学术投稿

一种外周血白细胞原位杂交实验新技术

李瑞峰;魏树珍;陈融;郭成浩;陈福琴;李莉;邴鲁军

关键词:白细胞, 原位杂交, RNA, 信使
摘要:用原位杂交技术检测组织细胞中mRNA的表达,实验条件要求较高,同时原位杂交实验也受到组织取材难的限制,因此检测组织细胞mRNA的原位杂交实验很难广泛应用于临床研究.外周血是了解疾病的窗口,取材容易,我们针对特定信息分子mRNA的表达,进行了外周血白细胞原位杂交实验方法的探索.通过反复实验,改良了原位杂交流程,使检测方法取得了成功.
山东大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 羟甲基烟酰胺缓释片的制备及其体外释放特性的研究

    目的:研究以羟丙甲基纤维素(HPMC)为骨架材料制备羟甲基烟酰胺(Ⅰ)缓释片及其体外释药特性.方法:湿法制粒法制备缓释片,以正交实验设计考察HPMC用量、粘度及粘合剂种类对药物体外释放速率的影响.结果:该缓释片药物的体外释放行为符合Higuchi方程;粘合剂种类和HPMC用量对该缓释片的释药速率有显著性影响.结论:HPMC Ⅰ缓释片体外释药符合设计要求.

    作者:臧恒昌;翟光喜;任冉 刊期: 2002年第03期

  • 不同产地不同丹参品种的蛋白电泳观察

    丹参为常用中药,具有祛瘀止痛、活血调经、清心除烦之作用.目前主要用于扩张冠状动脉,抵抗血栓形成,增强微循环,抑制转氨酶上升等方面.同时还具有解热、抗菌消炎作用,尤其对治疗心脑血管方面的疾病具有显著疗效[1].野生丹参资源已不能满足药材市场的需求.目前丹参多为栽培,其栽培面积日益扩大.为了获得质优高产的丹参良种,我们申报了省中医管理局课题,从1998年开始,到全省各地采集丹参标本栽种到本校药圃中,以供研究.本实验选取丹参根和根茎作水溶性蛋白质的凝胶电泳分析,以观察各地野生品种和栽培品种所含蛋白质的区别.

    作者:赵华英;李允尧;霍德兰;陈沪宁;吴路新 刊期: 2002年第03期

  • EGF 对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控

    目的:探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理.方法:以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC-3的促增殖作用;以适浓度EGF(50 ng/ml)刺激该细胞,分别于0、1、3、6、12、24 h提取总RNA,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODC mRNA丰度;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化.结果:①EGF能促进PC-3细胞的增殖,而且随着EGF浓度的升高,细胞增殖活性增加;②斑点杂交显示,EGF刺激细胞后3 h,ODC mRNA开始明显升高,12 h达高峰(约为0 h 的3.66倍),至24 h 时有所降低;③免疫组化及流式细胞术检测显示,EGF刺激细胞3 d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高.结论:EGF诱导ODC基因表达可能是其促进前列腺细胞增殖的分子机制之一.

    作者:刘贤锡;迟伟玲;刘师莲;胡海燕;刘传华;耿昭 刊期: 2002年第03期

  • 减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建

    目的:构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗.方法:设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件,插入pTriEx真核启动子CMV IE 下游,构建pCMVnir双启动子载体.将人乳头瘤病毒16型L1L7,融合基因,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL3261,厌氧诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析检测Nir启动子的活性.结果:经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL3261,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质.结论:成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌)匹配的双启动子DNA疫苗新型载体,并构建了HPV16pCMVnirL1E7新型DNA疫苗.

    作者:卞继峰;于修平;赵蔚明;耿昭;杨海宁;于瑾;李静;胡海燕;卢翌;张茂修;姜广水 刊期: 2002年第03期

  • 低分子量肝素对不稳定型心绞痛患者血浆内皮素、一氧化氮的影响

    目的:观察低分子量肝素(LMWH)对不稳定型心绞痛(UA)患者血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO)水平的影响,探讨LMWH治疗UA的机理.方法:UA患者在常规治疗基础上腹部皮下注射低分子量肝素7500IU,12h 1次.用放射免疫法及化学比色法分别测定其血浆ET、NO水平.结果:UA患者血浆 ET水平明显高于对照组(P<0.01), NO水平明显低于对照组(P<0.01),经LMWH治疗后 ET水平由治疗前(91.42±26.12)ng/L下降至(67.28±17.94)ng/L(P<0.01),NO水平由治疗前(37.89±9.23)μmol/L升高至(48.56±11.74)μmol/L(P<0.01),治疗前、后ET与NO水平均有显著性差异;治疗后与对照组相比ET、NO水平均差异无统计学意义.结论:LMWH可改善血管内皮功能,使ET合成下降、NO合成增加;通过扩张血管、抑制血小板聚集、抗血栓形成而发挥其抗心绞痛的作用.

