学术投稿

造血干细胞采集、分离与冻存的研究

徐群;武正炎

关键词:造血干细胞, 细胞保存值
摘要:目的:研究外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测。方法:用封闭式动脉采血法采集10例脐血,经Ficoll溶液分离获得干细胞,分成3组,分别用10%二甲亚矾(DMSO)、自配的5%DMSO+6%羟乙基淀粉(HES) +4%人体白蛋白及CP-1 3种不同的冷冻保存液冻存于 196℃的液氮和[ CD*2/3〗80℃的低温冰箱中,对冷冻后的样本进行单个核细胞(MNC)计数。锥虫蓝拒染试验及流式细胞仪CD+ 34细胞计数。结果:采集的血量平均数为(72.2±17.3)ml,3种不同冷冻保存液对造血干细胞的保存效果在1、3、6个月差异无显著性(P>0.05)。随着冷冻时间的延长,特别是6个月后,流式细胞仪对CD+34细胞检测的相对数逐渐增高。在6个月内,80℃低温冰箱中的冻存与196℃液氮内的冻存相比,对造血干细胞的影响差异无显著性(P>0.05)。结论:自配的冷冻保存液效果良好,短期造血干细胞的冻存可以在80℃低温冰箱内进行,冷冻保存造血干细胞1、3、6个月对细胞的活性影响不大。
南京医科大学学报(自然科学版)杂志相关文献
  • 皖籍女性寻常型银屑病发病因素的病例对照研究

    目的:探讨皖籍女性寻常型银屑病发病的相关因素。方法:采用病例对照研究方法对354例皖籍女性寻常型银屑病患者和同一地区的269例健康对照进行系统问卷调查,所获资料用EpiInfo6.0软件进行统计学分析。结果:被调查的患者中95例有银屑病家族史,其暴露比率为26.84%。病情比较显示:有家族史患者呈中、重度发病的比例(18.95%和23.16%)高于无家族史患者(12.74%和 16 .60%);再发患者该比例(38.29%和33.71%)高于首发患者(34.12%和24.71%)。若干环境诱因的单因素分析表明,受潮、感染、精神紧张及食鱼虾等与其发病相关。结论:皖籍女性寻常型银屑病具有一定的遗传背景,环境诱因在其发病中起着重要作用。

    作者:张安平;张学军;朱文元 刊期: 2001年第03期

  • 胰腺电子计算机体层扫描增强扫描参数研究

    目的:研究不同扫描参数对胰腺电子计算机体层扫描(CT)增强的影响,以得出合适的扫描方案。方法:①预试验10例,按1.5 ml/kg,3 ml/s注射造影剂(Omnipaque 300 mg I/ml)行胰腺薄层三期扫描,动脉期、胰腺期及门脉期的延迟时间各为18 s、40 s,70 s,分别测量平均胰腺CT增强值并作比较。②将40例患者按不同剂量和注射速度随机分成4组,Ⅰ组(1.5 ml/kg,3.0 ml/s),Ⅱ组(1.5 ml/kg,2.5 ml/s),Ⅲ组(1.0 ml/kg,3.0 ml/s),Ⅳ组(1.0 ml/kg,2.5 ml/s)每组各10例,分别行胰腺期、门脉期扫描,分别测量平均胰腺CT增强值并作比较。结果:预试验中发现平均胰腺CT增强值,胰腺期[(69.56±10.6) Hu]比动脉期[(24.81±14.98) Hu]高(P<0.05),胰腺期[(69.56±10.6) Hu]比门脉期[(54.38±10.34) Hu]高(P<0.05)。40例对照研究中,胰腺期平均胰腺CT增强值:Ⅰ组为(71.05±9.64) Hu,Ⅱ组为(62.27±12.29) Hu,Ⅲ组为(42.3±11.75) Hu,Ⅳ组为(44.16±11.27) Hu、Ⅰ组与Ⅲ组相比(P<0.05)、Ⅱ组与Ⅳ组相比(P<0.05)。Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅳ组相比无明显差异。结论:平均胰腺实质增强胰腺期比动脉期、门脉期好,以1.5 ml/kg剂量,2.5~3.0 ml/s的注射速度是比较合适的注射参数。

