学术投稿

实时定量PCR和ELISA检测支原体感染在儿童肺炎诊断中的应用

张磊;郭桂林;张如;赵舒;刘晨风;周育森

关键词:支原体, 酶联免疫吸附反应, 荧光定量聚合酶链反应, 呼吸道感染
摘要:目的 对比分析荧光实时定量PCR技术和ELISA技术在检测支原体肺炎中的可靠性和优劣性,探讨更加准确、快速的检测方法.方法 收集本院儿科治疗的呼吸道感染患者446例,根据年龄将患者分组.收集患者咽拭子用于实时定量PCR检测肺炎支原体DNA(MP-DNA),收集血液用于酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肺炎支原体抗体(MP-IgM).结果 实时定量PCR技术检测MP-DNA总阳性率为37.00%,其中各年龄段阳性率分别为39.44%、37.31%、35.11%、28.95%,阳性检测率随年龄增加而降低;ELISA方法检测MP-IgM总阳性率为37.44%,其中各年龄段阳性率分别为18.89%、46.27%、50.00%、63.16%,阳性检测率随年龄增加而增加(P<0.05),PCR方法婴儿组患者检出率明显高于血清ELISA方法.结论 2种方法检测MP阳性率差异无统计学意义,但实时定量PCR法在1岁以下的阳性检出率更高(P<0.05),2种检测方法联合应用可更好地指导临床治疗.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 常用凝血指标对慢乙肝肝纤维化的诊断价值

    目的 研究常用凝血指标对慢乙肝患者是否发生肝纤维化病变的诊断价值.方法 回顾性分析肝纤维化病变程度在S0期~S4期的453例慢乙肝患者,依据肝穿病检结果分为无纤维化组(S0期~S1期)和纤维化组(S2期~S4期),分析组间PT、APTT、TT、Fbg、PLT水平的差异.应用二元Loigstic回归和ROC曲线分析有意义项目对肝纤维化病变的诊断价值.结果 纤维化组PT、APTT、TT水平比无纤维化组高,PLT水平则降低;Fbg的水平无差异(P>0.05).联合PLT、PT、APTT、TT计算预测值的回归方程为:Pre=1/[1+e(-0.815-0.012PLT+0.238PT+0.022APTT+0.041TT)],其对肝纤维化病变预测的总体准确性为74.4%;经ROC曲线分析PLT、PT、APTT、TT、预测值诊断肝纤维化的曲线下面积分别是0.706、0.619、0.581、0.575、0.723(均为P<0.05).大Youden指数时对应的灵敏度、特异度分别是:PLT(56.6%,75.2%);PT(35.7%,84.0%);APTT(48.6%,64.0%);TT(44.0%,72.0%);预测值(68.9%,68.8%).结论 常用凝血指标PLT、PT、APTT、TT对慢乙肝患者是否发生肝纤维化病变具有一定的诊断意义,PT的诊断特异度高,联合应用则诊断价值更高.

    作者:安宏亮;江海燕;伍华林;钟幸容;陈胜男 刊期: 2014年第13期

  • 锦州市2012年-2013年男性性病门诊就诊者哨点监测报告

    目的 了解性病门诊男性就诊者艾滋病相关知识、危险行为和HIV、丙肝、性传播疾病的感染状况.方法 依照《全国艾滋病哨点监测方案》,对性病门诊男性就诊者进行问卷调查和血清学检测.结果 2012年-2013年共监测性病门诊男性就诊者800人,HIV抗体阳性者6例,HIV抗体阳性率为0.75%;梅毒抗体阳性者234例,梅毒感染率为29.25%、丙肝抗体阳性者5例,丙肝感染率为0.63%;性病以梅毒、生殖器泡疹的构成较高,分别占69.85%、18.81%.结论 性病门诊就诊者中HIV感染率仍维持在较低的水平,但性病患病率高,提示应及时采取有效的干预措施,控制艾滋病在性病病人中的蔓延扩散.

