学术投稿

错配杂交化学发光法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性

姚群峰;宁勇;吴晓明;周宜开

关键词:亚甲基四氢叶酸还原酶, 基因多态性, 错配杂交, 化学发光
摘要:目的建立一种基于错配杂交及化学发光技术的检测亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reducatase,MTHFR)基因多态性的新方法.方法针对多态位点设计两条寡核苷酸探针,分别与野生型及突变型序列互补.将两条探针分别与含多态位点C677T的PCR扩增产物杂交,然后用化学发光法检测,根据两条探针的发光值之比确定样品的基因型.结果用本法随机检测了50例DNA样品,结果3种基因型的发光值之比可以严格区分,其中野生型(C/C)15例,杂合型(C/T)28例,突变型(T/T)7例,与参考方法(PCR-RFLP)的检测结果完全一致.结论本方法操作简便、检测快速而且费用低廉,可广泛应用于MTHFR基因突变及多态性检测.
临床检验杂志相关文献
  • 冠心病患者外周血中sCD14水平的研究

    目的分析冠心病患者外周血中sCD14的水平及其与单核细胞数量的相关关系,探讨sCD14和动脉粥样硬化之间的关系.方法ELISA法测定269例冠心病患者和24例健康人血清中的sCD14水平,血细胞分析仪检测受试者抗凝全血中单核细胞的数目和比例.结果冠心病患者与健康对照组sCD14分别为:(3 011.4±1431.4)ng/L和(1 943.8±510.2)ng/L,二者结果有显著差异(t=3.7259,P=0,002);冠心病患者血清sCD14水平(Y)与血单核细胞数量(X)和比例(X)均无相关关系,直线回归方程分别为:Y=2 969.8-95.6X,r=-0.026,P=0.668;Y=2 763.6+1581.8X,r=0.060,P=0.329.结论冠心病患者血清sCD14水平显著性增高与血单核细胞数量和比例均无相关关系,可能与单核细胞的质量改变有关.

    作者:张葵;王丽;罗浔阳;顾光煜;毕永春;宋景秋;夏永泉;郭丹;杜忠祥 刊期: 2005年第06期

  • 梅毒螺旋体嵌合抗原的克隆表达及其临床应用

    目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体Tp15-17嵌合抗原,用于临床检测梅毒感染.方法利用PCR法从Tp全基因组中分别扩增目的基因Tp15和Tp17,用T4DNA连接酶连接后,克隆选表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-6P-1+Tp15-17,在大肠埃希菌中表达重组Tp嵌合蛋白,重组蛋白经亲和层析柱纯化后包被微孔板,初步建立间接ELISA法检测血清中的抗Tp抗体.结果重组嵌合抗原获得了高效表达,免疫印迹试验显示重组抗原具有很强的抗原性.用重组嵌合抗原建立间接ELISA法,对梅毒螺旋体抗体阳性参比血清及梅毒患者血清的检测符合率100%.结论重组梅毒螺旋体嵌合抗原Tp15-17能够作为梅毒螺旋体诊断性ELISA抗原.

    作者:汤巧 刊期: 2005年第06期

  • 奇异变形杆菌的同一性试验

    奇异变形杆菌常引起食物中毒、婴儿腹泻及医源性感染等,由该菌引起的感染是否具有流行病学的意义,应有一种简单快速的方法来确认.我们从变形杆菌众多的同一性试验方法中,选取了Dienes试验、交叉定量凝集试验2种方法,对20株临床分离菌株进行了系统的实验研究,以用于该菌感染的流行病学调查.

