学术投稿

郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定

赵国强;宋建伟;戚敏;张世杰;陈宗德

关键词:B19, 聚合酶链反应, 序列分析
摘要:目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列.方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814 bp(1~814),849 bp(753~1 601),663 bp(1 523~2 185),738 bp(2 124~2 861),1 011 bp(2 790~3 800),1 014 bp(3 747~4 760),914 bp(4 681~5 594).将其分别克隆入T载体,进行测序分析.结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5 594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF).第1个ORF位于615~2 630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2 623~4 968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3 304~4 968位核苷酸,编码555个氨基酸.在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1 655/5 594),T,26.52%(1 484/5 594),G,22.88%(1 280/5 594),C,21.02%(1 175/5 594).郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3 752位C→G导致Ser→Cys).结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型.
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  • 槲寄生中血小板活化因子拮抗剂有效成分的纯化及鉴定

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    作者:万鼎铭;徐从高;张茂宏 刊期: 2005年第03期

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    作者:刘爱清;程国梅 刊期: 2005年第03期

  • 铜绿假单胞菌及其外毒素A对人单个核细胞TNF-α分泌的影响

    目的:探讨加热杀灭的铜绿假单胞菌(HKPA)及其外毒素A(PEA)对人单个核细胞(PBMC)TNF-α分泌的影响.方法:采用1×10 7 CFU/ml HKPA作为诱导物、50μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L PEA作为抑制物、抗PEA血清作为中和物,诱导PBMC体外产生TNF-α.ELISA法检测TNF-α浓度.结果:对照组HKPA可诱导PB-MC产生一定浓度的TNF-α;当PEA浓度≥100μg/L时,抑制TNF-α的产生(P<0.01),TNF-α浓度与PEA的剂量呈负相关(r=-0.82,P<0.01).抗PEA血清完全中和PEA的抑制作用,与对照组比较,TNF-α分泌量差异无统计学意义(P>0.05).结论:HKPA在体外可有效诱导PBMC产生TNF-α,PEA以剂量依赖的方式抑制TNF-α的产生.

    作者:邓予晖 刊期: 2005年第03期

  • 食管癌组织中肺耐药蛋白的表达

    目的:探讨食管癌组织中肺耐药蛋白(LRP)的表达.方法:运用免疫组织化学方法检测49例存档蜡块食管癌组织、46例食管正常组织、32例新鲜食管正常及癌组织LRP蛋白的表达;对其中的32例新鲜标本,运用RT-PCR技术检测LRP mRNA的表达.结果:食管癌组织LRP蛋白阳性表达率54.3%(44/81),高于正常组织的35.9%(28/78)(x2=5.44,P<0.05).食管癌组织中LRP mRNA的表达水平(0.54±0.05)高于正常组织的(0.39±0.04)(t=2.30,P<0.05).LRP蛋白及mRNA的表达与食管癌病理特征不相关(P>0.05).结论:食管癌组织中LRP的高表达可能与食管癌的耐药性有关,该特性可能独立于病理特征之外.

    作者:董鑫;郝志芳;李珊珊;司源;阎爱花 刊期: 2005年第03期

  • IL-1β对体外人Graves眼病球后成纤维细胞分泌RANTES的影响

    目的:探讨IL-1β对人眼球后成纤维细胞(RF)产生趋化因子RANTES的影响及其对外周血淋巴细胞(PBL)的趋化作用.方法:取Graves眼病(GO)患者和斜视患者眼球后结缔组织,胶原酶消化法获得RF,分别以0μg/L、0.04μg/L、0.40 μg/L、8.00 μg/L、10.00 μg/L的IL-1β在RPMI培养基中孵育24 h,RT-PCR和ELISA法分别检测RANTES mRNA表达和RF培养上清中RANTES的含量,并观察活性核因子κB抑制剂CAPE对RANTES表达量的影响.采用96微孔板Chemo TX System进行趋化实验检测RF产生的RANTES对PBL的趋化作用,并观察鼠抗人RANTES抗体对PBL游走能力的影响.结果:RF在体外几乎不能产生RANTES,经IL-1β刺激之后,RANTES在mRNA和蛋白水平表达都升高,GO患者RF产生RANTES的量明显高于正常对照RF((182.9±14.1)μg/L vs(77.9±3.8)μg/L,t=16.765,P<0.01),且在一定范围内具有浓度依赖性.CAPE可明显抑制IL-1β对RF表达RANTES的诱导效应.经IL-1β刺激的RF培养上清可增强PBL的游走能力,此效应可被鼠抗人RANTES抗体所抑制.结论:IL-1β诱导RF表达的RANTES参与了GO眶后淋巴细胞浸润,且RANTES的表达可能与NF-κB的激活有关.

