俞晨；杨帆；李健；陈斌；袁晔；高焱；李勇；费蓓蓓；徐又佳；彭笳宸
目的 观察天冬氨酸β羟化酶(ASPH)在调节细胞自噬中的作用.方法 向OUMS-29、HEK-293T细胞转染ASPH质粒,Western blot检测转染后细胞p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的表达;向OUMS-29细胞共转染ASPH、pEGFP-LC3质粒,荧光显微镜下计算绿色荧光蛋白(GFP)-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数的比率.沉默HuCCT1、SSP25细胞ASPH基因,Western blot检测细胞p62、LC3-Ⅱ的表达,并用噻唑蓝(MTT)法检测细胞自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)或二甲双胍(Met)对细胞生长速率的影响.结果 过表达ASPH使OUMS49、HEK-293T细胞内LC3-Ⅱ表达下降44％ (P =0.002,P=0.008),但不改变p62表达量(P =0.060,P=0.798);过表达ASPH使OUMS-29细胞GFP-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数比率由50.84％降至28.31％ (P =0.002);ASPH基因沉默使HuCCT1、SSP25细胞内LC3-Ⅱ表达分别上调87％、133％(P =0.001,P=0.000),但不影响p62表达(P =0.677,P=0.168);细胞自噬诱导剂雷帕霉素或二甲双胍掩盖ASPH沉默对HuCCT1、SSP25细胞生长速率的影响.结论 ASPH通过抑制LC3-Ⅱ生成抑制细胞自噬;ASPH对细胞自噬的调节可能是其参与细胞生长调控的机制之一.
作者：邹婧；何继满 刊期： 2018年第04期
骨肉瘤(Osteosarcoma)是常见的原发恶性骨肿瘤,其恶性程度高、预后差,严重威胁儿童和青少年的健康.表皮生长因子受体(EGFR)家族属于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶受体,其表达能够抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖、血管生成和远处转移.目前国内外有关EGFR家族与骨肉瘤进展的研究十分有限且存在较大争议.本文将对EGFR家族表达与骨肉瘤进展相关性以及EGFR抑制剂在骨肉瘤治疗中的应用作综合性阐述.
作者：王生淋；余凤强；林建华 刊期： 2018年第04期
目的 观察大黄素对肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移抑制作用.方法 采用原代人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC),常规培养、建立缺氧细胞模型,采用不同浓度(0、5、10、15、20 μmol/L)大黄素分别处理于缺氧环境下培养12、24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)和Transwell侵袭实验检测缺氧肺动脉细胞增殖及迁移.用Westemblot法测定大黄素对缺氧HPASMC p38蛋白的表达.结果 大黄素对缺氧HPASMC的增殖及迁移呈浓度及时间依赖性抑制.浓度为20 μmol/L时效果显著,其12、24、48、72 h抑制率依次为(53.46±1.81)％、(61.32±2.69)％、(76.34±3.05)％、(84.43±3.18)％.Transwell实验组(5、10、15、20μmol/L)大黄素干预后细胞迁移数依次为(68.90±8.49)、(46.10±5.63)、(27.56±5.38)、(12.61±3.68)个与对照组[(88.59±8.56)个]比较明显减少.与对照组比较,实验组p38蛋白的表达均减少(P=0.001).结论 大黄素可明显抑制缺氧环境下人肺动脉平滑肌细胞的增殖及迁移,并下调其p38蛋白表达水平.
作者：李海燕；李鲲；冯旭；王康；覃家锦 刊期： 2018年第04期
目的 观察纳米金结合重组人血管内皮抑素对原代人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其机制.方法 将原代HUVECs培养传至第4代,分为对照组、重组人血管内皮抑素组(ES)、纳米金组(AU)和纳米金结合重组人血管内皮抑素组(AU-ES).采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法分别检测在24、48、72 h和25、50、100 μg/ml下各组细胞增殖抑制率,可得出佳时间及浓度组合条件;在该条件下采用流式细胞仪、Transwell实验观察各组HUVECs的凋亡率、迁移能力的变化;采用Western blot检测各组与细胞增殖、凋亡及迁移功能相关蛋白质表达水平变化.结果 (1) CCK-8结果表明在不同浓度及时间下,AU-ES组(24h,100μg/ml)增殖抑制率为(35.166±3.076)％,差异有统计学意义(t=4.251,P=0.013);(24 h,100 μg/ml)为佳处理条件;(2)流式细胞仪结果表明在24h,100 μg/ml下,AU-ES组对HUVECs的凋亡率为(27.197±0.390)％,与对照组[(10.357±3.012)％]比较,差异有统计学意义(t=9.603,P=0.001);(3)Transwell实验24 h后小室底膜迁移面积比为(42.943±3.129)％,与对照组(58.98±1.543)％比较,差异有统计学意义(t=7.963,P=0.001);(4)与细胞增殖、凋亡及迁移有关蛋白如:B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、c-Myc、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮因子生长受体-2(VEGFR-2)、波形蛋白(Vimentin),与对照组比较AU-ES组的蛋白表达水平是明显降低.结论 在一定条件下AU-ES能对原代HUVECs具有抑制增殖及迁移、促进凋亡的作用,并且降低有关蛋白的表达.
