曲颜丽；王海峰；唐勇
目的 观察巴戟天寡糖(MOO)对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)的作用.方法 健康雌性SD大鼠100只按随机数字表法随机均分为5组,每组20只:空白对照组、假手术组、IRI组、MOO2.1 g/(kg·d)组、MOO 0.7 g/(kg·d)组.空白对照组仅开腹并分离卵巢,假手术组开腹切除双侧卵巢并开胸暴露心脏,其余3组均按去卵巢心肌IRI模型处理,其中MOO 2.1g/(kg·d)组、MOO 0.7 g/(kg·d)组给予含相应浓度MOO的10 ml/kg药液灌胃.实验结束均称重大鼠及其子宫,并取出心脏组织,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),采用硫代巴比妥酸法检测微量丙二醛(MDA)水平;采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;采用Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化p53(p-p53)蛋白表达.结果 各组SOD、GSH-Px、MDA、TNF-0、IL-1β、IL-6、bcl-2、bax、p-p38、p-p53比较差异均有统计学意义(F=205.773、268.788、57.214、205.395、264.242、221.096、202.681、70.138、132.288、64.817,P均=0.000). MOO2.1 g/(kg·d)组[(152.11±4.53)、(134.34±5.20) U/mg]、MOO 0.7 g/(kg·d)组[(137.96±5.21)、(118.60 ±4.37) U/mg] SOD、GSH-Px水平高于IRI组[(87.40±6.28)、(69.91±5.48) U/mg],而MOO 2.1 g/(kg·d)组[(2.30±0.11) nmol/mg,(79.26±8.32)、(96.76±7.63)、(137.42 ±7.85) ng/g]、MOO 0.7g/(kg·d)组[(2.81±0.15) nmol/mg,(99.87 ±8.84)、(130.86±8.37)、(157.19±12.20) ng/g] MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于IRI组[(4.06±0.65) nmol/mg,(158.46±14.65)、(192.47 ±9.61)、(233.59±14.37) ng/g,P均=0.000].与MOO 2.1 g/(kg·d)组比较,MOO 0.7g/(kg·d)组SOD、GSH-Px水平降低,而MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P均=0.000).MOO 2.1 g/(kg·d)组(1.45±0.15)、MOO 0.7 g/(kg·d)组bcl-2水平(1.03±0.13)高于IRI组(0.60±0.12,P均=0.000);而MOO 2.1 g/(kg·d)组bax、p-p38、p-p53水平[(1.71±0.16)、(4.25±1.07)、(2.99±0.61)]、MOO 0.7g/(kg·d)组(2.05±0.14、5.90±1.46、5.19±1.16)低于IRI组(2.39±0.23、11.79±1.46、6.22±1.35,P均=0.000).MOO 2.1 g/(kg,d)组和MOO0.7g/(kg·d)组SOD、GSH-Px、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、bcl-2、bax、p-p38、p-p53比较差异均有统计学意义(P均=0.000).结论 MOO对去卵巢心肌IRI有保护作用,能够减轻去卵巢心肌IRI中细胞损伤或凋亡,其中p38、p53信号通路发挥重要作用.
作者：王志红；刘海；黄冬梅；邓克红；王武亮；徐臻；袁博；胡滨；王燕 刊期： 2018年第04期
高血压脑出血是神经内外科常见的急重症,死亡率高,严重危害患者的生命安全[1-2].以往研究表明高血压脑出血是一种与年龄相关的疾病,主要发生在中老年患者.然而,近年来高血压脑出血越来越多的出现在青年人中.一、资料与方法1.一般资料:2014年10月至2016年10月期间,吉林大学第一医院神经血管病外科采取行扩大翼点经外侧裂入路治疗青年高血压脑出血的76例患者资料(按照世界卫生组织颁布的青年标准:患者年龄在18～45岁),其中男62例,女14例.
