学术投稿

羟乙基呱嗪乙硫磺酸对人骨髓间充质干细胞纯化培养的影响

李敏霞;李相中;刘清芳

关键词:间充质干细胞, 体外培养, 人骨髓, 羟乙基呱嗪乙硫磺酸
摘要:目的:探讨羟乙基呱嗪乙硫磺酸对人骨髓间充质干细胞(hMSC)纯化培养的影响.方法:采用全髓直接接种法分离培养13~18周胎龄水囊引产新鲜胎儿股骨骨髓,贴壁细胞达90%以上融合时消化传代.传代细胞分别接种于含100 ml/L胎牛血清的L-DMEM培养基(常规培养基)和加入15 mmol/L羟乙基呱嗪乙硫磺酸(Hepes)的常规培养基(改良培养基)中,观察细胞生长情况,用酸度计监测培养基pH值变化情况,流式细胞仪鉴定细胞纯度及CD抗原表达情况.并诱导改良培养基培养的hMSC向成骨细胞分化,酶细胞化学法和全自动生化仪检测碱性磷酸酶(ALP)活性,鉴定hMSC的成骨分化能力.结果:2种培养基培养的hMSC在细胞形态、生长特性、CD抗原表达等方面相似,但改良培养基由于pH值较恒定而能提高hMSC纯度及细胞增殖速度,且诱骨分化后可形成矿化结节,ALP染色阳性.结论:Hepes能提高全髓直接接种法培养的hMSC纯度及细胞增殖速度,简化骨髓细胞分离程序,减少细胞损伤及受污染机会,利于hMSC培养的推广应用.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 沙利度胺联合VAD方案治疗多发性骨髓瘤24例

    VAD(长春新碱、阿霉素、地塞米松)方案是治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的常用方案,但部分患者存在原发耐药或缓解后复发.近年来研究发现沙利度胺(反应停,thalidomide)有治疗MM作用,并且对难治复发者也有效[1,2].作者应用沙利度胺联合VAD方案治疗24例MM,现报道如下.

    作者:陈玉清;李琳;张茵;臧玉柱;席雨人;李晓雯 刊期: 2005年第03期

  • 高龄患者腹腔镜胆囊切除术后护理

    腹腔镜胆囊切除术(LC)具有创伤小,痛苦轻,恢复快,术后并发症发生率低,住院时间短等优点[1].但老年患者由于代偿、修复、愈合等能力较差,LC术后仍存在较大潜在危险,故做好术后护理有着重要的作用.2003年以来,本科共收治60岁以上结石性胆囊炎患者65例,LC术后恢复良好,护理效果满意,报道如下.

    作者:王云霞;屈清荣;马继红 刊期: 2005年第03期

  • HBsAg和B19 VP2复合抗原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

    目的:构建乙肝表面抗原(HBsAg)-人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统.方法:用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEM-T重组,构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pGEX-5X-1表达载体中,得到pGEX-5X-1-HBs;再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pGEX-5X-1-HBs中,得到pGEX-5X-1-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定.结果:pGEX-5X-1-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达产物经Western-blot鉴定具有HBsAg及B19 VP2的双重抗原性.结论:成功构建pGEX-5X-1-HBs-VP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为HBV和B19病毒重组多价疫苗的研究奠定了基础.

    作者:赵国强;张世杰;刘全离;徐慧丹;陈宗德 刊期: 2005年第03期

  • 食管癌组织中肺耐药蛋白的表达

    目的:探讨食管癌组织中肺耐药蛋白(LRP)的表达.方法:运用免疫组织化学方法检测49例存档蜡块食管癌组织、46例食管正常组织、32例新鲜食管正常及癌组织LRP蛋白的表达;对其中的32例新鲜标本,运用RT-PCR技术检测LRP mRNA的表达.结果:食管癌组织LRP蛋白阳性表达率54.3%(44/81),高于正常组织的35.9%(28/78)(x2=5.44,P<0.05).食管癌组织中LRP mRNA的表达水平(0.54±0.05)高于正常组织的(0.39±0.04)(t=2.30,P<0.05).LRP蛋白及mRNA的表达与食管癌病理特征不相关(P>0.05).结论:食管癌组织中LRP的高表达可能与食管癌的耐药性有关,该特性可能独立于病理特征之外.

