王生淋；余凤强；林建华
目的 应用改良“枕大池二次注血法”建立稳定、可靠的蛛网膜下腔出血(SAH)模型,并评估其脑血管痉挛程度.方法 在“枕大池二次注血法”的基础上进行改良:(1)利用立体定向仪在三维空间定位和角度调节,更加准确地穿刺枕大池的部位.(2)应用微量注射泵以恒量、恒速注射自体血,减少手工注射时对脑于的损伤.采用随机数字法将SD大鼠分为:假手术组、对照组、SAH组,每组各25只.SAH组采用改良“枕大池二次注血法”建立蛛网膜下腔出血模型,对照组用等量的生理盐水,假手术组仅仅暴露寰枕筋膜.观察该模型的成功率和失败率、神经功能、脑组织含水量、基底动脉改变、局部脑血流量(rCBF)变化.结果 与假手术组比较,SAH组大鼠造模第1天时神经功能受损严重,差异有统计学意义[(9.2±0.7)分比(1.0±0.6)分,P=0.001];与假手术组、对照组比较,SAH组第1天时大鼠脑组织含水量显著增多,差异有统计学意义[(79.98±0.11)％比(78.29±0.12)％、(78.39±0.13)％,P=0.001].光镜下苏木素-伊红(HE)染色结果显示:与假手术组比较,SAH组第5天时大鼠基底动脉管腔内径和管腔面积明显缩小,差异有统计学意义[(325.200±15.156) μm比(461.000±22.705) μm,P=0.000;(80 739.200±7 297.735) μm2比(167 124.200 ±7 067.155) μm2,P=0.000].激光散斑结果显示:SAH组大鼠第5天时的rCBF明显低于假手术组和对照组,差异有统计学意义[(56.0±3.5)％比(97.2±1.7)％、(95.8±3.5)％,P=0.001].结论 应用改良“枕大池二次注血法”可以建立稳定、可靠的SAH模型.
作者：周帅；殷冬培；徐新；高伟伟；李飞；王计伟；孙东东；王毅；张建宁 刊期： 2018年第04期
我们构建靶向长链非编码RNA (lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)基因的短发卡RNA (shRNA)载体,观察其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响.一、材料与方法1.shRNA载体构建及转染:pRNAT-U6.1(美国GenScript公司)和shRNA模板双酶切后定向连接后测序鉴定.胃癌细胞转染按照转染试剂盒(美国Invitrogen公司)说明书进行.2.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测:提取总RNA,检测CCAT2及POU5 F1B基因的表达情况.3.噻唑蓝(MTT)法检测:细胞存活率检测按照MTr细胞增殖检测试剂盒(碧云天公司,南通)说明书进行.
作者：余招焱；袁平；朱昕；张忠民；丁杰 刊期： 2018年第04期
目的 探讨纳米磁性药物载体2,2'-联吡啶(2,2'-dipyridyl)磁性白蛋白纳米粒(MNA-DPD)的制备工艺并分析其物理性能.方法 应用化学反应制备纳米级的磁流体(Fe3O4),用热处理法将人血浆蛋白质和2,2'-联吡啶分散在磁流体中,在高速超声搅拌下加热,使蛋白质稳定,得到蛋白质包覆的生物相容性MNA-DPD.进一步分析MNA-DPD磁响应性、磁特性、靶向性和分散性.结果 成功制备稳定的纳米级的MNA-DPD,其平均粒径(D)=131.3 nm.物理性能分析结果显示,制备出的MNA-DPD具有良好的磁响应性、磁特性、靶向性、分散性.结论 用热处理法可以制备纳米级、具有良好磁响应性、磁特性、靶向性、分散性的MNA-DPD.
