学术投稿

人绒毛膜促性腺激素α亚基cDNA克隆、表达及纯化

金东华;诸葛洪祥;钱峰;石永兵

关键词:人绒毛膜促性腺激素α亚基, 克隆, 大肠杆菌, 表达
摘要:目的从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促性腺激素α亚基(HCGα)cDNA,构建表达载体并进行了表达、纯化,为进一步研究HCGα在多种肿瘤及异常妊娠中的作用作前期准备.方法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增出HCGα cDNA,克隆于表达载体PGEX4T-1,酶切鉴定后测序,测序证实序列正确,并转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST- HCGα.超声破菌后上清经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化,沉淀包涵体经变性、透析复性等处理,用SDS-PAGE电泳、Western印迹分析产物.结果琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增片段大小约280 bp,同预计片段相符.SDS-PAGE电泳显示诱导表达的产物经初步处理后有36 kd左右的一条明显新增条带,与预期分子量相符,Western 印迹证实此结果.融合蛋白主要以包涵体形式存在.结论成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGα cDNA,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,表达产物有较好的免疫特异性.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 慢性充血性心力衰竭患者血浆TNF-α、NOS活性和NO的变化及其意义

    目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮合酶(NOS) 活性和一氧化氮(NO)在慢性充血性心力衰竭(CHF)患者血浆中的变化以及三者之间的相互关系.方法 80例CHF患者和20名健康对照组抽取静脉血检测TNF-α、NOS活性和NO;TNF-α含量测定采用放射免疫法,NOS活性、NO含量测定采用化学比色法.结果 CHF组的TNF-α、NOS活性、NO水平均明显高于对照组,且随着心衰程度的加重,各项指标的含量逐渐升高;在TNF-α、NOS活性、NO两两之间及它们与反映心功能的射血分数(EF)值之间存在着显著的直线相关关系.结论 TNF-α、NOS、NO可能参与了心衰的发生、发展,它们是反映心衰严重程度及预后的重要指标.

    作者:周亚峰;程绪杰;刘志华 刊期: 2003年第05期

  • 人P选择素胞外区Lectin-EGF片段的基因克隆及表达研究

    目的构建表达人P-选择素胞外凝集素-表皮生长因子样区(Lectin-EGF)片段的基因工程菌.方法从人血小板中提取总RNA,经RT-PCR得到P-选择素cDNA,用PCR方法扩增其中的Lectin-EGF片段,并将其克隆到原核表达载体PBV220中,再转化宿主菌DH5α.结果通过酶切、PCR和基因序列分析确定重组载体片段为目的基因的核苷酸序列,并在大肠杆菌中获有效表达重组蛋白.结论表达人P-选择素胞外区Lectin-EGF片段的基因工程菌的成功构建,为在大肠杆菌中大量表达该表位片段对应蛋白从而制备其抗体提供基础.

    作者:郭瑞峰;姜海燕;杨吉成;熊佩华;盛伟华;李福民 刊期: 2003年第05期

  • 成人骨性Ⅲ类错牙合的正畸掩饰性矫治

    2000年2月我科收治1例18岁以上骨性Ⅲ类错牙合畸形患者,采用正畸掩饰性矫治方法,取得满意的效果.

    作者:李韵 刊期: 2003年第05期

  • 1093例剖宫产原因分析

    通过回顾分析6年间剖宫产1093例,探讨剖宫产率上升之原因.结果总剖宫产率36.46%(1093/2988),其中胎儿窘迫及头盆不称分别占21.68%及16.83%.认为加强孕产妇保健,防止胎儿窘迫过度诊断,减少相对剖宫产指征,可降低总剖宫产率.

    作者:钱志红;陈昕 刊期: 2003年第05期

  • 卡维地洛尔对扩张型心肌病患者心率变异和心功能的影响

    16例心功能Ⅱ~Ⅲ级的扩张型心肌病(DCM)患者在常规治疗的基础上,给予卡维地洛尔治疗, 观察服药前后患者24 h心率变异和心脏超声的变化.对照组为20名无心血管疾病者.结果:经卡维地洛尔治疗后DCM患者的24 h心率变异显著增加,平均心率显著降低(均P<0.05); NYHA心功能分级显著改善(P<0.01);肺动脉压显著降低(P<0.05).提示卡维地洛尔能显著改善DCM患者的自主神经对心率、心律总的调控作用及其心功能分级.

