学术投稿

TAT介导的白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端融合蛋白的制备及其对HL-60细胞生长的抑制作用

徐莎;王越;孙擎;刘厚奇

关键词:白血病抑制因子受体, TAT融合蛋白, HL-60细胞
摘要:目的:克隆表达HIV-1反式激活蛋白TAT与白血病抑制因子(LIF)受体α亚基胞内区C末端序列(LIFRα-CT3)的融合蛋白(TAT-CT3),并检测其对HL-60细胞增殖的抑制作用.方法:重组构建TAT-CT3和SUMO融合表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导SUMO-TAT-CT3融合蛋白表达.表达产物经亲和层析柱纯化、去除SUMO蛋白标签后获得TAT-CT3融合蛋白,免疫印迹鉴定.采用CCK-8法检测HL-60细胞的抑制率.结果:构建了高表达重组子pET28a-SUMO-TAT-CT3,获得了相对分子质量约为26 kD的TAT-CT3融合蛋白.经活性检测,TAT-CT3融合蛋白能有效抑制HL-60细胞的生长.结论:成功地克隆、表达、纯化TAT-CT3融合蛋白,该融合蛋白具有生物活性,可抑制HL-60细胞的增殖.
解剖学杂志相关文献
  • 生长因子基因在兔软骨细胞损伤模型中表达

    目的:探测生长因子基因在兔关节软骨细胞损伤后不同时间点的表达变化.方法:通过机械划伤制备关节软骨细胞损伤模型,观察软骨细胞在划伤后的形态变化.采用实时荧光定量PCR技术检测软骨细胞在划伤前和划伤后1、3、7d4个时间点的血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和Ⅱ型胶原基因mRNA表达.结果:细胞划伤后划痕两侧细胞逐渐向划痕区生长和融合.VEGF和bFGF基因在细胞划伤后呈明显低水平表达,而TGF-β1、IGF-Ⅰ和Ⅱ型胶原基因却呈现较高表达水平.VEGF基因在细胞损伤第3天的表达达高峰后开始下降,而bFGF、TGF-β1及Ⅱ型胶原基因在损伤的第1天表达明显降低,随后呈现升高的趋势.IGF-Ⅰ基因在损伤初期表达变化平稳,在损伤第3天后出现明显升高趋势.结论:bFGF、TGF-β1、VEGF、IGF-Ⅰ和Ⅱ型胶原基因细胞损伤后的表达存在差异性,这为调节关节软骨内源性生长因子基因表达治疗关节软骨损伤提供实验依据.

    作者:赵海洋;马子君;任俊丽;陈传好 刊期: 2014年第02期

  • 离体猪肺与人肺动、静脉成像的解剖学

    目的:将离体猪肺与人肺动、静脉行多层螺旋CT增强扫描成像进行解剖学观察,为进一步研究人肺动、静脉提供参考依据.方法:将已用羧甲基纤维素泛影葡胺液灌注的30例离体猪肺置于螺旋CT机架上进行增强扫描,行三维重建,挑选5例肺动、静脉清晰的猪肺,进行动、静脉测量;同时选择正常健康成人肺5例行增强扫描,三维重建.结果:通过两者间动、静脉的成像比较有相似性,而猪肺与人肺动、静脉管径存在一定的差异性.结论:多层螺旋CT成像能较好地显示离体猪肺与人肺动、静脉走行及管径,可进行大样本的测量研究,为临床诊断提供参考依据.

    作者:汤挺兵;陈吴兴;陈光平;纪建松;王祖飞 刊期: 2014年第02期

  • 湖南宁乡地区城市汉族体型分析

    目的:了解湖南宁乡城市汉族体型特征.方法:采用随机抽样方法,测量湖南宁乡地区319名(男149,女170)城市汉族的身高、体质量、上臂紧张围、小腿围等10项指标,按照Heath-Carter体型法进行统计分析.结果:湖南宁乡城市汉族男性平均体型值为4.2-5.5-1.6,属偏内胚层的中胚层体型;女性平均体型值为4.9-4.8-1.6,属偏中胚层的内胚层体型.男性以30岁为体型分界点、女性以40岁为体型分界点,随着年龄的增长,中因子值明显增加、外因子值则明显减少,肌肉和骨骼也逐渐趋向于发达,身体线性度下降,体型有明显的性别差异.结论:湖南宁乡城市汉族男性体格魁梧,女性体态丰满圆润;与其他群体相比,湖南宁乡城市汉族男性平均体型与山东乡村汉族为接近;湖南宁乡城市汉族女性平均体型与鄂温克族为接近.

