学术投稿

新生大鼠神经干细胞的体外分离和培养

龚珊;单立冬;郭试瑜;久光 正;蒋星红

关键词:新生大鼠, 神经干细胞, 细胞培养
摘要:目的改进大鼠神经干细胞的分离和培养方法.方法用出生1~3 d的新生大鼠,取脑用刀片剁碎和吸管吹打的机械分离法代替酶消化法.用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞、神经元和星形胶质细胞.结果用机械分离法从新生大鼠脑组织分离神经干细胞的获得率较高,并培养出较多的神经球,还能分化成神经元和星形胶质细胞.结论该方法简便,能得到较多的神经球,细胞获得率也较高.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 国产聚乙烯醇树脂组织相容性的实验研究

    目的观察国产聚乙烯醇树酯(PVA)植入家兔背部肌肉后的不同时间材料周围的组织反应情况.方法大耳家白兔10只,在其脊柱一侧背部植入国产PVA,另一侧植入进口PVA,观察术后1、4、12、26、52周材料周围的组织反应情况.结果肉眼观察植入部位无皮下和肌肉组织异常病变,组织病理学检查结果符合国家规定的组织反应程度指标.结论国产PVA的组织相容性良好.

    作者:张宏文;倪才方;冷德嵘 刊期: 2005年第01期

  • 血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

    目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段.方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GPⅥ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA Resin纯化后复性;使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质.结果PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32 kd的蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合.结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性.

    作者:余自强;董宁征;白霞;祝怀平;季顺东;江淼;阮长耿 刊期: 2005年第01期

  • 腹部带蒂真皮下血管网皮瓣修复手部软组织缺损的临床应用

    应用腹部带蒂真皮下血管网皮瓣修复手部软组织缺损76例,效果满意.它具有皮瓣薄、质地好、断蒂时间短、供皮范围广、面积大、皮肤相对松弛、位置隐蔽、不需二次去脂手术等优点,是修复手部软组织缺损尤其是伴有肌腱、骨等外露创面的理想皮瓣,可广泛应用于急诊手外伤的修复.

    作者:唐俊;陆兴安;沈国良 刊期: 2005年第01期

  • 经皮肝穿胆道引流术并发症的观察和治疗方法探讨

    对69例恶性阻塞性黄疸患者行经皮肝穿胆道引流术,其中行单纯引流12例,胆道内支架植入51例,胆道内支架植入+置管引流6例.术后并发症有胆道感染、胆道出血、引流管脱落闭塞、支架植入不到位、支架未完全扩张、支架闭塞等.对并发症发生的原因及治疗方法进行分析,认为提高经皮肝穿胆道引流术的安全性、预防和避免并发症发生的关键是及时采取有效的治疗方式.

    作者:金一琦;沈利明;陈磊;沈钧康 刊期: 2005年第01期

  • 284个指蹼畸形修复分析

    我院1985年1月至1995年共收治192例284个指蹼粘连畸形,采用不同手术方式进行整形修复,术后半年内门诊复查均获满意效果.现报告如下.

    作者:刘惕;吴敏;王龙村 刊期: 2005年第01期

  • 层流手术室不同状态下空气细菌学的对比分析与对策

    在不同状态下对不同级别层流手术室空气的细菌进行采样,经培养后测定菌落数.结果:手术开始后30min及2 h时术中控制开门次数和人员流动数与未控制组相比,空气中菌落数均有明显差异,经控制管理后的空气菌落数明显减少(P<0.001);且手术开始后2 h时空气菌落数均比手术开始后30 min时低(P<0.05).认为手术人员对层流手术室的学习和认识亟待提高,防止其他手术间人员随意进出,参观人员必须更换清洁的洗手衣裤,以减少对术中空气的污染,降低手术患者的感染率.

    作者:王莉;钟建华;杜美兰;蒋芳琴;秦长渝;吴晨虹;盛亚敏 刊期: 2005年第01期

  • 血清神经元特异性烯醇化酶检测在肺癌诊断中的应用价值

    目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测在肺癌诊断中的价值.方法对68例原发性肺癌患者、30例急性肺炎患者和30名健康人,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清神经元特异性烯醇化酶水平.结果肺癌组NSE水平明显高于急性肺炎组和健康对照组(P<0.01),且升高程度与临床分期有关.结论血清NSE检测可作为肺癌临床诊断、病情判断的一项辅助参考指标.