作者：桂铮；于耀宇；汪子文；卢学刚；郭栋；朱明；李臻；水少峰；韩新巍 刊期： 2018年第04期
目的 筛选早期甲状腺乳头状癌(PTC)特征性微小RNA(miRNAs,miR)表达谱,旨在寻找一种无创早期诊断PTC标志物.方法 采用基于实时荧光定量聚合酶反应(PCR)的miRNA芯片分析10例早期PTC特征性miRNAs表达谱,采用10例甲状腺结节组织作对照鉴定和验证PTC特征性标记;同时在100例早期PTC患者术前和术后7d外周血、100例甲状腺结节患者外周血、以及100例健康人外周血标本中进行验证分析.结果 与癌旁正常组织比较,早期甲状腺乳头状癌组织中有20种miRNAs表达存在差异,其中11种miRNAs(hsa-miR-21-5p、hsa-miR-31-5p、miR-34a等)上调、9种miRNAs(hsa-miR-15a-Sp、hsa-miR-16-5p 、hsa-miR-26a-5p等)下调;hsa-miR-181 b-5p在良性甲状腺结节标本中表达上调.hsa-miR-21-5p、hsa-miR-146a-5 p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-181b 6种miRNAs在PTC患者术前血清中的表达显著高于健康对照组(六者在PTC组和健康对照组表达中位数分别为:hsa-miR-21-5p(8.25比3.38)、hsa-miR-146a-5p(13.63比3.42)、hsa-miR-155-5p(10.83比3.49)、hsa-miR-221-3p(18.63比3.82)、hsa-miR-222-3p(22.74比3.92)、hsa-miR-181b(9.52比3.43),均P=0.000.术后7d血清hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-221-3 p、hsa-miR-222-3p水平均显著下调(均P=0.000).结论 筛选出hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p 3种miRNAs分子组合作为早期PTC外周血循环miRNAs指纹图谱,有助于PTC早期诊断.
作者：魏丽君；马小琴；凌志强 刊期： 2018年第04期
目的 以转移性前列腺癌患者为研究对象,探讨基于循环肿瘤细胞(CTCs)的前列腺癌相关基因标志物,用于转移性前列腺癌的诊断.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对人前列腺癌细胞(LNCap)中人激肽释放酶相关酶2(KLK2)、人激肽释放酶相关酶3(KLK3)、叉头框蛋白A1(FOXA1)、粒状头样转录因子2(GRHL2)及同源盒B13 (HOXB13)5个基因的表达进行检测,建立多基因表达的联合检测的方法.采集30例转移性前列腺癌患者和20例健康志愿者的血液样本,利用血液样本和前列腺癌细胞对检测方法的一致性、重复性、线性和灵敏度方面进行了评估.通过比较患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果,确定前列腺癌相关标志基因表达水平对于患者预后的意义.结果 该联合检测方法中各基因表达水平与单基因表达水平具有一致性;5个基因表达量在LNCap RNA不同稀释浓度(1 pg～1 μg)的对数范围内呈现较明显的线性关系:KLK2(0.995)、KLK3 (1.000)、FOXA1 (0.992)、GRHL2 (0.999)、HOXB13 (1.000);各基因检测浓度范围分别是KLK2(5 pg ～1 μg)、KLK3(1 pg～1 μg)、FOXA1(10 pg ～1 μg)、GRHL2(100 pg～1 μg)、HOXB13(100 pg ～1 μg);患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果对比显示两者具有相关性,即CTCs计数越高的患者,其基因表达阳性率也越高.结论 KLK2、KLK3、FOXA1、GRHL2及HOXB13 5个基因表达水平的联合检测方法具有操作更简单便捷的技术优势和较好的准确性和灵敏度.