    作者:刘燕;陆舜华;李玉玲;李咏兰;傅媛;郑连斌 刊期: 2014年第02期

  • 大鼠膝关节改良不稳定性骨性关节炎模型的建立及病理特征

    目的:通过切断前交叉韧带并强迫活动建立大鼠改良不稳定性骨关节炎模型,观察其病理变化,为骨关节炎的研究提供简便理想的动物模型.方法:健康5月龄Wistar大鼠,一侧予以手术处理,建立骨性关节炎模型组,每日大腿外侧肌肉注射青霉素10万IU.观察关节软骨退变现象,并行Mankin评分.结果:模型组随着时间的延长,软骨退变呈进行性发展.4周时未见任何退变征象,8周时软骨面色暗,部分可见小裂纹,从12周后软骨不同程度糜烂、剥脱,与假手术组之间比较,差异均有统计学意义.光镜观察显示,模型组4周深层同源软骨细胞群数目显著增加;模型组8、12、16周与假手术组比较,退变加重,中间层及深层软骨细胞逐渐变化,差异均有统计学意义;模型组20周时,软骨退变重,甚至剥脱,各层细胞排列及形态均有明显变化.结论:切断前交叉韧带并强迫活动能成功诱发大鼠膝关节骨关节炎改变,其病理变化随时间的增加而加重.

    作者:马钢;任明姬 刊期: 2014年第02期

  • Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏骨髓来源树突状细胞瘤苗的抗肿瘤免疫学效应

    目的:研究Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的骨髓来源树突状细胞(BMDCs)的抗肿瘤免疫生物学效应.方法:用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏BMDCs制成瘤苗,瘤苗的效应通过C57BL/6J小鼠肝细胞癌模型验证.皮下接种Hepal-6细胞8d后,成瘤小鼠随机分实验组,足垫部皮下注射Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏BMDCs;无血清RPMI-1640注射组、BMDCs注射组和单纯Hepal-6细胞裂解蛋白致敏BMDCs注射组.取肿瘤组织分离成细胞悬液,FACS检测CD11c+细胞、CCR7+细胞、CD80+细胞和CD86+细胞;取淋巴结、脾、肿瘤冷冻切片并采用免疫组织化学检测淋巴结、脾、肿瘤内Foxp3+细胞浸润的改变;ELISA检测瘤内转化生长因子-p1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)的表达.结果:实验组肿瘤组织比各对照组有更多的CD11c+细胞、CCR7+细胞、CD80+细胞和CD86+细胞浸润;与各组对照相比较,实验组Foxp3+细胞在淋巴结、脾、肿瘤内浸润明显减少;实验组细胞因子TGF-β1、IL-10低于各对照组,IFN-γ、IL-2则高于各对照组.结论:Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗能促进DCs在瘤内浸润和成熟,减少Foxp3+细胞在肿瘤内的浸润,下调免疫抑制细胞因子TGF-β1、IL-10和上调免疫促进因子IFN-γ、IL-2分泌,有较强的抗肿瘤免疫生物学效应.

    作者:李日伦;周爽;秦杰;张浩如;梁春敏;罗国容 刊期: 2014年第02期

  • 副神经脊髓根颅外段的解剖学

    目的:解剖观测副神经脊髓根颅外段(简称副神经)的走形,为临床提供可靠的解剖学依据.方法:利用显微解剖方法,观测副神经的走行.结果:副神经出颈静脉孔时,58.06%位于颈内静脉浅面,37.10%位于其深面,4.84%从其主干分叉处穿过;二腹肌后腹下缘处,83.87%的副神经位于颈内静脉浅面,16.13%位于其深面;副神经自胸锁乳突肌前缘中上1/4交界处进入该肌深面,随后副神经主干行于该肌深面或从其肌腹内穿过,于该肌后缘中上1/3交界处穿出;副神经主干迂曲向外下越过枕三角,在斜方肌前缘中下1/5交界处进入该肌深面;斜方肌深面,副神经先向外下方走行一段距离后,转向内下方走行,形成终末支进入该肌肌腹,故副神经在斜方肌深面走行近似“?”;副神经走行双侧差异无统计学意义.结论:颈静脉孔处结扎颈内静脉时,注意副神经从颈内静脉中间穿出的类型;胸锁乳突肌前缘和后缘处寻找副神经可分别以二腹肌后腹和耳大神经作为参考标志.