    作者:田晶;张旭;白梅;张丽华 刊期: 2014年第13期

  • 圆盘式超快速荧光定量PCR检测梅毒螺旋体的方法研究

    目的 建立一种反应时间大幅度缩短、操作简单的超快速实时荧光定量PCR检测梅毒螺旋体的方法.方法 根据探针实时荧光PCR技术的测定原理,用梅毒螺旋体脂蛋白(TPP17)的特异基因作为靶序列,设计合成其引物和探针,通过PCR特异性、灵敏度和重复性研究,建立圆盘式超快速荧光定量PCR检测梅毒螺旋体的方法,用于梅毒的筛选和诊断.结果 本法的特异性为100%;低可检出10个拷贝的质粒DNA分子;该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果CV值均<5%.结论 本法的建立有助于梅毒的快速诊断,对于血液中梅毒螺旋体增殖能力判断具有重大潜在应用价值.

    作者:张慧嫦;吴忠华;龚晗英;冯长访;郑伟 刊期: 2014年第13期

  • 拉曼散射光谱快速鉴别替硝唑葡萄糖注射液

    目的 本文采用拉曼光谱分析技术,对替硝唑葡萄糖注射液进行拉曼光谱扫描,采用模式识别技术,建立样品的快速鉴别模型.方法 采用拉曼散射光谱法,激发波长785 nm,激光强度和积分时间根据样品的特性进行调整,对收集的替硝唑葡萄糖注射液样品进行拉曼光谱扫描,以替硝唑、葡萄糖为两个主成分,选择特征谱段,建立化学计量学模型:谱段为970 cm-1~1140 cm-1与1160 cm-1~ 1580 cm-1;光谱预处理方法为矢量归一与一阶导数(30点平滑);采用主成分光谱和主成分参考光谱的相关系数进行计算;阈值为0.95,同时验证模型的准确性.结果 所建立的鉴别模型对验证集中的样品能够作出准确无误的判别.结论 通过验证试验表明,模型结果准确可靠,所建方法准确有效,可用于替硝唑葡萄糖注射液的快速鉴别,适用于市场监督抽样.

    作者:王春红 刊期: 2014年第13期

  • Mini-MPN法在食品沙门菌快速检测中的应用

    目的 为了探索一种与传统定量方法比较,更具有实用性和准确性的沙门菌定量检测方法.方法 通过对牡丹江市400份肉鸡生产销售环节的样品进行沙门菌定性和定量检测,分析比较了MPN法和Mini-MPN法对沙门菌检测率的影响.结果 Mini-MPN法共检出49份试样呈阳性,比MPN法多检出9份,阳性率为12.3%,比MPN法提高了2.3个百分点.用2个方法检测MPN值>3.8 MPN/g的试样均为9份,而用Mini-MPN法检测MPN值在0.3 MPN/g~3.8 MPN/g的试样为40份,比用MPN法多9份.结论 与传统MPN法相比,Mini-MPN法在沙门菌定量检测中具有灵敏度高、耗时短、工作量小、成本低等优良的特性.

    作者:吕昌武;吴双志;褚杨硕;冯春艳;沙丽娜;裘静霞 刊期: 2014年第13期

  • 高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法同时测定门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量

    目的 建立高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法同时测定门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量.方法 采用CarboPacTM PA20阴离子分离柱(3mm×250m m)和PA20保护柱(3mm×50 mm);以去离子水为淋洗液A、200 mmol/L的氢氧化钠溶液为淋洗液B、1 mol/L的醋酸钠为淋洗液C,进行梯度洗脱,流速为0.5 ml/min;积分脉冲安培检测器(金工作电极、pH-Ag/Agcl参比电极);检测器温度30℃;柱温30℃,进样量25μl.结果 葡萄糖和门冬氨酸两种成分线性范围分别为0.7952μg/ml ~ 25.4470 μg/ml(r=0.9996)和0.1122 μg/ml ~7.1808μg/ml (r =0.9998);葡萄糖和门冬氨酸两种成分高、中、低3种浓度的回收率分别在98.77%~100.14%之间和98.15%~100.05%之间,相对标准偏差分别为0.6%(n=9)和0.5%(n=9).结论 该法操作简便、专属性强、门冬氨酸和葡萄糖的分离效果好,可用于门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量测定.