    作者:王育林;杨俊华;高美雯;宋建平;刘志华 刊期: 2003年第05期

  • 89Sr和99Tc-MDP联合治疗前列腺癌转移性骨肿瘤20例报告

    目的评价89Sr和99Tc-MDP(云克)联合治疗前列腺癌转移性骨肿瘤的疗效和副作用.方法对20例前列腺癌骨转移患者采用89Sr和99Tc-MDP联合治疗,分别从缓解骨痛、改善骨显像病灶和毒副作用3个方面进行观察、随访. 结果缓解骨痛的总有效率为86.66%,8例患者骨显像原发病灶均有所改善.毒副作用主要为白细胞和血小板轻度降低,可恢复正常.结论 89Sr和99Tc-MDP联合治疗前列腺癌转移性骨肿瘤有较好疗效,对骨痛缓解尤为明显.

    作者:王云炎;单玉喜;崔勇;高洁;王文炯;孙传洋;陶伟 刊期: 2003年第05期

  • 小儿胆石症12例临床分析

    小儿胆石症既往极为罕见,北京儿童医院25年间收治66例急性胆囊炎与胆管炎中,伴发胆石症者仅1例[1].近年来国内相继有报道.我院2001~2002年共收治经B超确诊的小儿胆石症12例,现报告如下.

    作者:朱怿东;周剑峰;柴建农;陈科 刊期: 2003年第05期

  • 逆行交锁髓内钉在股骨远端骨折中的应用

    采用逆行交锁髓内钉治疗股骨远端骨折13例,12例获得成功,骨折端解剖复位或近似解剖复位,内固定稳固.膝关节活动范围平均3°~110°.二次膝关节切开内固定取出术后未发生明显的膝关节功能丧失.提示如患者选择适当,逆行交锁髓内钉内固定术治疗股骨远端骨折具有较好疗效.髁间进针点对膝关节功能影响较小.

    作者:张正廉;孙俊英;徐耀增;杨惠林;唐天驷;董天华 刊期: 2003年第05期

  • 盐酸纳洛酮在新生儿窒息复苏中的应用

    新生儿窒息是新生儿死亡的主要原因之一.我们在综合抢救治疗基础上经脐静脉穿刺注入盐酸纳洛酮(Naloxone)治疗20例,取得良好效果,报道如下.

    作者:黄运姣;邱立国 刊期: 2003年第05期

  • 胸腺肽α1在非小细胞肺癌治疗中的免疫指标和临床观察

    将40例晚期非小细胞肺癌患者随机分为2组,治疗组予EP方案加胸腺肽α1治疗;对照组仅予EP方案治疗;其余对症支持治疗两组相同.检测两组患者T淋巴细胞亚群,同时观察疗效和副作用.结果治疗组治疗前后T淋巴细胞亚群有显著改善,临床控制率有显著提高.认为EP方案结合胸腺肽α1治疗非小细胞肺癌可以显著改善机体T细胞功能,是一种安全而有效的治疗方案.

    作者:左玉如;徐跃华 刊期: 2003年第05期

  • 质粒pGH/BL21在大肠杆菌中表达条件的研究

    目的寻找质粒pGH/BL21在大肠杆菌中的佳表达条件.方法当它在大肠杆菌中表达时,考查不同IPTG诱导浓度及不同的诱导时间对表达产物的影响,表达产物的量以SDS-PAGE电泳方法分析.结果该基因的佳表达条件为:IPTG诱导浓度1.0 mmol/L,诱导时间4 h.结论 IPTG对不同的基因在不同的表达体系中需不同的诱导条件,只有找到它的佳诱导条件才能保证终产物的大产率.

    作者:成中芹;王雪峰;朱江 刊期: 2003年第05期

  • 甲状腺功能亢进症合并肝损害58例临床分析

    我院1995年6月~2002年6月收治甲状腺功能亢进症(甲亢)患者186例,其中发生肝损害58例,现分析如下.

    作者:殷洪二 刊期: 2003年第05期

  • EH复合材料修补额眶部颅骨缺损及整容14例报告

    应用EH复合材料修补额眶部颅骨缺损14例.术前预制EH复合材料人工颅骨板,术中调制EH复合材料并塑形,再造眉弓等骨性标志.结果所有患者外观满意,达到整容效果,术后无感染、皮下积液等并发症.随访10~42个月,CT检查证实人工颅骨与颅骨连接紧密,无明显间隙,未见EH材料被吸收、变形或移位等表现.表明EH复合材料具有在室温下可随意塑形、不易被吸收、组织相容性好等特点,临床应用操作简便,整形效果好,术后并发症少,是一种理想的颅骨修补及整容材料.