    作者:吕琳;朱艳丽;朱兴雷 刊期: 2002年第03期

  • 不同起搏方式对心脏起搏患者心理状态的影响

    目的:对安装埋藏式心脏起搏器的患者采用量表化分析,观察不同起搏方式对心脏起搏患者的心理特点的影响.方法:病例组60人,均由经静脉系统植入埋藏式心脏起搏器,时间超过3个月.其中房室顺序起搏组(安装DDD或VDD型起搏器)24例,心室单腔起搏组(安装VVI型起搏器)36例.在常规随访过程中要求患者填写完成问卷或量表,包括一般状况调查、患者心脏症状调查表、心理健康水平评定量表(90项症状自评量表SCL-90).对照组为门诊查体的健康人30例,按要求填写SCL-90量表.量表采用标准评分法进行统计分析.结果:房室顺序起搏组和心室单腔起搏组患者的心理状态水平均低于对照组.房室顺序起搏组SCL-90得分与心室单腔起搏组比较差异有显著性,前者优于后者.心室单腔起搏组患者抑郁、敌对性、躯体化等心理症状得分高于房室顺序起搏组(P<0.05). 结论:不同心脏起搏方式可以影响长期心脏起搏患者心理状态,房室顺序起搏组患者的心理状态优于心室单腔起搏组患者.

    作者:王苏加;徐冬玲;潘秀荣;王可富;李琛;侯瑞华 刊期: 2002年第03期

  • 低分子肝素柔性纳米脂质体的研究

    目的:研制用于透皮吸收的低分子肝素柔性纳米脂质体制剂.方法:用超声波分散法制备低分子肝素柔性纳米脂质体,以正交实验设计确定佳制备工艺;电镜观察其形态及粒径分布,以Franz扩散池法测定其体外经皮渗透动力学,以小鼠用药前后血液凝固时间的变化研究其促透作用.结果:低分子肝素柔性纳米脂质体在电镜下为圆形或椭圆形,平均粒径为85.4 nm,包封率为35.2%;其体外经皮渗透符合Fick's扩散方程,小鼠用药后血液凝固时间显著延长.结论:柔性纳米脂质体对低分子肝素有良好的透皮促进作用.

    作者:翟光喜;王唯红;赵焰;李爱国;陶安进;朱启登 刊期: 2002年第03期

  • 肝硬化患者红细胞膜带3蛋白含量和功能的变化

    目的:观察肝硬化患者红细胞膜带3 蛋白含量及功能的变化.方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离红细胞膜蛋白并分析带3 蛋白含量;取适量患者红细胞检测红细胞丙酮酸-Cl 交换速率常数,并与正常人比较.结果:凝胶电泳显示患者组带3蛋白分布较窄,着色减弱;扫描图谱显示带3蛋白的浓度峰明显低于对照组;患者组红细胞丙酮酸-Cl 交换速率常数明显低于对照组.结论:肝硬化患者红细胞膜带3 蛋白含量减少,阴离子交换功能降低;带3蛋白阴离子交换功能减低是肝硬化患者红细胞内2,3-二磷酸甘油酸含量明显增加的重要原因;改善带3 蛋白的功能将有助于恢复肝硬化患者红细胞的正常状态.

    作者:彭友清;吕敏和;权启镇;吕红 刊期: 2002年第03期

  • HBVPreS2反义寡核苷酸对HepG 2.2.15细胞系HLA-I类抗原表达及生物活性的影响

    目的:观察针对乙型肝炎病毒(HBV)PreS2基因特异性反义寡核苷酸(asON)对转基因细胞HepG2.2.15表面的人类白细胞I类抗原(HLA-I)基因表达的影响.方法:设计合成互补于HBV PreS2翻译起始区的反义寡核苷酸即序列I ,并设非互补序列作对照即序列II,免疫细胞化学染色观察asON对HepG2.2.15表面表达的HLA-I类抗原的影响,用ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的变化, 放射免疫测定法检测asON对宿主细胞自身分泌蛋白-血清铁蛋白的影响.结果:HepG2.2.15细胞表面HLA-I类抗原表达降低 ,用药组和对照组相比有统计学意义(P<0.05).asON能够抑制HBV表达HBsAg和HBeAg ,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91% ,而序列II对HBsAg和HBeAg的抑制率均为11% .asON对宿主细胞自身分泌蛋白无影响,即对宿主细胞无毒性作用.结论:asON以序列特异性方式抑制HBV基因表达而对宿主细胞无毒性作用,HLA-I类抗原表达降低,这对减轻过度炎症反应,阻止慢性肝炎至重症肝炎的发生具有重要意义.

