期的阳性表达率(47.4%)较Ⅲ~Ⅳ期(87.5%)低(P<0.05).鼻咽癌组织中VEGF的表达与颈淋巴结转移及TNM分期有关,有颈淋巴结转移者其阳性表达率较高,Ⅰ~Ⅱ期的阳性表达率(42.1%)较Ⅲ~Ⅳ期(87.5%)低(P<0.01).鼻咽癌组织中survivin、VEGF的表达呈正相关性.结论鼻咽癌组织中存在survivin、VEGF的过表达现象.survivin、VEGF基因的异常表达与鼻咽癌的发生发展存在一定的关系.survivin的异常表达可能在鼻咽癌的血管生成中发挥一定的作用.

    作者:李俊;周绪红;彭涛;江孝清;薛英 刊期: 2005年第03期

  • 多瑞吉致药物依赖1例报告

    1病例介绍患者,女,31岁.患者于2002年7月确诊为右肺癌、骨转移.病理诊断为:低分化腺癌.因右肺癌伴多发骨转移于2003年5月26日入我院.患者感胸背部、骨盆及右下肢持续疼痛,疼痛程度为重度(VAS评分10分).

    作者:刘建芝;贺华英;刘烈军;邱卉;徐建明 刊期: 2005年第03期

  • CD基因靶向治疗与放疗联合应用的研究进展

    基因治疗作为治疗恶性肿瘤的1种新手段,正愈来愈受到重视和关注,肿瘤基因治疗的原理是将目的基因用基因转移技术导入靶细胞,使其表达此基因而获得特定的功能和效应,继而执行或介导对肿瘤的杀伤和抑制作用,终达到直接或是间接杀灭肿瘤细胞的目的.自杀基因疗法:又称病毒介导的酶-药物前体疗法(virys-directed enzyme prodrug therapy,VDEPT),是将某些细菌、病毒和真菌中的基因导入肿瘤细胞,使其编码的特异性酶类将原本对细胞无毒或毒性极低的药物前体在肿瘤细胞内代谢成毒性产物,达到杀死肿瘤细胞的目的,目前国内外研究较多.本文就其中CD/5-Fc体系近年来在恶性肿瘤的靶向治疗以及放疗的联合应用方面的研究进展作一综述.

    作者:高晓林;王和 刊期: 2005年第03期

  • Cyclin A、CDK2基因在非小细胞肺癌中的表达及其意义

    目的研究细胞周期素A(Cyclin A)和细胞周期素依赖性激酶2(cyclin-dependent kinases,CDK2)基因在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其相互关系,探讨其对NSCLC发生、发展、淋巴结转移及预后的影响.方法采用免疫组织化学二步法检测40例NSCLC(伴淋巴结转移21例,不伴淋巴结转移19例),11例支气管黏膜上皮增生或不典型增生,9例淋巴结转移癌组织中Cyclin A、CDK2蛋白的表达,并随访40例NSCLC患者3年生存期.结果在支气管黏膜上皮增生或不典型增生,不伴淋巴结转移的NSCLC,伴淋巴结转移的NSCLC,淋巴结转移癌组织中,Cyclin A蛋白的阳性表达率分别为9.09%(1/11),31.58%(6/19),80.95%(17/21),66.67%(6/9);CDK2蛋白的阳性表达率分别为9.09%(1/11),36.84%(7/19),76.19%(16/21),77.78%(7/9);不伴淋巴结转移的NSCLC组织中的Cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率分别与伴淋巴结转移NSCLC组织、淋巴结转移癌组织的Cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率比较,差异均有显著性(P均<0.05).23例Cyclin A蛋白表达阳性患者3年生存率为21.74%(5/23),17例表达阴性患者3年生存率为58.82%(10/17),两者比较有显著性差异(P<0.05);23例CDK2蛋白表达阳性患者3年生存率为17.39%(4/23),17例表达阴性患者3年生存率为64.71%(11/17),两者比较有显著性差异(P<0.05).NSCLC中Cyclin A与CDK2蛋白表达呈正相关(x2=19.22,P<0.001,列联系数Pearson=0.570).结论在NSCLC发生、演进、浸润、淋巴结转移过程中CyclinA、CDK2起正调控作用,NSCLC组织中CyclinA、CDK2表达上调可作为判断NSCLC预后不良的参考指标.