作者：常鹏飞；李明；时敬国；鲁质成；王长坤；綦斌 刊期： 2018年第04期
目的 探讨脂肪非典型钙黏蛋白(FAT1)通过靶向调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)调节缺氧条件下胶质瘤细胞侵袭能力的作用机制.方法 选择我院收治的48例Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤患者的手术病理组织样本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测FAT1和HIF-1α表达水平并分析其相关性.以人胶质瘤细胞U87MG和GOS3作为研究对象,采用FQ-PCR技术检测正常氧气和缺氧条件下FAT1和HIF-1α表达.采用脂质体2000法将FAT1小干扰RNA(siRNA)、HIF-1α siRNA以及对照siRNA转染至U87MG和GOS3细胞株,检测正常氧气和缺氧条件下FAT1和HIF-1α表达,并采用Transwell小室技术检测U87MG和GOS3胶质瘤细胞的侵袭能力.结果 48例Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤患者病理组织FAT1和HIF-1α相对表达水平分别为4.07(0.72,13.42)和0.94(0.29,3.49),Spearman相关分析显示FAT1和HIF-1α相对表达水平明显相关(r=0.835,P=0.000).正常氧气浓度下GOS3细胞株FAT1(0.29±0.03)和HIF-1α(0.34 ±0.09)相对表达水平均显著低于U87MG细胞株的1.08 ±0.15、1.00 ±0.12,差异有统计学意义(t=8.945、7.621,P=0.010、0.002);缺氧条件下,U87MG和GOS3细胞株FAT1和HIF-1α相对表达水平均显著高于正常氧气浓度下(t=17.994、8.920、14.047、4.037,P=0.000、0.001、0.004、0.016);U87MG细胞株缺氧条件下FAT1 (4.38 ±0.28)和HIF-1α(2.76 ±0.32)相对表达水平均显著高于GOS3细胞株的1.69±0.17、0.83±0.19,差异有统计学意义(t=14.224、8.982,P=0.000、0.001).转染FAT1 siRNA后U87MG和GOS3细胞在正常氧气和缺氧条件下FAT1 (0.17 ±0.06、0.16 ±0.03、0.16±0.03、0.18 ±0.03)和HIF-1α(0.18 ±0.03、0.17 ±0.04、0.15 ±0.04、0.21 ±0.02)相对表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(t=7.577、7.793、7.793、7.783、9.285、9.260、9.484、9.042,P=0.002、0.013、0.013、0.014、0.009、0.007、0.007、0.011);转染HIF-1αsiRNA后U87MG和GOS3细胞在正常氧条件下的FAT1 (0.16 ±0.04、0.28 ±0.03)以及正常氧气和缺氧条件下HIF-1α(0.15 ±0.03、0.16 ±0.02、0.15 ±0.03、0.17 ±0.02)相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(t=7.890、6.834、9.624、9.614、9.624、9.500,P=0.012、0.018、0.008、0.009、0.008、0.010);但缺氧条件下的FAT1 (4.27±0.41、2.72 ±0.25)相对表达水平显著高于正常氧,差异均有统计学意义(t=12.649、9.671,P=0.000、0.001).缺氧条件下,转染FAT1 siRNA、转染HIF1αsiRNA的U87MG细胞侵袭细胞数量[(23.2±4.2)、(21.5±3.1)个]显著低于正常氧条件[(57.6±8.1)、(58.7±7.6)个],差异有统计学意义(t=6.530、7.850,P=0.003、0.001).结论 高级别胶质瘤中FAT1和HIF-1α表达具有较强的相关性,缺氧条件下两者高表达,FAT1可通过靶向调控HIF-1α促进胶质瘤细胞侵袭.
作者：蒋广义；孙剑瑞；丁大领；庞长河；刘献志 刊期： 2018年第04期
目的 观察膜联蛋白A11(ANXA11)对人胃癌细胞株SGC7901 5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性影响.方法 检测人胃癌细胞株SCG7901、BGC823的ANXA11表达.将ANXA11-小干扰RNA(siRNA)及阴性对照序列瞬时转染入SGC7901细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染后各组细胞对不同剂量5-Fu(1、10、20、40、80 μg/ml)的药物敏感性改变.应用流式细胞术检测不同处理组凋亡率,应用定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot检测胸腺嘧啶脱氧核苷合成酶(TS)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达的改变.结果 ANXA11 mRNA及蛋白表达量在SGC7901中显著高于BGC823(t=3.212,P=0.033;t=-10.768,P=0.000).转染组(转染ANXA11-siRNA)细胞的半数抑制剂量(IC50)及20％抑制剂量(IC20)值明显低于阴性、空白对照组(F =47.500,P=0.000;F =45.523,P=0.000).转染组、联合组凋亡率较阴性(转染NS-siRNA)、空白对照组(转染LipofectamineTM2000)显著升高(F=117.525,P=0.000),且联合组凋亡率较转染组明显升高(=9.004,P=0.000).转染组及联合组ANXA11蛋白表达较阴性、空白对照组显著降低(F=118.403,P=0.000).转染组及联合组bax的表达上调(F =35.608,P=0.000),而bcl-2、TS的表达降低(F=30.048,P=0.000;F=22.874,P=0.000).结论 抑制ANXA11表达能提高人胃癌细胞株SGC7901对5-Fu的敏感性,可能与抑制TS、bcl-2、上调bax的表达有关.
作者：贾楠；李勇；赵一杰；赵群；范立侨；檀碧波；刘羽 刊期： 2018年第04期
目的 观察不同浓度的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对糖尿病大鼠血糖浓度的影响.方法 取正常SD大鼠的骨髓,分离、纯化培养得到BMSCs,并检测表面分子标志物CD34、CD44、CD45和CD90的表达.建立的糖尿病大鼠模型随机分为对照组、低浓度组、高浓度组以及正常饲养的大鼠为正常组.低浓度组、高浓度组分别注射1×105和5×106个BMSCs,正常组和对照组则注射磷酸盐缓冲液(PBS),分别检测注射后1、2、3周的血糖浓度并进行统计学分析.结果 细胞免疫荧光检测显示CD34(-)、CD44(+)、CD45(-)和CD90(+),证实为BMSCs.静脉注射BMSCs治疗后,低浓度治疗组大鼠血糖浓度在治疗前2周无明显变化,第3周下降16.1％;高浓度治疗组与对照组比较,随着治疗时间推移,大鼠的血糖浓度表现出显著的降低,第3周血糖浓度下降42.0％.正常组和对照组治疗前后血糖浓度无明显变化.结论 静脉移植高浓度(5×106个)的BMSCs,有助于控制并调节糖尿病大鼠的血糖浓度.
