学术投稿

二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌胞外蛋白和膜蛋白

何秀云;庄玉辉;张小刚;李国利;丁勤学

关键词:结核分枝杆菌, 二维凝胶电泳, 胞外蛋白, 膜蛋白
摘要:目的:建立二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌(M.TB)胞外蛋白和膜蛋白的方法. 方法:M.TB H37Rv菌株在苏通液体培养基培养3周后获得胞外蛋白和膜蛋白,第一相电泳用pH 3~10线性IPG预制胶条进行等电聚焦,第二相电泳用SDS-PAGE凝胶再分离蛋白.银染PAGE凝胶、干燥,用ImageScanner扫描凝胶,ImageMaster 2D Elite 3.10(图像分析软件)分析2D图像. 结果:胞外蛋白和膜蛋白的蛋白质斑点数分别为907和681,两组蛋白的斑点大部分在酸性区域(pH<7.0).在极碱性区域(pH>9.0),胞外蛋白只有10个蛋白质斑点(占1.1%),而膜蛋白有52个蛋白质斑点(占7.6%);在极酸性区域(pH<4.0),膜蛋白只有15个蛋白质斑点(占2.2%),而胞外蛋白有99个蛋白质斑点(占10.9%).约50%的胞外蛋白和膜蛋白相对分子质量<30000. 结论:二维凝胶电泳分离M.TB蛋白是研究M.TB蛋白质组学的重要途径之一.
医学研究生学报杂志相关文献
  • 兔眼球爆炸伤后玻璃体谷氨酸含量的改变及意义

    目的:通过测定兔眼球爆炸伤后玻璃体内谷氨酸含量,以探讨其意义. 方法:制作兔眼球爆炸伤模型,测定玻璃体内谷氨酸浓度,并与对侧对照眼进行平行对比分析. 结果:所有实验眼玻璃体内谷氨酸浓度均显著高于对照眼,眼球爆炸伤后1天玻璃体内谷氨酸含量即增高,伤后25~30天达高值,其后逐渐下降. 结论:眼球爆炸伤后玻璃体内谷氨酸浓度增高可能是伤后视觉功能损伤的一个重要原因.

    作者:陈穗桦;王理理;黄振平;冯媛;潘丽娟;倪利群 刊期: 2002年第02期

  • 六亚甲基双乙酰胺与紫杉醇合用对人骨肉瘤OS-9901细胞的抑制作用

    目的:研究六亚甲基双乙酰胺(HMBA)与紫杉醇合用对人骨肉瘤OS-9901细胞的抑制作用. 方法:用MTT法检测HMBA、紫杉醇单用或二者合用对体外培养的人骨肉瘤OS-9901细胞增殖变化的影响. 结果:在单用紫杉醇处理组中,不同药物浓度均未使增殖细胞抑制达到生长半数.在先用1.0 μg/ml紫杉醇处理6 h后再加用1 mmol/L HMBA组中,抑制率由18%增至59%.0.1 μg/ml紫杉醇先处理24 h组中,抑制率由23%增至67%.HMBA明显增强了紫杉醇的抗癌作用. 结论:HMBA与紫杉醇联合应用对骨肉瘤保肢术后的治疗可能有一定的价值.

    作者:俞玮;张殿忠;范清宇;周勇 刊期: 2002年第02期

  • 环氧化酶-2与氧化应激在急性肝损伤中的作用

    目的:研究环氧化酶-2(COX-2)在急性肝损伤中的表达,探讨COX-2与氧化应激在急性肝损伤中的作用. 方法:将30只Wistar大鼠随机分为三组,正常组10只;对照组10只,腹腔注射CCl4原液1 ml/kg;实验组10只,腹腔注射CCl4原液1 ml/kg、2 h后给予80 mg/kg塞来昔布(Celecoxib)灌胃. 结果:血清学检测结果显示,对照组和实验组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和细菌内毒素(LPS)均较正常组大鼠显著增高(P<0.05),对照组与实验组大鼠血清ALT、AST和LPS水平差异显著(P<0.05).对照组和实验组大鼠肝匀浆一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)均较正常组大鼠明显增高(P<0.05),对照组与实验组大鼠血清NO和MDA水平差异显著(P<0.05).H-E染色光镜下示对照组和实验组大鼠大量肝细胞肿胀、空泡变性和脂肪变性,部分肝细胞坏死.免疫组化结果显示COX-2在正常肝组织无表达,实验组大鼠较对照组大鼠COX-2表达明显增高(P<0.05). 结论:急性肝损伤后,内毒素刺激COX-2表达,氧化应激反应加剧,COX-2表达和NO水平增高可能是机体对抗损伤的一种保护性机制.