    作者:张军霞;仲平 刊期: 2014年第13期

  • 化工原材料中挥发性有机物的GC-MS定性研究

    目的 建立利用顶空-气相色谱-质谱联用仪联用技术对化工原材料中30个挥发性有机物组分定性分析的方法.方法 利用静态顶空原理,化工原材料中可挥发的有机组分在一定的温度下达到气-液或气-固两相平衡后,取一定量的顶部气体进样,以HP-5MS毛细管柱为分离柱,在气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)的质谱全扫描模式下检测并进行定性.结果 各组分都能完全分离,利用质谱鉴定分离得出来的分子离子、碎片离子和保留时间等相关信息,建立化工原材料中30个挥发性有机物组分的GC/MS指纹图谱鉴定参数表,被测样品中挥发性有机物分离峰根据其保留时间和特征离子进行准确定性.结论 该方法准确度高、操作简单,能快速地对化工原材料中的挥发性有机物进行定性,对职业化学中毒及工作场所日常监测起快速鉴定作用.

    作者:梁素丹 刊期: 2014年第13期

  • HIV/AIDS患者合并其他病原体感染情况分析

    目的 研究关爱家园HIV/AIDS患者合并其他病原体感染情况分析及多重感染对HIV/AIDS的影响,为HIV/AIDS防控和综合治疗提供科学依据.方法 采用ELSIA法检测丙肝抗体(抗-HCV)、EB病毒抗体(EBAb)、科萨奇病毒抗体(CoxAb);TORCH采用胶体金法进行检测;用流式细胞仪检测HIV感染者全血中的CD4/CD8细胞,检测结果分组,组间采用卡方检验.结果 321例HIV阳性患者单纯合并乙肝病毒(HBV)感染37例(11.53%);单纯合并丙肝病毒(HCV)感染8例(2.49%);单纯合并梅毒螺旋体(TP)感染107例(33.33%);单纯合并巨细胞病毒(CMV)感染4例(1.25%).结论 HIV阳性患者容易合并多种病原体感染,尤其以梅毒螺旋体感染常见.

    作者:潘熠健;朱明利;潘克女;余道军;张永乐 刊期: 2014年第13期

  • 鸡血藤水提取物的体内抗coxsackievirus B3病毒作用

    目的 揭示鸡血藤水提取物(A.E.)的抗coxsackievirus B3(CVB3)病毒的作用.方法 采用BALB/c小鼠经腹腔注射感染CoxsackieB3病毒造成小鼠心肌炎模型,观察心指数、死亡率和病理切片.并通过RT-PCR比较鸡血藤水提取物在BALB/c小鼠体内抑制Coxsackie B3病毒的mRNA表达的效果.结果 显示A.E.在小鼠体内具有明显的抗病毒作用.每日灌注A.E.能够明显降低病毒感染小鼠的死亡率、心指数和心脏病理切片坏死和浸润的程度.而且A.E.还能显著的降低CVB3病毒mRNA的表达.结论 表明鸡血藤值得进一步研究以发现更多能够治疗肠道病毒感染的潜在成分.

    作者:庞佶;郭金鹏;金敏;谌志强;王新为;李君文 刊期: 2014年第13期

  • 2012年某地区种植大米重金属污染状况

    目的 了解某地产大米重金属污染情况.方法 采集某市所辖12个县65个乡镇农户家自产大米样品318份,按照国家标准GB/T5009.11-2003GB/T5009.12-2003,GB/T5009.15-2003,GB/T5009.17-2003方法进行检测.结果 某地产大米合格率87.74%,8个县检出镉超标大米,镉超标率10.38%,高检出值为1.18 mg/kg,6份大米镉检出值超过1.00 mg/kg;有4个县大米中总汞超标,总汞超标率1.57%,高检出值0.3 mg/kg.结论 某地大米存在一定程度的重金属污染,特别是镉污染较为严重,应加强本地区大米重金属的监测工作.