作者：刘书昊；潘运龙；覃莉；李伟；阳小燕；李鑫；杨文德；潘璠 刊期： 2018年第04期
目的 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在铁蓄积环境下培养,观察细胞增殖指标和成骨方向分化的影响.方法 无菌条件下取正常SD 4周龄雌性大鼠股骨髓腔细胞,经分离纯化后传代培养,并经流式细胞仪鉴定成功后,体外扩增后接种,由不同浓度枸櫞酸铁铵(FAC) (50、100、200 μmol/L)及成骨诱导培养基共同培养,以不加FAC为空白对照组,在第4、7、10、14天收集细胞,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR),分别检测成骨细胞分化关键基因:成骨相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)表达;在第14天茜素红染色并半定量检测钙结节形成情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度FAC对BMSCs增殖的影响.结果 随着铁剂浓度的增加,大鼠BMSCs的增殖能力逐渐降低;BMSCs经成骨诱导14 d后,在铁剂影响下,形成的钙结节较空白对照组明显减少,但铁剂干预各组间无明显差异,半定量结果亦显示相同结果(对照组:2.357±0.160、50 μmol/L组:0.308±0.029、100 μmol/L组:0.281±0.031、200 μmol/L组:0.224±0.017,P=0.000);不同浓度的铁剂对BMSCs成骨分化的各个阶段基因都有不同程度的影响.在成骨早期,Runx2的表达在对照组、100 μmol/L和200μmol/L铁剂干预组有明显差异(对照组:1.000±0.229、100 μmol/L组:0.198±0.044、200 μmol/L组:0.149±0.009,P=0.001),且与浓度存在一致相关性;在成骨中期,不同浓度铁剂对ALP的表达都具有明显抑制(对照组:0.980±0.063、50 μmol/L组:0.018±0.001、100 μmol/L组:0.014±0.002、200 μmol/L组:0.008±0.001,P=0.001);在成骨晚期阶段,不同浓度铁剂较对照组对OPN有明显抑制表达作用(对照组:0.999±0.001、50 μmol/L组:0.170 ±0.072、100 umol/L组:0.142±0.008、200 μmol/L组:0.117 ±0.028,P =0.003).结论 铁蓄积培养环境可明显抑制BMSCs的增殖,同时抑制其向成骨细胞方向的分化,且有剂量依赖性.
作者：俞晨；杨帆；李健；陈斌；袁晔；高焱；李勇；费蓓蓓；徐又佳；彭笳宸 刊期： 2018年第04期
目的 观察干扰谷氨酰胺酶1(GLS1)表达对人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞生物学特性的影响.方法 Western blot检测GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达;将正常对照(NS)-小干扰RNA (siRNA)、GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3转染人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞株BON-1,未转染任何siRNA的作为对照组,Westem blot检测转染后各组细胞中GLS1蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测转染12、24、48 h后细胞增殖;细胞转染24 h后,Transwell小室检测细胞侵袭数;Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、人核糖体蛋白S6激酶(rps6k)、磷酸化rps6k (p-rps6k)蛋白表达;细胞中加入10 nmol/L mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素,检测其对细胞增殖侵袭的影响.结果 GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织(P=0.000);GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3组细胞中GLS1蛋白表达水平均显著低于对照组,选择GLS1-siRNA2作为后续研究;GLS1-siRNA组在12、24、48 h的细胞存活率为(85.31±4.42)％、(76.12±2.93)％、(69.22±3.62)％,均显著低于对照组[(97.02±2.21)％、(96.61±1.52)％、(97.11 ±2.32)％;t12 h =4.104,P12 h =0.015;t24 h=10.752,P24 h=0.000;t4s h=11.235,P48 h=0.000];GLS1-siRNA组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、p-mTOR、p-rps6k蛋白表达水平均显著低于对照组;加入抑制剂后的细胞增殖及侵袭结果与干扰GLS1表达的结果趋势一致.结论 GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中呈高表达,抑制GLS1的表达能显著抑制BON-1细胞增殖和侵袭,其机制与mTOR信号通路的调控有关.