    作者:孙春明;崔岗;周幽心;王中;周岱 刊期: 2003年第05期

  • 混合血清用于电解质仪室内质控的探讨

    用-20℃冰箱保存的混合血清对4台电解质仪每日进行对比监测,发现-20℃冰箱保存的混合血清半年中稳定性较好,4台电解质仪的钾、钠、氯的CV(%)均小于江苏省临床化学推荐的RCV值.表明用同一测定物对不同电解质仪进行监测,可实现相同项目检验结果的一致性.

    作者:黄惠芳;程振螽 刊期: 2003年第05期

  • 56例老年慢性支气管炎的影响因素

    老年慢性支气管炎是引起肺气肿、肺心病的主要原因,而肺气肿和肺心病是呼吸系统死亡率高的疾病,因其发生、发展时间长,严重影响老年人的生活质量.故我们就1997年以来苏州大学离休干部被确诊为慢性支气管炎的56例患者的影响因素及对生活质量的影响分析如下.

    作者:金晓波;张金华 刊期: 2003年第05期

  • 急性有机磷农药中毒肾损害189例临床特点分析

    分析急性有机磷农药中毒合并肾损害189例,占同期有机磷农药中毒患者的46.3%(189/408).其中102例为重度中毒合并肾损害,占54.0%;≥61岁者占同期老年中毒患者的81.8%(27/33).血尿、蛋白尿、氮质血症三者同时存在18例,死亡10例,病死率为55.6%.提示有机磷农药中毒肾损害易发生于重度中毒者及老年人,肾损害表现为单纯血尿、蛋白尿者预后良好,一旦合并氮质血症病死率显著增高.

    作者:周华琴;潘解萍 刊期: 2003年第05期

  • 股骨髓腔扩大对股骨骨折及愈合影响的实验研究

    目的探讨股骨髓腔扩大对股骨骨折局部血运及骨折愈合的影响.方法成年新西兰兔20只,打断股骨后分别制作扩髓与不扩髓模型,并用髓内钉固定.于术后3 d和1、2、4周,分别注射185 MBq 99Tcm后在放射性核素断层扫描计算机(ECT)上进行显像,观察局部血供,并于术后1、2、4、8 周处死动物后,取骨痂进行组织学电镜观察.结果股骨扩髓组99Tcm摄取比明显下降,组织学研究显示扩髓组骨痂成熟缓慢.结论股骨扩髓后早期局部血供降低,骨折愈合过程延迟.

    作者:周海斌;郑祖根;董启榕 刊期: 2003年第05期

  • 系统性红斑狼疮合并妊娠21例临床分析

    报告21例系统性红斑狼疮(SLE)合并妊娠,14例获得妊娠成功,其中8例为早产儿,6例为足月儿;但合并妊高征10例,胎儿宫内发育迟缓6例,胎盘功能低下6例.表明SLE患者孕前病情缓解可以妊娠,但妊娠期一定要给予激素及其他产科合并症的治疗.如妊娠期病情恶化需及时终止妊娠,21例中无1例孕妇死亡.

    作者:奚玲;杨伟文;黄亚珍 刊期: 2003年第05期

  • 肩锁关节损伤54例临床分析

    肩锁关节损伤如处理不当,易发生患肩疼痛无力、活动受限,后期可发生肩锁关节骨性关节炎[1].现就本院1998~2002年处理的54例分析如下.

    作者:计小东;郑红根;张伟中;徐浩 刊期: 2003年第05期

  • 自体刃厚皮与异种无细胞真皮基质联合移植的临床应用

    选用白色健康猪,活杀后取断层皮,高渗盐水法去除表皮,用酶化学剂脱去表皮细胞,保留完整的基底膜和细胞外基质形态,制成网状异种无细胞真皮基质.对13例Ⅲ°烧伤患者切痂后创面行异种无细胞真皮基质与自体刃厚皮联合移植,结果皮片成活率达97%~100%,联合移植皮片成活后创面平坦,瘢痕增生轻或不明显.提示自体刃厚皮与异种无细胞真皮基质联合移植是修复深度创面较理想的方法.

    作者:许明;陆兴安;沈国良 刊期: 2003年第05期

苏州大学学报(医学版)杂志

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