樊一笋；曾万杰；耿春松；胡振华；陈强；丁双双
目的 建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb).方法 用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体.经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价.结果 本法抗原包被量为0.083 μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL；高、低浓度混合血清批间变异系数(CV)为9.2％、9.0％,批内CV为4.6％、5.6％；回收率为96.0％～104.0％；包被板37℃放置5d保持稳定；与抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)交叉反应率为0.22％.经检测120例健康人,将参考值定为＜65.7 IU/mL.与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数(r)为0.985(P＜0.01).结论 间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强；操作简单,成本较低,适合基层医院.
作者：孙颖；李会强；陈寅；仁杰；李婵 刊期： 2011年第08期
目的 分析我室2008及2009年参加国际临床化学联合会( IFCC)的参考实验室GGT、CK、LDH的国际比对计划的结果,评估我室所用参考方法的检测质量及完善程度.方法 用IFCC推荐的酶学活性测定(37℃)参考方法测定人血清GGT、CK、LDH,用酶有证参考物质评估参考方法的准确度,同时测定国际RELA比对样本,并对回报数据进行分析处理.结果 2008年度的国际RELA比对结果室内变异系数(CV)在0.67％～1.13％之间,与均值的偏倚在±3.50％以内；2009年度的国际RELA比对结果室内CV均在0.88％～1.30％之间,GGT和CK测定结果的偏倚在±1.00％以内,但LDH测定结果的偏倚大于2008年.2008、2009年的GGT、CK、LDH的比对结果均在IFCC公布的等效限内.结论 本参考实验室所用的GGT、CK、LDH的检测方法比较成熟稳定.
作者：徐静；张建平；王清涛 刊期： 2011年第08期
目的 检测宫颈癌患者外周血单个核细胞(PBMC)和癌组织中TH 17细胞(CD3+ CD8 - IL-17+)的比例并分析其转录因子的表达水平,探讨TH 17细胞在宫颈癌发展进程中的作用.方法 收集42例宫颈癌患者外周血和癌组织标本,15例体检健康者外周血标本及15例正常宫颈组织标本.用流式细胞术检测PBMC和癌组织中TH17细胞的比例以及PBMC中CCR5、CCR6、CXCR4水平.用实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)技术测定癌组织标本中RANTES、CXCL12和CCL20的mRNA 表达水平.结果 与对照组比较,宫颈癌患者外周血和癌组织中TH17细胞比例均升高(P＜0.01和P＜0.05),尤以宫颈癌晚期为著.宫颈癌患者PBMC中TH17细胞表面CCR6显著升高(P＜0.01).癌组织中CCL20 mRNA水平亦升高(P＜0.05),RANTES、CXCL12水平无显著差异(P＞0.05).结论 宫颈癌患者外周血和癌组织存在高TH 17细胞水平,且随病程的进展呈现强势表达状态,监测TH 17细胞水平及其特异性转录因子表达状态,有助于病程的判断.
作者：杨佩芳；付婷；张建新；焦志军；王胜军；马洁；苏兆亮；仝佳；许化溪 刊期： 2011年第08期
目的 探讨氨甲喋呤(MTX)对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性.方法 用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株,用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷酸化RTKs[磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化胰岛素样生长因子1受体(p-IGF-1R)、磷酸化肝细胞生长因子受体(p-HGFR)、磷酸化血小板源性生长因子受体(p-PDGFRβ)、磷酸化人类表皮生长因子受体2(p-HER-2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-V EGFR2)、磷酸化血管生成素受体(p-Tie-2)]的表达水平,分析它们之间的相关性.结果 n-(-)-MTX/A549组p-EGFR、p-HER-2的平均荧光强度(MFI)分别为26.91±1.81、16.56±1.15；L-(+)-MTX/A549组的MFI分别为54.13±2.75、16.94±1.44；亲本细胞组的MFI分别为54.38±2.88、33.75 +2.49.p-EGFR与p-HER-2显著相关(P＜0.05),p-HER-2和p-VEGFR、p-HGFR之间显著相关(P＜0.05),其他磷酸化RTKs之间相关关系不显著.结论 MTX对映体诱导的耐药A549细胞株中,p-EGFR表达水平存在手性差异.
作者：许维东；何晓东；孙利；李道静；张永娟；张白银；沈佐君 刊期： 2011年第08期
糖尿病肾病( diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的慢性微血管并发症,是导致终末期肾功能衰竭的主要原因.血清β-痕量蛋白(B-trace protein,p-TP)又称为前列腺素D2合酶,是一种低分子量蛋白质,属于脂质运载蛋白质家族,含168个氨基酸,相对分子质量(Mr)在23 000 - 29 000(其大小取决于糖化程度).研究发现,肾功能下降时血p-TP明显升高,且血清肌酐( Scr)正常时(即所谓肌酐盲区)即已升高,是提示肾小球滤过率(GFR)下降的早期指标[1-2].我们研究2型糖尿病( 12DM)患者血清β-TP含量变化,初步探讨其在糖尿病肾损伤中的应用.