作者：张靖；宁松毅；何明芳；谢婧婧；胡建鹏；崔飞伦 刊期： 2018年第04期
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-214在前列腺癌中的表达及其生物学功能.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测36例前列腺癌患者癌组织和癌旁组织中miR-214的表达.在人前列腺癌细胞株DU145中转染miR-214模拟物miR-214 mimic,阴性对照miR-214-nc.采用噻唑蓝(MTT)法检测过表达miR-214后DU145细胞的增殖能力,采用小室(Transwell)实验检测细胞的侵袭能力.结果 miR-214在36例前列腺癌患者癌组织与癌旁组织中的相对表达量分别为0.85±0.84和1.75±0.93,癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织且差异有统计学意义(P=0.001);MTT实验显示miR-214 mimic组、miR-214nc组及对照组前列腺癌细胞DU145培养72 h后,细胞计数分别为(5.40±0.32)、(8.15±0.33)、(8.65±0.41)个,miR-214 mimic显著低于其他两组,且差异有统计学意义(P=0.001),提示上调DU145细胞miR-214表达后,细胞增殖能力明显降低;Tranwell实验显示,miR-214 mimic组、miR-214nc组及对照组细胞的穿膜细胞数分别为(23.45±2.80)、(25.22±3.11)、(24.31±4.20)个,3组穿过基底膜的细胞克隆数差异无统计学意义(P =0.722).结果提示上调DU145细胞miR-214表达后,其迁移侵袭能力无明显变化.结论 miR-214可能参与了前列腺癌的发生发展并与其细胞增殖能力有关.
作者：刘骞；朱朝阳；李晓东；李扬；田鑫；张广伟 刊期： 2018年第04期
目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)联合顺铂对荷PC-9肺癌小鼠肿瘤生长的影响.方法 将60只荷PC-9肺癌肿瘤的裸鼠随机分为对照组、TRAIL组、顺铂组和联合治疗组,每组15只,TRAIL组经腹腔注射TRAIL 10 mg/kg,顺铂组经腹腔注射顺铂1.5 mg/kg,联合治疗组经腹腔分别注射TRAIL 10 mg/kg和顺铂1.5 mg/kg,对照组经腹腔注射等体积的生理盐水.所有小鼠每隔1d给药1次,连续治疗30d,测定每组小鼠肿瘤的生长情况和体重的变化.并采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色法分析4组小鼠肿瘤组织中细胞的凋亡水平.采用Western blot分析4组小鼠肿瘤组织细胞中p53、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3等凋亡相关蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤生长受到显著抑制(P=0.030、0.026、0.009),而联合治疗组小鼠肿瘤生长速度明显缓于TRAIL组和顺铂组(P=0.036、0.018).与对照组比较,顺铂组和联合治疗组小鼠体重明显下降(P=0.030、0.038),而TRAIL组小鼠体重变化差异无统计学意义(P =0.070).与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤组织中细胞凋亡比例明显增加(P=0.023、0.034、0.027).与顺铂组比较,TRAIL组和联合治疗组小鼠肿瘤组织细胞凋亡比例明显增加(P =0.028、0.013).Western blot结果显示与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组p53和Caspase-3表达水平明显增加,而联合治疗组增加水平更加显著(P=0.018).结论 TRAIL联合顺铂能显著抑制荷PC-9小鼠肿瘤的生长,这一现象是通过促进肿瘤细胞凋亡相关基因表达,进而促进肿瘤细胞凋亡来实现的.
作者：张春敭；齐宇；吴恺；张岩；赵松 刊期： 2018年第04期
目的 检测胃癌及癌旁组织中M2型丙酮酸激酶(PKM2)和张力蛋白同源物基因(PTEN)的差异表达,探讨PKM2表达水平及PTEN表达水平与胃癌临床病理特征之间的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测88例胃癌组织和癌旁组织中PKM2和PTEN表达,结合相关临床资料进行分析.结果 PKM2在胃癌组织的阳性表达率为71.59％ (63/88),明显高于癌旁组织阳性表达率[30.68％ (27/88)],两者比较差异有统计学意义(t=29.470,P=0.000),PKM2表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=4.130,P=0.040;t=5.840,P=0.020);PTEN在胃癌组织的阳性表达率为39.77％(35/88),明显低于胃癌癌旁组织阳性表达率[92.05％(81/88)],两者差异有统计学意义(t=53.510,P=0.000),PTEN表达水平与胃癌TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=5.550,P=0.020;t =4.330,P=0.040;t =5.840,P=0.020).结论 PKM2和PTEN的表达水平可能与胃癌的发生、发展及淋巴结转移明显相关.
