学术投稿

HBsAg和B19 VP2复合抗原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

赵国强;张世杰;刘全离;徐慧丹;陈宗德

关键词:B19 VP2, HBsAg, 原核表达
摘要:目的:构建乙肝表面抗原(HBsAg)-人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统.方法:用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEM-T重组,构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pGEX-5X-1表达载体中,得到pGEX-5X-1-HBs;再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pGEX-5X-1-HBs中,得到pGEX-5X-1-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定.结果:pGEX-5X-1-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达产物经Western-blot鉴定具有HBsAg及B19 VP2的双重抗原性.结论:成功构建pGEX-5X-1-HBs-VP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为HBV和B19病毒重组多价疫苗的研究奠定了基础.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 上颌窦提升在上颌后牙区萎缩牙槽嵴牙种植术中的应用

    目的:探讨上颌窦提升术对上颌后牙区萎缩牙槽嵴患者种植义齿修复的临床应用价值.方法:56例患者植入196枚种植体,患者平均年龄60.6岁.将自体松质骨(Spongiosa)与Bio-OSS(R)混合进行上颌窦提升术,根据情况一期或二期植入种植体.种植体植入后至少6个月,选用适当的上部修复体进行义齿修复.结果:上颌窦提升术后或/和种植体植入术后,创口愈合良好,未见种植体松动或脱落,供骨区和种植术区均未见并发症.术后12个月PTVs小为-5,X线检查种植体周垂直骨吸收均不超过1 mm.种植体全部稳定地行使功能.结论:应用上颌窦提升术对上颌后牙区萎缩牙槽嵴患者进行种植义齿修复有广阔的应用前景.

    作者:张克豪;Lorenzoni M;Wegscheider WA 刊期: 2005年第03期

  • 血栓性血小板减少性紫癜14例治疗体会

    1999年3月至2003年9月,作者用血浆置换术(PE)结合冷上清输注治疗血栓性血小板减少性紫癜(TTP)14例,疗效满意,现报道如下.

    作者:郭建社;梅海燕;陈善华 刊期: 2005年第03期

  • 急性单核细胞白血病核型分析

    目的:急性单核细胞白血病(M5)核型分析及其临床意义.方法:采用R显带法对56例M5患者进行核型分析.结果:M5患者中异常染色体的检出率为57.14%(32/56).异常核型组完全缓解率25.00%(8/32),明显低于正常核型组的58.33%(14/24)(P<0.05).核型异常涉及多的是8号染色体(11/32),表现为±8、t(8;16)和t(8;21).结论:核型异常的M5患者预后不良.

    作者:孟小莉 刊期: 2005年第03期

  • 不同年龄和疾病阶段非痴呆帕金森病患者认知功能和听沉P300改变

    目的:探讨不同年龄和疾病阶段非痴呆帕金森病患者的P300改变.方法:将120例帕金森病(PD)患者按病程分为早期PD组(60例)和晚期PD组(60例);其中早期PD组又按年龄分为年轻早期PD组(33例)和老年早期PD组(27例),晚期PD组又按年龄分为年轻晚期PD组(32例)和老年晚期PD组(28例).将60例正常人按年龄分为年轻对照组(34例)和老年对照组(26例).分别采用简明精神量表(MMSE)、Fuld物体记忆测验(FOM)、语言流畅性测验(RVR)、积木测验(BD)和数字广度测验(DS)评定认知功能,记录分析听觉诱发事件相关电位P300PL.结果:年轻晚期PD组5项评分均低于年轻对照组,且P300PL延长(P<0.01);老年早期PD组5项评分均低于老年对照组,且P300PL延长(P<0.01);老年晚期PD组5项评分均低于老年对照组,且P300PL延长(P<0.01);晚期PD组5项评分均低于对照组,且P300PL延长,差异有统计学意义(P<0.01);而年轻早期PD组较年轻对照组5项评分及P300PL差异无统计学意义(P>0.01);早期PD组较对照组5项评分及P300PL差异无统计学意义(P>0.01).各组MMSE、FOM、RVR、BD、DS评分和P300峰潜伏时的延长呈负相关.结论:非痴呆PD患者存在认知功能的下降,其认知功能的下降与发病年龄及疾病阶段有关.