    作者:徐青;黄庆娟;王小宁 刊期: 2001年第03期

  • Bcl-2、Bax基因表达改变与禁食诱导的脂肪细胞凋亡研究

    目的:研究禁食对大鼠体重及外周脂肪湿重的影响,探讨禁食减脂减重与脂肪细胞凋亡的关系。方法:禁食48 h,用DNA提取物凝胶电泳证实脂肪细胞凋亡的存在,逆转录(RT)-PCR探讨Bcl-2与Bax基因的表达。结果:①禁食能明显降低大鼠体重,组间比较具有显著的统计学意义(P<0.001);②禁食能减少外周脂肪组织湿重,但统计学意义不显著(P>0.05);③DNA提取物凝胶电泳结果证实脂肪细胞发生了凋亡;④外周脂肪组织中Bcl-2基因表达减少,Bax表达增加;⑤生殖器周脂肪组织对细胞凋亡的敏感性高于腹膜后。结论:降低Bcl-2与Bax的比值,诱导脂肪细胞凋亡可能是禁食减脂减重的重要机制。

    作者:龚海霞;郭锡熔;陈荣华;费莉;刘倩琦;李晓南 刊期: 2001年第03期

  • 局麻行疝环充填式无张力疝修补术18例报告

    自1999年9月至2000年9月,作者用局麻方法完成腹股沟疝疝环充填式无张力疝修补术18例,报告如下。1 临床资料 一般资料本组18例,均男性,年龄40~80岁,平均65.2岁,其中大于65岁的12例。18例均为腹股沟疝,其中斜疝15例,直疝3例,病程3个月至8年。 麻醉手术方法患者仰卧位,0.5%利多卡因“三点一线”法行腹股沟区局部浸润麻醉。沿腹股沟管切开皮肤皮下组织,打开腹外斜肌腱膜,游离精索,打开睾提肌,游离疝囊至腹膜外脂肪。置入巴德公司Perfix圆锥状充填物,使疝囊反向纳入腹腔。如疝囊过大,则在腹股沟管中间位离断后,关闭疝囊断面并游离至内环,同法置入充填物。嘱患者咳嗽以增加腹压,证实充填物位置正确适当,将充填物与内环缘的腹横筋膜断缘层固定数针。精索后平置Perfix平片,分层缝合腹外斜肌腱膜、皮下和皮肤层。

    作者:蒋振善 刊期: 2001年第03期

  • 造血干细胞采集、分离与冻存的研究

    目的:研究外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测。方法:用封闭式动脉采血法采集10例脐血,经Ficoll溶液分离获得干细胞,分成3组,分别用10%二甲亚矾(DMSO)、自配的5%DMSO+6%羟乙基淀粉(HES) +4%人体白蛋白及CP-1 3种不同的冷冻保存液冻存于 196℃的液氮和[ CD*2/3〗80℃的低温冰箱中,对冷冻后的样本进行单个核细胞(MNC)计数。锥虫蓝拒染试验及流式细胞仪CD+ 34细胞计数。结果:采集的血量平均数为(72.2±17.3)ml,3种不同冷冻保存液对造血干细胞的保存效果在1、3、6个月差异无显著性(P>0.05)。随着冷冻时间的延长,特别是6个月后,流式细胞仪对CD+34细胞检测的相对数逐渐增高。在6个月内,80℃低温冰箱中的冻存与196℃液氮内的冻存相比,对造血干细胞的影响差异无显著性(P>0.05)。结论:自配的冷冻保存液效果良好,短期造血干细胞的冻存可以在80℃低温冰箱内进行,冷冻保存造血干细胞1、3、6个月对细胞的活性影响不大。