    作者:董鑫;郝志芳;李珊珊;司源;阎爱花 刊期: 2005年第03期

  • 肺癌组织中蛋白质组双向电泳图谱分析方法的建立

    目的:建立一套双向凝胶电泳图像的分析方法,为进一步分析和鉴定差异蛋白奠定基础.方法:提取肺癌组织和癌旁组织中的可溶性总蛋白,进行双向凝胶电泳,电泳图片由专用扫描仪获取后,应用图像分析软件(PDQuest 7.1)进行蛋白差异点的表达情况分析.结果:二维电泳图片经过背景消减、点检测、点匹配等一系列分析后,得出了差异点.结论:PDQuest 7.1软件可以用来快速有效地对生物样品之间蛋白质的差异进行分析.

    作者:张慧珍;范清堂;吴逸明 刊期: 2005年第03期

  • 门静脉高压症术后再出血50例外科治疗体会

    肝硬变门静脉高压症术后再出血是目前临床处理的难题之一.作者对本院1983年至2002年门静脉高压症术后再出血50例的临床资料进行回顾分析,报道如下.

    作者:冯留顺;李月光;马秀现;叶学祥;许培钦 刊期: 2005年第03期

  • 槲寄生中血小板活化因子拮抗剂有效成分的纯化及鉴定

    目的:提纯槲寄生中血小板活化因子(PAF)拮抗剂有效活性成分并鉴定其分子结构.方法:利用硅胶柱层析分离出槲寄生乙酸乙酯剂结晶化合物及槲寄生水剂结晶化合物.再利用红外光谱分析、核磁共振谱分析和质谱分析进行分子结构鉴定.结果与结论:槲寄生中的PAF拮抗剂有效活性成分是高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖甙.

    作者:万鼎铭;徐从高;张茂宏 刊期: 2005年第03期

  • 阿司匹林对急性脑梗死患者血浆NO及血小板α颗粒膜蛋白含量的影响

    目的:探讨阿司匹林对急性脑梗死患者血浆一氧化氮(NO)及血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的影响.方法:83例急性脑梗死患者随机分为阿司匹林组(43例)和对照组(40例).2组均给予常规治疗,阿司匹林组在此基础上服用阿司匹林150 mg/d,治疗2周.治疗前后,分别采用硝酸酶还原法和双抗体夹心酶联免疫吸附法测定2组血浆NO及GMP-140含量,并按照欧洲卒中评分(ESS)标准进行评分.结果:治疗后阿司匹林组血浆NO及GMP-140含量均较对照组下降(P<0.01),但ESS分值变化2组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:阿司匹林能降低急性脑梗死患者血浆NO及GMP-140的水平.

    作者:林爱琴;赵凤臣;倪居;邓双全 刊期: 2005年第03期

  • 蜈蚣、全蝎、地龙氨基酸含量测定

    目的:研究蜈蚣、全蝎、地龙中氨基酸分布规律.方法:用氨基酸分析仪测定3种药材中氨基酸含量,并与常见动植物蛋白氨基酸含量进行比较.结果与结论:3种药材蛋白含量均很高,Gly、Ala、Val、Leu、Arg等氨基酸比例较高.3种药材氨基酸分布规律与其药理作用有一定关系.

    作者:刘继红;尚娟;贾斌;刘宏民 刊期: 2005年第03期

  • B19 VP2抗原真核表达载体的构建及免疫原性观察

    目的:探讨以B19 VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性.方法:用PCR方法以pGEM1-B19为模板扩增出B19 VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3-VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家兔血清中B19 VP2抗体产生情况.结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3-VP2;其作为基因疫苗接种家兔后可产生滴度较高,持续时间较长的抗体.结论:B19 VP2基因可作为B19病毒基因疫苗构建的靶基因.

    作者:胡军;戚敏;张世杰;宋建伟;赵国强 刊期: 2005年第03期

  • 高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖甙体外对多形核白细胞分泌炎症介质的影响

    目的:探讨高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖甙(HG)体外对多形核白细胞分泌炎症介质的影响.方法:利用HG预处理人体主要的炎症细胞多形核白细胞(PMN),测定PAF刺激下PMN产生的炎症介质IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和白三烯B4(LTB4).结果:PAF可刺激PMN产生炎症介质TNF-α、LTB4;HG能完全抑制PAF所致的PMN产生TNF-α,HG能部分抑制PAF所致的PMN产生LTB4;PAF和HG均对PMN产生IL-1β、IL-6及IL-8无影响.结论:HG作为PAF拮抗剂,可抑制炎症介质产生而发挥抗炎作用.