    作者:秦友燕;何柳莹;蔡江帆;方芳;何艳红 刊期: 2014年第13期

  • 动态涂层毛细管电泳法检测不同种类溶菌酶含量

    目的 采用动态涂层毛细管电泳法测定不同种类溶菌酶含量.方法 通过均相反应合成季铵化纤维素(QC),运用500 μg/ml QC对毛细管涂层以抑制溶菌酶吸附,并对不同种类溶菌酶进行分离检测.结果 QC有效抑制毛细管内壁对溶菌酶的吸附,显著改善蛋白质的分离效果,同时实现对人和鸡溶菌酶的定量检测.鸡溶菌酶线性相关系数r为0.991,检出限和定量限为0.022 mg/ml和0.073 mg/ml.人溶菌酶线性相关系数r为0.995,检出限和定量限为0.016 mg/ml和0.053 mg/ml.鸡溶菌酶平均加标回收率为90.4%(RSD =5.2%),人溶菌酶平均加标回收率为92.7%(RSD =4.3%).3个浓度水平溶菌酶含量测定的日内精密度RSD(%)为2.7% ~6.5%,日间精密度RSD(%)为3.9%~7.0%.实际样品分析对溶菌酶含片和人泪液中溶菌酶种类和含量进行了测定.结论 该方法适合生物、医药制剂等样本中溶菌酶的检测.

    作者:赵凌国;丘汾;李可;周海涛;梁肇海;谢欢 刊期: 2014年第13期

  • GP73在肝癌中的诊断价值

    目的 探讨高尔基体蛋白73(GP73)和甲胎蛋白(AFP)在肝癌中的诊断价值.方法 本实验共收集199例血清,其中肝恶性肿瘤患者83例,肝硬化患者40例,肝炎患者36例,健康体检者40例.采用酶联免疫法检测血清样品中GP73的浓度,应用电化学发光免疫法测定血清标本中AFP的含量.结果 GP73临界值取112.5 ng/ml时,诊断HCC的灵敏度和特异度达到佳,分别为83.13%和77.58%,ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.825;AFP临界值取10 ng/ml时,诊断HCC的灵敏度和特异度分别为75.90%和70.69%,AUC为0.756.两者联合检测时敏感性可达91.57%.结论 GP73可作为一项较好的肝癌诊断指标,与AFP联合检测,可提高肝癌诊断的敏感性.

    作者:陈素云;倪英玲;李俊;沈波;吴春龙;赵志新 刊期: 2014年第13期

  • 牡丹花的亚慢性毒性研究

    目的 通过90d大鼠喂养实验,了解牡丹花的亚慢性毒性,并对其安全性做出评价.方法 试验设3个试验组、1个阴性对照组.每日灌胃.单笼饲养,每天观察并记录动物的一般表现,中毒表现和死亡情况.每周记录1次体重和2次食物摄入量,计算每周及总的食物利用率.连续灌胃90d,每周记录体重及摄食量,灌胃结束后,做血液学、病理学等检查.结果 大鼠90d喂养试验:临床检查、血液细胞学检查、血液生化学检查、脏器称量结果表明各检验项目的实验组与对照组比较,差异不显著.组织病理学检查结果表明对照组和高剂量实验组雌、雄性大鼠的肝、肾、胃、肠、脾、睾丸、卵巢均未见与试验用样品有关的组织病理学改变.结论 通过各项指标的观察,未见实验样品对雌雄大鼠有明显毒性作用.

