张琳；李良庆；郑建涛
目的 应用改良“枕大池二次注血法”建立稳定、可靠的蛛网膜下腔出血(SAH)模型,并评估其脑血管痉挛程度.方法 在“枕大池二次注血法”的基础上进行改良:(1)利用立体定向仪在三维空间定位和角度调节,更加准确地穿刺枕大池的部位.(2)应用微量注射泵以恒量、恒速注射自体血,减少手工注射时对脑于的损伤.采用随机数字法将SD大鼠分为:假手术组、对照组、SAH组,每组各25只.SAH组采用改良“枕大池二次注血法”建立蛛网膜下腔出血模型,对照组用等量的生理盐水,假手术组仅仅暴露寰枕筋膜.观察该模型的成功率和失败率、神经功能、脑组织含水量、基底动脉改变、局部脑血流量(rCBF)变化.结果 与假手术组比较,SAH组大鼠造模第1天时神经功能受损严重,差异有统计学意义[(9.2±0.7)分比(1.0±0.6)分,P=0.001];与假手术组、对照组比较,SAH组第1天时大鼠脑组织含水量显著增多,差异有统计学意义[(79.98±0.11)％比(78.29±0.12)％、(78.39±0.13)％,P=0.001].光镜下苏木素-伊红(HE)染色结果显示:与假手术组比较,SAH组第5天时大鼠基底动脉管腔内径和管腔面积明显缩小,差异有统计学意义[(325.200±15.156) μm比(461.000±22.705) μm,P=0.000;(80 739.200±7 297.735) μm2比(167 124.200 ±7 067.155) μm2,P=0.000].激光散斑结果显示:SAH组大鼠第5天时的rCBF明显低于假手术组和对照组,差异有统计学意义[(56.0±3.5)％比(97.2±1.7)％、(95.8±3.5)％,P=0.001].结论 应用改良“枕大池二次注血法”可以建立稳定、可靠的SAH模型.
作者：周帅；殷冬培；徐新；高伟伟；李飞；王计伟；孙东东；王毅；张建宁 刊期： 2018年第04期
目的 观察小干扰RNA(siRNA)特异性沉默人胃癌BGC-823细胞中缺氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β)后葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨HIFs对胃癌细胞内GLUT1 、PKM2及VEGF的调控差异.方法 用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot法检测转染HIFs及Control小干扰RNA(siRNA)后细胞内GLUT1 、PKM2及VEGF的表达.结果 RNA干扰技术沉默HIF-1α后其mRNA、蛋白表达量分别为0.372 ±0.097、0.351 ±0.041,均低于空载体组(0.980 ±0.115、0.520 ±0.030)及空白对照组(1.000 ±0.000、0.478 ±0.062),差异均有统计学意义(F=50.358,P=0.000;F=10.931,P =0.010);RNA干扰技术沉默HIF-2α后其mRNA、蛋白表达量分别为0.391 ±0.091、0.293±0.031,均低于空载体组(1.037±0.090、0.427±0.026)及空白对照组(1.000±0.000、0.430±0.056),差异均有统计学意义(F=72.416,P =0.000;F =9.016,P =0.016);RNA干扰技术沉默HIF-1β后其mRNA、蛋白表达量分别为0.383 ±0.091、0.323 ±0.038,均低于空载体组(0.987 ±0.100、0.445 ±0.059)及空白对照组(1.000 ±0.000、0.457 ±0.040),差异均有统计学意义(F =78.273,P =0.000;F =7.636,P =0.022).转染HIFs(HIF-1α 、HIF-1β 、HIF-2α) siRNA后VEGF及GLUT1在mRNA(分别为0.721 ±0.067、0.833 ±0.059、0.493 ±0.067;0.711 ±0.057、0.826±0.054、0.793±0.068)及蛋白(分别为0.263±0.072、0.303±0.042、0.198±0.057;0.391±0.049、0.451 ±0.054、0.473±0.086),表达水平较空载组(mRNA:1.046±0.094、1.039±0.092;蛋白:0.391 ±0.064、0.690 ±0.066)及对照组(mRNA:1.000±0.000、1.000±0.000;蛋白:0.438±0.055、0.707±0.040)下降,差异均有统计学意义(VEGF mRNA:F=35.232,P=0.000;GLUT1 mRNA:F=15.364,P =0.000;VEGF蛋白:F=8.150,P=0.003,GLUT1蛋白:F=17.109,P=0.000),其中转染HIF-2α后VEGF表达下调明显,转染HIF-1α后GLUT1表达下调明显.转染HIF-1α后PKM2在mRNA(0.611±0.036)及蛋白(0.351 ±0.047)表达水平较空载体组(1.037±0.197、0.731±0.057)及对照组(1.000 ±0.000、0.737 ±0.043)均下降,差异均有统计学意义(F=12.480,P=0.007;F=60.403,P=0.000).转染HIF-2α后PKM2 mRNA (0.793±0.067)表达下降,差异均有统计学意义(F=12.480,P =0.007),蛋白无明显变化(0.675 ±0.030,F=1.211,P=0.373);而转染HIF-1β(mRNA:0.980 ±0.115,蛋白:0.641 ±0.076)后PKM2无明显下降(F=0.144,P =0.869;F=2.404,P =0.171).结论 研究结果提示HIF-1α、HIF-2α和HIF-1β均参与调控GLUT1、及VEGF的表达,HIF-1α参与调控PKM2,HIF-2α在转录水平可能调控PKM2的表达.