作者：邹新华；杜烨；任国强；王知；张静；李炳辉 刊期： 2018年第04期
目的 观察膜联蛋白A9(ANXA9)在人结肠癌细胞株SW620增殖中发挥的作用,并探讨其机制.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测人结肠癌细胞株HT29、SW620、SW480、LoVo、SW1116中ANXA9的表达;应用40 nmol/L的ANXA9-小干扰RNA(siRNA)转染ANXA9表达强的SW620细胞株,抑制内源性ANXA9的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测转染对SW620细胞活性的影响;流式细胞术(FCM)检测转染ANXA9-siRNA对SW620细胞周期的影响;Real-time PCR和Western blot法检测增殖相关基因增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D、Cyclin E、p21、p16的表达.结果 人结肠癌细胞株HT29、SW620、SW480、LoVo、SW1116中ANXA9 mRNA表达强度分别为0.027±0.004、0.041±0.005、0.028±0.003、0.033±0.003、0.025±0.005;ANXA9蛋白表达强度分别为0.287±0.076、1.246±0.103、0.326±0.040、0.387±0.097、0.295±0.064,其中SW620细胞ANXA9的mRNA和蛋白表达强(F=8.212,P=0.003;F=81.728,P=0.000).转染组、阴性对照组、空白组的ANXA9mRNA和蛋白的表达水平分别为0.209±0.016、0.317±0.104,0.957±0.070、0.647±0.155,1.031±0.171、0.727±0.145.转染后转染组的细胞ANXA9的mRNA和蛋白均明显低于对照组及空白组(F=54.072,P=0.000;F=7.601,P=0.023).CCK8结果显示,转染组、阴性对照组、空白组的细胞活性24h分别为0.605±0.024、0.612±0.022、0.628 ±0.027;48 h分别为0.810±0.049、1.196±0.118、1.308±0.070;72 h分别为1.145±0.070、1.531±0.062、1.454±0.081.转染组的细胞活性明显低于对照组及空白组(F =38.742,P=0.000;F=32.56,P=0.000).G0/G1、G2/M、S期的细胞比例在转染组为(66.870±3.850)％、(15.060±2.480)％、(18.080± 1.420)％;阴性对照组为(50.070±3.370)％、(32.520±2.500)％、(17.410±0.920)％;空白组为(48.740±2.170)％、(32.390±1.820)％、(19.210±0.390)％.转染组细胞的G0/G1期比例升高(F=29.752,P=0.001)、G2/M期的比例降低(F=57.860,P=0.000),S期细胞的比例无明显变化(F=1.568,P=0.284).转染组细胞Cyclin D1、Cyclin E1的mRNA和蛋白表达明显降低[mRNA:F=462.821、5.512,P=0.000、0.044;蛋白:F=15.148、8.300,P=0.005、0.019)],而p21的mRNA和蛋白表达明显增高[mRNA:F=6.472,P=0.032;蛋白:F=21.230,P=0.002].结论 ANXA9可能通过Cyclin D1、Cyclin E1、p21表达而参与了结肠癌细胞株SW620的增殖过程.
作者：卞红磊；于溯洋；张盛君；高鑫 刊期： 2018年第04期
目的 以转移性前列腺癌患者为研究对象,探讨基于循环肿瘤细胞(CTCs)的前列腺癌相关基因标志物,用于转移性前列腺癌的诊断.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对人前列腺癌细胞(LNCap)中人激肽释放酶相关酶2(KLK2)、人激肽释放酶相关酶3(KLK3)、叉头框蛋白A1(FOXA1)、粒状头样转录因子2(GRHL2)及同源盒B13 (HOXB13)5个基因的表达进行检测,建立多基因表达的联合检测的方法.采集30例转移性前列腺癌患者和20例健康志愿者的血液样本,利用血液样本和前列腺癌细胞对检测方法的一致性、重复性、线性和灵敏度方面进行了评估.通过比较患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果,确定前列腺癌相关标志基因表达水平对于患者预后的意义.结果 该联合检测方法中各基因表达水平与单基因表达水平具有一致性;5个基因表达量在LNCap RNA不同稀释浓度(1 pg～1 μg)的对数范围内呈现较明显的线性关系:KLK2(0.995)、KLK3 (1.000)、FOXA1 (0.992)、GRHL2 (0.999)、HOXB13 (1.000);各基因检测浓度范围分别是KLK2(5 pg ～1 μg)、KLK3(1 pg～1 μg)、FOXA1(10 pg ～1 μg)、GRHL2(100 pg～1 μg)、HOXB13(100 pg ～1 μg);患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果对比显示两者具有相关性,即CTCs计数越高的患者,其基因表达阳性率也越高.结论 KLK2、KLK3、FOXA1、GRHL2及HOXB13 5个基因表达水平的联合检测方法具有操作更简单便捷的技术优势和较好的准确性和灵敏度.
