学术投稿

LacZ基因在哺乳动物细胞中的稳定表达及其检测方法

陈永井;施勤;徐宽枫;周斌;张学光

关键词:LacZ, 哺乳动物细胞, 稳定表达
摘要:目的构建含有LacZ标记基因的真核表达载体和稳定表达LacZ的转基因细胞,并建立简易有效的检测方法.方法采用脂质体转染法将装有LacZ基因的真核表达载体pcDNA3 导入鼠成纤维细胞L929,G418筛选LacZ基因稳定表达细胞株,并应用超声波破碎和贴壁细胞悬浮培养的方法来检测转基因细胞的转染率及目的蛋白的表达.结果成功构建了稳定表达LacZ 基因的转基因细胞,超声波破碎后其上清与β-半乳糖苷酶(LacZ)的底物X-gal 反应显兰色;铺有固体琼脂粉的平皿中细胞培养至第4天开始显兰色,并随时间的延长,比率增加,终可高达100%.结论 LacZ基因在哺乳动物细胞中可稳定表达,建立的检测方法具有简单及重复性好的特点.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 伤寒杆菌耐药质粒pRST98与细菌外膜泡的关系

    目的研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98与细菌外膜泡(OMV)形成的关系.方法将(1)携带pRST98的野生型耐药伤寒杆菌--ST1及ST2;(2)不含pRST98的野生型敏感伤寒杆菌--ST3及ST4;(3)不含质粒的大肠杆菌--E.coliK12W1485;(4)用十二烷基硫酸钠消除pRST98的突变体菌株--ST1(R-)及ST2(R-);和(5)经接合转移将pRST98导入敏感型伤寒杆菌及大肠杆菌的接合子--pRST98/ST3、pRST98/ST4及pRST98/E.coliK12W1485用于实验,用透射电镜观测细菌在有无pRST98时,OMV形成的差异.结果携带pRST98的耐药伤寒杆菌消除pRST98前后,不含pRST98的敏感伤寒杆菌和大肠杆菌在导入该质粒前后,细菌形成OMV的数量和形态均无明显变化.结论伤寒杆菌耐药质粒pRST98在体外与细菌外膜泡的形成未发现有明显关系.

    作者:吴淑燕;黄瑞;王响英;李苏安;毛棣华 刊期: 2002年第06期

  • 连续肾脏替代治疗急性肾功能衰竭伴多脏器功能衰竭1例

    连续肾脏替代疗法(CRRT)具有十分良好的血流动力学稳定性,治疗危重急性肾功能衰竭(ARF)伴多脏器功能衰竭(MOF)效果显著,较常规血透和腹透具有更大的优越性.我院2002年引进该项技术,成功抢救1例急性胆囊出血伴梗阻性胆管炎术后出现急性肾功能衰竭和多脏器功能衰竭的患者,报道如下.

    作者:陆慧勤;汪克定;王浩;邵伯良 刊期: 2002年第06期

  • 花粉延缓脑衰老的实验研究

    目的通过研究花粉对脑衰老模型大鼠海马区超氧化物歧化酶(SOD)、氨基酸神经递质(AANT)和NO水平的影响,探讨花粉延缓脑衰老的机制.方法采用D-半乳糖建立大鼠衰老模型,用生化方法检测对照组、衰老模型组和衰老模型花粉组大鼠海马区SOD活性、AANT和NO水平,并作统计分析.结果花粉能明显提高脑衰老模型大鼠海马区SOD活性,降低NO水平,并增加兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)的含量,降低抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)的含量.结论花粉通过清除自由基,减少NO释放,升高兴奋性氨基酸,降低抑制性氨基酸等而发挥延缓脑衰老的作用.

    作者:蒋菊香;王尉平;蒋滢 刊期: 2002年第06期

  • 60Coγ射线诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡的研究

    目的观察不同剂量的γ射线和照后不同时间的K562细胞的增殖抑制及凋亡情况.方法细胞动态计数;3H-TdR掺入分析;利用ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit 在荧光显微镜下观察荧光情况和在流式细胞仪上测定凋亡细胞的比例.结果在不同剂量照射和照后的不同时间处,60Coγ射线诱导的细胞增殖抑制和凋亡情况明显不同:细胞增殖抑制情况与受照剂量的大小呈正相关,细胞凋亡比例与受照剂量的大小未见明显相关性,而表现为在照后6 h处凋亡细胞较多.结论 60Coγ射线照射引起的肿瘤细胞增殖抑制有一定的发生时机,并且表现出剂量相关性,而其引起的凋亡效应则更多地表现为时间相关性.