    作者:赵莘瑜;卢宏;滕军放;张炳谦;王少平;王左生;赵宗美;王海珍 刊期: 2005年第03期

  • 人骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性观察

    目的:观察体外培养的人骨髓间充质干细胞(MSCs)部分生物学特性.方法:自健康人骨髓中分离出MSCs,进行原代培养,第5 d首次更换培养液,以去除未贴壁细胞,以后每周换液2次,细胞铺满整个培养瓶底90%时开始传代培养.倒置相差显微镜下观察原代及传代细胞形态及生长特性,并绘制传代细胞的生长曲线.流式细胞仪检测第3代MSCs细胞表面分子CD29、CD44,以进行MSCs鉴定.结果:MSCs体外培养为贴壁生长.MSCs原代培养约18~21 d才达传代要求;传代培养细胞生长潜伏期仅24~36 h,对数增长期约3~5 d,之后为平台期,4~6 d传1代.传至第8代,出现凋亡征象.第3代MSCs细胞表面CD29、CD44的表达率分别为90.6%和91.5%,MSCs均一性较高.结论:从人骨髓中分离出的MSCs在体外环境中具有很强的自我更新和分裂增殖能力.

    作者:法宪恩;王利霞;侯剑峰;张瑞成;王海永;杨辰垣 刊期: 2005年第03期

  • 罗格列酮对糖尿病肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子表达的影响

    目的:探讨罗格列酮(RGZ)对糖尿病肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法:大鼠随机分成治疗组、模型组、正常组(n=9).治疗组、模型组大鼠用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型,均造模成功7只.治疗组大鼠于造模前24 h行RGZ灌胃,模型组和正常组以等体积蒸馏水灌胃.12周后处死动物,观察肾小球病理学变化及细胞外基质(ECM)相对面积,用免疫组织化学法检测肾皮质CTGF的表达.结果:治疗组及模型组肾小球ECM相对面积及肾皮质CTGF表达水平均较正常组升高,但治疗组2指标均较模型组低(P<0.01);治疗组肾脏病理学改变较模型组减轻.结论:RGZ能改善糖尿病时肾脏的病理变化,延缓肾纤维化的发生,其作用可能与抑制肾组织中CTGF的表达有关.

    作者:孟晓青;邓安国;朱忠华;杨晓;刘建设 刊期: 2005年第03期

  • 早期康复治疗对脑出血患者预后的影响

    脑出血可增加致残率,影响患者生活质量[1].作者对42例急性脑出血患者采用常规治疗的同时辅助早期系统的康复治疗,并以常规治疗的42例作对照,探讨早期康复治疗对脑出血患者预后的影响.

    作者:马丽;侯巧红;郭建超;许予明 刊期: 2005年第03期

  • 胃癌术后2种辅助化疗方法效果比较

    近年来术后辅助化疗越来越受到临床工作者的重视[1].1998年至2000年,作者采用全身化疗+腹腔灌注化疗治疗晚期胃癌术后患者50例,疗效满意,报道如下.

    作者:刘俊叶;申学昌;刘义兴;冯献明 刊期: 2005年第03期

  • 儿童肾积水肾脏动态增强MRI检查

    目的:了解动态增强MRI技术评价儿童肾积水肾脏形态及功能的价值.方法:单侧先天性肾盂输尿管连接部狭窄(PUJO)所致肾积水男性患儿7例,均经B超、静脉尿路造影(IVU)及病理证实.观察并记录动态增强MRI注射对比剂Gd-DTPA前和注射后1 min,3 min,5 min,10 min,15 min,30 min,45 min和60 min肾实质和集合系统相对信号强度(RSI).均以对侧正常肾脏作为对照.结果:平扫示积水肾脏皮、髓质分界不清,集合系统信号强度较低;动态扫描示积水肾实质和集合系统RSI逐渐增大,正常肾脏则逐渐减小.结论:动态增强MRI可对儿童肾积水肾脏的功能和形态进行联合评估.