    作者:田耕;于皆平;罗和生;余保平;李建英 刊期: 2002年第02期

  • 低频率不规则生物电信号峰值测量电路的设计

    目的:为临床设计一种测量低频率不规则生物电信号的新型测量电路. 方法和结果:首先构思电路原理,然后进入实际设计和改进,后进入实际测试和结果误差分析. 结论:实践证明,该电路具有构思巧妙、原理简单、易与微处理器接口匹配等优点,可用于生物电信号和低频率不规则信号测量和诸多测控系统.

    作者:汤黎明;刘铁兵;吴敏;凌刚;常本康 刊期: 2002年第02期

  • 血清AST测定方法的比较及其与IFCC法结果转换的计算方法

    目的:研究血清标本及校正品或标准品用不同方法测定天冬氨酸转氨酶(AST)结果间的关系以及转换成IFCC法结果的计算方法. 方法:采用八种常用的AST测定方法(试剂盒)测定87份血清标本,以IFCC推荐的方法H(不含磷酸吡哆醛)为基准,其他七种方法测定的血清AST值与之进行相关分析;并研究两种酶校正品(RANDOX、c.f.a.s)和一种酶参考品(ERM)与人血清AST的转换性. 结果:八种方法间血清AST测定值的相关性较好,相关系数(r)接近1.0,截距接近0.ERM在以上各方法间均与人血清AST反应性相近,具转换性;校正品RANDOX、c.f.a.s则与人血清AST反应性有差异,转换性欠佳. 结论:采用统一的合格的酶参考品可以大大减小各方法间测定值的离散度,是酶测定标准化的新途径.

    作者:史利宁;孟泽 刊期: 2002年第02期

  • 微量白蛋白尿与胰岛素抵抗的关系

    微量白蛋白尿是糖尿病肾病的早期诊断指标,近年作为心血管疾病的独立危险因素日益受到关注.有研究表明,微量白蛋白尿的发生与胰岛素抵抗有关.至于微量白蛋白尿与胰岛素抵抗有直接的病理生理联系,还是仅与该综合征的某些代谢紊乱有关,目前尚不清楚.作者对有关的研究进展作一综述.

    作者:索丽霞;余叶蓉 刊期: 2002年第02期

  • 派瑞松霜治疗皮炎湿疹类皮肤病疗效观察

    本研究的目的在于观察西安杨森制药公司生产的派瑞松(原名复方达克宁)霜治疗30例皮炎湿疹类皮肤病的疗效及安全性,现报告如下.1 资料与方法

    作者:车敦发;沈献平;郑用谋;曹杨 刊期: 2002年第02期

  • 人胎盘滋养层细胞的分离培养及IgG FcγRⅢ在滋养层细胞的表达

    目的:体外分离培养人胎盘滋养层细胞,观察其生物学特性, 研究 IgG FcγRⅢ(CD16)在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16,从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础. 方法:采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织,以35%、45%两个Percoll密度梯度进行分离纯化.用ABC免疫组化染色法对足月分娩后的胎盘组织石蜡包埋切片及体外分离培养的胎盘滋养层细胞进行染色. 结果:胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性,血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性,经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者(滋养层细胞)占90%以上,胎盘组织切片的滋养层细胞及体外分离培养的滋养层细胞抗CD16染色阳性,阳性信号定位于胞质,未见胞核着色. 结论:改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞,胎盘组织的滋养层细胞和体外分离培养的滋养层细胞均有CD16表达.

    作者:程勇前;聂青和;周永兴;杜德伟;杨华光 刊期: 2002年第02期

  • 上颌尖牙第一双尖牙易位的正畸治疗

    目的:对上颌尖牙与第一双尖牙易位的原因进行探讨,并提出正畸治疗方法. 方法:收集上颌尖牙与第一双尖牙易位11例,对其发生的左右两侧位置、性别,是否伴有牙列的其他异常等进行详细记录.对不同病例根据情况分别进行治疗. 结果:上颌尖牙与第一双尖牙易位多伴有乳尖牙滞留及过小侧切牙,性别、左右两侧之间无明显差异,两侧均有易位者比例较高(2/7),两种治疗都取得了良好的结果. 结论:在引起上颌尖牙与第一双尖牙易位的多因素中,遗传及萌出位置和方向的改变占有重要地位,治疗措施应根据整个牙列的情况决定,以保证获得美观与功能的协调,在非拥挤病例可保持错位顺序而排齐牙列.