作者：张靖；宁松毅；何明芳；谢婧婧；胡建鹏；崔飞伦 刊期： 2018年第04期
目的 观察人脐带沃顿胶(WJ)对脑外伤小鼠的神经修复作用.方法 采用小鼠CCI脑外伤模型建立动物模型,将实验小鼠随机分为Veh和WJ移植组.术后3d,干湿称重法检测小鼠损伤侧脑含水量,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-10的表达,碘化丙锭(PI)染色检测损伤附近区域坏死细胞数量;术后28 d,神经功能缺损评分评价小鼠运动功能,新物体识别实验检测小鼠认知功能,糖水偏好实验评价小鼠抑郁状况,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测神经元特异性相关蛋白和神经营养因子表达.结果 (1)WJ移植组小鼠脑含水量[(84.61±1.61)％]与Veh组比较[(11.06±2.24)％]明显降低,差异有统计学意义(t=4.935,P=0.001).(2)小鼠神经功能缺损评分结果显示WJ移植组术后第7、14、21、28天神经功能缺损评分[(11.80±1.30)、(10.60±1.14)、(9.40±1.14)和(8.20±1.30)分]与Veh组比较有统计学意义[(9.80±1.09)、(8.40±1.14)、(7.20±1.09)和(5.80±0.84)分,P =0.000].(3)小鼠新物体识别实验结果显示WJ移植组小鼠新物体辨别率为(65.57±1.543)％,高于Veh组[(50.03±1.704)％],差异有统计学意义(t=6.760,P=0.000).(4)糖水偏嗜实验表明WJ移植组和Veh组比较差异有统计学意义[(63.05±2.10)％和(48.62±1.80)％,t=4.935,P=0.001].(4)WJ移植组抑炎因子IL-10表达量[(659.39±14.40) pg/ml]明显高于Veh组[(554.39±15.54) pg/ml,t=4.957,P=0.008],而促炎因子TNF-α(755.90±16.89) ng/ml明显低于Veh组[(1 081.22±14.81) ng/ml,t=14.480,P=0.000].(5)WJ移植组神经元特异性相关蛋白微管相关蛋白-2(MAP-2)、双皮质蛋白(DCX)和神经营养因子脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达(0.94±0.18、1.38±0.06、1.02±0.02和0.85±0.67)明显高于Veh组(0.41±0.03、0.81±0.04、0.52±0.03和0.23 ±0.03),差异有统计学意义(=2.900,P=0.044;t=8.007,P=0.001;t=13.060,P=0.000;=8.640,P=0.001).(6)对比Veh组[(321.60±17.98)个],WJ移植组的坏死细胞数量显著减少[(179.60±18.95)个],差异有统计学意义(t=5.435,P=0.001).结论 人脐带沃顿胶对脑外伤小鼠有神经修复作用.
作者：程田；刘雯雯；刘宏建；关方霞 刊期： 2018年第04期
目的 观察转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 利用免疫组织化学方法分析SOX2在32例肝癌及其癌旁组织中的表达;在肝癌细胞株SMMC-7721中通过细胞增殖、侵袭等功能实验分析SOX2通过上皮-间充质转化(EMT)促进转移复发的具体机制.结果 在人肝癌组织标本中SOX2较其配对癌旁组织及正常组织表达上调,其在癌组织、癌旁组织及正常肝组织中SOX2的阳性率分别为73.8％、32.5％及12.4％ (P =0.008、0.006).在体外克隆形成实验结果示pWPI-SOX2转染组细胞克隆形成数为(654.9±39.4)个,显著高于对照组(232.7±19.4)个(P=0.000).Transwell小室实验结果显示它能促进肝癌细胞侵袭能力(P =0.003).慢病毒转染的SOX2高表达SMMC-7721肝癌细胞株发生EMT,上皮化表型E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)的表达下调和间质化表型N-钙黏蛋白(N-cadherin)和纤维连接蛋白(Fn)表达上调.结论 SOX2表达与肝癌的发生、发展密切相关,其具体机制可能是通过诱导EMT促进肝癌的转移复发.
