学术投稿

嗜肺军团菌微滴式数字PCR检测方法的建立

于纪棉;李如松;倪健波;魏姣姣;高峰;王建峰

关键词:嗜肺军团菌, 微滴式数字PCR, 实时荧光定量PCR, 检测
摘要:目的 建立嗜肺军团菌微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)技术进行比较.方法 针对嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,验证其特异性后,用于ddPCR和qPCR.优化ddPCR的退火温度、引物、探针浓度后,比较ddPCR和qPCR灵敏度和重复性,并对模拟样品进行检测.结果 用5株非嗜肺军团菌测试特异性,结果表明具有良好的特异性.ddPCR与qPCR对DNA模板的检测限一致(42.6 fg),模拟样品检出限为300 cfu/ml,ddPCR的线性相关系数(0.999)略优于qPCR(0.982),ddPCR检测的RSD(0.78% ~ 14.06%)均高于qPCR(0.30%~1.98%).结论 微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于嗜肺军团菌检测,且可以对基因进行绝对定量.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 一种复方醋酸氯已定-乙醇消毒剂性能的研究

    目的 研究一种以醋酸氯己定和乙醇复配的消毒剂的消毒性能.方法 用理化测定方法、消毒性能检测方法,对该复方消毒剂的性能进行检测.结果 含醋酸氯己定600 mg/L、乙醇11.23%的复方消毒液作用2 min;含醋酸氯己定450 mg/L、乙醇8.43%的复方消毒液作用2 min;含醋酸氯己定780 mg/L、乙醇14.60%的复方消毒液作用2 min,分别对悬液内金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的杀灭对数值>5.00;含醋酸氯己定780 mg/L、乙醇14.60%的复方消毒液作用1 min,对悬液内白色念珠菌的杀灭对数值>4.00.消毒剂原液作用1 min对手和皮肤的自然菌杀灭对数值> 1.00.结论 该复方消毒剂储存性能稳定,原液和一定浓度的稀释液均对指标菌的细菌繁殖体和真菌有较好的杀菌作用,对皮肤和手上自然菌的杀菌效果均可以达到标准的要求.

    作者:王嵬;孙巍;王玲;吴晓松;王晓蕾;张伟 刊期: 2017年第09期

  • 不同来源熟肉制品肠杆菌科细菌污染情况分析

    目的 对不同来源熟肉制品肠杆菌科细菌污染情况进行调查分析,为预防和控制食源性疾病暴发和流行提供科学依据.方法 依据GB 4789.4-2010、GB 4789.38-2012和SN/T 0738-1997标准检测不同来源熟肉制品肠杆菌科细菌.结果 检测样品160份,合格69份,合格率为43.1%,共检出肠杆菌科细菌133株,居前2位的分别为肺炎克雷伯菌肺炎亚种和大肠埃希菌.定型包装合格率高于散装,网络食品和超市合格率高于农贸市场和零售店,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 本市熟肉制品被肠杆菌科细菌污染的程度较为严重,监督部门应加强熟肉制品在各个环节的监管力度,规范熟肉制品加工制作卫生行为,减少食源性疾病的发生,从而保障本市人民的饮食卫生和生命安全.

    作者:李毅;胡玉琴;洪程基;谢爱蓉;上官智慧 刊期: 2017年第09期

  • 全麻联合硬膜外阻滞镇痛法对原位肝癌切除术后细胞免疫功能和肿瘤指标的影响

    目的 探讨全麻联合硬膜外阻滞镇痛法对原位肝癌切除术后细胞免疫功能和肿瘤预后的影响.方法 选择2015年3月-2016年3月在本院行肝癌切除术的患者60例,根据患者麻醉方式不同分为观察组和对照组,观察组患者采用全麻联合硬膜外阻滞镇痛,对照组患者采用静脉镇痛,对比2组患者术后细胞免疫功能、疼痛指标及肿瘤指标的情况.结果 2组患者术后6h、12 h、24h、48 h时机械痛阈值均较术前降低,观察组术后各时间点机械痛阈值均较对照组升高.术后对照组Th17、Treg细胞、Th17/Treg细胞含量差异无统计学意义(P>0.05),术后观察组Th17、Th1 7/Treg低于对照组患者,Treg含量高于对照组;术后观察组患者AFP、CA125、CA19-9、CEA低于对照组患者,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 全麻联合硬膜外阻滞有助于降低肝癌患者机械痛阈、调节免疫功能、降低肿瘤指标,值得临床推广.