    作者:唐成忠;徐辉;汤学华;翁志强 刊期: 2002年第02期

  • 加替沙星与左氧氟沙星随机对照治疗急性下呼吸道感染的临床评价

    目的:采用随机双盲平行对照方法评价加替沙星治疗急性下呼吸道感染的临床疗效和安全性. 方法:经临床确诊为急性下呼吸道感染的患者48例,其中治疗组23例,口服加替沙星0.4 g,每天1次;对照组25例,口服左氧氟沙星0.2 g,每天2次,疗程均为7~14天. 结果:治疗组和对照组的痊愈率分别为69.6%(16/23)与72.0%(18/25),有效率分别为100%与96.0%(P>0.05).两组细菌清除率分别为100%与90.0%(P=0.192),两组间临床和细菌学疗效差异不显著.不良事件发生率分别为11.5%(3/26)与4.0%(1/25),均为消化道反应.两组分别有8例(30.8%)和9例(36%)患者出现实验室检查异常,主要为转氨酶和淀粉酶轻度升高,但不影响治疗. 结论:加替沙星抗菌谱广,抗菌活性强,能安全有效地治疗急性下呼吸道感染.

    作者:苏欣;施毅;夏锡荣;邵海枫;李珍大;申萍;张晓琳 刊期: 2002年第02期

  • 凝血酶与脑出血神经细胞程序性死亡

    脑出血后在血液凝固过程中释放出大量凝血酶,高浓度的凝血酶具有神经毒性,并参与脑出血后神经细胞程序性死亡.凝血酶导致神经细胞程序性死亡与其浓度、作用时间密切相关,可能的作用机制包括RhoA活化、PKC的过度激活、NMDA受体反应性增高等.针对凝血酶采取相应的措施,有可能成为防治脑出血后神经损伤的有效途径.

    作者:周中和;李玮;王景周 刊期: 2002年第02期

  • 绿荧光蛋白的荧光强度在D-氨基酸氧化酶活性检测中的应用

    目的:探讨在转基因细胞KDfGc和KDfGd,以内部核糖体进入位点(IRES)序列连接的绿荧光蛋白(GFP)的荧光强度为单位,衡量D-氨基酸氧化酶(DAAO)活性的准确性. 方法:白血病细胞系K562e经转染含IRES序列连接的GFP和DAAO基因的逆转录病毒载体pLDfG,获得稳定表达GFP和DAAO基因的单克隆细胞KDfGc和KDfGd,以流式细胞仪和Lowry测定其荧光阳性率以及平均荧光强度、蛋白量,用D-丙氨酸(D-Ala)作用DAAO+细胞,并用酚红氧化法测定培养上清H2O2. 结果:KDfGc和KDfGd细胞的荧光阳性率分别为94.64%和96.31%.2×104细胞的平均荧光强度分别为202 U和174 U.2×104细胞的蛋白量分别为13.17 μg和7.12 μg,KDfGc、KDfGd细胞每微克蛋白量每小时产生的H2O2峰值无差异,而以单位荧光来衡量,两细胞具有明显差别. 结论:在含IRES序列的转基因细胞,以GFP的平均荧光强度为度量单位,比以细胞蛋白量能更准确地反映DAAO的活性.

    作者:翟勇平;王健民;张雨生;周虹;吕书晴 刊期: 2002年第02期

  • 人CTLA4单克隆抗体的制备和鉴定

    目的:制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)的单克隆抗体. 方法:利用蛋白纯化技术获得人CTLA4 Ig蛋白免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并用Western印迹和流式细胞检测仪鉴定所制备的单克隆抗体. 结果:获得一个稳定的分泌抗人CTLA4的杂交瘤细胞株.该细胞克隆培养上清中所含的单抗能和经过PHA刺激后的人T细胞结合,但不能和经过PHA刺激后的小鼠T细胞结合. 结论:利用重组人CTLA4 Ig制备获得高特异性的抗人CTLA4单克隆抗体.

    作者:卢洋;钱卫珠;王皓;吴孟超;郭亚军 刊期: 2002年第02期

  • 预防假体周围溶骨的研究进展

    在人工关节置换中,磨损微粒引起假体周围溶骨已成为当前预防假体无菌性松动的研究重点.本文对近年来为减少磨损微粒的产生、阻止微粒进入假体-骨界面和向远端移动、应用二膦酸盐等的研究作一综述.