    作者:何金鑫;岳淑芬;宋芳;赵紫薇 刊期: 2014年第02期

  • 浅析阻碍古代中医解剖学发展的儒学思想基础

    中医经典之作《黄帝内经》、《难经》中有着具体细致的解剖学记载,如《灵枢·胃肠》中记载的人肠道与食管比例为35∶1,与现代解剖学结果基本吻合.这证明了早期中医学与解剖学有关联,但后来的医者由于受儒学思想的影响,无视、轻视解剖或不敢解剖,使古代中医解剖学的发展步履维艰.以下即对这些儒学思想之阻碍因素进行分析,不当之处,望同道海涵及斧正.

    作者:顾云湘;李文彦 刊期: 2014年第02期

  • 巴基斯坦留学生指嵴纹数分析

    目的:通过指嵴纹数的调查分析,为人类学和医学肤纹学提供正常参数.方法:无油墨法采集巴基斯坦留学生的指纹,放大镜下计数.结果:巴基斯坦留学生的总指嵴纹数(TFRC)为128.34±33.00,男性TFRC为130.89±36.74,女性TFRC为125.67±28.76.各指指嵴纹数(FRC)中,拇指和环指明显高于其他各指,均为男性大于女性.随着对应指FRC差值的增加,频数减小,以差值0的频率高,绝大部分差值在4以内,共占79.34%.TFRC的频数分布近似正态.河北汉族青年的TFRC为148.37±39.56,男性TFRC为158.37±38.83,女性为138.37±37.83.结论:巴基斯坦留学生各指的FRC值具有明显的性别差异,左右对应指FRC值分布具有对称性.与河北汉族青年FRC相比,无论男女,巴基斯坦留学生TFRC普遍比河北汉族青年低,其他各项与河北汉族青年相差不大.

    作者:李超;沈海娥;张红梅;陈静 刊期: 2014年第02期

  • 组织工程学实验教学改革初探

    组织工程学是一门新兴的边缘交叉学科,是生命科学与工程学相结合的产物.其主要目的是研究和开发人体组织器官的替代物,修复人体组织或器官的缺损,帮助患者恢复劳动能力,提高生活质量.近10年来组织工程学得到了突飞猛进的发展,世界上许多大学和研究机构,都专门建立了组织工程的研究和教学平台.培养一批掌握组织工程技术的专门人才,紧跟科学前沿,开拓进取,锐意创新,为推动组织工程学的发展,造福人类健康服务[1].

    作者:范军;田晓红;柏树令;侯伟健;徐赫;佟浩 刊期: 2014年第02期

  • 巢蛋白和性别决定基因高迁移率组蛋白阳性细胞在成年大鼠穹隆下器的表达

    目的:观察巢蛋白与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在穹隆下器的阳性细胞表达情况.方法:Wistar大鼠经心灌注后,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光显色观察巢蛋白、SOX2在穹隆下器中的表达情况.结果:巢蛋白阳性细胞呈絮状或丝状,有数目不等的分支,在室管膜下区域密集分布,室管膜、背侧区及两侧大血管周围分布较少,中央区域罕有分布.SOX2阳性细胞胞核多呈圆形或椭圆形,在穹隆下器室管膜、室管膜下及背侧区密集分布,中央区分布较少.SOX2和巢蛋白荧光双标染色,可见少量SOX2和巢蛋白双阳性表达细胞.结论:穹隆下器内SOX2及巢蛋白阳性细胞密集表达,并存在少量SOX2和巢蛋白双阳性表达细胞,说明穹隆下器可能存在神经干细胞/祖细胞.

    作者:唐蔚东;叶建亚;李彩格;马常升;郝庆卯;秦永;李力;王立涛 刊期: 2014年第02期

  • 制作小肠组织石蜡切片的改进方法

    小肠是消化和吸收的主要部位,腔面为环形皱襞,黏膜表面有许多细小的肠绒毛.由于传统方法在制作小肠组织教学切片时,常出现组织易碎裂,细胞收缩,切片厚薄不均,染色太深或太浅使染色质结构在显微镜下观察不清晰.为了解决这些问题,笔者在实际工作中摸索实践,在制片方法上进行了一些分析和改进,采用福尔马林-醋酸-乙醇(FAA)固定液无需水洗直接投入乙醇中脱水,利用震荡法缩短制片时间,使小肠组织石蜡切片的质量有所提高.

