学术投稿

用PCR方法快速检测用拉米夫定治疗的乙型肝炎病人中HBV P基因区codon 550的变异

程新建;徐蓓;姚光弼

关键词:拉米夫定, 治疗, HBV, 变异
摘要:目的建立一种快速特异的乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的检测方法.方法针对HBV codon 550位置设计2条高度特异的的引物,用PCR方法进行DNA扩增.根据电泳结果可分析下列2种情况:(1)A741G变异型(YVDD);(2)G743T变异型(YIDD).用该方法对32例病人在拉米夫定治疗前(0周),治疗中(52周和104周)共61份血清进行YMDD变异检测.结果特异性:10例病人分别做0周和52周标本codon 550特异性PCR和DNA测序.0周血清检测结果全部为野生型,52周血清中5例为A741G,2例为G743T,两种方法的检测结果完全相同.敏感性:61份血清中2例血清PCR未能检出阳性,codon 550变异为29份,野生型为30份,和葛兰素威康公司检测结果的符合率为98.3%.混合变异株检测3例病人104周血清用PCR测定发现同时存在A741G和G743T两种变异株,其中2例结果经多克隆测序的方法得到确证.结论HBV codon 550特异性PCR方法具有快速、简便和经济实用的优点,适用于临床拉米夫定治疗病人HBV YMDD变异的跟踪测定.
肝脏杂志相关文献
  • 肝脏纤维化程度的二维超声图像与血清学指标的关系

    根据肝纤维化或肝硬化时多普勒二维超声图像的各种特异性改变,与血清纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅳ型肢原(ColⅣ)及层粘蛋白(LN)的变化,综合评价两者对纤维化或肝硬化时,特别是早期肝硬化的诊断能力,以期为临床诊断提供更客观的指标.

    作者:朱银芳;刘海肃;顾锡炳 刊期: 2001年第02期

  • 慢性重型乙型肝炎患者血清TNFα水平与HBV前C区基因变异关系的研究

    肿瘤坏死因子(TNF)是一种重要的细胞因子,包括α和β两种单体,具有广泛的生物学活性.已有大量的研究证实,TNFα参与了病毒性肝炎的发病,是介导肝细胞损害的重要细胞因子之一,在重型肝炎中可见其明显升高.一些学者也发现,HBV前C区基因变异与重型病毒性肝炎有关.鉴于以上两者在重型肝炎发病中的作用,我们就慢性重型乙型肝炎患者血清TNFα水平与HBV前C区变异之间是否有某种联系进行了探讨.

    作者:朱传武;罗端德;曾令兰;李淑莉;郭劲松;李伟;高勇 刊期: 2001年第02期

  • 乙型和丙型肝炎病人的肝移植问题

    一、乙型肝炎病人的肝移植问题由于存在肝外HBV复制(例如外周血单个核细胞和骨髓),再加上免疫抑制剂的应用,乙型肝炎病人接受肝移植后HBV再感染的发生率高达80%.肝移植后3年内HBV的再感染率与术前病毒复制水平有关:术前HBeAg阳性、HBVDNA阳性(杂交法)的患者再感染率高为83%,术前HBeAg阴性、HBV DNA阴性(杂交法)肝硬化者为58%,术前同时合并HDV感染者为32%(HDV可干扰HBV的复制).但是,暴发性乙型肝炎病人虽然术前病毒复制活跃且肝损害严重,但其复发率低(16%).

    作者:贾继东 刊期: 2001年第02期

  • 拉米夫定治疗慢性重型乙型肝炎12例

    我们于1999年3月~2000年4月观察拉米夫定治疗慢性重型乙型肝炎12例,现将治疗结果总结如下.

    作者:周胜生;顾惠芳;严桐;刘美娟 刊期: 2001年第02期

  • 肝纤维化形成机制研究进展

    肝纤维化是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿性反应,以细胞外基质(ECM)在肝内过量沉积为病理特征.肝纤维化已成为世界范围内的一个主要健康问题.现已证实肝纤维化发生的中心事件是:由损伤所引起的肝星状细胞(HSC)的激活及其转化为肌成纤维细胞,从而大量合成各种细胞外基质蛋白,沉积于肝脏终导致肝纤维化.本文就肝星状细胞的激活及调控对近年来肝纤维化形成机制的有关进展作一简介.

    作者:王燕;刘宝源 刊期: 2001年第02期

  • 维生素E对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-2、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白表达的影响

    目的研究维生素E(VE)防治肝纤维化作用及可能存在的机制.方法以四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,用VE乳剂(100 mg/kg,2次/周)静脉注射,连续10周.免疫组织化学检测肝组织Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(FN)沉积;原位杂交检测肝内金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)及α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达.结果治疗组大鼠肝内Ⅲ型胶原蛋白及FN形成较对照组减少;α1(Ⅲ)前胶原及TIMP-2mRNA表达降低,经图像分析,与对照组差异有显著性(P<0.05).结论VE治疗可下调肝纤维化大鼠TIMP-2基因表达,减少细胞外基质沉积,有助于实验性肝纤维化的恢复.

