周媛媛；封阳；曹建平；张旭光；朱巍；倪倩影；耿冲；陈光烈；罗居东
目的 构建含 PTEN 基因的重组腺病毒载体,为 PTEN 进行肺腺癌的基因治疗奠定基础.方法 用PTEN 引物 VT415 和 VT416 扩增 PTEN 基因后,分别用EcoR I+Sal I双酶切PCR-PTEN和PSUCMV,回收并纯化PTEN cDNA小片断和PSUCMV的大片断,使两者连接获得含有PTEN基因的重组穿梭质粒载体PSUCMV-PTEN;采用细胞内同源重组方法构建PTEN基因重组腺病毒载体,将质粒PSUCMV-PTEN与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbghe3通过 Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经PCR鉴定,扩增病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化浓缩,测定病毒滴度.结果 经双酶切和PCR进行鉴定,经鉴定正确的腺病毒命名为VSUCMV-PTEN,TCID50法测定病毒滴度为1.0×1010pfu/ml.结论 成功构建了含PTEN基因的重组腺病毒载体Ad-PTEN,为下一步体内外实验证实PTEN对肺癌的抑制作用研究打下基础.
作者：徐中华；钱海鑫；钱永跃 刊期： 2011年第01期
目的 研究跨损伤DNA合成通路中的关键基因RAD6、RAD18、PCNA和UBC13在人食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异.方法 采用 SYBR Green实时定量PCR技术检测60例食管鳞癌患者癌组织和其中的24例癌旁组织中RAD6、RAD18、PCNA和UBC13基因表达情况.结果 RAD6和UBC13在食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异均无统计学意义(均P>0.05);RAD18和PCNA的表达在食管鳞癌中均显著上升,与癌旁组织相比差异均有高度统计学意义(均P＜0.01).结论 RAD18和PCNA的表达升高可能是食管鳞癌的一个特征.RAD18和PCNA表达的升高可能与食管鳞癌中跨损伤DNA合成途径作用增强有关.
作者：朱孝中；俞力超；施舜缤；邱鹏；钱永跃；陈勇兵 刊期： 2011年第01期
目的 观察 Sina 基因同源类似基因1(SIAH1)在大鼠脊髓损伤过程中的表达情况,分析它们与神经元存活和死亡、胶质细胞活化增殖等生物学的关系,探讨它们在脊髓损伤和修复过程中的生物学功能.方法 制作脊髓损伤模型,利用Western blot、免疫组织化学、免疫荧光技术观察SIAH1在损伤脊髓中的表达变化、组织分布与细胞定位,在此基础上探讨SIAH1在脊髓损伤后的病理生理意义.结果 Western blot结果显示SIAH1经历了在损伤后8 h、1 d和2 d的增加后开始下降,直到损伤后14 d仍没有明显上调的变化趋势.免疫组化结果显示在脊髓损伤后1 d,SIAH1的阳性信号在临近损伤中心的脊髓中明显增加,而在脊髓损伤后7 d,SIAH1阳性的细胞数明显减少.免疫荧光结果显示SIAH1与神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞存在共定位.结论 脊髓损伤后脊髓中SIAH1的表达上调可能参与神经元的凋亡过程以及星形胶质细胞和小胶质细胞的活化的病理生理过程.
作者：陈向东；张烽；沈爱国 刊期： 2011年第01期
目的 研究Tula理组,采用137Cs-γ射线对两组小鼠进行不同剂量单次全身照射;其中处理组小鼠在照射前1 d给予Tulasi(20 mg/kg),采用大耐受量评价Tulasi的用药安全性,观察小鼠30 d存活率、肝脏丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 Tulasi 具有很好的用药安全性,大耐受量为275 mg/kg,能显著提高辐射小鼠的30 d生存率,处理组与对照相比,差异有高度统计学意义(P＜0.001);对照组肝脏MDA的含量明显较处理组高,而GSH的含量则明显低于处理组,两者差异均有高度统计学意义(P＜0.001).结论 Tulasi 对接受全身照射的小鼠具有明显的辐射防护作用.