作者：陈新宽；郑萍；赵绍林；张欢欢；杨晋；杨新林；马宁；吴惠毅 刊期： 2011年第08期
目的 评价离心培养法分离检测流感病毒的敏感性、特异性,探讨其临床应用价值.方法 收集2010年1月至2011年2月895份上呼吸道感染患者鼻咽拭子,以传统细胞培养法和离心培养法进行流感病毒培养,并作免疫荧光试验(IF)鉴定.结果 广州地区上呼吸道感染患者的流感病毒感染呈两个高峰期,分别为3～5月的春季高峰(以乙型流感病毒为主)和7～9月夏季高峰(甲型流感病毒为主)；传统细胞培养分离流感病毒288例,分离率为32％；离心培养分离病毒260例,分离率、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为29％、89％、99％、98％、95％.结论 离心培养法结合IF具有高的敏感性和特异性并能快速报告结果,而且操作简单、节省人力,可实现流感病毒快速分离,适于临床实验室使用.
作者：秦笙；杨子峰；伍时冠；刘文宽；王玉涛；关文达；莫自耀；周荣；罗翌；徐霞 刊期： 2011年第08期
目的 建立稳定、快速和特异的抗MHC-I类链相关基因B(MICB)抗体流式荧光检测方法,了解MICB抗体在健康人群中的分布频率.方法 克隆、表达和分离纯化MICB融合蛋白,将其包被在Luminex微球表面,建立MICB抗体流式荧光检测方法.评价方法的线性范围、特异性、精密度、准确性,并用此方法检测500例健康人血清MICB抗体.结果 MICB抗体流式荧光检测方法在血清抗体浓度在3.1～100.0 μg/mL之间,具有较好的线性关系,相关系数为0.995.回收实验和重复实验结果显示,其回收率为97.4％～99.6％,批内变异系数为3.4％、2.9％,批间变异系数为4.5％、4.9％.该检测方法与MICA抗体无交叉反应.500例健康人血清中发现4例MICB等位基因特异性抗体.结论 MICB抗体流式荧光检测方法的特异性和灵敏度较高,结果稳定可靠.MICB抗体在器官移植中的作用需进一步研究.
作者：樊一笋；曾万杰；耿春松；胡振华；陈强；丁双双 刊期： 2011年第08期
目的 了解义乌妇女的人乳头瘤病毒( HPV)感染及分型情况.方法 收集4 178例HPV体检妇女宫颈脱落细胞标本,用流式荧光杂交法(液相芯片技术)检测HPV基因型7种低危型、19种高危型.结果 4 178例妇女中有765例阳性,总检出率为18.31％,其中单一基因型检出率为15.53％,二重感染率为2.28％,三重感染率为0.31％,四重感染率为0.19％.HPV亚型共检测出21种,分别是6、11、40、61、16、18、26、31、33、38、39、45、51、52、53、56、58、59、68、82、83型；常见的基因型分别为6、11、16、18、33、52、58等亚型.18 ～30岁组感染较集中的有6、11、16、33、52、58等基因型,31 ～40岁组较集中的有16、18、39、52、58等,41 ～50岁组较集中的有16、18、33、52、58等；低危型感染在18 ～30岁组检出率相对较高,16、52、58型在18～50岁组阳性率均较高；18型在31 ～40、41 ～50岁2组阳性率较高,与18 ～30岁组比较,P均＜0.05.HPV 18、11、6型在本地与外地人口的感染率存在显著差异,P＜0.01,HPV 18型本地人口高,而HPV 11、6型外地人口高.结论 义乌妇女的HPV感染受经商流动人口的影响,基因型分布较广.
作者：傅祝能；吴荣辉；郭小妹；楼跃明 刊期： 2011年第08期
目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)结合常规细胞遗传学(CC)方法检测多发性骨髓瘤(MM)患者染色体异常情况的意义.方法 用CC法和FISH对26例MM患者进行染色体异常分析.结果 26例MM患者中,CC法检测出染色体异常有9例(34.6％)；FISH检测出染色体异常有22例(84.6％),其中IGH基因重排占38.5％(10例)；P53缺失5例(19.2％)；1q21扩增9例,缺失1例；13q14缺失13例(50.0％).13例伴有13q14缺失MM患者中8例出现1q21异常,13例未检测到13q14缺失患者中2例发现1q21异常,差异有统计学意义(x2=5.85,P＜0.05).MM患者13q14缺失和1q21异常之间存在正相关关系(r =0.474,P＜0.05).结论 FISH结合CC法可提高MM患者染色体异常的检出率.