    作者:陈燕明;裘建明 刊期: 2005年第01期

  • 急性胰腺炎患者血小板计数变化规律及临床意义

    目的探讨急性胰腺炎(AP)时血小板计数的变化规律及其临床意义.方法回顾性分析AP不同病程、严重程度、性别、年龄的血小板计数变化的特点.结果AP发病第1天中有49%的患者血小板计数<100×109/L,该比例随后逐渐下降(r=-0.85);平均血小板计数在起病的前2周内呈上升趋势(r=0.96),且不同发病天数间的平均血小板计数有显著差异(P<0.01).病程中后期,部分患者的血小板计数>300×109/L,其比例随病程时间延长而升高(r=0.83);上述变化在不同性别中无明显差异,但≥60岁的患者中血小板计数<100×109/L的比例明显高于<60岁者(P<0.05).重症胰腺炎(SAP)患者发病前3天首次血小板计数<100×109/L的比例(57%)明显多于轻症AP患者(19%,P<0.001),病程中血小板计数>300×109/L的比例(29%)也明显多于轻症患者(7%,P<0.001).如以发病后首次血小板计数<100×109/L为标准预测SAP,其敏感性59%,特异性81%,阳性预测值51%,阴性预测值85%.结论AP发病时血小板计数有下降趋势,随着病程延长,血小板计数有增高趋势,血小板计数<100×109/L对预测SAP有较高的特异性.

    作者:袁苏徐 刊期: 2005年第01期

  • 人骨髓间充质干细胞表面抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

    目的制备人骨髓间充质干细胞(MSCs)的特异性细胞表面抗原的单克隆抗体.方法以人骨髓MSCs为抗原,常规方法免疫Balb/c小鼠,细胞融合制备杂交瘤细胞,并用免疫荧光法在流式细胞仪上对杂交瘤产生的抗体进行初测和复测.结果通过分泌的抗体与人MSCs表面抗原特异性结合的鉴定,进行杂交瘤筛选,将复测为阳性的克隆连续克隆化培养,获得两株持续分泌抗人MSCs的杂交瘤细胞株:8g8、8f9.两株单抗经体外连续传代培养,生长良好,稳定分泌抗体.结论人骨髓MSCs的特异性细胞表面抗原单克隆抗体可望在MSCs的提纯和体外富集、特异性骨病的诊断等方面有广阔的应用前景.

    作者:王晓东;王明海;张亚;张德强;张锡庆;王科文 刊期: 2005年第01期

  • 大鼠同种异体原位肾移植模型的建立及并发症的预防

    目的为开展器官移植的移植免疫实验研究,建立大鼠同种异体原位肾移植模型,并探讨防止并发症发生的方法.方法Wistar系大鼠为供体,SD系大鼠为受体.采用左侧原位肾移植法,动脉端-端吻合,静脉袖套吻合,输尿管带膀胱瓣与膀胱吻合.结果共进行大鼠肾移植80次,存活73只,7只大鼠死于并发症,手术成功率为91.3%,建立了稳定、实用的大鼠肾移植动物模型.结论大鼠同种异体原位肾移植是一种成功率较高的动物模型.术前准备、术中操作及术后护理对建立稳定的模型有重要影响.加强并发症的预防可提高成功率.

    作者:平季根;吕金星;严春寅 刊期: 2005年第01期

  • 活化剂HYP协同rSjc26GST的抗血吸虫性肉芽肿的效果及其机制的研究

    目的探讨活化剂HYP协同rSjc26GST的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果及机制.方法采用活化剂HYP联用rSjc26GST、福氏佐剂(FCA)联用rSjc26GST、单用HYP和单用福氏佐剂分别免疫BALB/c小鼠,末次免疫后1周,免疫和对照组小鼠均用日本血吸虫尾蚴攻击感染,7周后测定其免疫效应,观察其抗血吸虫卵肉芽肿病变的效果.结果活化剂HYP联用rSjc26GST组的总虫卵数和成熟虫卵数减少率分别为55.37%和54.31%,均显著高于FCA联用rSjc26GST组的30.30%和38.07%;该两组肝内虫卵肉芽肿的直径及面积分别下降36.86%和35.25%及62.59%和60.44%;两组IgG和IgG1水平均明显升高.结论活化剂HYP协同rSjc26GST比FCA具有更好的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果,其机制与体液免疫(IgG和IgG1)的增强密切相关.