    作者:曹金德;倪丽萍;王惠民;张志泉;沈荣春;施英娟;褚少朋 刊期: 2005年第06期

  • 多色荧光原位杂交技术的临床应用

    目的检测来源不明的额外标记染色体和衍生染色体.方法用多色荧光原位杂交技术结合G显带技术和NOR技术,对1例47,XY,inv(9)(p11q13),+mar和1例46,XY,t(5;?)核型进行诊断.结果病例1的额外标记染色体片段来源于15号染色体,患者核型为47,XY,inv(9)(p11q13),+SMC(15).病例2的核型为46,XY,der(5)t(4,5)(q27;q35).在此基础上对患者的核型-表型进行了分析.结论多色荧光原位杂交技术结合细胞遗传学核型分析,对于来源不明的标记染色体和衍生染色体的诊断是非常有帮助的.

    作者:王云华;崔英霞;姚兵;郝丽君;拜红霞;宛传丹;黄宇烽 刊期: 2005年第06期

  • 止血敏对果糖胺测定有正干扰

    我们用硝基四氮唑蓝(NBT)比色法测定1例胃出血患者血清果糖胺(FMN)高达8.54 mmol/L,而血清葡萄糖仅6.54 mmol/L,两者关系显然不符,考虑与药物干扰有关.经试验除与已知的维生素C干扰有关外,止血药酚磺乙胺(止血敏)对NBT法测FMN亦有严重干扰.于是我们做了止血敏干扰测定FMN的体内、外试验,发现静脉注射止血敏后一定时间内,或血清含有一定浓度止血敏,可导致NBT法FMN值假性升高.

    作者:朱德文 刊期: 2005年第06期

  • 血小板相关抗体检测用于血小板减少症辅助诊断

    免疫性血小板减少症,是由于患者产生抗自身血小板的抗体,即血小板相关抗体(PAIg),使血小板被单核吞噬细胞系统大量吞噬,导致血小板减少并伴紫癜或出血[1].PAIg的检测对免疫性血小板减少症诊断有一定的辅助作用.

    作者:关向宏;王家银;孙培玉 刊期: 2005年第06期

  • 126例化脓性骨髓炎脓液细菌分离及耐药性分析

    1病例与标本全部病例均为经X光片和/或CT检查确诊的住院患者.骨髓炎病灶在胫腓骨64例(50.8%),股骨22例(17.5%),跟骨21例(6.7%),指骨6例(4.8%),其他部位13例(10.3%).年龄4~77岁,男101例,女25例.标本均由临床医生采集脓性分泌物或手术中取肉芽组织或死骨送检,收集于2001~2004年.

    作者:李珍大;王卫萍;张小卫;邵海枫;陆维举 刊期: 2005年第06期

  • 恶性肿瘤化学治疗与血清可溶性Fas、FasL水平变化的研究

    目的探讨恶性肿瘤患者化疗前后血清中可溶性Fas、FasL水平变化及其临床意义.方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法对33例恶性肿瘤患者化疗前后的sFas、sFasL水平进行测定,20例健康体检者作正常对照.结果恶性肿瘤患者的sFas、sFasL水平显著高于正常对照组(P<0.01),且仅sFas与肿瘤临床分期相关(P<0.01).化学治疗后有效者sFas和sFasL水平均显著降低(P<0.01).结论sFas和sFasL的水平变化对探讨肿瘤的发生发展、病情判断及指导化疗有一定价值.

    作者:魏卫;包志明;刘妍;袁保兰 刊期: 2005年第06期

  • 脑膜炎奈瑟菌C群引起的流脑1例报告

    我院于2004年12月到2005年2月共收治了14例流行性脑膜炎病人,其中有5例为某小学五年级的在读学生,只有1例血液和脑脊液均培养出脑膜炎奈瑟菌C群.

    作者:张亮;姚文虎;沈玲 刊期: 2005年第06期

  • 乳腺癌患者治疗前后微量元素含量的变化

    乳腺癌的发生和发展与微量元素有一定关系[1].我们于2001~2003年期间检测了54例乳腺癌患者治疗前后血中铜、锌、铁、硒、锰、钴、镍、镉的含量,现报告如下.