作者：薛玉龙；汪传一；韩杰；杨征宇；辛永利 刊期： 2018年第04期
目的 观察单因素抑制Hes1基因的表达对人神经干细胞诱导分化为γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化率的影响.方法 对人神经干细胞进行原代培养,传代(神经干细胞5～7d传代1次).取传至第2代的神经干细胞进行神经元巢蛋白免疫荧光鉴定,证明其为神经干细胞后进行GABA能神经元的诱导分化.采用完全随机分组原则将第二代神经干细胞分为对照组和实验组.对照组为含胎牛血清的普通诱导分化液,实验组除加入抑制Hes1基因的寡核苷酸链外,其余成分同对照组相同.待诱导分化结束后分别对实验组及对照组进行GABA能神经元免疫荧光染色鉴定.结果 诱导分化后第6天,约半数以上细胞开始分化并出现汇聚现象,重新消化接种,第14天镜下可见90％ ～ 95％细胞已贴壁完成分化.进行GABA能神经元免疫荧光染色鉴定,随机选取10个视野,实验组每个视野下在100个细胞中可见55 ～ 70个GABA阳性细胞,分化率可达(64.0±0.6)％,而对照组在同样情况下仅可见15 ～ 20个GABA阳性细胞,分化率仅为(16.6±0.6)％,两者比较差异有统计学意义.结论 抑制Hes1基因的表达可以显著提高入神经干细胞诱导分化为GABA能神经元的分化率.
作者：王伟；赵全军；刘爽；崔绍杰；史铁钧；王涛；王培新 刊期： 2018年第04期
目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)联合顺铂对荷PC-9肺癌小鼠肿瘤生长的影响.方法 将60只荷PC-9肺癌肿瘤的裸鼠随机分为对照组、TRAIL组、顺铂组和联合治疗组,每组15只,TRAIL组经腹腔注射TRAIL 10 mg/kg,顺铂组经腹腔注射顺铂1.5 mg/kg,联合治疗组经腹腔分别注射TRAIL 10 mg/kg和顺铂1.5 mg/kg,对照组经腹腔注射等体积的生理盐水.所有小鼠每隔1d给药1次,连续治疗30d,测定每组小鼠肿瘤的生长情况和体重的变化.并采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色法分析4组小鼠肿瘤组织中细胞的凋亡水平.采用Western blot分析4组小鼠肿瘤组织细胞中p53、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3等凋亡相关蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤生长受到显著抑制(P=0.030、0.026、0.009),而联合治疗组小鼠肿瘤生长速度明显缓于TRAIL组和顺铂组(P=0.036、0.018).与对照组比较,顺铂组和联合治疗组小鼠体重明显下降(P=0.030、0.038),而TRAIL组小鼠体重变化差异无统计学意义(P =0.070).与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤组织中细胞凋亡比例明显增加(P=0.023、0.034、0.027).与顺铂组比较,TRAIL组和联合治疗组小鼠肿瘤组织细胞凋亡比例明显增加(P =0.028、0.013).Western blot结果显示与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组p53和Caspase-3表达水平明显增加,而联合治疗组增加水平更加显著(P=0.018).结论 TRAIL联合顺铂能显著抑制荷PC-9小鼠肿瘤的生长,这一现象是通过促进肿瘤细胞凋亡相关基因表达,进而促进肿瘤细胞凋亡来实现的.
作者：张春敭；齐宇；吴恺；张岩；赵松 刊期： 2018年第04期
目的 探讨干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体(IFIT2)在人胃癌进展中的作用及机制.方法 通过使用RNA干扰(RNAi)技术构建IFIT2稳定下调表达的人胃癌细胞株SGC-7901及AGS,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别在RNA水平和蛋白水平验证两株细胞株LV-IFIT2-短发卡RNA(shRNA)组的IFIT2的表达水平,进一步研究IFIT2在人胃癌细胞株中的生物学功能.结果 Real-time PCR检测结果显示,SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组IFIT2mRNA表达水平均显著低于LV-NC组(SGC-7901:0.426 ±0.140比1.000±0.157,P=0.004;AGS:0.232±0.090比1.000±0.194,P=0.003);蛋白质印迹检测结果显示,SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组的IFH2的蛋白表达水平均显著低于LV-NC组(SGC-7901:0.344 ±0.041比1.000±0.062,P=0.002;AGS:0.091±0.001比1.000±0.106,P=0.000).对稳定转染LV-IFIT2-shRNA及LV-NC的人胃癌细胞系SGC-7901和AGS进行CCK-8增殖实验、划痕实验、Transwell实验和细胞周期测定.在培养的48、72 h shRNA组的吸光度值显著高于LV-NC组,提示下调IFIT2的表达可以显著抑制人胃癌细胞系SGC-7901和AGS的增殖能力(SGC-7901:48 h:0.348±0.031比0.276 ±0.026,P =0.013;72 h:0.523±0.042比0.411±0.027,P =0.004;AGS:48 h:0.454±0.034比0.362±0.038,P=0.011;72 h:0.696±0.053比0.553±0.030,P=0.003);划痕实验显示SGC-7901和AGS细胞IFIT2干扰组的迁移能力明显高于NC组的迁移能力,提示IFIT2表达的降低可明显增强SGC-7901和AGS细胞的迁移能力(SGC-7901:0.640±0.029比0.447±0.056,P=0.006;AGS:0.444±0.036比0.166±0.034,P=0.001);Transwell侵袭实验中,LV-IFIT2-shRNA组的结晶紫染色迁移细胞数明显多于LV-NC组,表明SGC-7901和AGS细胞下调IFIT2表达后的侵袭能力提高(SGC-7901:299.3±45.6比162.3 ±25.9,P=0.011;AGS:404.0±44.5比235.0±30.0,P =0.003);流式细胞术分析细胞周期显示,LV-IFIT2-shRNA组的S期细胞比例高于LV-NC组,提示人胃癌细胞系中IFIT2的敲除可显著影响细胞周期.结论 IFIT2表达降低可促进胃癌进展,并可预测患者的不良预后.