作者：唐礼恭；徐勇超；李星；任莹坤；韩广森；尹路 刊期： 2018年第04期
目的 探讨仙龙颗粒对于血清中肝素结合性表皮生长因子(HBEGF)、高尔基磷酸化蛋白2(GOLPH2)分子表达的调控效果及仙龙颗粒的抗癌机制.方法 选择250只SD大鼠予以致癌剂构建肝癌大鼠模型,将其平均分成5组各50只,分别为阳性对照组[静脉注射顺铂(DDP),60 mg/m2]、低剂量组(喂养仙龙颗粒水溶液,1.0 g/ml)、中剂量组(喂养仙龙颗粒水溶液,2.0g/ml)、高剂量组(喂养仙龙颗粒水溶液,6.0 g/ml)、阴性对照组(喂养蒸馏水),另取50只健康SD大鼠作空白组.对各组的大鼠进行肝脏肿瘤切除术,在手术前1周、手术后第6、12、24、36周分别按各组要求给药并每组处死1只SD大鼠作肝脏病理检查,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测剩余生存大鼠血液中的HBEGF、GOLPH2水平,统计HBEGF、GOLPH2阳性表达率.结果 死亡率方面,低剂量组术前1周为4.0％,术后36周为37.0％;中剂量组术前1周为2.0％,术后36周为2.4％;高剂量组术前1周为0.0％,术后36周为14.0％;GOLPH2阳性率,低剂量组术前1周为62.0％,术后36周为22.2％ (x2=9.577,P=0.002);中剂量组术前1周为64.0％,术后36周为7.1％(x2=28.941,P=0.000);高剂量组术前1周为20.0％,术后36周为38.2％(x2=7.092,P=0.008);HBEGF阳性率,低剂量组术前1周为58.0％,术后36周为22.0％(x2=7.666,P=0.006);中剂量组术前1周为62.0％,术后36周为16.7％ (x2=17.525,P=0.000);高剂量组术前1周为56.0％,术后36周为29.4％ (x2 =4.752,P=0.029).不同剂量的仙龙颗粒均能显著降低大鼠的死亡率、血清中HBEGF、GOLPH2的阳性率,但低剂量组、高剂量组的效果不及中剂量组.结论 仙龙颗粒可下调肝癌大鼠血清中HBEGF、GOLPH2的表达,从而抑制癌细胞增殖及促进其凋亡,达到抗癌、延长存活时间的效果.
作者：陈卓；李明晶；郭环宇；景年财 刊期： 2018年第04期
随着骨科手术中金属植入物使用的增多,术后伴有金属植入物的CT检查也逐渐增多,而CT扫描会产生严重的伪影,干扰临床诊疗.为了解决这一问题,近年来大量研究分别从工程学和医学角度提出不同的方法和理论来减少金属伪影.工程学方面主要包括改变CT机的型号与性能,如应用双能CT (DECT)、锥状束CT(CBCT)等代替传统的螺旋CT.医学方面主要有改变CT电子管电压、扫描范围(FOV)、扫描层厚等参数,应用CT后处理软件与算法(如O-MAR技术)等.本综述将从以上两个大的角度,详细阐述近年来国内外在CT金属去伪影方面相关研究的进展,并据此为骨科金属植入物CT去伪影扫描方法提供参考.
