学术投稿

杜氏盐藻荧光素酶基因表达载体的构建

柴玉荣;王天云;侯桂琴;侯卫红;谢华;袁保梅;王建民;薛乐勋

关键词:杜氏盐藻, 荧光素酶基因, 质粒表达载体
摘要:目的:构建盐藻荧光素酶基因表达载体.方法:分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD-B、pMD-CA和pMD-rbcs,胶回收适当的片段,T4 DNA连接酶过夜连接,转化宿主菌大肠杆菌JM109.挑取阳性克隆,提取质粒DNA,酶切鉴定.结果:得到含盐藻自身启动子碳酸酐酶(CA)基因启动子、双倍重复碳酸酐酶(DCA)基因启动子和来自衣藻的1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基(rbcs)基因启动子,以及荧光素酶(Luc)基因为外源基因的3个盐藻表达载体.结论:构建了3个杜氏盐藻荧光素酶表达载体.
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  • 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的表创

    目的:构建含单纯疱疹病毒胸苷激酶(HsV-tk)基因的真核表达载体(pcDNA3-tk),并观察能否在食管癌细胞株中表达.方法:将HsV-tk的cDNA亚克隆于真核表达载体pcDNA3上,构建pcDNA3-tk.后者经脂质体介导转染食管癌细胞株Eca-109,通过高剂量的G418选择培养,筛选出抗性克隆.经RT-PCR检测确定HsV-tk基因是否能在转染细胞内转录.结果:成功地构建了真核表达载体pcDNA3-tk,并且在pcDNA3-tk转染的食管癌细胞内发现tk基因的mRNA.结论:含HsV-tk基因的真核表达载体能在食管癌细胞中表达.

    作者:李杰;郭玉忠;谢华;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 人脑星形细胞肿瘤组织中bcl-2基因的表达

    目的:观察星形细胞肿瘤组织中bcl-2基因的表达情况.方法:60例星形细胞,其中星形细胞瘤18例,间变星形细胞瘤24例,胶质母细胞瘤18例,另取因脑外伤需手术减压患者12例的脑组织做正常对照,采用免疫组化法检测星形细胞肿瘤组织和正常脑组织中bcl-2基因表达情况,并分析其与肿瘤恶性程度和患者预后的关系.结果:60例星形细胞肿瘤组织bcl-2基因表达阳性率为50%.其中星形细胞瘤bcl-2基因表达强度为0.030±0.006,阳性率为44.4%;间变星形细胞瘤bcl-2基因表达强度为0.090±0.003,阳性率为50%;胶质母细胞瘤bcl-2基因表达强度为0.16±0.01,阳性率为55.6%.不同类星形细胞瘤组织bcl-2基因表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05),其表达强度却随着肿瘤恶性级别的升高显著增强,各组间相比差异有统计学意义(P<0.01).正常脑组织中未能检出bcl-2基因表达.结论:bcl-2基因表达上调在星形细胞肿瘤发生、发展乃至间变的过程中可能起重要作用,其表达强度是反创映星形细胞肿瘤患者预后的重要指标之一.

    作者:付振峰;王载;谭占国 刊期: 2004年第01期

  • 高血压脑出血术后亚低温辅助治疗效果观察

    目的:研究亚低温应用对高血压脑出血术后治疗效果的影响.方法:65例高血压脑出血术后患者随机分为亚低温组和常规降温对照组.亚低温组33例,均于术后2 h内进行亚低温治疗,持续38~72 h,肛温维持在35.0~35.5℃.对照组32例,体温维持在37.0~37.5℃.2组其他治疗相同.监测降温期间患者的体温、呼吸、血压、心率、血氧饱和度、颅内压、血糖、血电解质和血气.2组患者均于术后3个月按日常生活能力(ADL)分级标准进行临床疗效评价.结果:与对照组相比,亚低温治疗组患者术后高颅压、高血糖、消化道出血发生率均显著下降(P<0.05);无严重并发症,病死率明显降低,预后显著改善(P<0.05).结论:高血压脑出血患者术后适时恰当应用亚低温辅助治疗,可降低术后病死率,提高患者生存质量.