作者：王利利；焦旸；徐加英；胡旭东；樊赛军 刊期： 2011年第01期
目的 观察七氟烷预处理对缺氧/复氧(H/R)损伤的H9c2大鼠心肌细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响,探讨自噬在七氟烷预处理延迟性保护中的作用.方法 H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组(CON);缺氧/复氧组H/R(缺氧2 h,复氧1 h);七氟烷预处理组(SEVO)予2.5%七氟烷预处理1 h,24 h后进行H/R;3-MA+SEVO组,七氟烷预处理前15 min 在培养液内加入3-MA(10 mmol/L),24 h后进行H/R;3-MA组,即在培养液内加入3-MA(10 mmol/L),25 h后进行H/R.取复氧后心肌细胞,MTT法检测各组H9c2心肌细胞存活率,Western blot 法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达.结果 与CON组相比H/R组和SEVO组细胞存活率均降低(均P＜0.05);与H/R组相比SEVO组、3-MA组和3-MA+SEVO组细胞存活率均增高(均P＜0.05).Western blot结果显示,与CON组相比SEVO组、H/R组自噬蛋白LC3-Ⅱ表达均上调(均P＜0.05),与H/R组相比SEVO组LC3-Ⅱ蛋白表达均下调(均P＜0.05),而3-MA组和3-MA+SEVO组表达均显著下调(均P＜0.01).结论 七氟烷预处理对H/R损伤H9c2心肌细胞具有延迟性保护作用,自噬可能参与了七氟烷预处理的延迟性保护机制.
作者：刘琴；李凌云；乔世刚；魏兴；谢红；王琛 刊期： 2011年第01期
目的 研究小鼠脑出血(ICH)后自噬是否被激活及NF-κB信号通路对ICH诱发的自噬相关蛋白表达的影响.方法 正常昆明小鼠纹状体注射胶原酶Ⅳ建立脑出血模型,或于脑出血模型建立前5 min,侧脑室给药SN50(0.1μg/μl)或生理盐水1 μl,随机分为脑出血组、SN50处理组和生理盐水处理组,同时设立空白对照组.每组分别于脑出血1 h,6 h,24 h,48 h,7 d后(5只/时间点)断头取脑,脑出血各组取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达水平或激活情况,SN50处理组和生理盐水处理组各时间点取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测LC3蛋白激活情况.结果 小鼠脑出血后出血区及出血周边脑组织Beclin-1蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调,以6-48 h时为显著(P＜0.05);Beclin-1/Bcl-2比值随时间变化逐渐增高,以6～48 h时为显著(P＜0.05);LC3被激活,随时间变化蛋白表达逐渐增加,48 h时达高峰,至7 d时仍较空白对照组有显著差异(P＜0.05).脑出血后,SN50处理组LC3蛋白激活高于生理盐水处理组,以6～48 h时为显著(P＜0.05).结论 脑出血后自噬被激活,这种激活的机制之一涉及到Beclin-1/Bcl-2比值的增加;NF-κB特异性抑制剂 SN50 促进了脑出血后自噬相关蛋白的上调表达.
作者：孙玉霞；包海军；刘伟丽；王涛；戴定坤；王龙；张璐；王尧琪；黄娅；秦正红；朱广友；陶陆阳 刊期： 2011年第01期
目的 探寻辐照对水流动力学注射(HGT)介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内的表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有效性.方法 将实验鼠分为辐照组和非辐照组,尾静脉大体积快速注射带有荧光素酶报告基因的真核表达质粒PGL3-luc.于注射后6 h腹腔注射荧光素酶底物,并通过活体动物体内光学成像系统检测基因表达的初始水平.将辐照组小鼠进行700c Gy非清髓性全身照射,并于水流动力学注射后12、24、48、72、96、120 h通过活体动物体内光学成像系统对两实验组小鼠体内目的基因的表达水平进行监测.结果 通过尾静脉进行水流动力学注射的PGL3-luc质粒在注射后6 h于小鼠肝脏大量表达,其平均表达水平为(3 739±924.8)相对荧光单位(RLU)/(sec·mg)蛋白.在各个时间监测点辐照组与非辐照组相比实验鼠体内基因表达水平差异均有统计学意义(均P>0.05),其表达水平均于水流动力学注射72 h后显著降低.结论 小鼠移植前的辐照预处理对水流动力学注射介导的基因在小鼠体内的表达并无影响,该种新型基因转移表达方法可以有效地应用于小鼠造血干细胞移植模型中.