作者：张客松；韩青；单悦展；邹运；陈炳鹏；王金成 刊期： 2018年第04期
目的 观察CAPZA1在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系,探讨CAPZA1调控胰腺细胞的侵袭转移的作用及机制.方法 采用免疫组织化学法检测CAPZA1和上皮-间充质转化(EMT)标志物在胰腺癌组织中的表达,统计分析胰腺癌患者的预后情况.Western blot、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胰腺癌细胞中CAPZA1和EMT标志物的表达.Transwell、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测胰腺癌细胞的迁移、侵袭和增殖.结果 CAPZA1表达水平与胰腺癌的生物学特性及患者的预后呈负相关.CAPZA1的表达水平与胰腺癌的侵袭转移潜能呈负相关,抑制CAPZA1的表达可促进胰腺癌的侵袭转移(192.0±13.8比153.0±17.1,P=0.004),而过表达CAPZA1可抑制胰腺癌的侵袭转移(107.0±18.5比153.0±17.1,P=0.004).过表达CAPZA1可以上调EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin,0.76±0.09比0.57 ±0.14,P=0.034)而抑制N-钙黏蛋白(N-cadherin,0.53 ±0.12比0.74±0.10,P=0.017)和波形蛋白(Vimentin,0.56±0.20比0.93±0.19,P=0.017)的表达.结论 CAPZA1可通过调控肌动蛋白骨架的装配,从而抑制胰腺癌细胞EMT,降低胰腺癌细胞的侵袭能力.
作者：翟东升；黄强；谭庆丰 刊期： 2018年第04期
目的 探讨姜黄素对人血管瘤内皮细胞(HemECs)中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素2(Ang-2)的影响及促进其凋亡的机制.方法 酶消化法分离培养HemECs,并经不同浓度(0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 μmol/L)姜黄素作用后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测HemECs增殖,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测HemECs的凋亡,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测VEGF、Ang-1和Ang-2 mRNA,细胞免疫荧光定量检测血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)1、VEGFR2、内皮特异性酪氨酸激酶受体(Tie)1和Tie2蛋白表达.结果 25.00、50.00 μmol/L姜黄素作用48 h比24 h细胞存活率降低[(62.34±10.08)％比(79.25±8.17)％和(15.23 ±4.01)％比(26.10±6.05)％;t=3.192,P=0.010和t=3.668,P=0.004].25.00μmol/L姜黄素作用48 h后,TUNEL阳性细胞数为(16.00±2.80)个,高于0.μmol/L姜黄素作用48 h后的[(5.00±1.40)个,t=8.607,P=0.000].25.00 μmol/L姜黄素作用24h后,VEGF mRNA相对表达量为0.34±0.09,低于0μmol/L姜黄素的1.00±0.12(=8.193,P=0.001);Ang-2 mRNA相对表达量为0.45±0.07,低于0μmol/L姜黄素的0.99 ±0.12(t =6.756,P=0.003).25.00 μmol/L姜黄素作用24h后,VEGFR2和Tie2的相对表达量分别为0.30 ±0.05、0.30±0.04,较0μmol/L姜黄素的0.48±0.09、0.52±0.07降低(=4.300,P=0.002;t=6.602,P=0.000).结论 姜黄素可抑制HemECs的生长并促进其凋亡,其可能与下调VEGF、Ang-2的表达有关.
作者：赵松峰；张晓坚；赵高峰 刊期： 2018年第04期
目的 探讨脂肪非典型钙黏蛋白(FAT1)通过靶向调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)调节缺氧条件下胶质瘤细胞侵袭能力的作用机制.方法 选择我院收治的48例Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤患者的手术病理组织样本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测FAT1和HIF-1α表达水平并分析其相关性.以人胶质瘤细胞U87MG和GOS3作为研究对象,采用FQ-PCR技术检测正常氧气和缺氧条件下FAT1和HIF-1α表达.采用脂质体2000法将FAT1小干扰RNA(siRNA)、HIF-1α siRNA以及对照siRNA转染至U87MG和GOS3细胞株,检测正常氧气和缺氧条件下FAT1和HIF-1α表达,并采用Transwell小室技术检测U87MG和GOS3胶质瘤细胞的侵袭能力.结果 48例Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤患者病理组织FAT1和HIF-1α相对表达水平分别为4.07(0.72,13.42)和0.94(0.29,3.49),Spearman相关分析显示FAT1和HIF-1α相对表达水平明显相关(r=0.835,P=0.000).