作者：翟文斯；陈陆俊；郑晓；胡文蔚；吴晨；王琦；卢斌峰；蒋敬庭 刊期： 2018年第04期
目的 探讨红景天苷对人骨肉瘤143B细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM,含10％血清及1％双抗)培养骨肉瘤143B细胞,实验分组为对照组、30、60 μmol/L红景天苷处理组.噻唑蓝(MTT)实验检测各组24、36、72 h的细胞增殖活性;处理24 h后,采用Transwell法检测3组细胞的侵袭能力;处理24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,计算细胞迁移率.3组细胞在处理24 h后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的mRNA相对表达水平变化,Western blot实验检测各组细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平.透射电镜检测处理24 h后的细胞自噬体.结果 处理24 h后,60 μmol/L组(0.038±0.002)和30μmol/L组(0.054 ±0.002)143B细胞吸光度值低于对照组(0.074±0.004,t2.659,P=0.016;t=1.993,P=0.039).处理48、72 h后,与对照组比较,浓度为30、60 μmol/L的红景天苷组143B细胞吸光度值同样分别低于对照组,呈剂量依赖和时间依赖性.60 μmol/L[(48.7±8.2)个]和30 μmol/L[(76.8±12.8)个]红景天苷组143B细胞跨膜数目分别少于对照组[(94.5±11.9)个,t=8.056,P=0.000;t=2.472,P=0.038].60 μmol/L[(52.9±6.8)％]和30 μmol/L[(82.6±3.7)％]红景天苷组143B细胞迁移率分别低于对照组[(98.7±0.3)％,t=12.576,P=0.000;t2 =9.794,P=0.000].60 μmol/L和30 μmol/L红景天苷处理组MMP-2、MMP-9的蛋白和mRNA相对表达量分别低于对照组.60 μmol/L红景天苷实验组自噬体形成数目[(2.6±0.5)个]多于对照组[(1.3±0.4)个,t=3.517,P=0.025].结论 红景天苷抑制了骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与诱导自噬及抑制MMP家族蛋白表达相关.
作者：赵迎春；陶海；郭卫春 刊期： 2018年第04期
目的 观察胃癌细胞中缺氧对N-myc下游调节基因4(NDRG4)功能的影响.方法 建立胃癌细胞缺氧模型,Transwell和划痕实验分析缺氧对胃癌细胞转移潜能的作用,同时通过Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析缺氧诱导的NDRG4蛋白表达上调在缺氧促胃癌进展中的潜在功能.另外通过细胞增殖实验、克隆形成实验、Transwell和划痕实验分析常氧下NDRG4过表达对胃癌细胞恶性表型的作用.结果 缺氧诱导24h可明显增强胃癌细胞的转移潜能,BGC-823的侵袭细胞数由常氧下的(48.20±11.76)个上升至(174.20±9.04)个,而MGC-803侵袭细胞数也由常氧下的(28.75 ±2.50)个上升至(229.00±34.22)个,差异均有统计学意义(均P=0.000).划痕实验结果也表明,常氧下BGC-823和MGC-803细胞的划痕愈合率分别为(15.69±0.04)％和(11.90 ±0.04)％,而缺氧诱导后的BGC-823和MGC-803细胞的划痕愈合率分别为(25.00±0.02)％和(32.03±0.04)％,且差异均有统计学意义(P=0.025、0.006).此过程伴随NDRG4蛋白表达水平的上升,NDRG4在缺氧应激下的表达上调或参与了胃癌进展;然而常氧状态下NDRG4过表达却能显著抑制胃癌细胞增殖,降低其克隆形成能力,并能有效抑制其转移.结论 缺氧诱导上调NDRG4或在缺氧促胃癌进展过程中发挥积极作用,不同氧浓度状态下NDRG4功能变化或与缺氧刺激下NDRG4异常积聚及功能性蛋白修饰相关.