作者：姚玉华；李桑；孙冠星；王志林；曹祥山 刊期： 2011年第08期
糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,GHb)是红细胞内血红蛋白与糖类物质(主要是葡萄糖)通过非酶促作用形成的化合物.2007年中国2型糖尿病(T2DM)防治指南中已将GHb作为血糖控制状态的指标[1].本文对GHb形成的分子基础、检测方法的研究现状与标准化、测定影响因素和在糖尿病( diabetes mellitus.DM)诊疗中的应用进行综述.
作者：涂国华；姜旭淦 刊期： 2011年第08期
急性呼吸道感染(ARTI)是常见的传染病.在美国,仅季节性流感每年至少造成约36 000人死亡,成为致死的第四大原因.目前常用的病毒培养、直接免疫荧光法(DFA)、免疫层析法及定量PCR等方法中,无一种方法能够及时检测出导致ARTI发生的主要病毒种类.由Luminex公司研制的xTAG呼吸道病毒诊断试剂盒(RVP)填补此项空缺,已经通过美国FDA认证.该试剂盒同时保证高敏感性及高特异性,xMAP技术是其核心技术.
作者：Mohamadou Sene；Joseph Mcampos；周晓芳 刊期： 2011年第08期
结核病( tuberculosis,TB)是一种经空气传播、危害巨大的传染病,每年感染人数高达800～1 000万[1],并有近300万人因此死亡.HIV阳性者感染潜伏性结核(latent TB infection,LTBI)后每年有7％～10％的可能性进展为活动性结核,而HIV阴性人员这种可能性一生都只有5％～10％[ 2].结核已经成为HIV感染者的头号死因,据报道称有45％～85％的HIV感染者死于结核[3].当今全球应用广的传统结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST),由于其使用的纯化蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)与非结核分枝杆菌和卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)之间发生交叉反应而使特异性降低.同时TST在免疫功能低下的人群如HIV感染者中的低敏感性也削弱了其临床应用价值.
作者：肖荣；陈瑜 刊期： 2011年第08期
目的 探讨武汉地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药株rpoB基因的突变特征.方法 对76例MTB临床分离株包括rpoB核心区域81 bp碱基在内的428 bp碱基进行PCR测定,并进行DNA序列分析.结果 76例临床分离MTB中利福平耐药株56例,敏感株20例.耐药株中92.9％(52/56)存在突变,共涉及10个密码子的18种突变类型.531、526为常见突变位点,其突变率分别为57.7％ (30/52)、19.2％(10/52)；联合突变率为13.5％(7/52)；同时发现了509位(AGC→AGA)新的突变类型和国内少见的517位CAG缺失类型.结论 rpoB基因突变在武汉地区利福平耐药MTB中广泛存在,并存在新的突变位点.
作者：马峻；温子禄；张朝宝；郭莉；张舒林；王洪海；余晓丽 刊期： 2011年第08期
目的 评价LC Green、Syto 9和Eva Green 3种高分辨熔解(HRM)染料对单核苷酸多态性(SNP)基因分型的能力.方法 以肿瘤坏死因子(TNF)基因启动子-857 C ＞T(rs1799724)位点为例,分别用上述3种荧光染料进行PCR-HRM检测,依据特征熔解曲线进行基因分型并测序验证.基因分型能力评价以野生型与纯合突变型PCR产物Tm值之差(△Tm)来表示.结果 PCR-HRM检测到4种特征熔解曲线,经测序后发现第4条为双突变杂合,包含-863C＞A(rs1800630)位点.HRM染料LC Green,Syto 9,EVa Green的基因分型能力分别为(0.52±0.030)℃、(0.51±0.066)℃和(0.39±0.152)℃.其中Syto 9野生型(CC)和突变型(TT)的变异系数(CV)均为0.03％,为3种染料中低.结论3种染料均能用于HRM技术进行SNP基因分型,Syto 9和LC Green分辨率优于Eva Green,其中Syto 9易用性好、Eva Green性价比高.