正常氧气浓度下GOS3细胞株FAT1(0.29±0.03)和HIF-1α(0.34 ±0.09)相对表达水平均显著低于U87MG细胞株的1.08 ±0.15、1.00 ±0.12,差异有统计学意义(t=8.945、7.621,P=0.010、0.002);缺氧条件下,U87MG和GOS3细胞株FAT1和HIF-1α相对表达水平均显著高于正常氧气浓度下(t=17.994、8.920、14.047、4.037,P=0.000、0.001、0.004、0.016);U87MG细胞株缺氧条件下FAT1 (4.38 ±0.28)和HIF-1α(2.76 ±0.32)相对表达水平均显著高于GOS3细胞株的1.69±0.17、0.83±0.19,差异有统计学意义(t=14.224、8.982,P=0.000、0.001).转染FAT1 siRNA后U87MG和GOS3细胞在正常氧气和缺氧条件下FAT1 (0.17 ±0.06、0.16 ±0.03、0.16±0.03、0.18 ±0.03)和HIF-1α(0.18 ±0.03、0.17 ±0.04、0.15 ±0.04、0.21 ±0.02)相对表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(t=7.577、7.793、7.793、7.783、9.285、9.260、9.484、9.042,P=0.002、0.013、0.013、0.014、0.009、0.007、0.007、0.011);转染HIF-1αsiRNA后U87MG和GOS3细胞在正常氧条件下的FAT1 (0.16 ±0.04、0.28 ±0.03)以及正常氧气和缺氧条件下HIF-1α(0.15 ±0.03、0.16 ±0.02、0.15 ±0.03、0.17 ±0.02)相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(t=7.890、6.834、9.624、9.614、9.624、9.500,P=0.012、0.018、0.008、0.009、0.008、0.010);但缺氧条件下的FAT1 (4.27±0.41、2.72 ±0.25)相对表达水平显著高于正常氧,差异均有统计学意义(t=12.649、9.671,P=0.000、0.001).缺氧条件下,转染FAT1 siRNA、转染HIF1αsiRNA的U87MG细胞侵袭细胞数量[(23.2±4.2)、(21.5±3.1)个]显著低于正常氧条件[(57.6±8.1)、(58.7±7.6)个],差异有统计学意义(t=6.530、7.850,P=0.003、0.001).结论 高级别胶质瘤中FAT1和HIF-1α表达具有较强的相关性,缺氧条件下两者高表达,FAT1可通过靶向调控HIF-1α促进胶质瘤细胞侵袭.
作者：蒋广义；孙剑瑞；丁大领；庞长河；刘献志 刊期： 2018年第04期
目的 观察不同浓度的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对糖尿病大鼠血糖浓度的影响.方法 取正常SD大鼠的骨髓,分离、纯化培养得到BMSCs,并检测表面分子标志物CD34、CD44、CD45和CD90的表达.建立的糖尿病大鼠模型随机分为对照组、低浓度组、高浓度组以及正常饲养的大鼠为正常组.低浓度组、高浓度组分别注射1×105和5×106个BMSCs,正常组和对照组则注射磷酸盐缓冲液(PBS),分别检测注射后1、2、3周的血糖浓度并进行统计学分析.结果 细胞免疫荧光检测显示CD34(-)、CD44(+)、CD45(-)和CD90(+),证实为BMSCs.静脉注射BMSCs治疗后,低浓度治疗组大鼠血糖浓度在治疗前2周无明显变化,第3周下降16.1％;高浓度治疗组与对照组比较,随着治疗时间推移,大鼠的血糖浓度表现出显著的降低,第3周血糖浓度下降42.0％.正常组和对照组治疗前后血糖浓度无明显变化.结论 静脉移植高浓度(5×106个)的BMSCs,有助于控制并调节糖尿病大鼠的血糖浓度.
作者：邹新华；杜烨；任国强；王知；张静；李炳辉 刊期： 2018年第04期
目的 应用改良“枕大池二次注血法”建立稳定、可靠的蛛网膜下腔出血(SAH)模型,并评估其脑血管痉挛程度.方法 在“枕大池二次注血法”的基础上进行改良:(1)利用立体定向仪在三维空间定位和角度调节,更加准确地穿刺枕大池的部位.(2)应用微量注射泵以恒量、恒速注射自体血,减少手工注射时对脑于的损伤.采用随机数字法将SD大鼠分为:假手术组、对照组、SAH组,每组各25只.SAH组采用改良“枕大池二次注血法”建立蛛网膜下腔出血模型,对照组用等量的生理盐水,假手术组仅仅暴露寰枕筋膜.观察该模型的成功率和失败率、神经功能、脑组织含水量、基底动脉改变、局部脑血流量(rCBF)变化.结果 与假手术组比较,SAH组大鼠造模第1天时神经功能受损严重,差异有统计学意义[(9.2±0.7)分比(1.0±0.6)分,P=0.001];与假手术组、对照组比较,SAH组第1天时大鼠脑组织含水量显著增多,差异有统计学意义[(79.98±0.11)％比(78.29±0.12)％、(78.39±0.13)％,P=0.001].光镜下苏木素-伊红(HE)染色结果显示:与假手术组比较,SAH组第5天时大鼠基底动脉管腔内径和管腔面积明显缩小,差异有统计学意义[(325.200±15.156) μm比(461.000±22.705) μm,P=0.000;(80 739.200±7 297.735) μm2比(167 124.200 ±7 067.155) μm2,P=0.000].激光散斑结果显示:SAH组大鼠第5天时的rCBF明显低于假手术组和对照组,差异有统计学意义[(56.0±3.5)％比(97.2±1.7)％、(95.8±3.5)％,P=0.001].结论 应用改良“枕大池二次注血法”可以建立稳定、可靠的SAH模型.