    作者:王新军;赵普学;寿纪新;李培栋;单峤;赵忠伟;刘泉 刊期: 2004年第01期

  • 铜离子对铜绿微囊藻生长及生理的影响

    目的:研究铜绿微囊藻在铜离子胁迫下的生长及生理学效应和其培养的佳铜离子浓度.方法:根据铜绿微囊藻在不同浓度铜离子中的生长,光合速率、超氧化物歧化酶(sOD)活性及类金属硫蛋白(MTL)的变化进行实验.结果:①在10-5~10.mol/L范围内,Cu2+浓度越高,对微囊藻生长的抑制越强,铜绿微囊藻生长适的cu2+的浓度为10-6mol/L.②低浓度(10-7~10-6mol/L)的Cu2+对铜绿微囊藻SOD活性没有诱导作用,但可以作为微量元素促进铜绿微囊藻的生长;中浓度(10-5~10-4mol/L)的Cu2+能够诱导铜绿微囊藻SOD活性增强;而高浓度(10-3~10-2mol/L)的Cu2+对铜绿微囊藻细胞产生毒性作用,抑制铜绿微囊藻生长.③10-5mol/L Cu2+能诱导铜绿微囊藻产生MTL,且量大;10-6mol/L Cu2+诱导铜绿微囊藻产生MTL的量较小;10-3mol/L Cu2+对铜绿微囊藻生长有很强的抑制作用,诱导生成MTL的量少.6~9 d诱导MTL的量大,抗性株在相同时间内诱导MTL的量远大于野生株.结论:不同浓度的铜离子可影响铜绿微囊藻的生长及生理活动,10-6moL/L的铜离子是铜绿微囊藻生长的适浓度.

    作者:刘红涛;李杰;席宇;赵以军;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 乳突翻查术59例分析

    随着耳显微手术的迅速发展,乳突根治术后中耳炎治愈率不断提高,但仍有部分患者术后中耳长期反复感染流脓.1990年至2000年,本科做乳突翻查术59例,现将59例术中情况分析如下.

    作者:耿曼英;贾艳丽 刊期: 2004年第01期

  • 莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻中转录活性的检测

    目的:验证莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的转录活性.方法:以绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)为报告基因,将报告基因插入莱茵衣藻叶绿体atpA启动子与rbcL终止子之间,构建载体pSP71-atpA-EGFP,用基因枪法转入杜氏盐藻叶绿体中,通过荧光显微镜观察EGFP基因在atpA启动子控制下的表达,以验证atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的生物活性.结果:荧光显微镜下观察到EGFP在杜氏盐藻叶绿体中得到了表达.结论:莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中有转录起始活性,可以应用于杜氏盐藻的叶绿体转化.

    作者:潘卫东;吕玉民;张贵星;牛向丽;侯桂琴;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3'旁侧序列比较

    目的:比较扩增盐藻肌动蛋白基因3'旁侧序列的2种PCR方法.方法:用pvuⅡ、EcoRV和Stu I 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后,供2种PCR用,一种是连接介导法PCR(LMPCR),与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列;另一种是反向PCR(IPCR),酶切后的DNA自身环化做模板,用2对基因特异引物反向扩增.结果:2轮PCR后,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起.而反向PCR在得到pvuⅡ和Stu I消化的自连文库中扩增得到2.5kb特异产物,经测序发现,片段两侧为基因特异引物,部分序列与已知序列相一致.Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA.结论:IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法.

    作者:姜国忠;谢华;郭玉忠;范天黎;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 胃癌组织中核基质蛋白与P16基因上游序列结合检测

    目的:研究胃癌组织核基质蛋白与p16基因上游序列的结合情况及其意义.方法:采用Southwestern印迹技术及Genetools定量分析软件,对22例胃癌及相应正常组织的核基质蛋白与P16基因上游序列的结合进行了检测.结果:正常胃组织核基质蛋白与p16基因上游序列结合主带的相对分子质量(Mr)为28000、30000、40000、43000、50000,胃癌组织中为40000、66000.与正常胃组织比较,胃癌组织中核基质蛋白与P16基因上游序列结合的66000主带阳性信号明显增强(P<0.05);而不同分化程度及不同临床分期胃癌组织间,此主带阳性信号强度差异无统计学意义(P>0.05).结论:胃癌组织中66000蛋白与p16基因上游区结合量的异常可能是胃癌发生的早期分子事件.

    作者:丁一;李卓;乐晓萍;邢文英;朱晓燕;张钦宪 刊期: 2004年第01期

  • 膀胱镜检查患者300例健康教育体会

    2001年10月至2002年8月,作者对300例膀胱镜检查的患者进行健康教育尝试,报道如下.