    作者:许建华;杨占山;杨淑琴;王春雷;姜建平 刊期: 2002年第06期

  • 近3年来我院急救中心镇痛药使用状况分析

    统计该院急救中心近3年来应用各种镇痛药的急诊处方45 760张,分析近年来镇痛药使用状况的变化.结果普通剂型镇痛药呈下降趋势;缓释、控释等新剂型镇痛药呈较大幅度上升趋势;中枢麻醉性镇痛药变化不大.

    作者:石建;邹振新 刊期: 2002年第06期

  • RH不合新生儿溶血病1例换血前后血型及抗体变化的观察

    我们于1999年对1例抗-D抗体引起的新生儿溶血病患儿,采取了换血治疗,并进一步观察了换血后患儿红细胞血型和抗体水平变化过程.现报道如下.

    作者:郑毅;程根林 刊期: 2002年第06期

  • 羟氨苄青霉素引起小儿药疹24例临床分析

    我科自2001年1月~11月诊治24例小儿服用羟氨苄青霉素干糖浆(商品名为再林)引起的药疹,现分析如下.

    作者:章毓秀 刊期: 2002年第06期

  • 缺血再灌注脊髓组织中白细胞介素-8表达的实验研究

    目的观察兔缺血再灌注脊髓组织中白细胞介素-8(IL-8)的表达,探讨其对脊髓缺血再灌注损伤的影响.方法采用免疫组织化学和组织病理学方法,检测并观察兔缺血再灌注不同阶段脊髓组织中IL-8的表达情况及病理改变.结果随着缺血及再灌注进程、脊髓组织病理变化的加重,组织中IL-8阳性表达强度逐渐增加.结论缺血再灌注脊髓组织中IL-8的产生及增多可能是加重其损伤的机制之一.

    作者:杨惠林;张洪涛;唐天驷;杨同其;刘继明 刊期: 2002年第06期

  • 硫氧还蛋白对缺氧/复氧大鼠海马神经元caspase-3活性的影响

    目的探讨硫氧还蛋白(Trx)和caspase-3在鼠海马神经元缺氧/复氧损伤中的作用.方法原代培养10 d的新生鼠海马神经元缺氧3 h复氧12 h、24 h和48 h,分为正常对照组、缺氧/复氧组和Trx组,用MTT比色法测定各时点的神经元存活率;底物裂解法检测caspase-3活性.结果缺氧/复氧组海马神经元复氧12~48 h, 海马神经元caspase-3样蛋白酶活性明显增高,以复氧24 h为高,而存活率进行性下降;Trx组caspase-3样蛋白酶活性曲线与缺氧/复氧组相似,但明显下降,细胞存活率较缺氧/复氧组明显提高.结论海马神经元缺氧/复氧后,caspase-3样蛋白酶被激活,参与神经元损伤过程;Trx对神经元有保护作用.

    作者:孙茂民;夏春林;王宇卉 刊期: 2002年第06期

  • LacZ基因在哺乳动物细胞中的稳定表达及其检测方法

    目的构建含有LacZ标记基因的真核表达载体和稳定表达LacZ的转基因细胞,并建立简易有效的检测方法.方法采用脂质体转染法将装有LacZ基因的真核表达载体pcDNA3 导入鼠成纤维细胞L929,G418筛选LacZ基因稳定表达细胞株,并应用超声波破碎和贴壁细胞悬浮培养的方法来检测转基因细胞的转染率及目的蛋白的表达.结果成功构建了稳定表达LacZ 基因的转基因细胞,超声波破碎后其上清与β-半乳糖苷酶(LacZ)的底物X-gal 反应显兰色;铺有固体琼脂粉的平皿中细胞培养至第4天开始显兰色,并随时间的延长,比率增加,终可高达100%.结论 LacZ基因在哺乳动物细胞中可稳定表达,建立的检测方法具有简单及重复性好的特点.

    作者:陈永井;施勤;徐宽枫;周斌;张学光 刊期: 2002年第06期

  • 选择性一氧化氮合成酶抑制剂1400W对创伤后脑组织保护作用的研究

    目的探讨选择性一氧化氮合成酶抑制剂1400W对外伤性脑组织的保护作用.方法建立大鼠自由落体脑外伤模型,测定脑外伤后生理盐水组和治疗组不同时期脑组织NO含量,同时观察脑组织病理及超微结构的改变,将两组结果进行比较.结果 1400W能明显降低NO的含量,改善脑外伤后脑组织的病理变化和超微结构改变.结论 1400W对脑外伤后脑组织有显著的保护作用.

    作者:张世明;蒋小齐;邵竹平;杨天明 刊期: 2002年第06期

  • Ⅲ°肩锁关节脱位21例手术治疗分析

    Ⅲ°肩锁关节脱位保守治疗难以维持复位.1995年5月~2000年12月,我们采用单根克氏针加钢丝张力带固定,治疗新鲜Ⅲ°肩锁关节脱位21例,取得了满意疗效.