作者：周帅；殷冬培；徐新；高伟伟；李飞；王计伟；孙东东；王毅；张建宁 刊期： 2018年第04期
目的 观察巴戟天寡糖(MOO)对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)的作用.方法 健康雌性SD大鼠100只按随机数字表法随机均分为5组,每组20只:空白对照组、假手术组、IRI组、MOO2.1 g/(kg·d)组、MOO 0.7 g/(kg·d)组.空白对照组仅开腹并分离卵巢,假手术组开腹切除双侧卵巢并开胸暴露心脏,其余3组均按去卵巢心肌IRI模型处理,其中MOO 2.1g/(kg·d)组、MOO 0.7 g/(kg·d)组给予含相应浓度MOO的10 ml/kg药液灌胃.实验结束均称重大鼠及其子宫,并取出心脏组织,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),采用硫代巴比妥酸法检测微量丙二醛(MDA)水平;采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;采用Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化p53(p-p53)蛋白表达.结果 各组SOD、GSH-Px、MDA、TNF-0、IL-1β、IL-6、bcl-2、bax、p-p38、p-p53比较差异均有统计学意义(F=205.773、268.788、57.214、205.395、264.242、221.096、202.681、70.138、132.288、64.817,P均=0.000). MOO2.1 g/(kg·d)组[(152.11±4.53)、(134.34±5.20) U/mg]、MOO 0.7 g/(kg·d)组[(137.96±5.21)、(118.60 ±4.37) U/mg] SOD、GSH-Px水平高于IRI组[(87.40±6.28)、(69.91±5.48) U/mg],而MOO 2.1 g/(kg·d)组[(2.30±0.11) nmol/mg,(79.26±8.32)、(96.76±7.63)、(137.42 ±7.85) ng/g]、MOO 0.7g/(kg·d)组[(2.81±0.15) nmol/mg,(99.87 ±8.84)、(130.86±8.37)、(157.19±12.20) ng/g] MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于IRI组[(4.06±0.65) nmol/mg,(158.46±14.65)、(192.47 ±9.61)、(233.59±14.37) ng/g,P均=0.000].与MOO 2.1 g/(kg·d)组比较,MOO 0.7g/(kg·d)组SOD、GSH-Px水平降低,而MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P均=0.000).MOO 2.1 g/(kg·d)组(1.45±0.15)、MOO 0.7 g/(kg·d)组bcl-2水平(1.03±0.13)高于IRI组(0.60±0.12,P均=0.000);而MOO 2.1 g/(kg·d)组bax、p-p38、p-p53水平[(1.71±0.16)、(4.25±1.07)、(2.99±0.61)]、MOO 0.7g/(kg·d)组(2.05±0.14、5.90±1.46、5.19±1.16)低于IRI组(2.39±0.23、11.79±1.46、6.22±1.35,P均=0.000).MOO 2.1 g/(kg,d)组和MOO0.7g/(kg·d)组SOD、GSH-Px、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、bcl-2、bax、p-p38、p-p53比较差异均有统计学意义(P均=0.000).结论 MOO对去卵巢心肌IRI有保护作用,能够减轻去卵巢心肌IRI中细胞损伤或凋亡,其中p38、p53信号通路发挥重要作用.