    作者:陈永浩;李红 刊期: 2017年第09期

  • 肺癌患者化疗后肺部感染病原菌及耐药分析

    目的 探讨肺癌患者化疗后肺部感染病原菌的分布和耐药性情况.方法 回顾性分析2014年1月-2016年6月,焦作市第二人民医院161例肺癌化疗后肺部感染患者的临床资料和微生物检查报告,利用SPSS 11.0软件进行统计学分析.结果 肺癌化疗后肺部感染患者分离出病原菌211株.其中革兰阴性杆菌共118株,占比55.93%,以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌为主;真菌共48株,占比22.75%,以白色念珠菌和热带念珠菌为主;革兰阳性菌共45株,占比21.32%,以凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为主.结论 肺癌患者化疗后肺部感染病原菌以革兰阴性菌和真菌为主,病原菌对临床常用抗菌药物耐药率较高,临床应根据药敏结果合理选用抗菌药物.

    作者:杨桂强;刘文超;刘滋润 刊期: 2017年第09期

  • 气相色谱-质谱法测定瓜蒌中的70种农药残留

    目的 采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术和QuEChERS结合固相萃取(SPE)前处理技术,建立瓜蒌中有机氯类、有机磷类、拟除虫菊酯类和氨基甲酸酯类等70种农药残留的检测方法.方法 样品采用QuEChERS方法提取并简单净化,经SPE固相萃取柱进一步净化,由HP-5 MS毛细管柱(30m×0.25mm,0.25 μm)分离,以三重四级杆串联质谱仪检测,选择多反应监测(MRM)模式,内标法定量.结果 70种农药的线性范围为5μg/L~ 200 μg/L,相关系数>0.995,方法的检出限为0.01 μg/kg ~ 2.00 μg/kg,定量限为0.05μg/kg ~5.00 μg/kg.70种农药的平均回收率为74.2% ~ 106.7%,相对标准偏差(RSD)为0.6% ~4.6%.结论 该方法稳定、可靠、样品处理简单、分析时间短、灵敏度和准确性好,可满足瓜蒌中多种农药的同时分析,适用于中药材中农药残留的快速筛查.

    作者:林林;刘广桢;穆向荣;林永强 刊期: 2017年第09期

  • 胎膜早破孕妇阴道病原菌感染与耐药性探讨

    目的 通过对胎膜早破孕妇患者阴道病原菌感染以及耐药性分析,为临床上合理性用药以及控制感染提供理论依据.方法 回顾性分析5 138例胎膜早破孕妇患者的所有临床资料,进行常规性菌群与支原体培养以及衣原体的分析.结果 5 138例胎膜早破孕妇患者中检出阳性1 734例(易感率为33.7%);病原学阳性结果支原体培养为1 283例(占25.0%),衣原体测定为143例(占2.8%),细菌为941株(占18.3%),常见病原菌主要是革兰阴性菌329株(占35.0%),以大肠埃希菌为主;革兰阳性菌358株(占38.0%),以β-溶血性链球菌、肠球菌、溶血性葡萄球菌等为主;真菌254株(占27.0%),以白色念珠菌为主.常见的支原体、病原菌耐药性均较高.结论 因胎膜早破孕妇患者常见的病原菌耐药性均较高,临床应依据药敏试验结果合理性用药.