    作者:徐群;武正炎 刊期: 2001年第03期

  • 重组腺辅助病毒载体的制备、纯化及其介导的基因转移

    目的:探讨一种制备、纯化重组腺辅助病毒(rAAV)载体的有效方法。方法:以质粒PDG和含有人apoAIcDNA的AAV载体共转染293T细胞,继以Iodixanol密度梯度离心结合肝素亲和层析法分离、纯化,斑点杂交鉴定rAAV病毒颗粒数;并以含人apoAIcDNA的rAAV感染C2C12细胞。结果:rAAV颗粒数为7×1010/ml;rAAV成功介导了人apoAIcDNA在C2C12细胞中的表达并持续了30天,在分化为肌管细胞后仍有此表达能力。结论:本实验采取的制备、纯化rAAV的方法简便、高效,rAAV成功介导apoAI基因在肌源性细胞C2C12中的表达。

    作者:王立峰;范乐明;陈丙莺 刊期: 2001年第03期

  • 心脏瓣膜替换围术期血小板与纤溶系统的活化

    目的:探讨体外循环(CPB)对瓣膜替换患者围术期血小板、纤溶系统的影响。方法:心脏瓣膜替换患者12例,用ELISA法检测血小板α颗粒膜蛋白(GMP- 140)、D-二聚体含量,结合血小板计数等指标,比较瓣膜替换不同时点血小板与纤溶系统的活化程度。结果:CPB过程中及CPB后早期血浆GMP-140、D-二聚体明显升高,血小板计数在CPB中明显下降,CPB后短期内回升至正常范围,血浆GMP-140比血小板计数的恢复明显滞后。结论:CPB后早期机体处于低凝状态,血小板功能的恢复要晚于数量的恢复。临床应重视血小板计数正常的术后早期出血。

    作者:周源;陈亦江;陈广明;邵永丰 刊期: 2001年第03期

  • 神经节细胞瘤的电子计算机体层扫描和磁共振成像表现(附9例分析)

    有关神经节细胞瘤的电子计算机体层扫描(CT)和磁共振成像(MRI)目前报道较少,现将笔者遇到的9例CT和MRI特征报道如下。1 临床资料 收集了1997~1998年共9例神经节细胞瘤,病人年龄和肿瘤分布见表1,平均年龄25岁,5例病人肿瘤是偶然发现的,所有病例均经手术病理证实。9例均做CT平扫加增强,8例病人做过MR I,其中4例做过MRI增强。CT机为西门子产Somatonplus24及GE sytec-4000i,扫描层厚10 mm连续,造影剂均为水溶性造影剂,造影方式采取高压注射(1.5 ml/s)和手推注射,造影剂总量70~100 ml;MRI也为西门子产Magneton Impact 1.0 T超导型及飞利浦GYROSCANT5- NT,所有病人均获轴位和矢状位相,少数加冠状位,扫描层厚7~10 mm,间隔1~2 mm,扫描序列为SET1WI(500/15)和T2WI(2000/90),增强MRI为静脉内注入Gd-DTPA 10~12 ml,行 T1WI。

    作者:张士贤;陈自谦 刊期: 2001年第03期

  • 呼气相电子计算机体层扫描在诊断慢性气道疾病方面的应用

    目的:评价呼气相电子计算机体层扫描(CT)在诊断慢性气道疾病方面的应用价值。方法:对25例临床确诊为慢性气道疾病的患者(病例组)及12例健康志愿者 (对照组),使用螺旋CT分别进行吸气末和呼气末的胸部CT扫描,测量和计算横断面积衰减分数(CLARS),肺密度衰减值(LDAV),象素指数(PI)。对两组结果进行了比较。结果:病例组和对照组的横断面积衰减分数分别为25和48,肺密度衰减值分别为79 HU和186 HU,呼气末病例组和正常对照组的PI值分别为11.36%和0.13%,两组结果有显著统计学差异。结论:呼气相CT对慢性气道疾病的诊断和定量有较大的帮助,能够在一定程度上反映气道的功能,是一种有发展前途的检查方法。