    作者:戴冬梅;于瑞珍 刊期: 2005年第06期

  • 不同检测系统4种心肌酶测定结果的比对与临床可接受性评价

    目的通过对同一检验科不同检测系统进行方法比对和偏差评估,探讨不同检测系统间天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶心型同工酶(CK-MB)4种心肌酶测定结果是否具有可比性,为血清酶测定的标准化和临床实验室认可提供实验数据.方法参考NCCLS的EP9-A文件,以日立7170生化分析仪、罗氏原装试剂、c.f.a.s校准品和质控品组成的检测系统(已通过ISO/IEC 17025标准认可)为比较方法,其他不同检测系统为实验方法,检测病人新鲜血清中4种心肌酶,用配对t检验和回归统计法分析实验方法(Y)和比较方法(X)测定结果均值处的相对偏差或医学决定水平处的系统误差,以美国临床实验室修正法规(CLIA'88)规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统的临床可接受性.结果除检测系统3、4的AST结果,检测系统1、2、3的CK-MB结果与比较方法的系统误差或均值处的相对偏差不能被接受外,其余项目测定结果的偏差临床可以接受.结论当同一实验室同一检验项目存在2个以上的检测系统时,应进行方法比对和偏差评估,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性.

    作者:张秀明;庄俊华;徐宁;黄宪章;郑松柏;王建兵;曹永坚;尹一兵 刊期: 2005年第06期

  • 肝病患者血清血小板生成素水平的观察

    血小板生成素(thrombopoietin,Tpo)是巨核细胞增殖、成熟,也是血小板生成的主要调节因子[1],主要由肝脏和肾脏产生[2].肝病患者常会出现血小板的减少.我们对肝病患者体内血小板生成素水平进行了研究.

    作者:叶军;张立新;李加新;陈亚宝 刊期: 2005年第06期

  • 不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶活性测定的影响

    目的探讨不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶测定的影响,为临床应用提供依据.方法通过参考范围调查,临床病例标本和临床随机成人血清中碱性磷酸酶的测定,分析比较3种不同缓冲体系测定方法之间的差异.结果二乙醇胺、2-乙基氨基乙醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇3种不同缓冲体系的方法测定血清碱性磷酸酶活性的参考范围分别为:(98±57)U/L、(86±44)U/L、(75±42)U/L;组间比较P<0.05.221例7组肝病患者标本用3种方法测定,组间结果比较,P<0.05.成人随机标本109例,3种方法的结果比较,P<0.05.结论不同缓冲体系的测定方法对ALP测定的结果差别很大,即使底物相同,采用不同激活型缓冲体系,也会对测定结果带来较大差异,其参考范围也不一致.

    作者:郑铁生;叶立新;薛锦;吴志勇;张徐;盛微翔 刊期: 2005年第06期

  • 1例疑难血型的实验室检查及分析

    正常A型人的红细胞上有A抗原,血清中有相应的抗B抗体.在某些疾病的影响下,血型抗原或抗体减少或缺失,给正确鉴定血型带来困难.本站近遇到1例罕见的抗原难检出、抗体缺失的患儿,经鉴定血型为A型,现报告如下,并分析原因.