    作者:秦贵军;罗方;赵艳艳;张素华;宋方州 刊期: 2005年第03期

  • 不同年龄和疾病阶段非痴呆帕金森病患者认知功能和听沉P300改变

    目的:探讨不同年龄和疾病阶段非痴呆帕金森病患者的P300改变.方法:将120例帕金森病(PD)患者按病程分为早期PD组(60例)和晚期PD组(60例);其中早期PD组又按年龄分为年轻早期PD组(33例)和老年早期PD组(27例),晚期PD组又按年龄分为年轻晚期PD组(32例)和老年晚期PD组(28例).将60例正常人按年龄分为年轻对照组(34例)和老年对照组(26例).分别采用简明精神量表(MMSE)、Fuld物体记忆测验(FOM)、语言流畅性测验(RVR)、积木测验(BD)和数字广度测验(DS)评定认知功能,记录分析听觉诱发事件相关电位P300PL.结果:年轻晚期PD组5项评分均低于年轻对照组,且P300PL延长(P<0.01);老年早期PD组5项评分均低于老年对照组,且P300PL延长(P<0.01);老年晚期PD组5项评分均低于老年对照组,且P300PL延长(P<0.01);晚期PD组5项评分均低于对照组,且P300PL延长,差异有统计学意义(P<0.01);而年轻早期PD组较年轻对照组5项评分及P300PL差异无统计学意义(P>0.01);早期PD组较对照组5项评分及P300PL差异无统计学意义(P>0.01).各组MMSE、FOM、RVR、BD、DS评分和P300峰潜伏时的延长呈负相关.结论:非痴呆PD患者存在认知功能的下降,其认知功能的下降与发病年龄及疾病阶段有关.

    作者:赵莘瑜;卢宏;滕军放;张炳谦;王少平;王左生;赵宗美;王海珍 刊期: 2005年第03期

  • 阿司匹林对急性脑梗死患者血浆NO及血小板α颗粒膜蛋白含量的影响

    目的:探讨阿司匹林对急性脑梗死患者血浆一氧化氮(NO)及血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的影响.方法:83例急性脑梗死患者随机分为阿司匹林组(43例)和对照组(40例).2组均给予常规治疗,阿司匹林组在此基础上服用阿司匹林150 mg/d,治疗2周.治疗前后,分别采用硝酸酶还原法和双抗体夹心酶联免疫吸附法测定2组血浆NO及GMP-140含量,并按照欧洲卒中评分(ESS)标准进行评分.结果:治疗后阿司匹林组血浆NO及GMP-140含量均较对照组下降(P<0.01),但ESS分值变化2组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:阿司匹林能降低急性脑梗死患者血浆NO及GMP-140的水平.

    作者:林爱琴;赵凤臣;倪居;邓双全 刊期: 2005年第03期

  • 应用双吻合器实施低位直肠癌保肛术36例体会

    直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,发病率呈增长趋势,以中低位直肠癌较多[1].1999年3月至2003年3月,本科应用全直肠系膜切除(TME)结合双吻合器技术行低位直肠癌保肛手术36例,效果满意,报道如下.

    作者:郭胜利 刊期: 2005年第03期

  • 血管活性药物海绵体内注射致阴茎异常勃起46例处理体会

    阴茎异常勃起是指阴茎长时间持续勃起,并出现一系列病理、生理变化,自然情况下较少见.血管活性药物海绵体内注射(ICI)可以导致阴茎异常勃起[1].1993年12月至2003年12月,本科采用阴茎海绵体内注射罂粟碱和前列腺素(PGE1)等药物检查、诊断和治疗勃起功能障碍(ED)940例,发生阴茎异常勃起46例(4.89%),妥善处理后,均未出现严重后果,现报道如下.

    作者:邵立钦 刊期: 2005年第03期

  • 自体断冠再接术治疗41颗外伤牙疗效观察

    2000年1月至2004年5月,作者对本科收治的32名患者41颗冠折上前牙施行活髓切断术或间接盖髓术后行断冠再接,疗效满意,报道如下.

    作者:李路平 刊期: 2005年第03期

  • 脊髓栓系综合征患儿尿动力学测定

    脊髓栓系综合征(TCS)常见的解剖异常为脊髓脊膜膨出和隐性脊柱裂[1].作者比较分析了脊髓脊膜膨出和隐性脊柱裂患儿下尿路尿动力学表现,为临床治疗提供依据.

    作者:史云菊;齐艳 刊期: 2005年第03期

  • 人微小病毒B19 VP2蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

    目的:利用原核系统表达人微小病毒B19的重组蛋白抗原,为建立ELISA方法诊断B19病毒感染提供特异性抗原.方法:采用PCR方法扩增B19 VP2基因,将之插入到T载体中进行测序,验证序列正确后再重组入原核表达载体pET-30a(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.表达 产物经亲合层析柱纯化得到VP2重组蛋白抗原.用B19 VP2 IgG对该蛋白进行了Western-Blot分析.结果:筛选出2株B19 VP2蛋白抗原高表达菌株,经IPTG诱导后,表达VP2重组蛋白量占菌体总蛋白量的24.6%.结论:VP2重组蛋白具有良好的抗原活性.