    作者:张胜名;刘铭球;李奇志;毛永荣;王敏 刊期: 2005年第03期

  • 5-Fu/LV+L-OHP方案静脉及腹腔热灌注化疗对T4期结直肠癌的疗效对比观察

    目的观察比较草酸铂腹腔热灌注与单纯静脉化疗治疗T4期结直肠癌的疗效和毒副作用.方法将病理检查确诊的60例T4期结直肠癌患者随机分成2个组,2组均先给予亚叶酸钙和氟脲嘧啶静脉输注.比较草酸铂腹腔热灌注化疗配合局部射频透热治疗和单纯静脉输注的疗效.结果静脉化疗+腹腔热灌注组有效率为59.3%,中位生存期11.0个月,中位无进展生存期9.2个月.单纯静脉化疗组有效率为35.7%,中位生存期9.7个月,中位无进展生存期7.0个月.静脉化疗+腹腔热灌注组中位生存期(11.0个月)长于单纯静脉化疗组(9.7个月),有统计学差异(P<0.05).静脉化疗+腹腔热灌注组腹水治疗有效率86.7%,单纯静脉化疗组有效率50.0%,2个组有显著差异(P<0.05).静脉化疗+腹腔热灌注组毒副反应主要为腹部不适.结论草酸铂腹腔热灌注化疗疗效有所提高,毒性尚可耐受,值得进一步研究.

    作者:束永前;刘凌翔;刘平;黄普文;殷咏梅;卢凯华;刘连科 刊期: 2005年第03期

  • 近膝关节骨巨细胞瘤半膝关节截除灭活再植术

    1995年3月~2003年7月我们对30例30例近膝关节的骨巨细胞瘤行瘤段半膝关节截除、灭活再植术,取得了较好的效果.现小结如下.

    作者:桂添瑞 刊期: 2005年第03期

  • TRAIL与卡铂联合诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

    目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与卡铂(CBP)联合应用对体外培养的卵巢A2780细胞的生物学效应及其作用机制.方法采用MTT法、流式细胞术,检测体外培养的A2780细胞在卡铂和TRAIL共同作用下的细胞增殖抑制效应以及细胞凋亡程度,应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测TRAIL受体的mRNA表达水平.结果A2780细胞对TRAIL敏感,TRAIL与卡铂联合用药对细胞的增殖抑制呈现高效协同作用,与单独用药组比较有显著性差异(P<0.05);流式细胞术分析协同性杀伤作用主要由于TRAIL和CBP联合诱导细胞凋亡引起;RT-PCR法检测结果显示A2780细胞在TRAIL与卡铂联合用药后均表现死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调.结论在体外TRAIL与化疗药物联用能明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,卡铂能明显增强TRAIL对肿瘤细胞的敏感性,其诱导机制可能与死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调相关.

    作者:陈儒新;尹福波;闫莉;刘娜;王艳艳 刊期: 2005年第03期

  • 低位直肠前切除术26例报告

    我院自1996年以来对26例低位直肠癌患者行低位直肠前切除术,采用双吻合技术行结-直肠(肛管)吻合,效果良好,现报道如下.

    作者:夏卉芳;邱爱华;万文犁;马巍 刊期: 2005年第03期

  • 塞来昔布诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡及其影响端粒酶活性的实验研究

    目的探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞生长、端粒酶活性,细胞凋亡及相关基因的影响,研究其抗肿瘤的作用机制.方法终浓度为100、200及300μmol/L的塞来昔布作用于SGC-7901人胃癌细胞后,采用MTT比色法测定细胞的生长抑制率,采用半定量-TRAP银染法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及bcl-2表达水平变化.结果不同浓度的塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞均有抑制作用,抑制率与对照组相比,差异均有显著性(P<0.05);流式细胞学检测到凋亡峰,细胞阻滞于G0/G1期.同时它也显著抑制胃癌细胞的端粒酶活性,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,且端粒酶活性的降低与bcl-2表达水平下降有关.结论塞来昔布能抑制胃癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡,降低端粒酶活性,其作用机制与bcl-2表达水平下降有关,此可能是COX-2抑制剂抗肿瘤的机制之一.

    作者:亓玉琴;司君利;魏涛;李文利;贺远龙;朱菊人 刊期: 2005年第03期

  • 肝脏血管平滑肌脂肪瘤的临床病理与免疫组织化学特征

    目的探讨肝血管平滑肌脂肪瘤(HAML)的临床病理及免疫组织化学特征.方法对4例HAML进行病理组织学观察,用免疫组织化学检测HMB45等10种抗体在瘤细胞中的表达.结果其中3例肿瘤组织由平滑肌、脂肪和血管按不同比例构成,1例由单一的上皮样细胞构成.免疫组织化学检测4例均显示黑色素标记HMB45阳性和肌源性标记SMA阳性.结论HAML由平滑肌、脂肪及血管按不同比例构成,形态变异大,瘤细胞表达黑色素标记,HMB45阳性具有诊断价值.

    作者:李里香;张文昌;涂明;雷瑛;廖首生 刊期: 2005年第03期

  • 急性白血病7q杂合性缺失和微卫星不稳定性研究

    目的探讨等位基因杂合性丢失及微卫星不稳定性在白血病发病过程中的作用及意义.方法采用PCR-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色技术,选择位于7q多态微卫星标志序列引物探讨急性白血病等位基因杂合性丢失(LOH)现象.结果在D7S487位点LOH发生率为3.0%(1/33),D7S523发生率为6.1%(2/33),D7S515发生率为15.2(5/33),D7S636发生率为9.1%(3/33),在33例患者中无1例出现微卫星不稳定性(MSI).20例正常对照标本中无1例出现LOH和MSI.结论7q区域可能存在肿瘤抑制基因(TSG)参与急性白血病的发生发展.