作者：黄哲；蔡朋株；林琳；徐飞鹏；许庆文 刊期： 2018年第04期
目的 观察单因素抑制Hes1基因的表达对人神经干细胞诱导分化为γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化率的影响.方法 对人神经干细胞进行原代培养,传代(神经干细胞5～7d传代1次).取传至第2代的神经干细胞进行神经元巢蛋白免疫荧光鉴定,证明其为神经干细胞后进行GABA能神经元的诱导分化.采用完全随机分组原则将第二代神经干细胞分为对照组和实验组.对照组为含胎牛血清的普通诱导分化液,实验组除加入抑制Hes1基因的寡核苷酸链外,其余成分同对照组相同.待诱导分化结束后分别对实验组及对照组进行GABA能神经元免疫荧光染色鉴定.结果 诱导分化后第6天,约半数以上细胞开始分化并出现汇聚现象,重新消化接种,第14天镜下可见90％ ～ 95％细胞已贴壁完成分化.进行GABA能神经元免疫荧光染色鉴定,随机选取10个视野,实验组每个视野下在100个细胞中可见55 ～ 70个GABA阳性细胞,分化率可达(64.0±0.6)％,而对照组在同样情况下仅可见15 ～ 20个GABA阳性细胞,分化率仅为(16.6±0.6)％,两者比较差异有统计学意义.结论 抑制Hes1基因的表达可以显著提高入神经干细胞诱导分化为GABA能神经元的分化率.
作者：王伟；赵全军；刘爽；崔绍杰；史铁钧；王涛；王培新 刊期： 2018年第04期
目的 观察Notch3通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路介导基质金属蛋白酶(MMP)-2/MMP-9对肝癌侵袭转移的影响.方法 应用实时荧光定量聚合酶连反应(FQ-PCR)方法检测30例肝癌及癌旁组织中Notch3基因的表达.免疫组织化学检测Notch3蛋白在组织样本中的表达.培养肝癌QGY7701细胞,传代细胞培养,并分为3组:空白对照组(Control组)、脂质体转染组(si-NC组)和小干扰RNA (siRNA)-Notch3转染组(si-N3组).细胞划痕及Transwell小室研究各组细胞侵袭转移能力.Western blot检测Notch3、β-catenin和MMP-2、MMP-9蛋白的表达.结果 Notch3基因在肝癌组织中明显高表达,差异有统计学意义(P=0.006);免疫组织化学实验结果示Notch3蛋白在肝癌组织中呈阳性表达;细胞划痕实验示:在不同时间点,si-N3组迁移细胞数较Control组和si-NC组均较少,细胞迁移能力被抑制;Transwell细胞侵袭实验显示:si-N3组侵袭细胞数明显少于Control组和si-NC组[(75±8)个比(125 ±11)个比(118±10)个,P=0.001、0.002];Western blot检测发现下调Notch3后,β-catenin的表达增加,MMP-2、MMP-9的表达减弱.结论 Notch3在肝癌中被激活,Notch3可通过Wnt/β-catenin通路介导MMP-2/MMP-9,促进肝癌细胞侵袭和转移.
作者：杨永光；鲁才杰；刘丽娟；贺翊峰；张剑；林满洲；李明意 刊期： 2018年第04期
随着骨科手术中金属植入物使用的增多,术后伴有金属植入物的CT检查也逐渐增多,而CT扫描会产生严重的伪影,干扰临床诊疗.为了解决这一问题,近年来大量研究分别从工程学和医学角度提出不同的方法和理论来减少金属伪影.工程学方面主要包括改变CT机的型号与性能,如应用双能CT (DECT)、锥状束CT(CBCT)等代替传统的螺旋CT.医学方面主要有改变CT电子管电压、扫描范围(FOV)、扫描层厚等参数,应用CT后处理软件与算法(如O-MAR技术)等.本综述将从以上两个大的角度,详细阐述近年来国内外在CT金属去伪影方面相关研究的进展,并据此为骨科金属植入物CT去伪影扫描方法提供参考.