    作者:齐艳 刊期: 2004年第01期

  • 带血管蒂包皮与交叉皮瓣一期修复尿道下裂38例

    1991年以来,作者采用带血管蒂包皮与交叉皮瓣覆盖对38例尿道下裂进行一期修复,疗效满意,报道如下.

    作者:孙永恒;乔保平;王昀;石奇刚 刊期: 2004年第01期

  • 百草枯中毒14例肺部X线与CT表现

    百草枯(Paraquat,PQ)又名克芜踪,是一种对人畜有很强毒性的有机杂环类接触性除草剂,使用过程中操作不当、误服或自杀性服用均可造成中毒.患者病情危重,病死率很高[1].百草枯中毒可引起肺、心、肝、肾等脏器严重损害,由于病变主要发生在肺,故又称百草枯肺.有关百草枯中毒的基础研究与治疗较多[1,2],而相关影像报道较少[3].作者总结了14例百草枯中毒患者肺部的X线与CT所见,报道如下.

    作者:韩东明;王清华;孙建明;窦文广;孙凤霞;李玉侠;李长松 刊期: 2004年第01期

  • 人端粒酶逆转录酶基因启动子区的克隆及其真核表达载体的构建

    目的:构建人端粒酶逆转录酶基因启动子区的真核表达载体.方法:用核酸内切酶Not I和Kpn I酶切报告基因GFP,插入pcDNA3.1(+)载体,得到pcDNA3.1(+)-GFP(PG)载体;用PCR方法扩增hTERT基因ATG上游的启动子序列,测序后用核酸内切酶BglⅡ和Kpn I酶切插入PG载体,得到pcDNA3.1(+)-GFP-hTERT(PGT)载体.将PGT载体转染人食管癌EC9706细胞系,经G418筛选,荧光显微镜下观察.结果:克隆得到的启动子序列与文献相符,重组载体经酶切鉴定方向正确,含有人端粒酶逆转录酶基因启动子序列.经转染人食管癌EC9706细胞系,在荧光显微镜下观察到绿色的阳性克隆.结论:克隆的人端粒酶逆转录酶基因启动子序列在真核细胞中具有启动子活性.

    作者:郭玉忠;李杰;姜国忠;王建民;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 大咯血窒息16例救治体会

    大咯血是临床工作中常见的急重症.1981年2月至2001年12月,本科收治大咯血住院患者126例,其中发生咯血窒息者16例.作者对大咯血窒息患者的救治进行了回顾性分析.

    作者:陈培勇;王琦 刊期: 2004年第01期

  • 丙丁酚加维生素E对高脂饮食大鼠肾间质纤维化的影响

    目的:观察抗氧化治疗(丙丁酚+VitE)对高脂饮食大鼠肾间质纤维化程度及其所引起的肾细胞因子表达的影响.方法:单肾切除大鼠分为对照组(10只,正常大鼠饲料)、高脂饮食组(10只,大鼠饲料含质量分数1.5%胆固醇、0.5%胆酸、5%动物油)、治疗组(10只,高脂饮食加丙丁酚500 mg/d、VitE 50 IU/d).治疗12周后测定肾功能、肾组织MDA含量,观察肾脏病理切片中间质病变程度,免疫组化方法检测肾组织胶原I和TGF-β1的表达.结果:与高脂饮食组相比,治疗组肾功能改善,肾组织MDA含量降低,肾间质病变减轻,肾组织胶原I和TGF-β1的表达减弱.结论:抗氧化剂可减轻高脂饮食大鼠肾间质纤维化的程度,同时抑制肾间质TGF-β1的表达.提示抗氧化剂可能通过此下调作用减轻肾间质纤维化.

    作者:刘章锁;王国勤 刊期: 2004年第01期

  • 铜绿微囊藻抗性株与野生株对铜离子的富积效应

    目的:分离筛选高铜离子抗性的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa),并研究其抗性机制及对铜离子的富积效果.方法:将抗性株与野生株分别加入不同浓度铜离子的BGll培养基中,在不同时间段取样过滤,分析过滤液中铜离子的残留量.结果:在相同时间内,抗性株比野生株产生类金属硫蛋白(MTL)的量要大,培养基中Cu2+减少主要发生在培养后24 h以前.抗性株在24 h之前对Cu2+富积较快,24h的去除率为48.87%,96 h的去除率为80.77%;而野生株在24 h之前对Cu2+富积相对较慢,24 h去除率为20.88%,96 h的去除率为34.29%.结论:利用抗性株铜绿微囊藻治理高铜离子污染源具有较大的应用前景.