作者：尤崇革；李晓军；郜莉娜；李菲菲 刊期： 2011年第08期
目的 探讨结直肠癌患者血浆中骨形态发生蛋白7(BMP7)的水平及临床意义.方法 收集56例结直肠癌患者术前血浆标本,以60例体检健康者作健康对照,ELISA法测定血浆中BMP7水平.结果 56例结直肠癌患者中,35例术前血浆BMP7平均含量为115.2 pg/mL,升高率为62.5％；60例健康对照者血浆中未检测到BMP7升高率异常.两组间血浆BMP7升高率有显著性差异(x2 =37.5,P＜0.01).检出BMP7异常的35例结直肠癌患者,有14例同时进行了血浆CEA检测,其中6例(42.9％)高于正常参考值.而在21例BMP7正常的结直肠癌患者中,7例标本CEA检测均在正常值范围.结论 BMP7在结直肠癌患者血浆中有较高的表达水平,其升高率明显高于CEA,敏感性为62.5,特异性为100％,可作为结直肠癌诊断的辅助指标.
作者：张庆玲；陶洋；蒋茜；彭秀娟；徐会涛；钱晖 刊期： 2011年第08期
目的 克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性.方法 用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化EcoliJM109.经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化Ecoli BL21( DE3),筛选重组表达质粒.用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化.结果 构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达.免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别.结论 成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础.
作者：史利宁；邵世和；李芳秋；孔小祥；王仕钦；陆静芬；黄梅；邵海枫 刊期： 2011年第08期
目的 用液态芯片技术研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫复合物(IC)对关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌细胞因子的影响.方法 用聚乙二醇(PEG)沉淀法分别提取10份抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)阳性的RA患者及健康人对照血清IC,间接ELISA法测定IC中ACCP特异性IC水平.体外培养RA患者关节FLS,分别用RA患者ACCP-IC阳性IC(ACCP+-IC)、ACCP-IC阴性IC(ACCP--IC)及健康人对照血清IC(C-IC)刺激FLS,培养24h后,用液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响.结果 10份RA患者血清中提取的IC,包括ACCP+-IC 6份和ACCP--IC 4份,刺激FLS 24 h后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACCP+-IC组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8水平均显著高于ACCP- -IC组.3组刺激物组刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异.结论 ACCP+-IC具备更强的促FLS分泌GM-CSF、IL-6和IL-8的活性.
作者：高德玉；王凯；刘阳；夏海萍；严孝岭；虞伟；李晓军 刊期： 2011年第08期
目的 用随机扩增多态性DNA (RAPD)分析、以基因外重复回文序列(REP)及肠杆菌基因间重复一致序列(ERIC)为模板的重复序列聚合酶链反应3种基因分型方法对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌进行同源性分析,筛选各级医疗机构易于开展的基因分型方法.方法 从住院患者痰液、尿液、血液等标本中鉴定并筛选产ESBLs大肠埃希菌.以RAPD、ERIC、REP为引物进行扩增的方法,对产ESBLs大肠埃希菌的DNA进行PCR扩增并进行同源性分析.用SPSS 16.0软件进行聚类分析,比较其分辨率系数.结果 共筛选出产ESBLs大肠埃希菌25株,3种方法均可将大肠埃希菌扩增出丰富的区带,产ESBLs大肠埃希菌分别被分为15、18、20个基因型,分辨率系数分别为0.957、0.970、0.977.结论 在产ESBLs大肠埃希菌基因同源性分析中,RAPD、ERIC-PCR和REP-PCR 3种方法的分辨力均很好,尤以REP-PCR分辨率高.
作者：刘丹；王培昌；赵霞；王力红；张京丽；白淑媛；张丽丽；王育英；张红艳 刊期： 2011年第08期
无症状性脑梗死(silent cerebral infarction,SCI)是指临床上无明显脑卒中发作史,而影像学检查却有梗死病灶或有与卒中病史无关的梗死灶.SCI普遍存在,老年人更为常见,并可演变为有症状脑卒中或血管性痴呆,故SCI尽早诊治具有重要意义.有研究表明,心型脂肪酸结合蛋白( heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP)、高半胱氨酸(hyperhomocysteine,Hcy)等生物学指标与脑梗死(CI)的发生、发展具有高度相关性[1].本文旨在探讨SCI、CI患者及体检健康人血清H-FABP和Hcy的水平差异.
作者：邱谷；戴世荣；王兴山 刊期： 2011年第08期
目的 探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用.方法 以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条件,分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测,评价2种检测方法结果的一致性.结果 HRM法可检出系列混合样本中5％的突变型等位基因突变,且重复性较高.以测序法为金标准,HRM法的敏感性和特异性均为100％,两种方法结果一致.结论 HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测,具有较高的敏感性和特异性,可用于JAK2基因V617F突变的临床检测.
作者：郑卫东；方伟；刘艳辉；罗盈；杜欣；陈志红 刊期： 2011年第08期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