作者：张客松；韩青；单悦展；邹运；陈炳鹏；王金成 刊期： 2018年第04期
目的 探讨红景天苷对人骨肉瘤143B细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM,含10％血清及1％双抗)培养骨肉瘤143B细胞,实验分组为对照组、30、60 μmol/L红景天苷处理组.噻唑蓝(MTT)实验检测各组24、36、72 h的细胞增殖活性;处理24 h后,采用Transwell法检测3组细胞的侵袭能力;处理24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,计算细胞迁移率.3组细胞在处理24 h后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的mRNA相对表达水平变化,Western blot实验检测各组细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平.透射电镜检测处理24 h后的细胞自噬体.结果 处理24 h后,60 μmol/L组(0.038±0.002)和30μmol/L组(0.054 ±0.002)143B细胞吸光度值低于对照组(0.074±0.004,t2.659,P=0.016;t=1.993,P=0.039).处理48、72 h后,与对照组比较,浓度为30、60 μmol/L的红景天苷组143B细胞吸光度值同样分别低于对照组,呈剂量依赖和时间依赖性.60 μmol/L[(48.7±8.2)个]和30 μmol/L[(76.8±12.8)个]红景天苷组143B细胞跨膜数目分别少于对照组[(94.5±11.9)个,t=8.056,P=0.000;t=2.472,P=0.038].60 μmol/L[(52.9±6.8)％]和30 μmol/L[(82.6±3.7)％]红景天苷组143B细胞迁移率分别低于对照组[(98.7±0.3)％,t=12.576,P=0.000;t2 =9.794,P=0.000].60 μmol/L和30 μmol/L红景天苷处理组MMP-2、MMP-9的蛋白和mRNA相对表达量分别低于对照组.60 μmol/L红景天苷实验组自噬体形成数目[(2.6±0.5)个]多于对照组[(1.3±0.4)个,t=3.517,P=0.025].结论 红景天苷抑制了骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与诱导自噬及抑制MMP家族蛋白表达相关.
作者：赵迎春；陶海；郭卫春 刊期： 2018年第04期
目的 探讨转录延伸样因子7(TCEAL7)对低分化人胃癌细胞株BGC823侵袭、迁移的影响及其机制.方法 应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测TCELA7 mRNA和蛋白在BGC823和正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达;构建TCEAL7真核表达载体GFP-TCEAL7并转染BGC823细胞48 h,检测转染效果;噻唑蓝(MTT)法检测GFP-TCEAL7转染对BGC823细胞活性的影响;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞侵袭、迁移;应用Real-time PCR和Western blot法检测转染GFP-TCEAL7转染对BGC823细胞侵袭、迁移基因表达水平的影响.结果 Real-time PCR和Western blot法显示,BGC823的TCEAL7表达(mRNA:0.280±0.048,蛋白:0.181±0.038)明显低于GES-1(mRNA:0.474±0.062,蛋白:0.346±0.057;t=-6.061,P=0.000;t=-5.900,P=0.000).GFP-TCEAL7转染后胃癌BGC823细胞TCEAL7的mRNA及蛋白表达(1.886±0.326、1.007±0.262)比对照组(0.302±0.053、0.172±0.030)显著上调(t=11.748,P =0.000:t=7.756,P=0.000).MTT结果显示,转染了GFP-TCEAL7的BGC823细胞活性(0.672±0.083)比对照组(1.242±0.215)显著减弱(t=-6.058,P =0.000).划痕实验、Transwell小室实验显示转染了GFP-TCEAL7的BGC823细胞迁移能力[转染组(53.945 ±9.952)％,对照组(81.017±7.208)％]和侵袭能力(转染组76.333±12.420,对照组121.167±11.771)均明显降低(t=-5.396,P =0.000;t=-6.418,P=0.000).Real-time PCR和Western blot法显示转染GFP-TCEAL7的BGC823细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7 、MMP-9的mRNA和蛋白表达水平下降,组织基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP1)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达明显增高.结论 过表达TCEAL7可抑制BGC823细胞的侵袭、迁移.