    作者:龚唯;骆伟;刘述先;施云松;陈家旭;宋光承;周卫芳;胡永德;李允鹤 刊期: 2005年第01期

  • 吗啡、曲马多、芬太尼用于术后硬膜外连续恒定镇痛的临床观察

    120例ASAⅠ~Ⅱ级的下腹部及下肢手术患者术后硬膜外连续恒定镇痛,随机分为吗啡组(M)、曲马多组(T)、芬太尼组(F)3组,每组40例,观察患者48 h内视觉模拟疼痛评分(VAS)及不良反应的发生率.结果显示:VAS评分M、T组<F组(P<0.05);恶心呕吐的发生率M组>T、F组(P<0.05);皮肤瘙痒的发生率T组<M、F组(P<0.05).提示曲马多组配方镇痛效果好,不良反应发生率低.

    作者:潘守俊;魏兴;谢红 刊期: 2005年第01期

  • 快速右心室起搏诱导心衰模型的改进

    目的改进快速右心室起搏的方法,获得稳定的慢性终末期心衰模型.方法以12只太湖梅山猪为实验对象,以230次/min的频率右心室快速起搏4周后,改用190次/min的频率维持右心室起搏4周.结果230次/min快速起搏4周后,所有实验动物均出现明显的充血性心衰的表现;心超显示心室壁变薄,EF、CO明显下降;心导管结果示肺动脉压、右房压、肺动脉楔压升高而心输出量、每搏输出量和动脉压降低;在以190次/min维持4周后,上述参数仍保持稳定.结论改进的快速右心室起搏诱导的心衰模型是稳定、持久的慢性终末期心衰模型.

    作者:焦鹏;沈振亚;惠杰;杨俊华;孟自立;余云生;叶文学;黄浩岳;刘鸿程;张卫民;李红卫 刊期: 2005年第01期

  • 兔骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学活性观察

    目的建立兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增的方法,并进行生物学活性观察.方法穿刺抽取新西兰大耳白兔骨髓5 ml,通过密度梯度离心法获取MSCs,体外贴壁培养、扩增、传代,倒置显微镜下观察原代及各代细胞形态、数量生长情况,描绘生长曲线.第2代细胞用矿化液连续培养后,进行ALP及矿化结节染色.结果体外成功建立兔骨髓间充质干细胞分离扩增传代的方法,能够连续传至8~9代;矿化液培养的细胞ALP及矿化结节染色阳性.结论兔骨髓间充质干细胞能在体外成功培养,具有向成骨细胞诱导分化的特性,可以作为骨组织工程的种子细胞.

    作者:张希峰;王晓东;张亚;杨金华;张永良;李强;刘新辉;李明忠 刊期: 2005年第01期

  • 高效液相荧光检测法同时测定人体内5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸

    目的建立高效液相荧光检测法(HPLC-FLD)来同时测定人体血浆、血小板、脑脊液中5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸的含量.方法样本经预处理后用高效液相色谱仪进行测定.色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm,7μm),流动相:甲醇和0.1 mol/L磷酸二氢钾(15:85),流速1.5 ml/min,Ex=254 nm,EM=338 nm,柱温为35℃.结果5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸得到良好分离,线性范围5-羟色胺为1.1328~~1160 ng/ml,5-羟吲哚乙酸为0.9765~2000 ng/ml,日内RSD分别为0.743%和1.470%,日间RSD分别为1.310%和2.043%;5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸的平均回收率:血浆中分别为98.32%、98.50%,血小板中分别为91.41%、88.05%,脑脊液中分别为92.84%、93.51%.结论该法具有取样量少、简单、快速、准确、灵敏等特点,可作为临床检测的常规方法.

    作者:石建;缪丽燕 刊期: 2005年第01期

  • 改良根管治疗开放型尖周炎45例疗效观察

    随着牙体修复技术的进步,残根、残冠的保存治疗更具积极意义.残根、残冠大多伴有慢性根尖周炎,由于这类患牙髓腔敞开,临床上习惯称之为开放型慢性尖周炎.其临床症状一般没有闭合型尖周炎重,但尖周组织破坏往往比闭合型尖周炎严重,且常伴根管内龋坏,感染的菌种复杂,因此在根管治疗操作上也应有别于闭合型尖周炎.作者在临床上选择90例患牙分别采用常规方法和改进方法进行根管治疗,并作术后反应比较,结果报告如下.