    作者:林秾;赵建宁;王与荣;吴苏稼 刊期: 2002年第02期

  • 三联疗法对幽门螺旋菌相关性十二指肠溃疡的疗效观察

    目的:观察雷尼替丁加克拉霉素、阿莫西林治疗幽门螺旋菌(helicobacter pylori, HP)感染相关的十二指肠溃疡(DU)及降低复发率的效果. 方法:对胃镜检查为活动性DU、胃窦粘膜活检尿素酶试验及组织切片阳性的HP感染患者96例,随机分为两组,治疗组用雷尼替丁150 mg,每天2次,早、晚餐前半小时服,克拉霉素500 mg、阿莫西林1000 mg,每天2次,连服2周.对照组用雷尼替丁150 mg,每天2次,早、晚餐前半小时服,枸橼酸铋钾颗粒剂每次220 mg,每天2次,连服2周.治疗结束后4周复查胃镜,随访1年,对出现上腹痛等症状者随时复查. 结果:溃疡愈合率:治疗组为95.83%(46/48),对照组为85.42%(41/48),P>0.05.HP根除率:治疗组为81.25%(39/48),明显高于对照组10.41%(5/48),P<0.01.溃疡愈合患者1年后复发率:HP根除组为9%(4/44),明显低于HP未根除组69.23%(36/52),P<0.01. 结论:雷尼替丁加克拉霉素、阿莫西林对治疗HP感染相关的DU及降低复发率,疗效显著,价格合理,是可供临床选择的治疗方案之一.

    作者:朱扣林 刊期: 2002年第02期

  • 边缘区B细胞淋巴瘤的临床和分子细胞遗传学研究进展

    边缘区B细胞淋巴瘤(MZBCL)是B细胞非霍奇金淋巴瘤中一种独特的亚型.近年来,在细胞和分子遗传学水平对MZBCL的发生发展机制的研究已有重要进展.MZBCL时,重排的VH基因亦是参与自身抗体产生的基因,提示该病源于自身反应性B细胞.多种染色体数量和结构异常及API2、BCL10和FAS等程序性死亡(又称凋亡)相关基因受累,表明程序性死亡受抑是MZBCL的主要发病原因.

    作者:杨继红;于亚平 刊期: 2002年第02期

  • 生物材料人造输尿管替代研究进展

    替代材料对替代输尿管解剖的连续性和功能的完整性起到决定性的作用.本文回顾了生物材料人造输尿管的研究近况,并简要综述了生物性人造输尿管替代手术方法与技巧.

    作者:余德才;戴玉田;陈强;沈健 刊期: 2002年第02期

  • 血管紧张素Ⅱ受体与高血压关系的研究进展

    从AⅡ1受体和AⅡ2受体的功能、基因等方面阐述两种受体在高血压中的重要作用,并简要介绍AⅡ1受体拮抗剂治疗高血压病的优越性.

    作者:王伟新;凌树森 刊期: 2002年第02期

  • 小儿重度烧伤早期胃肠道营养302例临床分析

    目的:回顾性分析302例小儿严重烧伤后,早期胃肠道营养对防止胃肠道大出血的临床经验. 方法:分析1980年至2001年10月收治的573例小儿烧伤中,302例为严重烧伤,在积极抗休克治疗的同时不禁食,并指导亲属施行早期胃肠道营养,同时观察胃肠道并发症的情况. 结果:302例严重烧伤患儿中,25例早期有明显休克,均平稳度过休克期.除2例并发急性胃扩张、腹泻及排柏油样便外,无一例并发胃肠道大出血.本组302例中死亡8例(2.6%),烧伤总面积均>50%,除1例死于化学性烧伤中毒外,其余7例均死于后期严重感染或MOF. 结论:在早期积极有效的抗休克治疗基础上,及早进行口服胃肠道营养治疗,并充分发挥患儿亲属的作用,对预防胃肠道大出血有积极作用,而且有利于患儿的心理康复.

    作者:胡心宝;姜会庆;陈一飞;解伟光;汪军;周济宏;陈馨 刊期: 2002年第02期

  • 帕金森病大鼠模型的炎性机制

    目的:研究帕金森病(PD)大鼠模型的炎性机制. 方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PD大鼠模型黑质纹状体区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的水平.采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化法估测黑质区神经损伤的程度. 结果:PD大鼠模型黑质纹状体区TNF-α和IL-1的水平较对照组明显增高(P<0.05),环孢素(CsA)可减轻6-羟基多巴胺(6-OHDA)对黑质多巴胺神经元的损伤,但对黑质纹状体区TNF-α和IL-1水平无明显影响. 结论:免疫炎性机制可能参与PD的发病过程,CsA可能通过与炎性因子无关的途径对黑质多巴胺神经元起保护作用.

    作者:周国庆;陈光辉 刊期: 2002年第02期

医学研究生学报杂志

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主管:南京军区联勤部卫生部

主办:南京军区南京总医院