学术投稿

激光捕获显微分离-高可信度全基因组mRNA扩增技术的建立及其在食管癌细胞基因检测中的应用

李沛;凌志强;金戈;杨洪艳;赵继敏;黄幼田;董子明

关键词:食管肿瘤, 癌, 激光捕获显微分离细胞技术, 高可信度全基因组mRNA扩增技术, 方法
摘要:目的:建立激光捕获显微分离(LCM)-高可信度全基因组mRNA扩增(GMA)技术,并用其分析食管癌细胞基因表达的变化.方法:应用LCM直接捕获15例食管癌组织中癌细胞,提取并纯化mRNA,在T7 RNA聚合酶作用下扩增成cRNA直接用于表达谱筛选.用实时荧光定量RT-PCR验证MET和PTPN2基因的表达,并将LCM与组织匀浆法和显微镜下针挑法检测结果进行比较.结果:基因芯片筛选出上调基因MET,其高表达率为12/15;下调基因PTPN2,其低表达率为9/15;2个基因实时荧光定量RT-PCR检测结果与上述结果的一致率达100%.组织匀浆法、显微镜下针挑细胞法所获样品经实时荧光定量RT-PCR检测,MET结果与LCM-GMA结果的一致率分别为25%(3/12)和33%(4/12),PTPN2分别为22%(2/9)和33%(3/9).结论:LCM-GMA技术十分有利于基因表达谱的芯片分析和单个基因表达变化的实时荧光定量RT-PCR研究.
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    子宫畸形是生殖道畸形中常见的疾病,在妊娠后期,对胎位及分娩均会产生不同程度的影响[1].1997年至2002年,本科共收治子宫畸形晚期妊娠75例,报道如下.

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    作者:刘萍;田薇薇;梁冰 刊期: 2006年第05期

  • 蛋白质指纹图谱模型在肝癌诊断中的应用

    目的:建立基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型,并探讨其在肝癌诊断中的应用.方法:应用表面增强激光解析-电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS),测定了52例肝癌和32例健康人血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合人工神经网络方法进行数据分析.将84例标本随机分成训练组56例(肝癌35例,健康人21例)和盲法测试组28例(肝癌17例,健康人11例).利用从训练组得出的基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型,对28例未知血清进行检测,并与甲胎蛋白(AFP)判断结果进行比较.结果:应用该方法对肝癌进行诊断的准确率、敏感性和特异性均为100%(17/17,11/11).AFP检测结果准确率为77.4%(65/84),灵敏度和特异性分别为69.2%(36/52)和90.6%(29/32).结论:该方法在肝癌的诊断中较AFP具有更高的敏感性和特异性.

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  • A型肉毒毒素治疗发作期偏头痛50例

    2003年6月至2005年12月,作者对于常规药物治疗(非类固醇类抗炎药、麦角胺以及英明格、佐米格等药物)不能适时控制、或严重依赖药物、或出现药物副作用的患者,给予A型肉毒毒素(BTXA)局部注射治疗,取得了满意的疗效,现报道如下.

    作者:程秀兰;程秀梅 刊期: 2006年第05期

  • 老年人慢性阻塞肺疾病不动杆菌感染20例临床分析

    不动杆菌是一种机会致病菌,可引起多种临床感染.作者对本院近5 a来收治的老年人慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)368例进行分析,确诊不动杆菌感染20例,占5.4%,现将临床及药敏试验结果报道如下.

    作者:明亮;谭伟丽;王丽华;蒋军广 刊期: 2006年第05期

  • 胃十二指肠溃疡穿孔腹腔镜修补术25例体会

    1996年至2004年,作者采用腹腔镜微创外科技术,行普通针线直接缝合法治疗上消化道穿孔25例,疗效满意,报道如下.

    作者:张豫峰;王萌;董良鹏;赵甦 刊期: 2006年第05期

  • 宫颈癌合并妊娠6例治疗体会

    宫颈癌合并妊娠是指在妊娠期、产褥期和产后6个月内发现的宫颈癌,又称为妊娠相关性宫颈癌[1].1994年1月至2004年10月,本科共收治宫颈癌合并妊娠6例,报道如下.