    作者:吴飞云;张思全;冯源;刘文 刊期: 2001年第03期

  • 联用维生素C、E对高血压病人血管内皮活性物质和舒张功能的影响

    流行病学研究表明抗氧化剂摄入减少或血浆中抗氧化剂水平降低与高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死和脑卒中等危险性增加有关。这可能由于体内的氧化应力增加,血管内皮功能受损,促进心脑血管疾病的发生发展。本研究观察高血压病人单独服用利尿剂降压与利尿剂联用维生素(Vit)C、E治疗前后血浆超氧化物歧化酶(SOD)、内皮素-1(ET-1) 、一氧化氮(NO)及氧化低密度脂蛋白(O-x-LDL)的变化,并观察反应性充血前后肱动脉直径的变化率(FMD%),旨在探讨增加抗氧化维生素摄入对高血压病人体内内皮活性物质和内皮依赖性舒张功能的影响。

    作者:陈忠;桂鸣;周秀娟;程蕴琳;穆庆霞;吴爱娟 刊期: 2001年第03期

  • 紫外线辐射对小鼠分泌肿瘤坏死因子α的影响

    目的:研究紫外线辐射对小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNFα)水平和脾细胞TNFα mRNA表达的影响,从而探讨紫外线辐射所致免疫抑制的作用机制。方法:用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中TNFα含量。一步法提取脾细胞RNA,逆转录聚合酶链反应检测其TNFα mRNA表达。结果:一定剂量的紫外线辐射不能使小鼠血清中出现可检测的TNFα(P>0.05)。但可使诱生的TNFα水平下降(P<0.01),辐射剂量与TNFα的浓度呈直线负相关(P<0.01)。脾细胞TNFα mRNA表达被抑制(P<0.001)。结论:紫外线辐射可能是通过抑制具有分泌TNFα功能的淋巴细胞和(或)单核巨噬细胞的TNFα mRNA转录,进而抑制TNFα的分泌,调节机体的免疫反应。

    作者:蒋艺;毕志刚;李燕华 刊期: 2001年第03期

  • Graves病患者外周血可溶性白细胞介素2受体水平的研究

    目的:探讨Graves病患者的血清可溶性白介素2受体(SIL -2R)在治疗前后的变化。方法:应用放射免疫法(RIA)对89例Graves病患者治疗前后的血清SIL-2R和各种甲状腺激素水平进行检测,比较并逐步回归。结果:治疗后Graves病患者除促甲状腺激素(TSH)外,各种甲状腺激素水平显著降低( P<0.05),并与SIL-2R的上升、下降显著相关。结论:SIL-2R水平能反映淋巴细胞的活化状态,可作为Graves病患者免疫活化的一项有用指标。

    作者:孙晓芳;俞晓芳;傅友恒;尹根娣;赵华秦 刊期: 2001年第03期

  • 胰十二指肠及肾联合切取的实验研究和临床应用

    目的:探讨同种异体胰十二指肠及肾联合移植尸体供移植物的获取、保存和修剪。方法:采用原位插管、低温灌注、整块快速切取及体外修剪获得可供移植的胰十二指肠及肾移植物。结果:8例尸体获取移植物,热缺血时间平均为4 min 50 s,获取时间为18 min 20 s,其中2例用于临床移植,胰肾移植物功能均于术后1周内恢复正常。第1例受体胰肾有功能存活2年余。结论:此方法适合于尸体供胰十二指肠及肾的获取和保存,应用于临床效果良好。

    作者:徐泽宽;张炜;刘训良;吴宏飞;苗毅;刘华;徐正铨;眭元庚 刊期: 2001年第03期

  • 体外循环瓣膜置换手术围术期血浆细胞粘附分子浓度的变化

    目的:观察瓣膜置换手术围术期外周血可溶性细胞粘附分子变化规律,并初步探讨其变化的临床意义。方法:连续随机地选取15例瓣膜置换病人,于体外循环(CPB)前、CPB开始后15 min、CPB结束、CPB结束后1 h及术后第1天晨5个时段抽取外周静脉血,用酶联免疫吸附试验法检测可溶性细胞粘附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管细胞粘附分子-1(sVCAM-1) 及可溶性P选择素(sP-selectin)的血浆浓度。结果:本组病人外周血可溶性细胞粘附分子浓度在CPB前在正常范围,CPB 结束后显著增高(P<0.05)。术后第1天晨,sICAM-1浓度下降至CPB前的基础水平,而s VCAM-1及sP-selectin仍维持较高水平(P<0.05)。结论:CPB可引起血浆多种粘附分子浓度增高,这可能与CPB导致的全身炎症反应有关,并成为CPB术后再灌注损伤及术后心肺功能损害的重要原因。