    作者:李刚;王振勇;杨胜 刊期: 2017年第09期

  • 宁波市食源性腹泻患者中3种相关病毒的检测与分型

    目的 了解腹泻患者中食源性相关病毒感染情况与流行特征,为防控病毒性胃肠炎提供依据.方法 采集2 129份食源性腹泻患者粪便标本,用实时荧光定量PCR法检测轮状病毒、诺如病毒和甲型肝炎病毒核酸;用NSP4和VP1基因对轮状病毒和诺如病毒流行株分别测序.结果 检出轮状病毒核酸52份,阳性率为2.44%,以A组感染为主;检出诺如病毒核酸113份,阳性率为5.31%,以Ⅱ型为主.VP1基因将诺如病毒分为GⅠ.2、GⅡ.6和GⅡ.17 3个型;A组轮状病毒均带NSP4毒力基因.全年均可检出病毒,秋冬季是发病高峰;全人群均可检出,5岁~及其以下年龄组的阳性率高于18岁~年龄组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 检测发现A组轮状病毒和GⅡ.17型诺如病毒是本市病毒性胃肠炎主要流行病原.病原感染途径多样、带毒者多、人群普遍易感、全年均可检出,本市人群随时有暴发疫情的可能.应加强关注,强化检测,以减少疾病的流行.

    作者:叶硕;周伟艳;高红;倪红霞;谢蕾;徐景野 刊期: 2017年第09期

  • 2011年-2015年宁波市烧伤儿童创面感染病原菌分布特点及耐药性分析

    目的 了解宁波市妇女儿童医院烧伤儿童创面分泌物病原菌的临床分布和耐药情况,为临床合理用药提供依据.方法 对本院2011年-2015年儿科烧伤病房送检的创面分泌物进行分离培养及药敏试验,菌株鉴定采用VITEK2 Compact全自动微生物分析仪,药敏试验采用MIC法,用参考菌株做质量控制.结果 共分离病原菌673株,其中革兰阳性菌占79.5%,以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和人型葡萄球菌为主;革兰阴性菌占20.1%,以铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌为主;真菌占0.4%.药敏结果显示,分离的病原菌部分呈多重耐药.结论 对本院烧伤患儿创面进行病原菌培养、鉴定及相应的药敏分析有助于指导临床合理使用抗菌药物,有效控制感染.

    作者:马巧红;陈群英;何娟妃;胡莹 刊期: 2017年第09期

  • 自然妊娠与辅助生殖术后妊娠胚胎停育患者绒毛细胞染色体比较分析

    目的 对自然妊娠与辅助生殖技术(ART)术后妊娠胚胎停育患者绒毛细胞染色体进行研究,分析自然妊娠与ART术后妊娠绒毛细胞染色体异常率,并通过二者之间的比较,从遗传学角度来验证ART手术是否安全.方法 通过搜集患者绒毛组织,按照常规方法制备染色体涂片,通过G显带法进行染色体核型分析,并应用SPSS 13.0软件进行统计分析,比较2组间绒毛细胞染色体异常率的差异.结果 异常核型共计145例,异常核型检出率为56.20%(145/258),以常染色体三倍体为主.自然流产绒毛细胞正常核型为63例,异常核型为73例,异常率为53.67%(73/136).ART组正常核型为50例,异常核型为72例,异常率为59.01%(72/122).自然流产组与ART组绒毛染色体异常率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 早期胚胎停育与胚胎染色体异常密切相关,自然妊娠与ART术后妊娠绒毛细胞染色体异常率无显著差异.

    作者:陈新科;周建伟;张昭才;常虹;郭焕;颜金艳 刊期: 2017年第09期

  • 呼吸道感染儿童肺炎支原体抗体检测结果分析

    目的 了解呼吸道感染儿童中肺炎支原体(MP)感染情况,为临床早期诊断和治疗提供可靠依据.方法 采用胶体金法检测2 428例患儿血清中MP-IgM抗体,同时做其他相关实验室检查.结果 2 428例儿童的血清标本中检出MP-IgM抗体阳性535例,阳性率为22.03%,其中男童阳性率为21.05%,女童阳性率为23.19%,男女患儿之间阳性率差异无统计学意义(x2=3.84,P >0.05).四季均可检出呼吸道感染患儿MP-IgM抗体,其中冬季阳性率高(28.07%),秋季次之(24.92%).随着年龄的增长阳性率呈逐渐上升趋势,7岁~14岁儿童阳性率高(36.96%).结论 胶体金法检测血清MP-IgM抗体操作简单,具有较高的敏感性和特异性,与血常规等联合检测有利于MP的早期诊断,本地区学龄前及学龄儿童为高危人群,临床应加强对MP的监控.