    作者:孟然;文建国;郑富增;程敬亮 刊期: 2005年第03期

  • 保留大隐静脉淋巴结清扫术治疗外阴恶性肿瘤18例

    外阴恶性肿瘤的传统手术方法为外阴根治术加双侧腹股沟淋巴结清扫术,后者常规结扎切断双侧大隐静脉及其主要分支,术后切口皮瓣常延迟愈合,感染发生率高,且易并发下肢水肿、下肢静脉血栓形成、疼痛、感觉异常等并发症[1].1990年1月至2004年7月,作者在行上述式术时保留大隐静脉治疗外阴恶性肿瘤18例,效果较好,报道如下.

    作者:赵红霞;王秀琴;杨丽娟;盛修贵 刊期: 2005年第03期

  • 蜈蚣、全蝎、地龙氨基酸含量测定

    目的:研究蜈蚣、全蝎、地龙中氨基酸分布规律.方法:用氨基酸分析仪测定3种药材中氨基酸含量,并与常见动植物蛋白氨基酸含量进行比较.结果与结论:3种药材蛋白含量均很高,Gly、Ala、Val、Leu、Arg等氨基酸比例较高.3种药材氨基酸分布规律与其药理作用有一定关系.

    作者:刘继红;尚娟;贾斌;刘宏民 刊期: 2005年第03期

  • 利巴韦林注射液与10种常用药物配伍的稳定性

    目的:考察利巴韦林在50 g/L葡萄糖注射液中分别与头孢唑啉钠、苯唑青霉素钠、乳糖酸红霉素、酒石酸柱晶白霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸妥布霉素、维生素C、维生素B6、地塞米松等10种静脉注射药物配伍后的稳定性.方法:模拟临床用药操作,将50 g/L葡萄糖注射液与利巴韦林混合,再按临床常用量分别将10种静脉药物加入到混合液中,放置0 h,1 h,2 h后,观察各混合液的澄明度,测定pH和不溶性微粒数.结果:混合液外观澄明,pH因药物性质不同而有所变化;≥25 μm微粒数变化不大,个别配伍有少量发现;≥10 μm微粒增加明显.但均符合药典规定.结论:利巴韦林与该10种常用药物可以配伍使用.

    作者:张孝祯;张尽廷;莫熄 刊期: 2005年第03期

  • 17-β雌二醇对血管性痴呆大鼠认知功能及脑内NGF、BDNF表达的影响

    目的:探讨17-β雌二醇对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能及脑组织神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、雌二醇组,各组均16只.采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型后,雌二醇组腹腔注射17-β雌二醇,其余2组腹腔注射花生油.60 d后应用Y迷宫、ELISA法分别检测VD大鼠认知功能以及脑组织中NGF和BDNF含量变化.结果:大鼠学习尝试次数、记忆测试10次的正确次数与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),认知功能显著改善;模型组、雌二醇组脑内NGF和BDNF的含量较正常对照组均增高,雌二醇组脑组织内NGF和BDNF的含量较模型组增高(P均<0.01).结论:腹腔注射17-β雌二醇可显著改善VD大鼠的认知功能,增加VD大鼠脑内NGF和BDNF含量,具有脑保护作用.

    作者:卢宏;姜晓蕊;滕军放;王建平;宋志宇;王凯娟 刊期: 2005年第03期

  • 经胸壁乳晕入路腔镜甲状腺切除术7例体会

    2003年9月至2004年6月,作者采用行经胸壁乳晕途径的腔镜甲状腺部分切除术治疗单发甲状腺腺瘤7例,效果满意,报道如下.

    作者:王耿泽;任武 刊期: 2005年第03期

  • 食管癌性狭窄及食管气管瘘患者内支架治疗体会

    1998年11月至2003年4月,作者应用镍钛记忆合金食管带膜内支架治疗食管狭窄24例,食管气管瘘6例,取得了满意的近期疗效,现报道如下.