作者：包光明；胡博；张胤晟；赵雷；卞士中；刘海燕 刊期： 2011年第01期
目的 检测肿瘤细胞在单位时间内的葡萄糖利用率.方法 将数量为2.5×105的HCT116结肠癌细胞培养至贴壁,在培养基中加入3H定位标记(5位碳原子)的葡萄糖,30 min后终止反应,采用阴离子交换树脂滤去大分子代谢产物,通过液体闪烁计数法测量流出液中氚水的每分放射性计数,计算得到单位数目的 HCT116细胞在30min 内的葡萄糖代谢率.结果 当层析柱内的层析液体积大于5.0 ml时,层析柱对3H-葡萄糖标准液内葡萄糖的吸附率几乎达到100%(99%);30 min内3.7×105的HCT116细胞的葡萄糖代谢率约为1.23%.结论 该方法通过在细胞培养液中加入同位素3H定位标记的葡萄糖,可以准确定量测定肿瘤细胞的葡萄糖代谢率,从而为研究不同种类肿瘤细胞糖代谢及能量供给提供可靠的实验方法.
作者：张昊文；刘建军；冯爽；徐媛媛；蒋昕；刘芬菊 刊期： 2011年第01期
目的 研究不同转移能力肿瘤细胞株中八聚体结合蛋白4(Oct 4)的表达情况及其意义.方法 选取3对不同转移能力的肿瘤细胞株:高转移能力人乳腺癌细胞 MDA-MB231 和低转移能力人乳腺癌细胞MCF7,高转移能力人食管癌细胞Eca-109和低转移能力人胃腺癌细胞AGS,高转移能力卵巢癌细胞HO-8910PM和低转移能力人卵巢癌细胞SK-OV-3;采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和细胞免疫荧光技术分别从mRNA和蛋白水平检测Oct 4在各株肿瘤细胞中的表达情况.结果 Oct 4在6株肿瘤细胞中mRNA和蛋白水平均有表达.高转移能力细胞中mRNA 表达量较低转移能力细胞高;Oct 4蛋白红色荧光在细胞质中均有显示,在高转移能力细胞中较低转移能力细胞亮.结论 Oct 4 在高转移能力肿瘤细胞株中的表达较低转移能力肿瘤细胞高,提示与肿瘤细胞的转移能力可能存在相关性,其机制有待进一步研究.
作者：孙兰云；朱雪明；杨欢；温会燕 刊期： 2011年第01期
目的 探讨青蒿素联合60 Co γ射线照射后对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞的DNA损伤.方法 采用甲基四唑蓝(MTY)法检测不同浓度青蒿素对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞的抑制效应,确定青蒿素的适实验浓度;采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测照射后HeLa和SiHa细胞DNA的损伤情况.结果 青蒿素对HeLa和SiHa细胞的抑制率存在剂量一效应关系;SCGE结果显示:两种细胞的单药组与对照组的彗星细胞检测指标(拖尾率、尾长、OLIVE 尾矩和彗尾 DNA%)无明显差异(P>0.05);在相同照射剂量下,青蒿素加照射组的HeLa细胞的彗星细胞检测指标高于单纯照射组(P＜0.05),而SiHa 细胞差异无统计学意义(P>0.05).结论 青蒿素本身不能引起HeLa 和SiHa细胞DNA损伤,但辐照后可致HeLa细胞DNA损伤加重,增加了HeLa细胞的辐射敏感性,而对SiHa细胞没有辐射增敏作用.
作者：封阳；周媛媛；杨巍；陈秋；李明；张舒羽；张旭光；朱巍；曹建平 刊期： 2011年第01期
目的 构建UHRF1的真核表达载体,并验证其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.方法 采用RTPCR方法,从乳腺癌细胞MCF-7的总cDNA中扩增出2.3kb 的 UHRF1基因的cDNA片段,经限制性内切酶Kpn I与Xho I双酶切,定向克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pcDNA3(+)-UHRF1,利用限制性内切酶双酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;构建成功的重组质粒,经脂质体Lipofactamin2000介导转染MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆,以RT-PCR 和 Western blot 检测 UHRF1 的mRNA和蛋白的表达.结果 获得全长约为2.3kb的UHRF1基因片段;重组质粒经限制性内切酶Xho I和Kpn I酶切、电泳后显示2.3kb的UHRF1目的片段和5.4kb的pcDNA3载体片段,即UHRF1基因的cDNA已正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中;UHRF1转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后的RT-PCR和Western blot的结果显示:UHRF1的mRNA和蛋白水平均呈现高表达.结论 成功构建UHRF1基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定基础.