    作者:华敏玉;郭永芳;姜健;洪俊 刊期: 2005年第06期

  • 江苏无锡地区社区及医院败血症病原菌与预后的比较

    目的比较社区及医院败血症的病原菌分布特点、预后及相关因素.方法收集无锡地区2000~2003年4家综合性医院血培养阳性病例共480例,统计分析不同感染类型、相应的病原菌构成及其预后的差别.结果480例血培养阳性患者77.3%为社区获得性菌血症(CABSI),22.6%为医院获得性菌血症(HABSI).CABSI的主要病原菌是凝固酶阴性葡萄球菌(38.0%)、大肠埃希菌(17.8%)、沙门菌(9.4%)和金黄色葡萄球菌(8.3%);而HABSI常见病原菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌(17.4%)、念珠菌(14.7%)、大肠埃希菌(12.8%)、铜绿假单胞菌(11.9%)和克雷伯杆菌(10.1%).HABSI的平均年龄52.2岁显著高于CABSI患者28.1岁(P<0.001).HABSI患者的病死率20.2%显著高于CABSI患者3.0%(P<0.001);医院感染组中,铜绿假单胞菌所致的感染病死率高达38.5%,而社区感染组中肺炎链球菌所致的感染病死率高,为16.7%.结论社区及医院败血症的病原菌构成、科室分布、病死率均不同,临床应有针对性地进行抗感染治疗,以降低菌血症的病死率.

    作者:严子禾;赵琪;夏燕萍;林萍萍;王宗明;谢国强;潘宇红;胡瑜 刊期: 2005年第06期

  • 细菌污染对血清HBV与HCV标志物检测结果的影响

    HBV与HCV血清标志物检测结果受标本存放时间的影响[1].我们对造成影响的主要因素进行了探讨.经对无菌或非无菌操作的血清室温(15℃~30℃)、4℃~8℃、-20℃保存不同时间后检测HBsAg、抗HBe、抗HCV,并同时进行细菌检测,结果发现,造成HBV与HCV血清标志物检测结果受标本存放时间影响的主要因素是细菌污染.

    作者:姜兴来 刊期: 2005年第06期

  • 进口与国产TrFIA试剂盒检测血清CEA的比较

    时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TrFIA)法具有灵敏度高、稳定性好和无放射性污染等优点[1-2].用本法检测血清癌胚抗原(CEA)的含量,已在国内许多医院应用.但该法进口试剂检测时间长,操作较为繁琐,检测成本亦较高.本文通过比较国产和进口TrFIA试剂检测CEA的敏感性和特异性,探讨国产试剂的可用性.

    作者:王恩兰;陆应玉;李涛 刊期: 2005年第06期

  • 不同孵育方式对ELISA法抗-HIV(1+2)检测结果的影响

    目前我国采用的检测HIV(1+2)抗体的初筛试验大多是ELISA间接法[1].在众多影响ELISA检测结果的因素中,孵育温度对反应体系的影响是为关键的因素之一[2].为此,我们对在相同温度的条件下,不同孵育方式对检测结果的影响进行了实验观察,报告如下.

    作者:殷勤;盛磊 刊期: 2005年第06期

  • 肠球菌感染及其耐药性分析

    为了解肠球菌感染和耐药情况,我们对2002~2004年临床分离的粪肠球菌109株、屎肠球菌56株的分离情况及其耐药性的变化进行回顾性分析.

    作者:吴承;熊怀民;姚乾;屈振东 刊期: 2005年第06期

  • 不同疾病患者血浆内毒素含量的测定及结果分析

    目的探讨不同疾病患者血浆内毒素的含量及内毒素检测的临床意义.方法用鲎试剂定量动态比浊法检测患者和健康对照者血浆内毒素含量.结果30例正常人血浆内毒素含量为(3.20±1.71)pg/ml,51例肝硬化患者内毒素阳性率为49.0%,平均内毒素含量为74.97 pg/ml.31例发热、28例白血病、16例肺炎、12例肺癌、9例肝炎和14例肝癌患者组血浆内毒素阳性率分别为67.7%、67.9%、68.8%、100%、33.3%和57.1%,内毒素平均值分别为73.47、29.47、239.45、259.42、8.74和17.34 pg/ml,与正常对照组相比除肺炎和肝炎组外,均有显著性差异.不同肝病之间及肺炎和肺癌之间均无显著性差异.结论检测血浆内毒素含童有助于早期判断感染性疾病及是否存在内毒素血症,有利于临床及早诊治疾病.

    作者:张建芳;徐修礼;樊新;孙怡群 刊期: 2005年第06期

临床检验杂志

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主办:江苏省医学会