作者：王志红；刘海；黄冬梅；邓克红；王武亮；徐臻；袁博；胡滨；王燕 刊期： 2018年第04期
目的 观察膜联蛋白A11(ANXA11)对人胃癌细胞株SGC7901 5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性影响.方法 检测人胃癌细胞株SCG7901、BGC823的ANXA11表达.将ANXA11-小干扰RNA(siRNA)及阴性对照序列瞬时转染入SGC7901细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染后各组细胞对不同剂量5-Fu(1、10、20、40、80 μg/ml)的药物敏感性改变.应用流式细胞术检测不同处理组凋亡率,应用定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot检测胸腺嘧啶脱氧核苷合成酶(TS)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达的改变.结果 ANXA11 mRNA及蛋白表达量在SGC7901中显著高于BGC823(t=3.212,P=0.033;t=-10.768,P=0.000).转染组(转染ANXA11-siRNA)细胞的半数抑制剂量(IC50)及20％抑制剂量(IC20)值明显低于阴性、空白对照组(F =47.500,P=0.000;F =45.523,P=0.000).转染组、联合组凋亡率较阴性(转染NS-siRNA)、空白对照组(转染LipofectamineTM2000)显著升高(F=117.525,P=0.000),且联合组凋亡率较转染组明显升高(=9.004,P=0.000).转染组及联合组ANXA11蛋白表达较阴性、空白对照组显著降低(F=118.403,P=0.000).转染组及联合组bax的表达上调(F =35.608,P=0.000),而bcl-2、TS的表达降低(F=30.048,P=0.000;F=22.874,P=0.000).结论 抑制ANXA11表达能提高人胃癌细胞株SGC7901对5-Fu的敏感性,可能与抑制TS、bcl-2、上调bax的表达有关.
作者：贾楠；李勇；赵一杰；赵群；范立侨；檀碧波；刘羽 刊期： 2018年第04期
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-148b和miR-152在胆管癌中的表达及其生物学功能.方法 用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-148b和miR-152在胆管癌与正常胆管组织、胆管癌细胞株QBC939和良性胆管细胞株H-69中的表达;分别用Real-time PCR、噻唑蓝(MTT)检测法、克隆形成实验和流式细胞术检测miR-148b和miR-152的表达及其对细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.结果 与正常胆管组织比较,miR-148b和miR-152在胆管癌组织中分别下调(2.75±0.16)倍和(3.05 ±0.18)倍,差异均有统计学意义(P=0.013、0.019);与良性胆管细胞比较,miR-148b和miR-152在胆管癌细胞中分别下调(2.52±0.03)倍和(3.96±0.02)倍,差异均有统计学意义(P=0.018、0.012);miR-148b和miR-152过表达显著抑制胆管癌细胞的增殖速率,分别为(38.49±0.31)％和(52.69±1.01)％,同时也能显著抑制克隆形成率(P=0.031、0.023),miR-148b和miR-152均可使细胞周期阻滞于S期(P=0.027、0.017),并且miR-148b和miR-152过表达均可诱导细胞凋亡.结论 胆管癌组织中miR-148b和miR-152表达均下调,过表达miR-148b和miR-152后可抑制胆管癌细胞增殖及诱导胆管癌细胞凋亡.
作者：曹坤；孙良权；龚勇军；张涛；李海洋；左石 刊期： 2018年第04期
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)影响肺腺癌细胞侵袭迁移,以及对上皮-间充质转化(EMT)和自噬的影响.方法 Transwell检测体外TGF-β1对肺腺癌细胞A549和SK-LU-1迁移与侵袭能力的影响;免疫荧光检测TGF-β1引起的A549细胞自噬水平变化;Western blot实验检测在A549细胞中TGF-β1对EMT标志分子及自噬调控基因表达的影响.结果 在A549和SK-LU-1细胞中,sh-TGF-β1干扰效率约为60％,GV358-TGF-β1过表达组过表达效率均在4倍以上;迁移实验结果显示,A549细胞中,随机干扰对照组(shNC组)迁移率为1.02±0.06,TGF-β1过表达组为5.14±0.43(t=16.440,P=0.004);SK-LU-1细胞中,shNC组迁移率为1.04±0.08,TGF-β1过表达组为4.92±0.48(t=13.810,P=0.005),差异均有统计学意义;侵袭实验结果显示,A549细胞中,随机干扰对照组(shNC组)侵袭率为0.96±0.07,TGF-β1过表达组为4.28 ±0.51(t=11.170,P =0.007);SK-LU-1细胞中,shNC组侵袭率为1.03±0.05,TGF-β1过表达组为4.11±0.36(t=10.410,P=0.009),差异均有统计学意义;免疫荧光实验结果可见,与对照组比较,TGF-β1过表达组点状分布的自噬小体数目明显增多(t=22.340,P=0.000),荧光强度显著增强;Westem blot实验结果显示,TGF-β1过表达组E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量明显减少,波形蛋白(Vimentin)、Twist、Snail的表达显著增加;自噬相关蛋白Beclin1表达上调,磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达上调;而TGF-β1干扰组的结果则与过表达组相反.结论 在肺腺癌细胞中,TGF-β1阳性表达诱导的自噬和EMT可能与其增强肺腺癌细胞侵袭迁移能力相关.