    作者:王雅凡;李奇芬;王宇明;毛青;吴纯清 刊期: 2001年第02期

  • 成人活体供肝的肝移植进展

    为缓解全球性的尸体供肝严重缺乏的状况,全球各个移植中心都在致力于活体肝移植技术(LDLT,living-rclated livcr transplantation)的研究.左外叶以及左半肝活体肝移植已经越来越多地应用于儿童及体重较轻的成年患者,并取得了令人满意的效果.

    作者:杨广顺;秦建伟 刊期: 2001年第02期

  • 基因重组表达戊型肝炎病毒的研究进展

    戊型肝炎是一种经粪-口途径传播的急性传染病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家和地区.其病毒成球形,直径27~34nm,基因组是单股正链RNA,长约7.5kb,由5'非编码区、编码区和3'非编码区组成,编码区包括3个开放读码框架(ORF).ORF1位于基因组的5'端,长 5 079bp,为非结构区基因,编码病毒复制所需要的RNA聚合酶、蛋白酶和解旋酶等;ORF2及ORF3位于基因组的3'端,ORF2长1 980bp,编码病毒的结构蛋白;ORF3长369bp,含有可被中和抗体所识别的抗原表位[1].随着戊型肝炎病毒(HEV)分子克隆技术的成功建立,以重组蛋白作为抗原来检测HEV抗体的技术正在逐步完善,同时HEV的生物学性状也在进一步了解中.本文就原核细胞、昆虫杆状病毒和哺乳动物等表达系统应用于HEV结构蛋白表达的研究情况作一综述.

    作者:王淑颖;阮冰 刊期: 2001年第02期

  • 古方鳖甲煎丸抗肝纤维化40例疗效观察

    肝纤维化是慢性肝病共同病理特征,系肝细胞外基质(ECM)在肝内异常沉积所致.现就鳖甲煎丸对慢性肝病肝纤维化的临床治疗作用报告于下.

    作者:赵治友;钟庆平;朱飞燕;吴彩珍;姚真敏;吕圭源 刊期: 2001年第02期

  • 丹参酸乙对转化生长因子β1刺激的大鼠肝星状细胞的观察

    目的探讨丹参酸乙(SAB)对转化生长因子β1(TGFβ1)刺激的大鼠肝星状细胞活化、Ⅰ型胶原及c-fos基因表达的影响.方法原位灌注、消化大鼠肝脏,分离肝星状细胞.以不同浓度SAB温育TGFβ1刺激的大鼠肝星状细胞.异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA,RT-PCR法检测目的基因的表达.结果1 μmol/L SAB和10μmol/L SAB可分别抑制Ⅰ型胶原及c-fos基因表达,但1 μmol/L SAB和10 μmol/L SAB对SM α-actin mRNA均无显著影响.结论TGFβ1对体外活化的大鼠肝星状细胞表达SM α-actin mRNA无明显影响,可促进Ⅰ型胶原和c-fos mRNA的表达.SAB可抑制TGFβ1促进细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的作用.

    作者:王晓玲;刘平;谭英姿;童普德;蒋文娟 刊期: 2001年第02期

  • IFN-α2b联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎临床观察

    我们自1999年5月以来,用IFN-α2b(天津华立达生物工程有限公司生产)与胸腺肽(浙江省医学科学院制药厂生产)联合治疗慢性乙型肝炎52例,取得较理想疗效,现报道如下.

    作者:蒋行健;梁伟峰 刊期: 2001年第02期

  • HBV感染时病毒清除与肝细胞免疫病理损伤并非同步--重视非靶细胞损伤性清除肝细胞内病毒的机制

    HBV感染后病毒清除和肝细胞免疫性损伤是两个密切相关的过程.但近年发现机体可在不损伤靶肝细胞的情况下清除其内的HBV,本文对这方面的研究进展作一介绍.

    作者:于乐成;顾长海 刊期: 2001年第02期

  • 静滴思美泰致严重过敏反应一例

    思美泰(ademetionine)是近年来治疗急、慢性肝病,尤其是伴有黄疸的常用药.我们在临床使用中,发生严重过敏反应1例,现报告如下:

    作者:饶凤秀;龚芬;樊海红 刊期: 2001年第02期

  • 慢性乙型肝炎患者生存质量的测量与评价

    目的测量并评价慢性乙型肝炎患者的生存质量(QOL).方法采用SF-36量表,对260例慢性乙型肝炎患者和260例正常对照进行QOL测量与评价,并对QOL的影响因素进行单因素分析和多因素逐步回归分析.结果慢性乙型肝炎患者的平均SF-36总评分及生理机能、角色生理状况、心理健康状况、角色心理状况、社会机能、活力、躯体疼痛和主观健康状况的平均评分分别为56±17、65±24、21±30、62±18、28±34、55±28、57±2、68±25和52±16,与对照组相比,差异有非常显著性(P均<0.01).慢性乙型肝炎患者的平均生存质量指数评分(7.2±2.2)与对照组相比,差异有非常显著性(P<0.01).慢性乙型肝炎患者SF-36总评分及其8个分项目相互之间的相关系数均具有显著性意义(P<0.01).SF-36总评分与生存质量指数评分呈极显著性正相关(r=0.7841,P<0.001);影响慢性乙型肝炎患者QOL的主要因素是临床分型、乏力、腹水、黄疸、脾肿大、血清ALT与总胆红素(TBil)升高、血浆白蛋白或(A/G)降低以及HBeAg、HBV-DNA持续阳性等.结论SF-36适用于我国慢性乙型肝炎患者QOL的测量.

    作者:潘化平 刊期: 2001年第02期

  • 异种肝移植研究进展

    肝移植已成为不可逆肝病尤其是肝衰竭的主要治疗手段,但供体不足问题日益突出.仅以美国为例,1997年即有近1000名患者在等待供体中死亡.为此,不少学者致力于异种肝移植的研究,以期作为供体不足的补充.异种肝移植还具有两大优点:一是可避免同种肝移植常见的肝炎病毒如乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)再感染;二是异种肝较易进行基因转移等操作,从而可望成为肝靶向基因治疗的工具.然而,异种肝移植也存在如下限制:首先,作为异种肝,易引起免疫反应,导致异种肝组织/细胞的破坏;其次,异种肝在恢复/重建生理功能方面尚存在遣传学限制;后,存在传播动物病原的潜在危险.现将有关研究进展综述如下.

    作者:王宇明 刊期: 2001年第02期

  • 妊娠合并肝病146例治疗探讨

    从1998年6月起,我们对78例中晚期妊娠合并肝病患者(治疗组)进行了综合治疗和追踪观察,同时与此以前的68例妊娠合并肝病患者(对照组)的治疗方法进行回顾性对照分析研究,现将结果报告如下.

    作者:施维群;杨珺超 刊期: 2001年第02期

  • Wilson病的基础与临床

    病毒性肝炎是我国的常见病和多发病,根据临床表现和病毒学标志,诊断并不困难.但有相当数量的慢性肝病,由于缺乏可靠的诊断标志,以及临床医生专业局限而常被误诊为慢性病毒性肝炎,在传染病科就诊者不乏其数,Wilson病就是其中之一.据调查,35岁以下不明原因的慢性肝炎中,以慢性肝炎为主要表现的Wilson病占5%.因此,了解并掌握Wilson病的一些基础和临床知识对于拓宽视野、提高鉴别能力和制定正确治疗方案有重要意义.

    作者:万谟彬 刊期: 2001年第02期

  • 肝移植时免疫抑制剂的应用

    肝移植是终末期肝病好的治疗方法,在各种移植脏器的研究中,肝移植物较其他组织的排斥要少些.尽管如此,人类异体肝移植会发生侵略性排斥反应,除非给予免疫抑制剂.事实上,肝移植的成功在很大程度上取决于合理应用免疫抑制药物控制同种移植免疫排斥反应.

    作者:范建高;田丽艳 刊期: 2001年第02期

  • TGFβ1与慢性病毒性肝纤维化的关系

    目的观察TGFβ1与肝纤维化的关系.方法将83例慢性病毒性肝炎及肝炎肝硬化患者肝活检组织分别按炎症活动度分级和纤维化程度分期并计分,应用ELISA法检测患者血清TGFβ1水平.结果血清TGFβ1水平在肝组织炎症活动度G2、G3及G4级比正常对照组明显升高(P<0.01),但在G2、G3及G4级之间,血清TGFβ1水平无明显差异(P>0.05),血清TGFβ1水平与肝组织炎症活动度计分无相关性(P>0.05).血清TGFβ1水平在肝纤维化S2、S3及S4期比正常对照组明显升高(P<0.001),且随着纤维化程度的加重而不断升高.血清TGFβ1水平与肝组织纤维化程度计分呈高度的正相关性(P<0.001).结论血清TGFβ1水平与肝纤维化程度密切相关,TGFβ1参与了肝纤维化的形成和发展.

    作者:陈晓红;周元平;崇雨田;何有成;姚集鲁 刊期: 2001年第02期

  • 转化、转染技术及其应用

    转化(transformation)和转染(transfection)是当今分子生物学中常用的两种技术.这两种技术有共同的理论基础,但又有不同的具体应用.近年来,在临床及实验室研究中较常应用这两种技术,现将其基本原理及应用作一简单介绍.

    作者:何丽芳 刊期: 2001年第02期

肝脏杂志

肝脏杂志

主管:上海市卫生局

主办:上海市医学会