    作者:邵永丰;朱秉智;陈广明;陈亦江;陈亮;周元 刊期: 2001年第03期

  • 复杂髋臼骨折16例手术治疗分析

    我院自1991年1月~1998年6月共收治复杂髋臼骨折16例,均手术治疗,临床效果满意,报告如下。1 临床资料 一般资料本组男15例,女1例,年龄22~47岁,平均31岁。左髋9例,右髋7例。车祸伤10 例,高处坠落伤6例,合并脑外伤3例,四肢骨折5例,臂丛损伤1例。根据Jadet-letournel 分类法[1],“T”型骨折3例,后壁后柱骨折5例,横型加后壁骨折、前壁加横型骨折各2例,双柱骨折4例。 治疗方法入院后常规股骨髁上牵引,有股骨头脱位者先行复位。16例患者均行手术治疗。 Carnesale髋关节扩大切口4例,Smith-Petersen切口5例,髋关节后外侧切口7例。术中输血800~1 600 ml。平均1 200 ml。用钢板螺钉作内固定,术后伤肢皮肤牵引3周,2个月后扶双拐行走。 治疗结果本组病例均获得随访。随访时间12~48个月,平均20个月。摄片复查髋臼骨折均愈合。患髋活动度正常,无疼痛者8例;患髋活动部分受限,长时间行走后疼痛明显者5例;患髋明显活动受限,扶双拐行走者2例;股骨头坏死1例。异位骨化发生12例。

    作者:陈金福;胡辉东 刊期: 2001年第03期

  • 血管内放射抑制猪髂动脉球囊损伤后狭窄形成的动态观察及机制探讨

    目的:评价血管内放射抑制猪髂动脉球囊损伤后狭窄形成的可行性、有效性及其作用机制。方法:小型家猪13头,分为对照组7头及实验组6头。对照组左侧髂动脉先行造影及血管内超声检查,随后行球囊扩张成形术,后置入置源管。实验组在上述处理基础上,通过置源管送入192Ir高剂量后装源取20 Gy对受损髂动脉行放射治疗。术后第3天、第10天及第28天各处死2头猪,取损伤的髂动脉分别行苏木精-伊红及Masson染色,计算机图像分析系统分析形态学及组织学变化。结果:对经球囊损伤后的猪髂动脉进行血管内放射在技术上是可行的,未见并发症发生。实验组在不同时间点与对照组相比较均可见新生内膜面积及厚度减少、血管腔面积及外弹力膜包绕面积增加现象;新生内膜中胶原含量有增生受抑现象。结论:在球囊扩张成形术后即刻应用血管内192Ir 20 Gy放射治疗,第3天起明显抑制新生内膜形成,第10天时新生内膜抑制达到高峰,血管发生有意义的正性重塑,到28天时血管正性重塑更加明显,从而达到有效抑制动脉损伤后狭窄形成的效果。

    作者:王连生;黄峻;马根山;杨志健;曹克将;冷静;彭韬;冯振卿 刊期: 2001年第03期

  • 仿真支气管内窥镜和三维重建在临床的应用

    1994年以来,电子计算机体层扫描仿真支气管内窥镜(CTVB)开始应用于临床[1],并以其无创性和直观性受到医学界的极大关注,支气管三维重建(3D)包括多层面/曲面/ X线体积成像(MPR/CPR/XVR)、小密度投影(MinIP)、大密度投影(MaxIP)、表面遮盖成像 (SSD)等技术可提供多方面的信息[17],有利于病变的诊断。本研究探讨3D和C TVB在临床的应用。