    作者:李爱军 刊期: 2006年第05期

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    目的:探讨丁酸对人牙周膜细胞增殖的影响.方法:用含不同浓度丁酸(0 mol/L,2 mol/L,4 mol/L,8mol/L)的培养液培养人牙周膜细胞,通过MTT法测定其增殖.结果:人牙周膜细胞进入指数生长期后,丁酸以剂量依赖的方式抑制人牙周膜细胞的增殖.结论:丁酸可能通过抑制人牙周膜细胞的增殖,进而影响牙周膜的改建和更新,促进牙周袋形成和牙周组织破坏.

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    近年来,异位妊娠(ectopic pregnancy,EP)的发病率呈明显上升趋势,EP破裂或流产可导致腹腔内大量出血,严重威胁患者的生命安全[1].

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  • 药物缓释剂和卡介苗联合应用构建大鼠局限性炎性肉芽肿模型效果观察

    目的:观察应用药物缓释剂和卡介苗构建大鼠局限性炎性肉芽肿模型的效果.方法:正常Wistar大鼠36只,随机分成3个对照组和3个实验组.对照组每组4只,注射药物分别为0.1 mmol/L PBS(对照1组)、10 g/L明胶(对照2组)和体积分数为25%的泊洛沙姆407(P407)(对照3组).实验组每组8只,注射药物分别为卡介苗(BCG)(BCG组)、BCG-明胶(明胶组)和BCG-P407(P407组).开腹直视下肝内和皮下分别注射药物0.1 ml.术后4周、8周时进行形态学观察和分析.结果:各对照组肝脏和皮下均未见明显变化.术后8周时,BCG组肝脏和皮下结节已经明显发生纤维化;明胶组和P407组仅见少量纤维组织增生,但明胶组有腹腔粘连发生.结论:应用BCG-P407可在大鼠肝内和皮下建立持续的局限性炎性肉芽肿模型.

    作者:马毓梅;翟佳;林萍萍;张小平;赵松;王恒树 刊期: 2006年第05期

  • 慢性粒细胞白血病患者树突状细胞抗原加工递呈和迁移功能观察

    目的:研究细胞因子体外联合诱导培养的慢性粒细胞白血病(CML)患者树突状细胞(DCs)的表型和抗原递呈、分泌和迁移功能的变化.方法:分离CML患者(CML组)和健康志愿者(正常组)外周血单个核细胞(PMNCs),经培养获取贴壁细胞,将CML组和正常组的贴壁细胞及K562细胞用细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α体外诱导10 d后,流式细胞仪检测细胞的免疫表型;培养5 d后,用ELISA检测细胞的内吞功能;应用混合淋巴细胞培养分析3组DCs对静息T细胞的免疫刺激活性.结果:正常组、CML组、K562组DCs的特异性标志CD83和共刺激分子标记CD80和CD86以及CD11和HLA-DR的表达差异无统计学意义(P>0.05);DCs的抗原吞噬、迁移能力和对T细胞的免疫刺激活性,CML组和K562组之间差异无统计学意义(P>0.05),CML组和正常组间差异有统计学意义(P<0.05).结论:CML患者DCs的免疫表型和正常人相似,但其抗原捕获、递呈和迁移功能有缺陷.

    作者:张琳;周健;胡杰英 刊期: 2006年第05期

  • 基因枪介导人精子顶体膜相关蛋白32基因疫苗在小鼠骨骼肌中的表达

    目的:观察pcDNA3.1(+)-人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)基因疫苗经基因枪介导肌肉接种后在小鼠体内的表达.方法:BALB/c雌性小鼠6只,实验组鼠(4只)经后腿股内侧肌以基因枪多点注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP32 5μg,空载体对照组(1只)注射pcDNA3.1(+)载体5 μg,空白对照组(1只)注射无菌生理盐水200μl.接种后第7 d取小鼠股内侧肌注射部位肌肉,RT-PCR和原位杂交法检测目的基因mRNA的表达,以自制抗血清进行免疫组织化学染色检测目的基因蛋白的表达.取小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎组织,PCR扩增,行基因疫苗的安全性检测.结果:RT-PCR和原位杂交检测结果显示实验组小鼠注射部位肌肉组织有目的基因及其蛋白的表达,对照组未见表达.实验组小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎的基因组DNA均未扩增出目的基因条带,说明外源性基因没有整合到宿主染色体.结论:该基因疫苗可在小鼠骨骼肌内有效、安全地表达.