作者：李新莉；孟庆慧；朱然；朱巍；樊赛军 刊期： 2011年第01期
目的 探讨米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗子宫瘢痕妊娠的临床价值.方法 分析6例子宫瘢痕妊娠的保守治疗的临床资料.结果 6例子宫瘢痕妊娠患者使用米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗效果满意,均无阴道大出血及子宫破裂等严重并发症发生.结论 对确诊的子宫瘢痕妊娠患者使用米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗,对保留子宫的功能和提高患者的生存质量有着重大意义.
作者：陈媛媛 刊期： 2011年第01期
目的 探讨熊果酸(UA)对人肝癌 SMMC-7721 细胞周期的影响.方法 用不同浓度的UA处理SMMC7721 细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞周期相关基因p21、p53及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 UA对SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;UA可以诱导SMMC-7721细胞阻滞在S期,RT-PCR结果显示其能够上调p21和p53基因,下调PCNA基因.结论 UA能明显抑制SMMC-7721细胞的生长,引起细胞周期阻滞;细胞周期阻滞的发生与p21、p53、PCNA基因变化相关.
作者：虞燕霞；顾振纶；殷江临；周文轩；郭次仪；梁中琴 刊期： 2011年第01期
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)与2型糖尿病患者视网膜病变(DR)之间的关系.方法 将52例2型糖尿病患者分为31例糖尿病视网膜病变组(DR组)和21例糖尿病视网膜无病变组(NDR组),又将DR组分为背景型糖尿病患者视网膜病变组(BDR组)19例和增值型糖尿病患者视网膜病变组(PDR组)12例.分别检测各组VEGF值并与36例正常对照组进行比较.结果 正常对照组、糖尿病组、NDR组、BDR组及PDR组VEGF含量(pg/m1)分别为108.4±27.2、185.2±32.6、162.3±28.7、220.3±44.6和201.9±31.7.糖尿病组和正常对照组相比,差异有高度统计学意义(均P＜0.01);BDR、PDR与NDR组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05),PDR与BDR相比,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF可作为了解糖尿病视网膜病变程度的参考指标.
作者：权玉萍；王育水；赵志勇；李高亮 刊期： 2011年第01期
目的 观察蛇床子素对小鼠酒精性脂肪肝的治疗作用并初步探讨其作用机制.方法 建立小鼠酒精性脂肪肝模型后,分别以蛇床子素不同剂量(10～40 mg/kg)给予治疗6周,然而测定小鼠血脂、肝脂及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量,同时观察肝脏的病理变化.结果 经蛇床子素处理过的小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)水平和肝组织中TC、TG和MDA的含量明显低于模型组(P＜0.05或0.01),同时肝组织中的SOD含量明显高于模型组(P＜0.05或0.01).肝组织形态学评估表明,蛇床子素显著减少了肝脂质的沉积.结论 蛇床子素对小鼠酒精性脂肪肝有较好的治疗作用,其作用机制可能与其增加机体的抗氧化能力有关.
作者：张建军；谢梅林；王恒斌 刊期： 2011年第01期
目的 研究纳米化紫杉醇(TAX-NLC)与电离辐射对KB细胞杀伤的联合作用.方法 利用MTT法观察TAX-NLC、电离辐射及其二者联合对KB细胞的杀伤效应.通过流式细胞仪观察TAX-NLC及电离辐射对细胞周期的影响.结果 TAX-NLC较紫杉醇(TAX)对KB细胞具有更强杀伤作用,TAX-NLC或TAX与电离辐射联合作用时,随着剂量的加大,对KB细胞的杀伤作用增强.与同等剂量的电离辐射联合作用时,同浓度的TAX-NLC也比TAX 的作用强.同样,TAX-NLC 可以影响细胞周期再分布,使G2/M期细胞比例增加,与电离辐射联合作用时,其对细胞周期的影响要强于TAX.结论 TAX-NLC 对KB细胞的杀伤作用高于TAX.TAX-NLC与电离辐射的联合效应比与TAX的联合效应要高.TAX-NLC作用机制可能是其更易通过细胞膜并在细胞中浓聚有关.