作者：洪莲莲；吴盈利；陈香浏；雷兰；凌志强 刊期： 2018年第04期
目的 观察血小板凝血酶蛋白1 (THBS1)表达下调对肺腺癌A549细胞的细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响.方法 采用Western blot法检测肺腺癌细胞株A549、H1299、H358、H1975、PC9、PG49及Calu3中THBS1蛋白的表达水平,脂质体将THBS1小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA分别转染至THBS1蛋白表达水平高的A549细胞,Western blot检验转染THBS1 siRNA组、对照组和未转染组细胞中THBS1蛋白的表达,然后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖,采用流式细胞术分析各组细胞的细胞凋亡及细胞周期分布.结果 不同肺腺癌细胞株中THBS1蛋白的表达水平不同,其中A549细胞(1.120±0.087)表达高(F=358.087,P=0.000).与未转染组A549细胞和对照组比较:转染THBS1 siRNA组中A549细胞中THBS1蛋白表达量(0.053±0.023)显著降低(P =0.000),细胞增殖能力减弱(P=0.000),细胞的凋亡率[转染THBS1siRNA组早期、中晚期及总凋亡率分别为(17.00±1.33)％、(3.70±0.56)％和(20.71±0.78)％升高(F值分别为115.899、14.418和167.329,P值分别为0.000、0.005和0.000],G0/G1期细胞百分比(68.43±2.26)％显著升高(F =46.521,P=0.000),S期细胞百分比(22.33±2.15)％降低(F=16.621,P=0.004),G2/M期细胞百分比(9.23±2.35)％降低(F=9.282,P=0.015),以上差异均有统计学意义.结论 沉默THBS1基因,降低肺腺癌A549细胞中THBS1蛋白表达可以减弱细胞的增殖能力,促进细胞凋亡并抑制细胞周期进程.
作者：高献争；左士宇；王晓慧；刁长英；李晟磊 刊期： 2018年第04期
骨水泥渗漏是经皮椎体成形术(PVP)中常见的并发症[1-2].实验已经证实采用小空腔技术能够降低骨水泥渗漏的发生[2].本研究旨在探讨新型活检钳及小空腔技术在椎体成形术中的临床应用.一、资料与方法1.一般资料:2017年1月至2018年1月,符合本研究纳入标准的椎体压缩性骨折患者46例,其中男19例,女27例,年龄(68.13±8.19)岁.T10 5例,T11 10例,T12 14例,L1 12例,L2 5例.采用随机数字表法进行随机分组:A组(n=23):行传统椎体成形术治疗椎体压缩骨折,B组(n=23):PVP中应用新型活检钳及小空腔技术治疗椎体压缩骨折.上海凯利泰公司生产的PVP部分手术器械.自行研发的新型活检钳:工作长度230 mm、大直径1.8mm、钳头大直径2 mm、齿长5 mm、槽深1.5 mm、张开角度45°.
作者：赵云；齐向北；李旭；高翔；王坤龙 刊期： 2018年第04期
目的 检测儿童类风湿关节炎亚型(S-JIA、JIA少关节型)外周血Nod样受体家族包含pyrin结构域蛋白-3(NLRP-3)mRNA基因表达差异,探讨NLRP-3 mRNA表达水平差异与患儿临床表现特征的相关性.方法 收集28例初治类风湿关节炎(S-JIA13例,JIA少关节型15例)住院患儿及20例同期正常体检患儿的外周血标本,提取标本总RNA,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测外周血标本中NLRP-3 mRNA表达的差异.结果 在外周血中NLRP-3 mRNA在S-JIA组的相对表达量为0.0667 ±0.0044,高于JIA少关节型组(0.0107±0.001 5)及正常对照组(0.021 3 ±0.003 2),差异有统计学意义(F=5.491,P=0.010);正常对照组与JIA少关节型组之间比较时,差异无统计学意义(F=1.745,P=0.105).结论 NLRP-3 mRNA水平升高,是导致S-JIA产生炎性反应的重要影响因素之一.
作者：向明丽；刘秋亮；刘玉峰；张素琴；丁婧 刊期： 2018年第04期
目的 应用改良“枕大池二次注血法”建立稳定、可靠的蛛网膜下腔出血(SAH)模型,并评估其脑血管痉挛程度.方法 在“枕大池二次注血法”的基础上进行改良:(1)利用立体定向仪在三维空间定位和角度调节,更加准确地穿刺枕大池的部位.(2)应用微量注射泵以恒量、恒速注射自体血,减少手工注射时对脑于的损伤.采用随机数字法将SD大鼠分为:假手术组、对照组、SAH组,每组各25只.SAH组采用改良“枕大池二次注血法”建立蛛网膜下腔出血模型,对照组用等量的生理盐水,假手术组仅仅暴露寰枕筋膜.观察该模型的成功率和失败率、神经功能、脑组织含水量、基底动脉改变、局部脑血流量(rCBF)变化.结果 与假手术组比较,SAH组大鼠造模第1天时神经功能受损严重,差异有统计学意义[(9.2±0.7)分比(1.0±0.6)分,P=0.001];与假手术组、对照组比较,SAH组第1天时大鼠脑组织含水量显著增多,差异有统计学意义[(79.98±0.11)％比(78.29±0.12)％、(78.39±0.13)％,P=0.001].光镜下苏木素-伊红(HE)染色结果显示:与假手术组比较,SAH组第5天时大鼠基底动脉管腔内径和管腔面积明显缩小,差异有统计学意义[(325.200±15.156) μm比(461.000±22.705) μm,P=0.000;(80 739.200±7 297.735) μm2比(167 124.200 ±7 067.155) μm2,P=0.000].激光散斑结果显示:SAH组大鼠第5天时的rCBF明显低于假手术组和对照组,差异有统计学意义[(56.0±3.5)％比(97.2±1.7)％、(95.8±3.5)％,P=0.001].结论 应用改良“枕大池二次注血法”可以建立稳定、可靠的SAH模型.