    作者:刘红涛;侯桂琴;席宇;赵以军;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 成釉细胞瘤组织中釉原蛋白基因的表达

    目的:研究釉原蛋白基因在良恶性成釉细胞瘤中的表达,为判断成釉细胞瘤细胞分化程度寻找有效指标.方法:收集存档的良恶性成釉细胞瘤标本72例,其中良性55例(包括滤泡型18例,丛状型20例,棘皮瘤型11例和颗粒细胞型6例),恶性17例,用原位杂交方法检测釉原蛋白基因在肿瘤组织中的表达,以12例牙胚标本作阳性对照.结果:釉原蛋白mRNA阳性表达位于肿瘤性上皮细胞胞浆内,55例良性肿瘤中,42例呈阳性表达(76.4%),各组织学类型间阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05),恶性17例有2例呈阳性表达(11.8%),其阳性表达率显著低于良性成釉细胞瘤(P<0.01).结论:釉原蛋白基因可以作为判断成釉细胞瘤细胞分化程度的一个特异性指标.

    作者:刘进忠;崔淑霞;汪说之;陈新明 刊期: 2004年第01期

  • 抗原诱导关节炎兔关节内注射153钐-柠檬酸-羟基磷灰石的生物学分布及病理学变化

    目的:研究兔关节内注射放射性核素153钐-柠檬酸-羟基磷灰石(153sm-citrate-HA)制剂的生物学分布及病理学变化.方法:将30只新西兰大白兔分为4组,其中24只制作成抗原诱导关节炎(antigen induuced arthritis,AIA)模型(AIA兔).A组为正常兔6只,B组AIA兔12只,2组膝关节腔内注射153sm-citrate-HA 3.7×107Bq后分别于第3 d、第6 d显像,用SPECT获得放射性计数并计算核素在关节内滞留率及生物学分布、漏出率.C、D组均为AIA兔6只,C组不做任何治疗,D组关节腔内注射153sm-citrate-HA 3.7×107Bq,2组观察30 d后取滑膜、软骨行病理学观察.结果:A、B组关节腔内核素的滞留率分别为(97.7±1.2)%(3 d)、(93.5±0.9)%(6 d)和(98.4±1.4)%(3 d)、(95.1±0.5)%(6 d).关节外漏出率分别为0.17%(3 d)、0.31% (6 d)和0.07%(3 d)、0.09%(6d).病理学观察:D组较C组滑膜炎症明显好转,关节软骨未发现损害.结论:153sm-citrate-HA漏出率低,关节内分布均匀且滞留率高,疗效肯定,安全性较高.

    作者:汤立新;陈安民 刊期: 2004年第01期

  • 人血管生成抑制因子canstatin原核表达载体的构建及表达

    目的:构建国人血管生成抑制因子canstatin的原核表达载体并在大肠杆菌BL21中表达canstatin重组蛋白.方法:用Trizol试剂提取人肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增canstatin的cDNA,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析.将canstatin cDNA定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,而后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达.结果:canstatin cDNA克隆入质粒pET30a(+)获得了重组表达载体pET30a(+)/Cans,canstatin的cDNA长度为684 bp,编码227个氨基酸.IPTG诱导原核表达载体pET30a(+)/Cans在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体总蛋白量的35%.结论:原核表达载体pET30a(+)/hCans在大肠杆菌BL21中高效表达canstatin重组蛋白.

    作者:侯卫红;袁保梅;王天云;柴玉荣;侯桂琴;王建民;薛乐勋 刊期: 2004年第01期

  • 儿童突眼45例CT诊断

    儿童突眼的病因与成人有所不同.作者收集了本院CT室1987年4月至2003年3月期间经手术病理证实及临床随访的45例突眼儿童的CT资料,旨在探讨不同病因突眼的CT特点,提高诊断正确率,指导临床治疗.

    作者:高雪梅;周志刚;赵艺蕾 刊期: 2004年第01期

  • 动力髋螺钉治疗股骨粗隆间骨折23例

    1998年9月至2000年12月,作者用动力髋螺钉治疗股骨粗隆间骨折23例,疗效满意,报道如下.

    作者:郑若昆 刊期: 2004年第01期

郑州大学学报(医学版)杂志

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