    作者:石月萍 刊期: 2017年第09期

  • 微波消解-原子吸收法测定辣条中铅的含量

    目的 了解济宁市市售辣条中重金属铅的含量,评估其污染状况,为保障食品安全提供科学依据.方法 对济宁市市售辣条随机抽取50份样本,采用微波消解法处理样品,石墨炉原子吸收分光光度法测定样品中铅的含量,并对消解试剂和基体改进剂进行了选择和优化.结果 在优化实验条件下,吸光度与浓度呈良好的线性关系(r =0.994),加标回收率为92.26%~ 97.41%,相对标准偏差(RSD)为3.54%,用该方法检测样品,重金属铅均有检出,检出率为100%.检测结果参照GB 2762-2012《食品中污染物限量》中规定的豆类制品铅的含量应≤0.5 mg/kg,50份检测样品的总合格率为88%.结论 该方法样品处理效率高、简单、快速、准确,可用于辣条中铅的测定.辣条样品中铅都有检出,说明有不同程度的积累,由于铅在体内具有蓄积性,相关部门应引起足够的重视.

    作者:程晓平;董方;赵艳霞;张建萍;郭建丽 刊期: 2017年第09期

  • 冠心病合并妇科恶性肿瘤患者胃饥饿素/肥胖抑制素比值变化及意义

    目的 探讨冠心病合并妇科恶性肿瘤患者胃饥饿素(Ghrelin)/肥胖抑制素(obestatin)比值变化及临床意义.方法 收集女性冠心病和妇科恶性肿瘤患者211例作为研究对象,根据检查结果分为冠心病肿瘤组(n=42)、单纯肿瘤组(n=55)、单纯冠心病组(n=64)及对照组(n=50).采用ELISA法测定血清胃饥饿素、肥胖抑制素水平.根据冠状动脉造影结果采用Gensini积分评估冠状动脉病变程度.结果 冠心病肿瘤组、单纯肿瘤组和单纯冠心病组患者的Ghre-lin/obestatin比值显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).冠心病肿瘤组患者的Ghrelin/obestatin比值与Gensini积分呈负相关(r=-0.55,P <0.05).结论 冠心病合并妇科恶性肿瘤患者的Ghrelin/obestatin比值与冠状动脉病变程度密切相关.Ghrelin/obestatin比值在预测冠心病合并妇科恶性肿瘤中有一定的辅助参考价值.

    作者:张波;黄伟萍;王世俊 刊期: 2017年第09期

  • 杭州市7个景区泉水元素测定及水质分析

    目的 通过研究杭州市7个景区泉水的感官指标、溶解性总固体、酸碱度以及微量元素含量,了解目前杭州市区泉水水质的现状.方法 以杭州市区居民日常取水人次较多的景区泉水点为分析对象,共7处采集点,测定各泉水TDS值及pH值,采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)进行16种元素含量的分析,根据GB 5749-2006《生活饮用水卫生标准》对泉水水质安全进行评估.结果 杭州市7个不同景区居民日常饮用泉水的TDS值符合限值标准,pH值低于规定限值,部分水样Mn、Bi、Al、Hg元素超出限值.结论 杭州市7个景区泉水均含有丰富的矿物元素,2处泉水点符合生活饮用水限量标准,5处泉水点有毒元素超出标准限量规定,不建议直接饮用超标地区的泉水.