作者：梁巍；耿玮；范亚男；叶智斌；高明；张立晓 刊期： 2018年第04期
目的 检测儿童类风湿关节炎亚型(S-JIA、JIA少关节型)外周血Nod样受体家族包含pyrin结构域蛋白-3(NLRP-3)mRNA基因表达差异,探讨NLRP-3 mRNA表达水平差异与患儿临床表现特征的相关性.方法 收集28例初治类风湿关节炎(S-JIA13例,JIA少关节型15例)住院患儿及20例同期正常体检患儿的外周血标本,提取标本总RNA,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测外周血标本中NLRP-3 mRNA表达的差异.结果 在外周血中NLRP-3 mRNA在S-JIA组的相对表达量为0.0667 ±0.0044,高于JIA少关节型组(0.0107±0.001 5)及正常对照组(0.021 3 ±0.003 2),差异有统计学意义(F=5.491,P=0.010);正常对照组与JIA少关节型组之间比较时,差异无统计学意义(F=1.745,P=0.105).结论 NLRP-3 mRNA水平升高,是导致S-JIA产生炎性反应的重要影响因素之一.
作者：向明丽；刘秋亮；刘玉峰；张素琴；丁婧 刊期： 2018年第04期
目的 采用浓度梯度法诱导建立顺铂(DDP)及吉西他滨(GEM)多药耐药膀胱癌细胞株(T24/DDP&GEM),并分析其生物学特征.方法 利用人膀胱癌细胞株T24,采用DDP和GEM作为诱导剂在体外建立DDP及GEM多药耐药的人膀胱癌细胞模型T24/DDP&GEM.通过倒置相差显微镜下观察T24、T24/DDP&GEM细胞形态差异,细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测相关细胞的耐药性,生长曲线检测相关膀胱癌细胞的增殖能力,Western blot检测P-糖蛋白(P-gP)的表达.结果 经过DDP和GEM 12个月的交替的诱导,成功建立了T24/DDP&GEM.倒置相差显微镜下观察并与T24细胞比较,T24DDP/GEM形态不规则,体积变大,细胞内可见空泡和颗粒形成.T24/DDP&GEM的增殖能力与T24比较显著下降,T24/DDP&GEM的倍增时间为(39.51 ±0.36)h,T24的倍增时间为(28.06±0.76)h,倍增时间延长(11.45 ±0.41)h.T24/DDP&GEM的耐药性明显提高,其耐药指数对于DDP为4.25,对于GEM为62.97.与T24细胞比较,T24/DDP&GEM细胞的S和G2期的细胞比例显著减少,而G1期细胞比例显著增多,细胞周期减慢.Western blot结果显示,T24/DDP&GEM细胞中P-gp的表达水平明显高于T24.结论 人工诱导的DDP及GEM耐药膀胱癌细胞株T24/DDP&GEM具有多药耐药肿瘤细胞特征.
作者：王鹏；陈明坤；陈子坚；郭晓彬；杨诚；卞军；周其赵；郭文彬；薛康颐；张万松；杨建昆；刘存东 刊期： 2018年第04期
前梯度蛋白2 (AGR2)属于蛋白二硫键异构酶家族[1],自1998年被发现以来,大量研究结果显示其在乳腺癌、胰腺癌、胃癌等肿瘤中呈高表达,并且通过调控细胞周期相关蛋白的折叠、成熟和分泌过程,在恶性肿瘤的生长过程中扮演重要的角色[2].本研究旨在观察AGR2与血管内皮生长因子C(VEGF-C)在前列腺癌组织中的表达,探讨其与临床资料的关系.