    作者:万鼎铭;徐从高;张茂宏 刊期: 2005年第03期

  • 中国汉族人多囊卵巢综合征患者CYP17基因多态性分析

    目的:探讨CYP17基因-34 bp处T→C碱基置换与多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制的关系.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法,对中国汉族人118例PCOS患者和106例对照组的CYP17基因-34 bp碱基置换进行检测;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清睾酮(T)水平,比较CYP17基因多态性与PCOS患者T水平之间的关系.结果:中国汉族人PCOS组CYP17基因型频率分布为9.9%(A1A1)、56.4%(A1A2)、33.7%(A2A2),对照组为20.0%(A1A1)、52.0%(A1A2)、28.0%(A2A2),2组间比较差异无统计学意义(x2=0.190,P>0.05);PCOS组A1、A2等位基因频率为38.1%、61.9%,对照组为46.0%、54.0%,2组间比较差异无统计学意义(x2=3.032,P>0.05);PCOS组A2A2基因型组的T水平((1.63±o.58)μg/L)高于A1A2组((1.30±0.85)μg/L)和A1 A1组((1.00±0.66)μg/L)(P<0.05),且含A2组(A1A2,A2A2)的T水平((1.43±0.67)μg/L)显著高于不含A2组(A1A1)的T水平(P<0.05).结论:CYP17基因-34 bp处T→C碱基置换的存在与PCOS高T血症之间有一定的相关性,可能是PCOS的易感基因之一.

    作者:谭丽;张蕾;朱桂金 刊期: 2005年第03期

  • 上颌窦提升在上颌后牙区萎缩牙槽嵴牙种植术中的应用

    目的:探讨上颌窦提升术对上颌后牙区萎缩牙槽嵴患者种植义齿修复的临床应用价值.方法:56例患者植入196枚种植体,患者平均年龄60.6岁.将自体松质骨(Spongiosa)与Bio-OSS(R)混合进行上颌窦提升术,根据情况一期或二期植入种植体.种植体植入后至少6个月,选用适当的上部修复体进行义齿修复.结果:上颌窦提升术后或/和种植体植入术后,创口愈合良好,未见种植体松动或脱落,供骨区和种植术区均未见并发症.术后12个月PTVs小为-5,X线检查种植体周垂直骨吸收均不超过1 mm.种植体全部稳定地行使功能.结论:应用上颌窦提升术对上颌后牙区萎缩牙槽嵴患者进行种植义齿修复有广阔的应用前景.

    作者:张克豪;Lorenzoni M;Wegscheider WA 刊期: 2005年第03期

  • IgA肾病高血压发生的影响因素分析

    目的:探讨IgA肾病高血压发生的影响因素.方法:93例IgA肾病患者,其中高血压36例,血压正常57例.对2组临床病理资料进行回顾性病例对照研究,运用单因素和多因素方法分析其高血压发生与临床病理因素的关系.结果:IgA肾病的小动脉增厚表现为肌层增厚或玻璃样变性,管腔狭窄.单因素及多因素Logistic回归结果显示年龄、蛋白尿程度、血肌酐水平及肾小动脉管壁增厚为IgA肾病高血压发生的独立危险因素.结论:年龄、蛋白尿程度、血肌酐水平及肾小动脉管壁增厚与IgA肾病高血压的发生有关.

    作者:李寒;王沛;刘章锁 刊期: 2005年第03期

  • 脊髓栓系综合征患儿尿动力学测定

    脊髓栓系综合征(TCS)常见的解剖异常为脊髓脊膜膨出和隐性脊柱裂[1].作者比较分析了脊髓脊膜膨出和隐性脊柱裂患儿下尿路尿动力学表现,为临床治疗提供依据.

    作者:史云菊;齐艳 刊期: 2005年第03期

  • 人骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性观察

    目的:观察体外培养的人骨髓间充质干细胞(MSCs)部分生物学特性.方法:自健康人骨髓中分离出MSCs,进行原代培养,第5 d首次更换培养液,以去除未贴壁细胞,以后每周换液2次,细胞铺满整个培养瓶底90%时开始传代培养.倒置相差显微镜下观察原代及传代细胞形态及生长特性,并绘制传代细胞的生长曲线.流式细胞仪检测第3代MSCs细胞表面分子CD29、CD44,以进行MSCs鉴定.结果:MSCs体外培养为贴壁生长.MSCs原代培养约18~21 d才达传代要求;传代培养细胞生长潜伏期仅24~36 h,对数增长期约3~5 d,之后为平台期,4~6 d传1代.传至第8代,出现凋亡征象.第3代MSCs细胞表面CD29、CD44的表达率分别为90.6%和91.5%,MSCs均一性较高.结论:从人骨髓中分离出的MSCs在体外环境中具有很强的自我更新和分裂增殖能力.