    作者:屠秋晓;范紫江;张明华;金晓东 刊期: 2002年第06期

  • 胆囊息肉样病变的超声分析

    胆囊息肉样病变是胆囊胆固醇息肉、炎性息肉、腺瘤和早期胆囊癌等胆囊病变的统称.现就我院1995年1月~2001年1月应用超声诊断并经手术、病理证实的31例胆囊息肉样病变分析如下,旨在提高该病的超声诊断率,为临床提供诊治依据.

    作者:陈红 刊期: 2002年第06期

  • 颅脑损伤患者的呼吸道管理

    在严重颅脑损伤患者的抢救中,保持呼吸道通畅是关系到抢救成败的至关重要的问题.1998年以来,本科收治重型颅脑损伤247例,其中入院时发生呼吸道不畅、梗阻者185例;术后作气管切开者83例,并发肺部感染者43例.现就其呼吸道管理分析如下.

    作者:钱珍 刊期: 2002年第06期

  • 长春瑞滨联合外照射对人乳腺癌MCF-7细胞作用的研究

    目的研究长春瑞滨联合外照射对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤机制.方法采用MTT法检测长春瑞滨对MCF-7细胞毒作用,流式细胞仪检测各组细胞周期分布、细胞凋亡指数,电子显微镜观察MCF-7细胞凋亡的形态学特征.结果 MTT检测表明,长春瑞滨给药24 h的IC50为7.20 μg/ml.流式细胞仪细胞周期分析显示:C组细胞大多处于G1~S期, V组G2相细胞明显高于对照组,V组G2相细胞与C组及R组相比均差异显著(均P<0.05).流式细胞仪检测各组MCF-7细胞凋亡结果显示:R组、V组、V+R组在不同时间内的平均凋亡指数分别为2.98±3.90%、8.01±1.87%、15.57±5.23%,(V+R)组与V组及R组相比均差异显著(均P<0.05).透射电镜观察到MCF-7细胞凋亡的形态学表现为染色质边集,胞浆浓缩,核固缩,可见有膜包绕的凋亡小体脱落.结论长春瑞滨对乳腺癌MCF-7细胞具有显著的细胞毒作用.它可诱导乳腺癌MCF-7细胞生长阻止在G2期,并能诱导它的凋亡.在照射前使用,能增强放疗对MCF-7细胞凋亡的诱导作用.

    作者:翟小明;许昌韶 刊期: 2002年第06期

  • ELISA检测损伤皮肤中PGE2含量推断损伤时间的实验研究

    目的探讨鉴别生前伤、死后伤及推断损伤时间的方法.方法运用ELISA检测大白鼠切割创缘皮肤内PGE2含量的变化规律.结果生前损伤后10~70 min,损伤组织中PGE2含量逐渐升高.生前伤PGE2含量与损伤时间有线性关系.结论 ELISA检测损伤皮肤中PGE2含量能鉴别生前伤及死后伤,推断损伤时间.

    作者:刘清芳;庄启元;王兆钺 刊期: 2002年第06期

  • 翻缝法治疗腱鞘囊肿50例疗效观察

    腱鞘囊肿的治疗方法较多,如按压、穿刺、囊肿内注射药物、穿线及手术摘除等,但复发率均高,而且摘除术还可能产生副损伤.笔者于1993~1995年采用囊肿壁十字形切开外翻缝至皮下的方法(简称翻缝法)治疗50例52例次,并与采用囊肿摘除法治疗的76例85例次作比较,结果报告如下.

    作者:徐其南 刊期: 2002年第06期

  • 恩格菲治疗恶性胸腹水86例临床分析

    癌性胸水或腹水治疗方法有多种[1].近几年来,我科采用恩格菲治疗86例,结果报道如下.

    作者:刘永标 刊期: 2002年第06期

  • 破裂脑动脉瘤术后持续腰穿外引流108例报告

    脑动脉瘤破裂致蛛网膜下腔出血(SAH)引起的脑血管痉挛(CVS)是患者致残、致死的主要原因之一.持续腰穿外引流(LCDF)在治疗颅内感染、脑脊液鼻漏、CVS等时效果较好[1].我科2000年1月~2002年1月对108例破裂脑动脉瘤进行了早期手术,配合尼卡地平持续脑池灌注和LCDH治疗CVS,取得较满意的效果.现报告如下.

    作者:沈梅芬;张海英 刊期: 2002年第06期

  • 微波联合抗宫炎片治疗宫颈糜烂50例疗效观察

    我院1998~2000年对本院妇科门诊及妇女病普查中发现的Ⅱ°、Ⅲ°宫颈糜烂患者50例采用微波联合抗宫炎片治疗,并与同期单纯微波治疗的60例作对比,结果报道如下.

    作者:陆敏 刊期: 2002年第06期

苏州大学学报(医学版)杂志

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