作者：刘敏；李智慧；许玉杰 刊期： 2011年第01期
目的 探讨高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)检测在官颈病变筛查中的价值.方法 分析380例同时行HR-HPV 检测、液基细胞学检查和活组织病理学检查的宫颈病变筛查患者的临床资料.结果 以活检宫颈上皮内瘤样变Ⅰ级(CINI)及CINI以上判定为活检阳性,活检阳性组HR-HPV感染率(85.4%)与阴性组(39.1%)相比,差异有高度统计学意义(P＜0.01),CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ和宫颈癌组HR-HPV感染率分别为77.5%、85.3%、91.9%和100%.细胞学检查为宫颈上皮内病变阴性(NILM)病例中,HR-HPV阳性组活检阳性率(47.4%)与阴性组(28.1%)相比;意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)病例中,HR-HPV阳性组活检(阳性率65.1%)与阴性组(23.4%相比;低度和高度鳞状上皮内病变(LSIL,HSIL)病例中,HR-HPV阳性组活检阳性率(88.6%)与阴性组(15.8%)相比;以上各组差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 HR-HPV感染率与宫颈病变严重程度呈正相关,HR-HPV检测在宫颈病变筛查中有很重要的临床价值.
作者：刘洁；平静；王俊利；常正义；庞广福；黄海玲 刊期： 2011年第01期
目的 研究17-DMAG对缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的人宫颈癌HeLa细胞的辐射敏感性影响.方法 首先应用不同浓度的CoCl2处理HeLa细胞24h,采用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达量,然后选取浓度为200μ mol/L的CoCl2对Hela细胞进行模拟缺氧处理24 h,应用不同浓度的17-DMAG预处理细胞16h后,接受2、4、6、8Gy不同剂量的射线照射,采用克隆形成实验观察细胞的存活率,应用 Western blot技术检测 HIF-1α蛋白表达.结果 在 CoCl2浓度为200μmol/L时HIF-1a蛋白表达量强;不同浓度17-DMAG处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率差异均有高度统计学论(均P＜0.01);17-DMAG预处理缺氧HeLa细胞后,HIF-1a蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制.结论 17-DMAG 预处理可增加缺氧细胞辐射敏感性,其机制可能是通过抑制HIF1a 蛋白表达而发挥作用.
作者：吴晓芬；洪承皎；张保国 刊期： 2011年第01期
目的 探讨多模式镇痛在骨科术后管理中的作用.方法 观察335例全关节置换和股骨干、胫腓骨骨折内固定术后患者多模式镇痛效果及疼痛管理的作用.结果 患者术后6h时疼痛评分升高(P＜0.001),经及时处理后,疼痛评分均显著下降(P＜0.001);使用不同镇痛方法,其副作用的发生率亦不同.结论 围手术期多模式镇痛的实施中,疼痛管理起着重要的作用.
作者：顾美珍；艾红珍；姜习凤 刊期： 2011年第01期
目的 探讨子宫内膜胎盘蛋白14(PP14)在子宫内膜异位症(EM)患者中的诊断价值.方法 选取50例EM患者为研究组,对照组为体检正常的30例女性.采用ELISA法测定EM各组血清及腹水中PP14和对照组各组血清PP14水平.结果 (1)轻型EM组增生期血清PP14高于对照组增生期(P＜0.05);轻型EM组分泌期血清PP14和对照组分泌期比较,差异无统计学意义(P>0.05).重型EM组增生期和分泌期血清PP14均高于对照组(均P＜0.05).在分泌期和增生期,EM组血清PP14表达水平均为重型组高于轻型组(P＜0.05).在增生期EM组PP14腹水表达水平重型组和轻型组差异无统计学意义(P>0.05);在分泌期EM组PP14腹水表达水平重型组高于轻型组(P＜0.05).(2)EM组血清PP14和腹水PP14水平呈直线正相关(r=0.674,P＜0.01).结论 PP14在EM的发生发展中起一定作用,血清PP14可能成为诊断EM的新的血清学指标.
作者：高红艳；沈宗姬；陈继明 刊期： 2011年第01期
苏州大学学报（医学版）杂志
主管:江苏省教育厅
主办：苏州大学