    作者:法宪恩;王利霞;侯剑峰;张瑞成;王海永;杨辰垣 刊期: 2005年第03期

  • 游离空肠袢修复犬肝门部胆管狭窄

    目的:探讨游离空肠袢修复肝门部胆管狭窄的效果.方法:12只成年犬随机分为游离空肠盲袢胆囊吻合组(IL组,n=7)和胆囊空肠盲袢型Roux-en-Y吻合组(RL组,n=5).IL组行游离空肠盲袢胆囊吻合,RL组行胆囊空肠盲袢型Roux-en-Y吻合.术后通过99mTc-EHIDA肝胆动态扫描、返流及胆管成石情况观察、胆汁细菌培养、肝脏病理学检查了解该术式的可行性和优越性.结果:术后2组肝脏排泌功能、盲袢排空功能相互比较及与术前比较,差异均无统计学意义(P>0.05);防止返流及逆行感染IL组优于RL组.结论:本术式效果可靠且在预防返流及逆行感染方面优于盲袢型胆肠Roux-en-Y吻合术.

    作者:牛跃平;徐智;李东庄;赵蕊;周孝思 刊期: 2005年第03期

  • 高龄老年心脏性猝死患者心率变异性分析

    目的:研究高龄老年人心率变异性(HRV)减低与心脏性猝死的关系.方法:回顾分析39例≥75岁心脏性猝死者的临床资料,对其死亡前6个月之内24 h动态心电图HRV进行时域和频域分析.以同期资料完整的老年健在患者作对照.结果:高龄老年人心脏性猝死组陈旧性心肌梗死、糖尿病及心功能不全患者多于对照组,HRV各参数均较对照组明显降低(P<0.01).结论:HRV减低是预测高龄老年人心脏性猝死较有价值的指标.

    作者:郑爱兰;郝道剑 刊期: 2005年第03期

  • 不同年龄和疾病阶段非痴呆帕金森病患者认知功能和听沉P300改变

    目的:探讨不同年龄和疾病阶段非痴呆帕金森病患者的P300改变.方法:将120例帕金森病(PD)患者按病程分为早期PD组(60例)和晚期PD组(60例);其中早期PD组又按年龄分为年轻早期PD组(33例)和老年早期PD组(27例),晚期PD组又按年龄分为年轻晚期PD组(32例)和老年晚期PD组(28例).将60例正常人按年龄分为年轻对照组(34例)和老年对照组(26例).分别采用简明精神量表(MMSE)、Fuld物体记忆测验(FOM)、语言流畅性测验(RVR)、积木测验(BD)和数字广度测验(DS)评定认知功能,记录分析听觉诱发事件相关电位P300PL.结果:年轻晚期PD组5项评分均低于年轻对照组,且P300PL延长(P<0.01);老年早期PD组5项评分均低于老年对照组,且P300PL延长(P<0.01);老年晚期PD组5项评分均低于老年对照组,且P300PL延长(P<0.01);晚期PD组5项评分均低于对照组,且P300PL延长,差异有统计学意义(P<0.01);而年轻早期PD组较年轻对照组5项评分及P300PL差异无统计学意义(P>0.01);早期PD组较对照组5项评分及P300PL差异无统计学意义(P>0.01).各组MMSE、FOM、RVR、BD、DS评分和P300峰潜伏时的延长呈负相关.结论:非痴呆PD患者存在认知功能的下降,其认知功能的下降与发病年龄及疾病阶段有关.

    作者:赵莘瑜;卢宏;滕军放;张炳谦;王少平;王左生;赵宗美;王海珍 刊期: 2005年第03期

  • 不同剂量咪唑安定顺行性遗忘作用观察

    现代麻醉学认为,手术中的记忆和知晓可以对患者的心理、生理产生重大影响[1].咪唑安定为苯二氮革类药,具有良好的顺行性遗忘作用.作者比较了不同剂量咪唑安定产生的顺行性遗忘作用,报道如下.

    作者:张建辉;聂瑞霞;李黎;姜丽华 刊期: 2005年第03期

郑州大学学报(医学版)杂志

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