    作者:丁培芳;孙汶生;王勤友;马春红;蒋保云;曹英林 刊期: 2002年第03期

  • 针对HBV X基因区三个关键位点的反义寡核苷酸体内抑瘤研究

    目的:研究HBV X基因区关键区段的反义寡核苷酸(asON)对人肝癌裸小鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用.方法:PCR法分别合成了互补于HBV X基因的翻译起始区Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸及无关对照序列,进行硫代化修饰,以HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞接种裸小鼠,24 h内同部位一次性用药100 μg,观察并比较3种反义硫代寡核苷酸的体内抑瘤作用.ELLSA法检测反义核酸作用裸小鼠血清中HBsAg和HBeAg含量的变化.结果:3种药物作用裸小鼠组均表现为出瘤潜伏期延长,出瘤率明显低于未用药瘤细胞对照组(P<0.05),且瘤体生长缓慢.互补于Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸一次性给药方式对荷瘤鼠HBsAg和HBeAg的表达无明显抑制作用;无关序列不影响荷瘤鼠瘤体生长及HBV抗原表达.结论:针对HBV X基因区关键部位的反义寡核苷酸可抑制荷瘤裸小鼠人肝癌的生长,为HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据.

    作者:曹英林;刘素侠;张利宁;马春红;丁培芳;孙汶生;丁红转 刊期: 2002年第03期

  • 血管内皮生长因子在人食管癌中的表达和临床意义

    目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)在人食管癌中的表达及其临床意义.方法:对72例食管鳞癌患者手术切除标本,10例正常食管组织,应用免疫组织化学技术,抗VEGF单克隆抗体检测VEGF的表达,抗CD34单克隆抗体测定组织微血管密度(MVD).结果:VEGF在40例(55.6%)食管鳞癌中阳性表达,而正常食管组织不表达;食管鳞癌组织MVD为 67.5±27.6,正常食管组织MVD为29.9±9.4,两者之间有显著性差异 (P<0.01);VEGF评分为高级的食管鳞癌组织MVD高于VEGF评分为阴性和低级的食管鳞癌组织 (P<0.01),MVD与VEGF的表达呈正相关(P<0.01);VEGF的表达和MVD值在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.01).结论:VEGF在食管鳞癌组织表达且与肿瘤血管形成有关;VEGF的表达和MVD与食管鳞癌的淋巴结转移密切相关,可作为术前治疗方案的选择和确定手术范围的重要指导因子.

    作者:李效良;逄小红;刘京升;田铧 刊期: 2002年第03期

  • 凝血因子V基因Leiden 突变和凝血酶原基因G20210A突变与下肢深静脉血栓形成关系的探讨

    目的:探讨凝血因子V 基因G1691A突变(Leiden 突变)和凝血酶原基因G20210A突变与下肢深静脉血栓形成的关系.方法:采用PCR---RFLP技术对86例下肢深静脉血栓形成患者和100例正常对照的健康人群进行凝血因子 V 基因G1691A突变和凝血酶原基因G20210A突变检测.结果:86例下肢深静脉血栓形成患者和100例正常对照组中均未检出凝血因子V基因 G1691A突变和凝血酶原基因G20210A突变.结论:凝血因子V基因G1691A突变和凝血酶原基因G20210A突变可能不是中国汉族人群下肢深静脉血栓形成的主要风险因子.

    作者:郭辰虹;郭琼行;龚瑶琴;陈丙玺;常宏;周海斌 刊期: 2002年第03期

  • 大蒜素对小鼠巨噬细胞功能的影响

    隐孢子虫(cryptosporidium)是一种新发现的引起婴幼儿腹泻的重要病原体,在免疫功能低下或缺陷者更易致严重腹泻.近年来发现的病例日趋增多[1] ,国内试用大蒜素治疗该病效果较好[2].为了解大蒜素对隐孢子虫的作用机制,我们观察大蒜素对小白鼠巨噬细胞免疫吞噬功能的影响.

    作者:刘锦华;陈秀春;周世昌 刊期: 2002年第03期

  • 全膝关节置换术治疗膝关节骨性强直

    人工全膝关节置换术(total knee arthroplasty, TKA)是治疗晚期骨性关节炎、类风湿性关节炎等其他类型关节炎行之有效的方法,能有效地减轻患者的疼痛,极大地改善关节功能. 2001年2月,我们应用Zimmer公司的IB-ⅡLCCK (legacy○ R knee constrained condylar knee)型假体为1例膝关节强直的患者施行了全膝关节置换术,取得良好效果.