    作者:范文霞;王利民;陈志红 刊期: 2005年第01期

  • 胸腔镜在复发性恶性胸腔积液诊治中的应用

    采用胸腔镜配合胸膜固定术治疗43例复发性恶性胸腔积液患者,并通过胸腔镜同时获取活体组织行病理学检查.结果43例患者均获病理确诊,其中甲状腺癌2例,结肠癌4例,乳腺癌6例,胸膜间皮瘤3例,肺癌28例;经胸膜固定术后症状明显缓解,胸膜固定术有效率为100%.2例术后发生复张性肺水肿,无手术死亡.随访1~2个月无大量胸腔积液复发,无死亡.提示胸腔镜是一种微创、有效、实用的诊治方法,配合胸膜固定术治疗复发性恶性胸腔积液可减轻症状、改善生活质量,具有较好的疗效.

    作者:刘志祯;钱永跃 刊期: 2005年第01期

  • 人基质金属蛋白酶-2纤维连接蛋白样片段的原核表达及单抗制备

    目的在体外原核表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)纤维连接蛋白样片段,制备抗MMP-2特异性的单克隆抗体.方法体外掊养EA hy926内皮细胞,收集细胞后抽提总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得纤维连接蛋白样片段cDNA,与PET20b(+)表达载体重组后转化大肠杆菌BL21(DE3)plus,挑选阳性克隆后,经IPTG诱导表达蛋白.蛋白经次氮基三乙酸镍琼脂糖(Ni-NTA agarose)柱纯化浓缩后免疫Balb/c小鼠,尾静脉加强后取脾细胞融合,ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水.结果原核表达MMP-2纤维连接蛋白样片段大小为21 kd,表达量占菌体总蛋白25%,经Ni-NTA agarose柱纯化后,获得了部分纯化的蛋白.小鼠脾细胞与杂交瘤细胞融合后筛选获得1株单克隆抗体.结论抗MMP-2特异性抗体的获得为MMP-2测定提供了一个有效工具,为进一步研究MMP-2的功能及探讨MMP-2在实体瘤及血液肿瘤发病过程中的作用奠定了基础.

    作者:胡晓慧;蒋菊香;董宁征;沈飞;阮长耿 刊期: 2005年第01期

  • 生长因子浓度和添加方式对兔间充质干细胞生长的影响

    目的探讨不同浓度bFGF和TGF-β1、bFGF不同添加方式对间充质干细胞增殖的影响.方法取兔间充质干细胞(MSCs),梯度离心,分离培养.取第4代细胞,分别添加不同浓度bFGF(0、10、50、80、100ng/ml)及序贯或同时加入TGF-β1、bFGF.观察细胞形态变化,MTT法测定各组细胞吸光值.结果各组细胞形态无显著差异.高浓度bFGF及序贯加入TGF-β1、bFGF,吸光值测定高于其他各组(P<0.05).结论bFGF浓度增加,促增殖作用加强.序贯添加TGF-β1、bFGF,小剂量可明显促进细胞增殖.

    作者:谢宗刚;董启榕 刊期: 2005年第01期

  • 免疫抑制大鼠模型感染后TNF-α和IL-6的基因表达

    目的观察免疫抑制大鼠腹腔感染后组织中TNF-α和IL-6基因表达的变化.方法60只SD大白鼠建立正常对照、免疫抑制两组动物模型,用盲肠结扎加穿刺法(CLP)形成腹腔感染,分别测定术后不同时段肝、肺组织中TNF-αmRNA和IL-6 mRNA的相对表达量并加以比较.结果(1)CLP前,免疫抑制大鼠肝、肺组织内TNF-αmRNA和IL-6 mRNA的表达均低于对照组(P<0.05).(2)CLP后,两组大鼠肝、肺组织内TNF-αmRNA,IL-6 mRNA的变化基本一致,于CLP后3 h升高,而后平稳上升,24 h达大值;免疫抑制大鼠肝、肺组织内TNF-α mRNA和IL-6 mRNA的表达始终低于对照组.(3)IL-6 mRNA在CLP后24 h平均升高8.97倍,TNF-αmRNA则为3.96倍.结论(1)免疫抑制大鼠腹腔感染后发生MODS可能系机体处于CARS状态的结果,这种状态下细胞因子基因变化的规律类似于因SIRS导致MODS时的变化.(2)机体免疫功能的改变可能发生于细胞因子转录水平,IL-6 mRNA可作为严重感染的预警指标.

    作者:张丰;曹苇;王玮;卢先州 刊期: 2005年第01期

苏州大学学报(医学版)杂志

苏州大学学报(医学版)杂志

主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学