作者：周帅；殷冬培；徐新；高伟伟；李飞；王计伟；孙东东；王毅；张建宁 刊期： 2018年第04期
目的 观察天冬氨酸β羟化酶(ASPH)在调节细胞自噬中的作用.方法 向OUMS-29、HEK-293T细胞转染ASPH质粒,Western blot检测转染后细胞p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的表达;向OUMS-29细胞共转染ASPH、pEGFP-LC3质粒,荧光显微镜下计算绿色荧光蛋白(GFP)-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数的比率.沉默HuCCT1、SSP25细胞ASPH基因,Western blot检测细胞p62、LC3-Ⅱ的表达,并用噻唑蓝(MTT)法检测细胞自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)或二甲双胍(Met)对细胞生长速率的影响.结果 过表达ASPH使OUMS49、HEK-293T细胞内LC3-Ⅱ表达下降44％ (P =0.002,P=0.008),但不改变p62表达量(P =0.060,P=0.798);过表达ASPH使OUMS-29细胞GFP-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数比率由50.84％降至28.31％ (P =0.002);ASPH基因沉默使HuCCT1、SSP25细胞内LC3-Ⅱ表达分别上调87％、133％(P =0.001,P=0.000),但不影响p62表达(P =0.677,P=0.168);细胞自噬诱导剂雷帕霉素或二甲双胍掩盖ASPH沉默对HuCCT1、SSP25细胞生长速率的影响.结论 ASPH通过抑制LC3-Ⅱ生成抑制细胞自噬;ASPH对细胞自噬的调节可能是其参与细胞生长调控的机制之一.
作者：邹婧；何继满 刊期： 2018年第04期
目的 探讨榄香烯对神经母细胞瘤增殖和凋亡的作用.方法 将SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株分为对照组和实验组,实验组中加入不同浓度的榄香烯.应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定榄香烯对SK-N-SH细胞增殖活力的影响,采用流式细胞仪测定榄香烯对SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测榄香烯对SK-N-SH细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9的mRNA表达的影响,并进一步用Caspase活性试剂盒测定Caspase-3和Caspase-9的活性.结果 榄香烯作用24 h后,各浓度点的抑制率为(10.963 ±2.994)％、(50.013±3.641)％、(77.515 ±4.612)％,t=4.220、5.615、8.096,P=0.022、0.000、0.000;榄香烯作用48 h后,各浓度点的抑制率为(14.478±2.270)％、(56.387±3.494)％、(79.531±3.874)％,t=4.229、5.379、7.842,P=0.021、0.000、0.000;榄香烯作用72 h后,各浓度点的抑制率为(24.174±2.920)％、(64.619±3.180)％、(87.375±4.189)％,t=4.759、6.773、15.384,P=0.001、0.000、0.000.榄香烯作用SK-N-SH细胞24 h后显著诱导细胞凋亡,各浓度点的凋亡率为(19.280±2.991)％、(52.493±4.379)％、(82.189 ±3.175)％,t=4.166、6.324、9.703,P=0.048、0.000、0.000.榄香烯作用SK-N-SH细胞后上调其Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达,Caspase-3 mRNA在各浓度点的上调倍数为(2.712 ±0.127)、(3.013 ±0.304)、(3.931 ±0.410),t=4.714、6.079、9.318,P=0.015、0.000、0.000;Caspase-9 mRNA在各浓度点的上调倍数为(1.206±0.136)、(2.331 ±0.412)、(2.824 ±0.410),t =4.874、7.523、10.530,P =0.038、0.010、0.000.并且榄香烯增强Caspase-3和Caspase-9的活性,Caspase-3的活性在各浓度点的上调倍数为(1.517±0.192)、(2.016±0.323)、(2.081 ±0.361),t=5.175、7.107、12.100,P=0.005、0.001、0.000;Caspase-9在各浓度点的上调倍数为(1.672 ±0.331)、(2.100 ±0.276)、(2.328 ±0.361),t=4.605、6.532、15.101,P=0.003、0.011、0.000.结论 榄香烯对神经母细胞瘤的增殖有抑制作用,并且通过激活Caspase-3和Caspase-9诱导其凋亡.
作者：周景儒；赵婉妮；王栋梁；梁剑峰 刊期： 2018年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