    作者:臧卫东;陈雪梅;任秀花;石冰涛;郝莉 刊期: 2006年第05期

  • 甲氨喋呤联合米非司酮治疗异位妊娠28例观察

    2000年1月至2005年1月,作者采用甲氨喋呤(MTX)联合米非司酮治疗血β-HCG≥10 000 IU/L未破裂型异位妊娠28例,疗效满意,报道如下.

    作者:肖芙姣;李梅玲;范银芬 刊期: 2006年第05期

  • 微创钻颅血肿清除术治疗老年高血压脑出血50例

    1999年至2002年,作者采用微创钻颅血肿清除术治疗老年高血压脑出血50例,疗效满意,报道如下.

    作者:朱林峰;许晓辉 刊期: 2006年第05期

  • 外伤性十二指肠损伤35例治疗体会

    1999年1月至2005年6月,共收治外伤性十二指肠损伤35例,报道如下.

    作者:侯红军;杨聪敏;吴燕莉 刊期: 2006年第05期

  • 自身免疫溶血性贫血患者ABO及Rh血型鉴定

    目的:研究自身免疫溶血性贫血(AIHA)患者自身抗体对ABO及Rh血型定型的干扰.方法:选取28例AIHA患者(直接抗球蛋白试验阳性),采用常规血型血清学技术测定ABO及Rh血型.对正反定型不符者进行氯喹放散后再行ABO、Rh血型鉴定.对抗体筛选阳性者行抗体特异性鉴定.结果:28例中10例ABO定型受干扰,多为间接抗球蛋白试验阳性者及正反定型不合者.28例中Rh表型定型中20例阴性误定为阳性,采用氯喹放散试验后血型皆正确判定,5例血清中含同种抗体,4例自身抗体具有血型特异性.结论:AIHA患者自身抗体干扰ABO、Rh血型鉴定.

    作者:庞桂芝;马云;张趁利;姜燕娟;胡利亚;兰炯采 刊期: 2006年第05期

  • 食管鳞癌组织中血管内皮生长因子mRNA的表达

    目的:探讨食管癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平与肿瘤侵袭和转移的关系.方法:应用实时荧光定量RT-PCR及基因芯片技术对15例食管鳞癌组织和相应正常食管黏膜组织进行VEGF mRNA检测.结果:15例食管鳞癌组织中有8例VEGF mRNA上调表达,其平均表达水平,cDNA微阵列和实时荧光定量RT-PCR检测结果分别为(3.82±0.75)和(4.11±0.89);VEGF mRNA的表达与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤的部位、大 小、形状、病理分化程度等临床病理特征无关,与临床分期、远处转移有关.结论:VEGF在食管癌浸润和转移过程中发挥重要作用,检测肿瘤组织中VEGF mRNA水平对预测食管癌的侵袭和转移具有重要的临床意义.

    作者:李沛;凌志强;杨洪艳;赵明耀;黄幼田;马俊芬;董子明 刊期: 2006年第05期

  • NP和TP方案治疗晚期非小细胞肺癌疗效和不良反应比较

    肺癌在我国城市中占常见恶性肿瘤的首位,在农村占第3位[1],55%的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者就诊时已为ⅢB~Ⅳ期,失去了手术治疗机会,对这种患者,目前主要是采用以铂类为基础的联合化疗方案治疗[2].常用的方案为NP方案及TP方案.作者对比分析了NP方案及TP方案对晚期NSCLC患者的治疗效果,现将结果报道如下.

    作者:邹宏志;吴惠娟;赵艳秋 刊期: 2006年第05期

  • 胰十二指肠切除术90例并发症分析

    胰十二指肠切除术是腹部外科中较复杂的一种手术,切除范围广,涉及的大血管多,重建的吻合口多,因而手术并发症多[1].1996年1月至2005年12月,作者共行胰十二指肠切除术90例,现将术后并发症发生及处理情况报道如下.

    作者:李晓勇;刘新江;周百中;曹予文;杨战锋;杨红星 刊期: 2006年第05期

郑州大学学报(医学版)杂志

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