    作者:杨春霞;范春瑛;许民;叶彬;王书智;顾建平 刊期: 2001年第03期

  • 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺癌24例分析

    自1997年1月至1999年12月,共对24例前列腺癌致尿道梗阻患者行经尿道前列腺汽化电切术,结合去势术及药物进行综合治疗,疗效满意,报告如下。1 临床资料 一般资料本组24例,年龄59~80岁,平均69.5岁。均有不同程度排尿梗阻症状,大尿流率(MFR)(8.3±2.5) ml/s,平均尿流率(AFR)(5.2±1.8) ml/s,剩余尿30~560 ml,平均186 ml。肛门指诊前列腺质硬,有硬结20例。血前列腺特异性抗原(PSA)12~171 ng/ml,平均56.5 ng/ml。15例行电子计算机体层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)检查发现有盆腔淋巴结转移或周围脏器转移,2例有骨痛症状经X线及同位素骨扫描(ECT)提示有骨转移。20例术前穿刺活检证实为前列腺癌,2例术中快速切片证实,2例术后石蜡切片证实。其中高分化腺癌5例,中分化腺癌8例,低分化腺癌11例。根据美国Jewett-Whitmore-Prout临床分期法,其中A期2例,B期1例,C期13例,D期8例。

    作者:刘伟民;陆曙炎 刊期: 2001年第03期

  • 双功彩色多普勒超声和99mTc-亚甲基二磷酸盐结合用于乳腺癌诊断的价值

    目的:评价双功彩色多普勒血流显像(CDFI)和99mTc-亚甲基二磷酸盐(MDP)结合用于乳腺癌诊断的价值。方法:用双功彩色多普勒超声检查152例159个乳腺肿块,定量分析其彩色象素平均密度、峰值血流速度、阻力指数(RI)值和血管数目;其中,32例乳腺肿块用99mTc-MDP检测。结果:乳腺癌彩色象素平均密度为(6.100±0.002)%,高于良性肿块(1.500±0.001)%(P<0.01);收缩期峰值血流速度为(23.55±1.23) cm/s,明显高于良性肿块的(5.73±0.39) cm/s(P<0.001);RI为0.71±0.011,明显高于良性肿块的0.51±0.012(P<0.01);血管数目为1.67±0.063,明显高于良性肿块的0.86±0.093(P<0.001);99mTc-MDP乳房显像为阳性。CDFI诊断乳腺癌的敏感性88%、特异性82%、准确性89%;99mTc-MDP诊断乳腺癌的敏感性90%、特异性80%、准确性87%。结论:CDFI、脉冲多普勒(PD)和99mTc-MDP联合应用对乳腺癌的诊断有较高的临床价值。

    作者:胡淑芳;姚薇萱 刊期: 2001年第03期

  • 适宜游泳应激对衰老小鼠行为和免疫功能的影响

    目的:观察适宜游泳应激对衰老小鼠行为和免疫功能的影响。方法:在正常对照组、D-半乳糖(腹腔内注射D-半乳糖0.12 mg/g)致衰老组基础上,分别都予以游泳应激(于水温18℃,水深15 cm的水中游泳15 min)。8周后,对各组小鼠进行Y-迷宫、被动回避、平衡耐力等行为学测试,测定胸腺指数,并取脾脏用3H-TdR掺入法观察脾淋巴细胞对不同有丝分裂刺激原ConA和LPS的增殖反应。结果:衰老组小鼠的学习记忆能力、平衡耐力、免疫功能与正常组小鼠相比明显降低,但经过8周游泳应激后,正常组、衰老组小鼠学习记忆能力、平衡耐力都明显提高,胸腺指数增加,脾淋巴细胞对不同有丝分裂刺激原ConA和LPS的增殖反应能力明显提高。结论:适宜游泳应激可改善衰老小鼠行为表现和免疫功能以延缓衰老进程。

    作者:何海蓉;李平;孙秀兰;陈启盛 刊期: 2001年第03期

南京医科大学学报(自然科学版)杂志

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