    作者:李兆翌;盛振华;林冰倩;葛尔宁 刊期: 2017年第09期

  • 全州县2008年-2015年伤寒、副伤寒监测结果分析

    目的 全面掌握全州县伤寒、副伤寒的发病情况及流行特征,为制定防治策略和措施提供科学依据.方法 在全州县建立伤寒、副伤寒监测系统,采集就诊发热患者和疑似患者血液标本、疫点水(定点水)水样以及饮食从业人员和随访患者粪便标本进行检测.结果 采集发热患者血液标本12 307份,共检出伤寒、副伤寒574例,发病率占4.66%;男性略多于女性,性别比为1.12∶1;20岁~49岁以下占50.87%,以少年儿童和青壮年阳性者多;发病高峰在6月-10月,占总发病数的59.06%;发病数前5名的乡镇均为交通便利的地方,占总发病数的76.48%;发病人群以农民和学生为主,分别占53.14%和24.56%;饮食从业人员、随访患者和水样均未检出阳性.结论 通过积极的防控措施,近4年全州县伤寒、副伤寒发病率下降明显.

    作者:蒋叶伟;蒋艳凤;姚崔华;蒋园园 刊期: 2017年第09期

  • 水样总放射性测量比对结果分析

    目的 确保生活饮用水总α和总β放射性测量结果的准确度,提升实验室检验能力,减少各种因素造成的结果误差.方法 依据国家标准对水样进行总放射性水平分析.结果 2014年总α和总β放射性测量值的标准偏差均<10%,其中总α放射性测量值的标准偏差为9.30%,高于总β放射性测量值的标准偏差3.28%,比对考核结果优秀.2009年、2010年、2014年、2016年比对测量结果中总β放射性测量值的标准偏差均<15%,2009年、2010年总α放射性测量值的标准偏差均>20%.结论 水样总放射性检测过程中,应重视每一个环节的质量控制,确保检测结果的准确性.通过实验室比对,发现实验室水样总放射性测量过程中存在的问题,提升实验室人员检验能力.

    作者:王延俊;罗伟立;邬家龙;孙卫;王赟;王芳 刊期: 2017年第09期

  • 昆山地区儿童呼吸道病原体感染的病原学与临床特征分析

    目的 了解昆山地区儿童呼吸道病原体感染的流行特点及其分布情况.方法 采用间接免疫荧光法对该院2015年10月1日-2016年9月30日1 894例因呼吸道病原体感染入院患儿的血清标本,进行嗜肺军团菌(LP)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次氏体(COX)、肺炎衣原体(CPn)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFA)、乙型流感病毒(IFB)、副流感病毒1型、2型和3型(PIV)检测,了解患儿呼吸道病原体感染的分布情况.结果 1 894份标本中,共检出病原体阳性1 086例,主要为MP(720例)、IFB(104例)、PIV(450例),检出混合感染阳性标本232例,主要是MP混合IFB感染(61例)、MP混合PIV感染(81例);1岁~3岁患儿平均阳性率高,以MP和PIV阳性率高;MP检出的阳性率在冬季(11月、12月、1月)高.临床诊断主要以支气管肺炎(953例)、发热(442例)为主.结论 昆山地区儿童呼吸道感染的主要病原体为MP、PIV和IFB,其发病率与季节、年龄相关.

    作者:何敖林;何大伟;李莎莎;刘媛媛;朱一帆;王华 刊期: 2017年第09期

  • 一种超薄切片定位捞片技术的建立与应用

    目的 建立针对目标超薄切片的精准展片、捞片方法,以提高透射电子显微镜检测超薄切片的效率.方法 以环氧树脂PON-812、丙烯酸树脂L R White 2种不同类型树脂包埋病毒感染的培养细胞及动物组织样本并进行超薄切片.用定位环套取漂浮在刀槽液面上的目标切片,以限制切片移动,以四氯甲烷气体展片,再以捞片环捞取目标切片,后对切片进行染色及透射电镜观察.结果 通过建立的定位捞片法能够对目标切片进行靶向性隔离、展片,实现超薄切片的靶向性精准捞片.结论 建立了一种针对目标超薄切片进行精准定位捞片的方法.