    作者:戴国锋;王韶进;刘琦;汤继文;王永惕;史东平 刊期: 2002年第03期

  • 腮腺粘液表皮样癌67例临床分析

    1970年9月~1991年12月,我科共收治腮腺低度分化粘液表皮样癌67例,所有病例均有病理诊断,进行回顾性分析,着重分析讨论了影响其预后的各种因素,现将该组病例的临床治疗情况和远期疗效报道如下.

    作者:王靖虓;李文峰 刊期: 2002年第03期

  • 血管内皮生长因子C mRNA在人乳腺癌细胞株中的表达

    目的:检测血管内皮生长因子C(VEGF-C) mRNA在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7中的定位、定量表达. 方法: 根据VEGF-C 基因序列,设计合成地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,运用原位杂交方法检测培养的细胞株MDA-MB-231及 MCF-7中VEGF-C mRNA 的定位表达;并运用半定量RT-PCR方法检测了两种细胞中VEGF-C相对于看家基因β-肌动蛋白(β-actin)的表达水平. 结果: 原位杂交检测到MDA-MB-231及 MCF-7细胞的胞浆中有阳性蓝色颗粒,而阴性对照细胞的胞浆中则均无阳性颗粒;半定量RT-PCR检测到两种细胞中VEGF-C基因均以较高水平表达,相对β-actin的表达水平分别为0.89和0.68. 结论: 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231及 MCF-7细胞能够以较高水平转录VEGF-C mRNA.

    作者:高杰;刘执玉;毕玉顺;田铧 刊期: 2002年第03期

  • 原发性颅底凹陷症平片、CT、CTM对照分析

    原发性颅底凹陷症是指枕骨大孔周围骨向颅内陷入的畸形,多表现为枕骨髁和斜坡向颅内陷入[1], 探讨该症的影像学特征和适宜的检查手段,对提高诊断和指导治疗很有价值.

    作者:胡令安;陈颉;卢春山;巩若箴 刊期: 2002年第03期

  • 儿童与成人烟雾病临床对照研究

    目的:对儿童与成人烟雾病患者进行临床特征的对照研究.方法:回顾儿童及成人烟雾病33例,并对其临床症状、影像学和随访资料等方面进行对照分析.结果:①儿童烟雾病患者临床表现以发热、抽搐和短暂性脑缺血发作(TIA)多见,成人患者则主要表现为头痛、偏瘫、意识障碍和颅神经受累;②儿童患者CT和磁共振(MRI)主要表现为脑梗塞(73.33%),成人患者以颅内出血多见(77.78%);③同数字减影(DSA)相比,磁共振血流成像(MRA)对血管的狭窄程度估计偏高,对儿童的高估率明显大于成人(P<0.05).MRA对异常血管网的发现率低,对成人的发现率明显低于儿童(P<0.05);④儿童烟雾病的后遗症以运动障碍多见,成人主要表现为运动及智力障碍和颅神经受累.结论:儿童与成人烟雾病在临床症状、影像学和后遗症方面存在一定的差异.

    作者:王艳玲;孙若鹏;王纪文;雷革非;李保敏;胡瑞梅;焉传祝 刊期: 2002年第03期

  • 改良式铸造烤瓷桥临床设计与应用

    金属烤瓷修复体以其美观、耐用、异物感小,已逐步被人们认可并被临床广泛选用,但切割牙体组织过多,制作工艺程序相对复杂,且价格偏高.自1999年以来,我们对要求行烤瓷修复,自愿配合的患者,有选择地采用了改良式铸造烤瓷桥修复,取得了良好的效果.

    作者:张德贵 刊期: 2002年第03期

  • 小气道病变与病理关系的探讨

    目的:探讨小气道病变与病理关系.方法:86例肺部局限性病变患者,依据术前的病史和肺功能分为3组.正常组30例,小气道病变组34例,慢性阻塞性肺疾病(COPD)组22例.利用手术的肺标本HE染色探讨其病理学特点并与临床资料比较.结果:小气道病变组炎性细胞浸润、平滑肌肥厚积分明显高于正常组;小气道病变组及COPD组气道粘膜层淋巴细胞数明显高于对照组;小气道病变组结缔组织增生、平滑肌肥厚积分与 50 、 25 显著负相关;COPD组炎性细胞浸润与FEV1.0及 50 显著负相关.结论:小气道病变病理改变主要为炎性细胞浸润及平滑肌肥厚,而炎性细胞以淋巴细胞为主;小气道病变功能异常与气道重建有关.

    作者:李玉;姜明;薛玉文;王玲;许仁和 刊期: 2002年第03期

山东大学学报(医学版)杂志

山东大学学报(医学版)杂志

主管:中华人民共和国教育部

主办:山东大学