    作者:胡军;王岚;宋建伟;陈宗德;赵国强 刊期: 2005年第03期

  • 恶性肿瘤骨转移并高钙血症7例

    恶性肿瘤骨转移常并发高钙血症,其发生率约为10%~20%[1].本症可出现多器官功能失调,但许多症状缺乏特异性,常被忽视,延误诊治.2003年1月至2004年12月,作者收治恶性肿瘤骨转移并高钙血症患者7例,现报道如下.

    作者:牛春莲;张靖;王明英 刊期: 2005年第03期

  • BALB/c 小鼠小肠乳糖酶活性双糖酶法测定条件的优化

    目的:建立一种方便、准确测定小鼠小肠乳糖酶活性的方法.方法:采用不同pH的底物溶液与肠黏膜提取物反应,计算相应的酶活性;取不同反应时间(45 min,60 min,75 min),不同显色时间(45 min,60 min,75 min)和不同显色剂用量(2.0 ml,2.5 ml,3.0 ml)按L9(34)正交实验设计方法,测定不同条件下的底物溶液与肠黏膜反应的A值作为正交实验的评分标准.结果与结论:由正交实验得出,该方法的佳反应条件为:pH 4.6,水浴75min,显色时间45 min,显色剂用量3.0 ml;批内酶活性(0.029±0.003)U/ml,CV=2.49%,批间酶活性(0.032±0.004)U/ml,CV=4.19%.该方法具有很好的重复性和可靠性.

    作者:何伟;黄磊;吕斌;黄承钰 刊期: 2005年第03期

  • 骨髓基质细胞移植治疗大鼠缺血性脑损伤

    目的:观察骨髓基质细胞(MSCs)移植对大鼠缺血性脑损伤后神经功能恢复的作用并探讨其作用机制.方法:线拴法制作SD大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO)(n=72),随机均分为模型组,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和MSCs组,缺血2 h后再灌注,24 h后MSCs组将标记5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)的2×10 6个MSCs通过颈动脉移植入脑缺血大鼠体内,PBS组经颈动脉注入等体积的PBS液,模型组不做任何处理.另设假手术组(n=6).分别于术后2d,4 d,6 d,8 d采用神经缺损评分检测各组大鼠神经系统功能,用免疫组化方法检测脑内骨髓基质细胞的迁移及营养因子的分泌情况.结果:MSCs移植后,在脑内存活、迁徙、分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)等多种神经保护性因子,与其他组相比,MSCs组神经功能改善情况明显.结论:动脉移植MSCs治疗缺血性脑损伤具有较好的疗效,自分泌或旁分泌多种神经保护性营养因子可能是其主要机制之一.

    作者:黄月;许予明;方树友;秦洁;宋波;马兴荣 刊期: 2005年第03期

  • 高龄老年心脏性猝死患者心率变异性分析

    目的:研究高龄老年人心率变异性(HRV)减低与心脏性猝死的关系.方法:回顾分析39例≥75岁心脏性猝死者的临床资料,对其死亡前6个月之内24 h动态心电图HRV进行时域和频域分析.以同期资料完整的老年健在患者作对照.结果:高龄老年人心脏性猝死组陈旧性心肌梗死、糖尿病及心功能不全患者多于对照组,HRV各参数均较对照组明显降低(P<0.01).结论:HRV减低是预测高龄老年人心脏性猝死较有价值的指标.

    作者:郑爱兰;郝道剑 刊期: 2005年第03期

  • 肺癌组织中蛋白质组双向电泳图谱分析方法的建立

    目的:建立一套双向凝胶电泳图像的分析方法,为进一步分析和鉴定差异蛋白奠定基础.方法:提取肺癌组织和癌旁组织中的可溶性总蛋白,进行双向凝胶电泳,电泳图片由专用扫描仪获取后,应用图像分析软件(PDQuest 7.1)进行蛋白差异点的表达情况分析.结果:二维电泳图片经过背景消减、点检测、点匹配等一系列分析后,得出了差异点.结论:PDQuest 7.1软件可以用来快速有效地对生物样品之间蛋白质的差异进行分析.

    作者:张慧珍;范清堂;吴逸明 刊期: 2005年第03期

  • 甲状腺功能亢进患者血清肝纤维化指标测定

    肝脏对甲状腺的调控有着重要的作用[1].甲状腺功能亢进(甲亢)可使肝细胞受损[2].作者通过检测甲亢患者血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)的含量,探讨甲亢对肝细胞纤维化的影响.

    作者:杨萍 刊期: 2005年第03期

  • 郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定

    目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列.方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814 bp(1~814),849 bp(753~1 601),663 bp(1 523~2 185),738 bp(2 124~2 861),1 011 bp(2 790~3 800),1 014 bp(3 747~4 760),914 bp(4 681~5 594).将其分别克隆入T载体,进行测序分析.结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5 594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF).第1个ORF位于615~2 630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2 623~4 968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3 304~4 968位核苷酸,编码555个氨基酸.在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1 655/5 594),T,26.52%(1 484/5 594),G,22.88%(1 280/5 594),C,21.02%(1 175/5 594).郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3 752位C→G导致Ser→Cys).结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型.

    作者:赵国强;宋建伟;戚敏;张世杰;陈宗德 刊期: 2005年第03期

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