    作者:谢韬;范文今;杨鸿武 刊期: 2014年第13期

  • 浙江省首次发现ST20型NDM-1鲍曼不动杆菌

    目的 对浙江省不同地区上送的分离株进行NDM-1基因筛检,以了解NDM-1基因携带菌存在现状.方法 应用定量PCR及PCR分别对菌株进行NDM-1基因筛检、MLST分型及其他耐药基因检测;使用VITEK 2仪器测试MIC耐药表型;运用改良Hodge实验及EDTA-增强协同确认试验检测碳青霉烯酶表型.结果 经对1 617株菌筛检,仅从1株ST20型鲍曼不动杆菌中检出NDM-1基因.该菌对Amikaci、Gentamicin、Tobramycin、Trimethoprim/Sulfa敏感,而对其他15种药物均显示耐药,另携带OXA-23、SPM,CARB,TEM,aadA1,AmpC,aphA1,OXA-51耐药基因.结论 浙江省首次检出NDM-1鲍曼不动杆菌,提示应加强该类菌株的监测检测力度.

    作者:朱水荣;潘军航;魏兰芬;梅玲玲;张云怡;张政 刊期: 2014年第13期

  • 上海市浦东新区弯曲菌流行状况及耐药性分析

    目的 了解上海市浦东新区腹泻人群中弯曲菌感染流行状况和耐药性情况,为正确评价腹泻病人中弯曲菌的流行和制定切实可行的预防措施提供依据.方法 采用改良培养分离方法对2011年6月-2012年5月间浦东新区13家监测点医院感染性腹泻人群进行进行弯曲菌监测.结果 在2 532份标本中,共分离到弯曲菌127株,其中空肠弯曲菌106株,阳性率4.19%;结肠弯曲菌21株,阳性率0.83%;中心城区感染率高于郊区,春秋季感染显著高于夏季(x2=12.17,P<0.01).106株空肠弯曲菌分离株对14种抗生素高度敏感的是阿奇霉素91.04%,红霉素86.57%;高度耐药的是:头孢西丁98.51%,奈啶酸97.76%,复方新诺明96.27%,头孢呋辛92.54%,诺氟沙星91.79%.结论 浦东新区腹泻病人中弯曲菌成为腹泻病原谱的主要病原,耐药性相当严重.

    作者:黄红;王闻卿;傅惠琴;苏靖华;张勇琪;赵冰 刊期: 2014年第13期

  • 阿司匹林抵抗与环氧合酶1基因多态性关联研究

    目的 探讨心脑血管病人群阿司匹林抵抗(aspirin resistance,AR)与环氧合酶1(cycloxygenase,COX-1)基因4个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点的相关性.方法 采用引物3'端错配扩增阻滞(ARMS)原理,结合荧光定量PCR技术(TaqMan探针)对经颅脑MRI及冠脉造影证实的380例缺血性卒中(Ischemic Stroke,IS)及冠心病(coronary artery disease,CAD)患者进行分组检测.结果 COX-1的22C >T、50C>T位点未见多态性,-842A>G基因多态位点3种基因型(AA、A/G、GG)在AS组、ASR与AR组分布频率分别为70.3%,21.5%,8.2%;100%,0%,0%;94.1%,0%,3.7%,3种基因型在3组间的分布差异无统计学意义(P=0.060).128G>A基因多态位点3种基因型(GG、G/A、从)在AS组、ASR与AR组分布频率分别为72.0%,20.3%,21.5%,7.7%;70.2%,19.1%,10.6%;50.0%,,50.0%,0%,3种基因型在3组间的分布差异无统计学意义(P=0.800).两基因单体型构建在3组间无统计学意义.结论 COX-1的-842A>G、128G>A位点基因多态性与AR发生无关联.