    作者:佟大伟;王广超;屈建国;洪涛;宋敬东 刊期: 2017年第09期

  • 基于铅诱导核酸适体133DNA链构象转变的铅和氡累积辐射非标记荧光传感检测新方法

    目的 应用核酸适体133DNA和N-甲基中卟啉IX (NMM),建立铅离子和放射性惰性气体氡的非标记荧光传感分析新方法.方法 以核酸适体133DNA为识别探针,以N-甲基中卟啉IX(NMM)为荧光信使,采集氡辐射稳定的子体铅;用Pb“离子诱导单链133DNA发生构象转变,形成稳定的G-四链体.G-四链体与NMM键合,导致体系荧光信号敏锐变化,灵敏检测铅和氡.结果 Pb2离子浓度cPb为5.0 nmol/L~90 nmol/L时,荧光强度改变量(△F)与Pb2离子浓度之间呈现良好的线性关系,△F=1.80cPb (nmol/L)-2.07,r =0.990 9;氡累积浓度cRn为2.O×104 Bq·h/m3~12.0×104 Bq ·h/m3时,△F值与氡累积浓度之间的数学定量模型为△F=7.71cRn+3.00,r =0.996 5.新方法对铅的检出限为1.67 nmol/L,对氡的检出限为1.19×103 Bq·h/m3,低于中国国家标准方法中氡的累积测量的检出限(2.1×103Bq ·h/m3).结论 本方法可以灵敏检测铅和氡,K+离子等干扰小.在氡的采样和检测过程中,避免了辐射危害;氡样品可直接测定,操作简单,成本低廉,拓展了核酸适体对放射性物质和气体的核酸适体荧光传感检测新领域.

    作者:宋春丽;田刚;刘红文;李诗雅;杨桂英;吕昌银 刊期: 2017年第09期

  • 12例烧烫伤患者耐碳青霉烯类黏质沙雷菌耐药机制及同源性分析

    目的 分析耐碳青霉烯类黏质沙雷菌(CRSM)的耐药机制及同源性,为临床合理用药提供依据.方法 收集2014年-2015年烧伤病区CRSM菌株12株,分析其耐药机制及同源性.结果 菌株对青霉素类、头孢菌素类和氨基糖苷类耐药率为100%,氟喹诺酮类和复方磺胺甲恶唑敏感率为100%,哌拉西林/他唑巴坦敏感率为91.7%;碳青霉烯类耐药率为91.7%;10株改良三维试验和改良Hodge试验阳性;11株Cuba NP试验阳性;8株3-氨基苯硼酸试验阳性;2株EDTA抑制试验阳性;PCR显示9株携带blaKPC-2;2株携带blaIMP-1;未发现有合产碳青霉烯酶;PFGE显示有4株菌株为同一克隆株.结论 本院烧伤病区患者分离的CRSM耐药机制以携带blaKPC-2为主,并同时产ESBLs和AmpC酶;其次是携带blatMP-1;有4株为同源株;应引起临床和实验室的重视.

    作者:王菊梅;张洪球;张元海;陆军 刊期: 2017年第09期

  • 离子液体萃取生活饮用水中挥发酚的分析方法研究

    目的 建立用离子液体萃取分光光度法测定生活饮用水中挥发酚的分析方法.方法 在pH=10.0±0.2和氧化剂铁氰化钾存在的溶液中,酚与4-氨基安替吡啉生成红色的安替吡啉染料,用离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐代替氯仿萃取后,在波长470 nm处比色定量.结果 本法具有较高的灵敏度,方法检出限为0.0012 mg/L,挥发酚的浓度在0.002 mg/L ~0.04 mg/L时,线性关系良好(相关系数为0.999 9).相对标准偏差(RSD)均≤4.94%,样品加标回收率为94.0%~102.5%.结论 该方法环境污染小,操作简便快速、重现性好、准确度高、线性范围宽,适用于生活饮用水中挥发酚的测定,值得推广应用.

    作者:陈惠珠;宣栋樑;王舵;蔡嵘 刊期: 2017年第09期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会