作者：柳惠斌；郭骏；蒲艳；张萌萌；宋建忠；王强 刊期： 2018年第04期
前梯度蛋白2 (AGR2)属于蛋白二硫键异构酶家族[1],自1998年被发现以来,大量研究结果显示其在乳腺癌、胰腺癌、胃癌等肿瘤中呈高表达,并且通过调控细胞周期相关蛋白的折叠、成熟和分泌过程,在恶性肿瘤的生长过程中扮演重要的角色[2].本研究旨在观察AGR2与血管内皮生长因子C(VEGF-C)在前列腺癌组织中的表达,探讨其与临床资料的关系.
作者：时景伟；陈欢；崔蕊；张华；高锋；孔庆阔；晋学飞 刊期： 2018年第04期
目的 以转移性前列腺癌患者为研究对象,探讨基于循环肿瘤细胞(CTCs)的前列腺癌相关基因标志物,用于转移性前列腺癌的诊断.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对人前列腺癌细胞(LNCap)中人激肽释放酶相关酶2(KLK2)、人激肽释放酶相关酶3(KLK3)、叉头框蛋白A1(FOXA1)、粒状头样转录因子2(GRHL2)及同源盒B13 (HOXB13)5个基因的表达进行检测,建立多基因表达的联合检测的方法.采集30例转移性前列腺癌患者和20例健康志愿者的血液样本,利用血液样本和前列腺癌细胞对检测方法的一致性、重复性、线性和灵敏度方面进行了评估.通过比较患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果,确定前列腺癌相关标志基因表达水平对于患者预后的意义.结果 该联合检测方法中各基因表达水平与单基因表达水平具有一致性;5个基因表达量在LNCap RNA不同稀释浓度(1 pg～1 μg)的对数范围内呈现较明显的线性关系:KLK2(0.995)、KLK3 (1.000)、FOXA1 (0.992)、GRHL2 (0.999)、HOXB13 (1.000);各基因检测浓度范围分别是KLK2(5 pg ～1 μg)、KLK3(1 pg～1 μg)、FOXA1(10 pg ～1 μg)、GRHL2(100 pg～1 μg)、HOXB13(100 pg ～1 μg);患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果对比显示两者具有相关性,即CTCs计数越高的患者,其基因表达阳性率也越高.结论 KLK2、KLK3、FOXA1、GRHL2及HOXB13 5个基因表达水平的联合检测方法具有操作更简单便捷的技术优势和较好的准确性和灵敏度.
作者：张靖；宁松毅；何明芳；谢婧婧；胡建鹏；崔飞伦 刊期： 2018年第04期
目的 观察单因素抑制Hes1基因的表达对人神经干细胞诱导分化为γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化率的影响.方法 对人神经干细胞进行原代培养,传代(神经干细胞5～7d传代1次).取传至第2代的神经干细胞进行神经元巢蛋白免疫荧光鉴定,证明其为神经干细胞后进行GABA能神经元的诱导分化.采用完全随机分组原则将第二代神经干细胞分为对照组和实验组.对照组为含胎牛血清的普通诱导分化液,实验组除加入抑制Hes1基因的寡核苷酸链外,其余成分同对照组相同.待诱导分化结束后分别对实验组及对照组进行GABA能神经元免疫荧光染色鉴定.结果 诱导分化后第6天,约半数以上细胞开始分化并出现汇聚现象,重新消化接种,第14天镜下可见90％ ～ 95％细胞已贴壁完成分化.进行GABA能神经元免疫荧光染色鉴定,随机选取10个视野,实验组每个视野下在100个细胞中可见55 ～ 70个GABA阳性细胞,分化率可达(64.0±0.6)％,而对照组在同样情况下仅可见15 ～ 20个GABA阳性细胞,分化率仅为(16.6±0.6)％,两者比较差异有统计学意义.结论 抑制Hes1基因的表达可以显著提高入神经干细胞诱导分化为GABA能神经元的分化率.
作者：王伟；赵全军；刘爽；崔绍杰；史铁钧；王涛；王培新 刊期： 2018年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