    作者:赵宏亮;李伟;范英杰;乔合坤 刊期: 2005年第03期

  • 卵巢上皮性肿瘤组织中VEGF与P53的表达

    目的:探讨卵巢上皮性肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及P53蛋白的表达.方法:应用免疫组织化学SP法和形态定量学方法,检测卵巢上皮性肿瘤组织(良性囊腺瘤17例,交界性肿瘤15例,恶性肿瘤29例)中VEGF和P53蛋白的表达,并测定其积分光密度(IOD)和平均光密度(MOD).结果:良性、交界性及恶性肿瘤组织中VEGF的IOD和MOD值分别为213.6±94.8和0.19±0.07、419.4±71.6和0.26±0.08、667.2±32.9和0.41±0.03,P53蛋白表达的IOD和MOD值分别为164.2±44.8和0.17±0.04、521.3±57.1和0.24±0.07、872.2±37.4和0.41±0.04,良性肿瘤分别与交界性肿瘤和恶性肿瘤相比,IOD和MOD值差异均有统计学意义(P<0.01或0.05).且VEGF与P53表达呈正相关(rs=6.24,P<0.05).结论:卵巢上皮性肿瘤的发展中VEGF起重要作用,P53蛋白可能参与卵巢肿瘤的血管生成调节.

    作者:马海彦;王珏辉;张红新;高冬玲;陈奎生 刊期: 2005年第03期

  • 阿司匹林对急性脑梗死患者血浆NO及血小板α颗粒膜蛋白含量的影响

    目的:探讨阿司匹林对急性脑梗死患者血浆一氧化氮(NO)及血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的影响.方法:83例急性脑梗死患者随机分为阿司匹林组(43例)和对照组(40例).2组均给予常规治疗,阿司匹林组在此基础上服用阿司匹林150 mg/d,治疗2周.治疗前后,分别采用硝酸酶还原法和双抗体夹心酶联免疫吸附法测定2组血浆NO及GMP-140含量,并按照欧洲卒中评分(ESS)标准进行评分.结果:治疗后阿司匹林组血浆NO及GMP-140含量均较对照组下降(P<0.01),但ESS分值变化2组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:阿司匹林能降低急性脑梗死患者血浆NO及GMP-140的水平.

    作者:林爱琴;赵凤臣;倪居;邓双全 刊期: 2005年第03期

  • 布-加综合征患者FVLeiden、FⅡG20210A突变检测

    目的:探讨凝血因子FVLeiden和FⅡG20210A基因多态性与布-加综合征(B-CS)发病的相关关系.方法:利用多重聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(Multiplex PCR-RFLP)方法,检测了53例布-加综合征患者与106例正常对照的FVLeiden和FⅡG20210A的突变情况,并加以对照分析.结果:53例B-CS患者与106例正常对照FVLeiden和FⅡG20210A基因多态,均为野生型,未发现纯合突变型与杂合突变型.结论:FVLeiden和FⅡG20210A的分布存在着地理差异与种族异质性,在中国人B-CS形成过程中的作用极小.

    作者:郑红;连建华;齐华;贺颖;林国岭;许培钦 刊期: 2005年第03期

  • 内镜下十二指肠乳头括约肌切开治疗胆总管结石140例体会

    2001年9月至2003年9月,作者采用内镜下十二指肠乳头括约肌切开术(EST)治疗胆总管结石140例,取得了较好的效果,现报道如下.

    作者:冯素萍;姜海波;王敬贞;马应杰 刊期: 2005年第03期

  • 新生豚鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定

    目的:探讨新生豚鼠海马来源的神经干细胞体外培养的佳条件.方法:分离新生24 h内的豚鼠海马组织,制成单细胞悬液,分别于DMEM/F12培养基、含体积分数2%B27的培养基及含4 ng/L bFGF的B27培养基进行原代和传代培养,收集原代和传代培养的细胞,进行巢蛋白(Nestin)、GFAP及NSE免疫细胞化学染色.结果:在含bFGF的B27培养基中,传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经干细胞团.传代培养分化的细胞可见NSE或GFAP免疫阳性细胞.结论:含体积分数2%B27的DMEM/F12培养基中添加bFGF可获得大量新生豚鼠海马神经干细胞.

    作者:席恺;董明敏 刊期: 2005年第03期

郑州大学学报(医学版)杂志

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