    作者:李璐;李琛 刊期: 2014年第02期

  • 细胞因子信号转导抑制因子3激酶抑制区对STAT3磷酸化的抑制作用

    目的:探讨细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的激酶抑制区(KIR)对细胞内STAT3蛋白磷酸化的影响.方法:化学合成穿膜肽TAT与KIR的融合肽(TAT-KIR),以异硫氰酸荧光素(FITC)进行氨基端标记;不同浓度融合肽加入培养的PC12细胞,荧光显微镜及流式细胞仪检测TAT-KIR的穿膜效果;以白细胞介素-6(IL-6)处理PC12细胞模拟炎症反应,MTT检测细胞活力/增殖情况,免疫印迹检测细胞内磷酸化STAT3 (P-STAT3)蛋白水平;对比阴性对照组(正常培养的细胞)、IL-6刺激组、TAT-KIR处理组及TAT-KIR+IL-6处理组细胞的P-STAT3水平,分析SOCS3的KIR对STAT3磷酸化的影响.结果:加入不同浓度TAT-KIR后10 min,显微镜下可见细胞内有绿色荧光出现,并随浓度升高胞内绿色荧光强度增强,其中3 μmol/I融合肽30 min时其跨膜转运效率高,可达99.94%;100 ng/ml IL-6可显著增加PC12细胞活力,并促进胞内STAT3磷酸化水平显著增高;与此相比,TAT-KIR+IL-6组细胞内P-STAT3水平显著下降,但是TAT-KIR处理组P-STAT3水平与阴性对照组比较差异无统计学意义.结论:KIR可被TAT成功转入细胞内部,并有效抑制IL-6刺激引起的PC12细胞STAT3磷酸化水平的增高,对正常情况细胞STAT3磷酸化的影响不大.

    作者:王丽;马辉;焦倩;王媛媛;张智超;杨蓬勃;陈新林;李昭荣;吕海侠 刊期: 2014年第02期

  • 左上肢动脉变异一例

    笔者在解剖1具老年男性尸体时,发现其左上肢动脉发生变异,现报道如下.该例左侧桡动脉(外径2.7 mm)自腋动脉第3段发出,其起始处距大圆肌下缘1.6 cm,在距动脉起始处0.6 cm处发出一分支,与主干一起行于肱二头肌内侧沟内,于肘窝上方行入深部.主干还发出2支肌支支配臂前群肌,后继续下行于前臂外侧,在距离肱骨内外上髁连线3.5 cm处,向内侧发出一细长分支,下行供应桡侧腕屈肌、肱桡肌等.桡动脉本干下行至桡骨茎突处向内发出掌浅支,但未与尺动脉终支吻合为弓.主干继续绕行至手背.此外,桡动脉从腋窝下行至肘窝的过程中,4次形成扭曲.

    作者:苏胜昌;滕永刚;郭晓丹;杨向群 刊期: 2014年第02期

  • 丹参酮ⅡA下调血管内皮生长因子及其受体抑制斑马鱼血管发育

    目的:研究丹参酮ⅡA对斑马鱼血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR2)和血管发育的影响.方法:将丹参酮ⅡA处理的胚胎作为实验组,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为对照组.受精后24 h(24 hpf)观察药物对转基因斑马鱼血管发育的影响,荧光显微镜观察新生血管状态,记录血管长度.分别从0、6、12和24 hpf时相的药物处理后的斑马鱼胚胎中提取总的RNA,采用实时定量RT-PCR方法检测VEGF及VEGFR2的表达变化.结果:丹参酮ⅡA可明显抑制斑马鱼血管发育,且在100 μg/ml和200 μg/ml浓度下可发挥抑制作用,无浓度递增关系.实验组较对照组VEGF及VEGFR2表达量降低,在药物作用的12 hpf和24 hpf具有显著性差异.结论:丹参酮ⅡA可下调VEGF及VEGFR2的表达,抑制斑马鱼血管发育.

    作者:刘博;吕慧;王国坤;吴峰;李松华;秦永文 刊期: 2014年第02期

  • 太行山猕猴掌面斗形纹旋转方向的不对称性

    目的:了解太行山猕猴(Macaca mulatta)及日本猕猴(Macaca fuscata)掌面Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区斗形纹的旋转方向及是否存在不对称性.方法:对59例(♀41例,♂18例)肤纹完整清晰的太行山猕猴掌面Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区斗形纹的旋转方向进行调查,数据经SPSS 13.0软件进行卡方检验,同时对日本猕猴掌面Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区斗形纹的旋转方向的数据进行卡方检验.结果:无论太行山猕猴、高崎山猕猴还是屋久岛猕猴掌面指间Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区斗形纹旋转方向在侧别间差异具有统计学意义.结论:斗形纹旋转方向表现出左右不对称性,推测猕猴掌面斗形纹旋转方向的不对称性也许是一种普遍现象,地磁的作用和地球自转导致生长素分布不均有可能影响斗形纹的旋转方向.