作者：时景伟；陈欢；崔蕊；张华；高锋；孔庆阔；晋学飞 刊期： 2018年第04期
目的 观察小干扰RNA(siRNA)特异性沉默人胃癌BGC-823细胞中缺氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β)后葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨HIFs对胃癌细胞内GLUT1 、PKM2及VEGF的调控差异.方法 用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot法检测转染HIFs及Control小干扰RNA(siRNA)后细胞内GLUT1 、PKM2及VEGF的表达.结果 RNA干扰技术沉默HIF-1α后其mRNA、蛋白表达量分别为0.372 ±0.097、0.351 ±0.041,均低于空载体组(0.980 ±0.115、0.520 ±0.030)及空白对照组(1.000 ±0.000、0.478 ±0.062),差异均有统计学意义(F=50.358,P=0.000;F=10.931,P =0.010);RNA干扰技术沉默HIF-2α后其mRNA、蛋白表达量分别为0.391 ±0.091、0.293±0.031,均低于空载体组(1.037±0.090、0.427±0.026)及空白对照组(1.000±0.000、0.430±0.056),差异均有统计学意义(F=72.416,P =0.000;F =9.016,P =0.016);RNA干扰技术沉默HIF-1β后其mRNA、蛋白表达量分别为0.383 ±0.091、0.323 ±0.038,均低于空载体组(0.987 ±0.100、0.445 ±0.059)及空白对照组(1.000 ±0.000、0.457 ±0.040),差异均有统计学意义(F =78.273,P =0.000;F =7.636,P =0.022).转染HIFs(HIF-1α 、HIF-1β 、HIF-2α) siRNA后VEGF及GLUT1在mRNA(分别为0.721 ±0.067、0.833 ±0.059、0.493 ±0.067;0.711 ±0.057、0.826±0.054、0.793±0.068)及蛋白(分别为0.263±0.072、0.303±0.042、0.198±0.057;0.391±0.049、0.451 ±0.054、0.473±0.086),表达水平较空载组(mRNA:1.046±0.094、1.039±0.092;蛋白:0.391 ±0.064、0.690 ±0.066)及对照组(mRNA:1.000±0.000、1.000±0.000;蛋白:0.438±0.055、0.707±0.040)下降,差异均有统计学意义(VEGF mRNA:F=35.232,P=0.000;GLUT1 mRNA:F=15.364,P =0.000;VEGF蛋白:F=8.150,P=0.003,GLUT1蛋白:F=17.109,P=0.000),其中转染HIF-2α后VEGF表达下调明显,转染HIF-1α后GLUT1表达下调明显.转染HIF-1α后PKM2在mRNA(0.611±0.036)及蛋白(0.351 ±0.047)表达水平较空载体组(1.037±0.197、0.731±0.057)及对照组(1.000 ±0.000、0.737 ±0.043)均下降,差异均有统计学意义(F=12.480,P=0.007;F=60.403,P=0.000).转染HIF-2α后PKM2 mRNA (0.793±0.067)表达下降,差异均有统计学意义(F=12.480,P =0.007),蛋白无明显变化(0.675 ±0.030,F=1.211,P=0.373);而转染HIF-1β(mRNA:0.980 ±0.115,蛋白:0.641 ±0.076)后PKM2无明显下降(F=0.144,P =0.869;F=2.404,P =0.171).结论 研究结果提示HIF-1α、HIF-2α和HIF-1β均参与调控GLUT1、及VEGF的表达,HIF-1α参与调控PKM2,HIF-2α在转录水平可能调控PKM2的表达.
作者：曲颜丽；王海峰；唐勇 刊期： 2018年第04期
目的 观察RNA干扰下调泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因对人胃癌SGC-7901细胞生长、凋亡、侵袭转移和周期分布变化的影响.方法 合成针对UHRF1基因的小干扰RNA(siRNA)片段,转染至胃癌细胞株SGC-7901;实验分为3组:转染组(转染特异性siRNA)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)、空白对照组;细胞转染24h后用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)和Western blot检测转染前后UHRF1的mRNA和蛋白的表达水平变化;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Matrigel和Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布.结果 转染后,胃癌细胞株SGC-7901 UHRF1 mRNA的相对表达量为0.22±0.02,低于阴性对照组(P=0.003)和空白对照组(P=0.001),UHRF1蛋白的相对表达量为0.17±0.01,低于阴性对照组(P =0.001)和空白对照组(P=0.000);细胞增殖能力显著降低(P=0.000);转染组细胞和非特异性阴性对照组侵袭细胞数分别为(117.3±4.2)个和(433.3±5.5)个(P=0.000),迁移细胞数分别为(123.0±3.6)个和(377.3±4.7)个(P=0.000),细胞的侵袭迁移能力显著减弱;转染组凋亡率为(16.36±0.84)％较阴性对照组(9.67±0.36)％、空白对照组(8.63±0.10)％明显增加(P=0.002);细胞周期分布改变显著,G0/G1期的细胞明显增多(P=0.010).结论 UHRF1能促进胃癌细胞株SGC-7901增殖,增强其迁移侵袭能力,抑制细胞凋亡.