    作者:徐旭;梁国威;陈忠云;杨旭 刊期: 2014年第13期

  • 枸杞中对硫磷残留量痕量测定的溶剂微萃取方法的研究

    目的 建立用快速溶剂萃取仪萃取枸杞中对硫磷的方法.方法 称取捣匀的样品5.0g,加20.0g硅藻土,研磨成沙状,放人事先在底部装有6.5g铝粉的萃取池中,用快速溶剂萃取仪萃取枸杞中对硫磷残留量,用安捷伦GC-6890N气相色谱仪测定.结果 浓度在0.010 μg/ml ~ 3.0μg/ml之间具有良好的线性关系,r值在0.9996~ 0.9998之间;RSD在0.56%~2.2%之间,回收率在98%~107%之间,低检出限为0.18 ng/kg,定量下线为0.57 ng/kg.结论 简化了萃取过程,防止了污染,降低了潜在的分析误差,该方法的精密度、回收率、检出线、定量下线等各项方法学指标均符合痕量分析的要求,适合枸杞中对硫磷残留量痕量的测定.

    作者:陈京闽;索芳;王生英 刊期: 2014年第13期

  • 白喉毒素竞争ELISA的定量检测

    目的 制备白喉毒素的单克隆抗体并建立定量检测白喉毒素的竞争ELISA方法.方法 用白喉毒素免疫BALB/c小鼠,通过常规方法融合、间接ELISA筛选分泌白喉毒素特异性抗体的杂交瘤阳性细胞株,有限稀释法克隆3次~4次,用稳定分泌抗白喉毒素特异性抗体的阳性细胞株扩大培养,制备腹水.以含白喉毒素单克隆抗体的腹水进行竞争ELISA定量检测白喉毒素.结果 筛选出6株分泌白喉毒素特异性抗体杂交瘤阳性细胞株,应用1株单克隆抗体,进行的竞争ELISA定量检测白喉毒素的检测范围为3.2 ng/ml~ 50 000 ng/ml.结论 用制备抗白喉毒素的单克隆抗体,建立了白喉毒素竞争ELISA定量检测的免疫检测方法.

    作者:钱雯;代云波;黄微;江曼;马波;李作生 刊期: 2014年第13期

  • 全球生物产业发展现状及我国生物材料进出口监管状况

    二十一世纪是生物的世纪,近年来,全球生物医药产业发展迅猛,给全人类带来了巨大的福祉.与此同时,随着生物产业的快速发展,越来越多的生物材料跨境运输给各国监管带来了很大挑战[1].如何在保证生物材料快速流通的同时,有效防范其潜在生物安全隐患,正成为各国在大力发展生物产业的同时不得不面临的问题[2].

    作者:李小波;黄吉城;陈晓东 刊期: 2014年第13期

  • 凯氏定氮装置的改进

    1883年丹麦化学家凯道尔(Johan Kjedahl)首创了凯氏定氮法,为定氮分析经典方法,并列为AOAC蛋白质测定的标准法,是我国食品中蛋白质的测定第一法[1].同时,凯氏定氮装置的蒸馏提纯及相关项目的检测分析在科研、教学和生产实践中有着广泛应用[2-6],是实验室不可缺少的设备.凯氏定氮装置发展至今,各种品牌自动凯氏定氮仪相继问世,但自动凯氏定氮仪价格相对较贵,其内部结构管道较复杂,维护较困难,易发生故障[7].传统凯氏定氮装置由水蒸气发生器、反应室、冷凝装置、接收瓶4部分组成,基本上是玻璃磨口连接,使用中,效率较低,特别是蒸气发生器,采用电炉加热玻璃烧瓶,热效率低下,玻璃易碎,且在烧瓶中水烧干后,需待烧瓶冷却后补加水,必要时还要在热的电炉上卸下烧瓶冷却,操作很不方便[8],因此,导致样品蒸馏效率低下.本实验室在分析以上缺点后,采用市售电高压锅替代蒸气发生器,并采用三通连接,使蒸气通入、泄压、调节大小非常方便.应用该装置开展了食品中二氧化硫、甲醛蒸馏和奶粉中蛋白质测定,获得满意效果.接下来用定氮蒸馏滴定试验来考察凯氏定氮蒸馏装置改进后实用性.

    作者:李铁墙;袁珣 刊期: 2014年第13期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会