    作者:夏瑞祥;倪婧;汪渊;周青;杨明珍;曾庆曙;王永庆;蔡学杰 刊期: 2005年第03期

  • 抑癌基因PTEN与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

    肿瘤的发生包括抑癌基因的失活、原癌基因的异常激活、DNA损伤等复杂过程.自1997年以来,相继有3个研究小组发现并命名了惟一编码具有双重磷酸酶活性的抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1,由此对第10号染色体同源丢失性磷酸酶和张力蛋白基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)的深入研究已成为肿瘤学研究的热点.现对PTEN抑癌基因及与妇科肿瘤关系的新近研究进展做一综述.

    作者:张清华;李少林 刊期: 2005年第03期

  • L-OHP+5-Fu/CF治疗晚期胰腺癌7例疗效观察

    胰腺癌是消化系统比较常见的肿瘤,占常见恶性肿瘤病例的1%~2%[1],因其起病隐袭,多数患者发病时已属晚期,失去手术治疗机会.且因其化疗效果差,临床可选用的药物有限,根据文献报道,以健择为主的化疗方案为目前有效率高的方案,但因其代价高,患者往往难以承受,为此我们试用L-OHP+5-Fu/CF方案治疗7例晚期初治胰腺癌患者,现将结果报道如下.

    作者:刘培杰 刊期: 2005年第03期

  • 125Ⅰ近距离放疗在直肠癌治疗中的应用

    放射治疗是肿瘤治疗的四大支柱之一,因而具有十分重要的作用,目前常采用手术前后辅助性放疗,在对实体肿瘤综合治疗的总体疗效中贡献至少约20%.近年来,放疗在理论和技术上均有很大的进步,尤其是新型人工合成放射源的应用,已使放射治疗朝着更加准确和微创化发展.

    作者:袁爱华;马文泽;曹秀峰 刊期: 2005年第03期

  • 维生素E琥珀酸酯联合阿霉素对乳腺癌细胞株Bcap-37的生长抑制作用

    目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合阿霉素(ADM)对乳腺癌细胞生长抑制作用.方法以VES联合ADM作用于人乳腺癌Bcap-37细胞24 h和36 h,VES浓度为5、10、20 mg/L,ADM的浓度分别为0.25、1、2 mg/L.采用MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析药物联合作用前后乳腺癌细胞凋亡率的变化和对细胞表面Fas表达的影响.结果VES联合ADM对乳腺癌Bcap-37细胞具有显著的生长抑制和凋亡诱导作用.流式细胞仪分析细胞周期,Bcap-37细胞的自然凋亡率为0.7%,5 mg/L和20 mg/LVES作用24 h后凋亡率分别为10.1%和19.2%,1 mg/L和2 mg/L ADM作用24 h后的凋亡率分别为16.0%和23.3%.5 mg/LVES联合1 mg/L ADM以及20 mg/LVES联合2 mg/L ADM作用24 h后的凋亡率分别升高至31.1%和40.7%.VES联合ADM作用24 h后Bcap-37细胞表面Fas表达增强.结论VES联合ADM对乳腺癌Bcap-37细胞具有显著的生长抑制作用,其机制可能与细胞表面Fas表达上调有关.

    作者:张伟;张军初;朱大乔;徐昕昀;张玲珍;王强 刊期: 2005年第03期

  • pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒构建及其转染Bcap-37细胞后细胞凋亡的研究

    目的构建人反义Hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As]并观察其对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡特性的影响.方法依照人hsp70mRNA全长序列,通过计算机分析,设计一对引物,在上游引物中带有1个BamHⅠ位点,经RT-PCR扩增、电泳、回收和纯化hsp70144-517片段,通过T-A克隆到pGEM-TEasy原核表达质粒中,经DNA测序和EcoRⅠ酶切图谱鉴定;EcoRⅠ酶切产物回收后亚克隆到pcDNA3.1(+)质粒中EcoRⅠ位点之间,利用BamH Ⅰ酶切图谱筛选反向插入重组质粒,经DNA测序得到pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒.以脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As转染到乳腺癌Bcap-37细胞中并克隆培养建株得到AsHsp-Bcap细胞.以DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞周期分析观察转染细胞的凋亡特性.结果本研究成功构建人反义hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As];转染到乳腺癌Bcap-37细胞后在DNA琼脂糖凝胶电泳上观察到细胞凋亡特征性DNA Ladder及流式细胞周期分析发现G1峰前有1个特征性Ap峰(亚二倍体峰).结论构建人反义重组质粒pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As对乳腺癌Bcap-37细胞有促进细胞凋亡的作用.

    作者:王晓稼;郑树;吴金民;郁琳琳;耿礼义;方永明;蒋文智 刊期: 2005年第03期

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主管:江西省卫生厅

主办:江西省肿瘤医院 江西省肿瘤研究所