作者：屈芫；王天明；严枫 刊期： 2018年第04期
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823迁移和侵袭的影响及机制.方法 采用Transwell小室将BMSCs与胃癌细胞共培养的方式,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白的表达.结果 与BMSCs(-)组比较,BMSCs(±)组胃癌细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低;在胃癌细胞SGC-7901中,MMP-2、MMP-9、PI3K以及磷酸化Akt(p-Akt)表达量分别为0.92 ±0.06、0.68±0.08、0.58 ±0.03、0.29±0.02,较对照组显著下调(P=0.000、0.012、0.031、0.027);在胃癌细胞BGC-823中,MMP-2、MMP-9、PI3K以及p-Akt表达量分别为0.50±0.05、0.26 ±0.04、0.31 ±0.02、0.13 ±0.03,较对照组均显著下调(P=0.018、0.023、0.029、0.016).结论 BMSCs可能通过阻断PI3 K/Akt信号通路抑制胃癌细胞的迁移及侵袭.
作者：张琳；李良庆；郑建涛 刊期： 2018年第04期
目的 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在铁蓄积环境下培养,观察细胞增殖指标和成骨方向分化的影响.方法 无菌条件下取正常SD 4周龄雌性大鼠股骨髓腔细胞,经分离纯化后传代培养,并经流式细胞仪鉴定成功后,体外扩增后接种,由不同浓度枸櫞酸铁铵(FAC) (50、100、200 μmol/L)及成骨诱导培养基共同培养,以不加FAC为空白对照组,在第4、7、10、14天收集细胞,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR),分别检测成骨细胞分化关键基因:成骨相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)表达;在第14天茜素红染色并半定量检测钙结节形成情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度FAC对BMSCs增殖的影响.结果 随着铁剂浓度的增加,大鼠BMSCs的增殖能力逐渐降低;BMSCs经成骨诱导14 d后,在铁剂影响下,形成的钙结节较空白对照组明显减少,但铁剂干预各组间无明显差异,半定量结果亦显示相同结果(对照组:2.357±0.160、50 μmol/L组:0.308±0.029、100 μmol/L组:0.281±0.031、200 μmol/L组:0.224±0.017,P=0.000);不同浓度的铁剂对BMSCs成骨分化的各个阶段基因都有不同程度的影响.在成骨早期,Runx2的表达在对照组、100 μmol/L和200μmol/L铁剂干预组有明显差异(对照组:1.000±0.229、100 μmol/L组:0.198±0.044、200 μmol/L组:0.149±0.009,P=0.001),且与浓度存在一致相关性;在成骨中期,不同浓度铁剂对ALP的表达都具有明显抑制(对照组:0.980±0.063、50 μmol/L组:0.018±0.001、100 μmol/L组:0.014±0.002、200 μmol/L组:0.008±0.001,P=0.001);在成骨晚期阶段,不同浓度铁剂较对照组对OPN有明显抑制表达作用(对照组:0.999±0.001、50 μmol/L组:0.170 ±0.072、100 umol/L组:0.142±0.008、200 μmol/L组:0.117 ±0.028,P =0.003).结论 铁蓄积培养环境可明显抑制BMSCs的增殖,同时抑制其向成骨细胞方向的分化,且有剂量依赖性.
作者：俞晨；杨帆；李健；陈斌；袁晔；高焱；李勇；费蓓蓓；徐又佳；彭笳宸 刊期： 2018年第04期
中华实验外科杂志
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