    作者:王凤产;田华香;宋洁;赵晓进 刊期: 2014年第02期

  • 尺神经手背支高位起点变异一例

    笔者在对1例老年男性标本的解剖时发现左尺神经手背支起点明显较高,现报道如下.福尔马林溶液固定标本,男性,年龄,身高不详.尺神经在前臂远侧2/3部走行于尺动脉尺侧.在距尺骨茎突上缘101.92mm,髁茎连线19.82mm处发出尺神经手背支,于尺侧腕屈肌深面下行,距尺骨茎突上方13.14mm,髁茎连线7.10 mm处浅出转向手背,在腕关节处分出3支皮神经.

    作者:汪淼;周睿;陆子轩;郭晓丹 刊期: 2014年第02期

  • 岩藻聚糖硫酸酯对大鼠神经病理性疼痛的镇痛作用及其机制

    目的:探讨岩藻聚糖硫酸酯对大鼠神经病理性疼痛的镇痛作用及其作用机制.方法:利用脊神经结扎神经病理性疼痛大鼠模型,鞘内注射岩藻聚糖硫酸酯(15、50、100mg/kg),通过行为学实验测试机械性缩足反射阈值和热缩足潜伏期的变化;实时定量PCR检测星形胶质细胞和小胶质细胞的标记蛋白GFAP和mac-1的mRNA表达变化;ELISA试剂盒检测炎症因子TNF-α、IL-1β以及IL-6的表达变化.结果:岩藻聚糖硫酸酯能够抑制脊神经结扎大鼠机械性痛觉超敏和热痛觉过敏,且该效应呈剂量依赖关系.岩藻聚糖硫酸酯还能够呈剂量依赖性地降低脊神经结扎大鼠GFAP和mac-1的mRNA表达以及TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,且该效应与其消减脊神经结扎大鼠机械性痛觉超敏和热痛觉过敏的作用相一致.结论:岩藻聚糖硫酸酯具有抗神经病理性疼痛作用,且该作用机制可能与其抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的激活,从而降低炎症因子TNF-α、IL-1β以及IL-6的表达有关.

    作者:胡传银;陈小萍;赵云涛 刊期: 2014年第02期

  • 大学视频公开课“人体解剖学”的制作

    视频公开课是中国高等教育为适应世界高等教育发展的新趋势,通过现代信息技术手段,面向社会公众免费开放的优质视频课程.首批20门由国内知名高校共同打造的“中国大学视频公开课”2011年11月已成功通过“爱课程”网及其他网络平台对外免费公开,反响良好[1].根据2011年6月教育部《关于启动2011年精品视频公开课建设工作的通知》[2],中南大学人体解剖学与神经生物学系推出的人体解剖学课程经申请审批成为第二批中国大学优质视频公开课.

    作者:蔡艳;王慧;吴晓英;熊鲲 刊期: 2014年第02期

  • β-淀粉样蛋白1-42寡聚体诱导的阿尔茨海默病大鼠海马的Bcl-2表达和caspase-3活性变化

    目的:研究β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)寡聚体诱导痴呆大鼠脑海马区的Bcl-2表达和caspase-3活性变化及其意义.方法:采用Morris水迷宫法筛选出逃避潜伏期少于60 s的60只SD雄性大鼠随机分为4组,即正常对照组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组.通过脑立体定位仪将Aβ1-42纤维体、Aβ1-42寡聚体注入大鼠右侧脑室,制备AD大鼠模型.RT-PCR法检测大鼠海马Bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA的表达,用免疫印迹测定大鼠海马区Bcl-2蛋白表达和caspase-3活性.结果:与正常对照组及PBS对照组比较,模型组大鼠海马区Bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达较低,Aβ1-42纤维组Bcl-2的蛋白表达高于Aβ1-42寡聚体组;Aβ1-42寡聚体组的caspase-3 mRNA表达以及caspase-3蛋白活性高于Aβ1-42纤维组.结论:Aβ1-42寡聚体可下调Bcl-2表达,活化caspase-3.

    作者:陈雪;孙婧霞;刘源劼;曹翠丽;蒋常文 刊期: 2014年第02期

  • 手动脉透明标本的制作

    解剖学标本透明技术常用于胚胎骨骼、内脏器官和血管透明标本的制作[1-8],在比较难透明的成人骨血管方面也有比较成功的案例[9-10];闫广照等[11]在剥离皮肤等结缔组织的手上,对手动脉及腱鞘的透明进行了探索.由于手掌皮肤角质层较厚,带有皮肤和皮下组织的完整手动脉透明标本的制作难度相对较大,尤其是标本的脱水和透明.为了教学和科研的需要,笔者对完整手及动脉透明标本的制作方法进行了研究,取得了较好的效果,现报道如下.

    作者:黄会龙;刘镇;姬瑞娟;党瑞山 刊期: 2014年第02期

解剖学杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中国解剖学会