作者：曲颜丽；王海峰；唐勇 刊期： 2018年第04期
目的 筛选早期甲状腺乳头状癌(PTC)特征性微小RNA(miRNAs,miR)表达谱,旨在寻找一种无创早期诊断PTC标志物.方法 采用基于实时荧光定量聚合酶反应(PCR)的miRNA芯片分析10例早期PTC特征性miRNAs表达谱,采用10例甲状腺结节组织作对照鉴定和验证PTC特征性标记;同时在100例早期PTC患者术前和术后7d外周血、100例甲状腺结节患者外周血、以及100例健康人外周血标本中进行验证分析.结果 与癌旁正常组织比较,早期甲状腺乳头状癌组织中有20种miRNAs表达存在差异,其中11种miRNAs(hsa-miR-21-5p、hsa-miR-31-5p、miR-34a等)上调、9种miRNAs(hsa-miR-15a-Sp、hsa-miR-16-5p 、hsa-miR-26a-5p等)下调;hsa-miR-181 b-5p在良性甲状腺结节标本中表达上调.hsa-miR-21-5p、hsa-miR-146a-5 p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-181b 6种miRNAs在PTC患者术前血清中的表达显著高于健康对照组(六者在PTC组和健康对照组表达中位数分别为:hsa-miR-21-5p(8.25比3.38)、hsa-miR-146a-5p(13.63比3.42)、hsa-miR-155-5p(10.83比3.49)、hsa-miR-221-3p(18.63比3.82)、hsa-miR-222-3p(22.74比3.92)、hsa-miR-181b(9.52比3.43),均P=0.000.术后7d血清hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-221-3 p、hsa-miR-222-3p水平均显著下调(均P=0.000).结论 筛选出hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p 3种miRNAs分子组合作为早期PTC外周血循环miRNAs指纹图谱,有助于PTC早期诊断.
作者：魏丽君；马小琴；凌志强 刊期： 2018年第04期
目的 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在铁蓄积环境下培养,观察细胞增殖指标和成骨方向分化的影响.方法 无菌条件下取正常SD 4周龄雌性大鼠股骨髓腔细胞,经分离纯化后传代培养,并经流式细胞仪鉴定成功后,体外扩增后接种,由不同浓度枸櫞酸铁铵(FAC) (50、100、200 μmol/L)及成骨诱导培养基共同培养,以不加FAC为空白对照组,在第4、7、10、14天收集细胞,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR),分别检测成骨细胞分化关键基因:成骨相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)表达;在第14天茜素红染色并半定量检测钙结节形成情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度FAC对BMSCs增殖的影响.结果 随着铁剂浓度的增加,大鼠BMSCs的增殖能力逐渐降低;BMSCs经成骨诱导14 d后,在铁剂影响下,形成的钙结节较空白对照组明显减少,但铁剂干预各组间无明显差异,半定量结果亦显示相同结果(对照组:2.357±0.160、50 μmol/L组:0.308±0.029、100 μmol/L组:0.281±0.031、200 μmol/L组:0.224±0.017,P=0.000);不同浓度的铁剂对BMSCs成骨分化的各个阶段基因都有不同程度的影响.在成骨早期,Runx2的表达在对照组、100 μmol/L和200μmol/L铁剂干预组有明显差异(对照组:1.000±0.229、100 μmol/L组:0.198±0.044、200 μmol/L组:0.149±0.009,P=0.001),且与浓度存在一致相关性;在成骨中期,不同浓度铁剂对ALP的表达都具有明显抑制(对照组:0.980±0.063、50 μmol/L组:0.018±0.001、100 μmol/L组:0.014±0.002、200 μmol/L组:0.008±0.001,P=0.001);在成骨晚期阶段,不同浓度铁剂较对照组对OPN有明显抑制表达作用(对照组:0.999±0.001、50 μmol/L组:0.170 ±0.072、100 umol/L组:0.142±0.008、200 μmol/L组:0.117 ±0.028,P =0.003).结论 铁蓄积培养环境可明显抑制BMSCs的增殖,同时抑制其向成骨细胞方向的分化,且有剂量依赖性.
作者：俞晨；杨帆；李健；陈斌；袁晔；高焱；李勇；费蓓蓓；徐又佳；彭笳宸 刊期： 2018年第04期
目的 探讨仙龙颗粒对于血清中肝素结合性表皮生长因子(HBEGF)、高尔基磷酸化蛋白2(GOLPH2)分子表达的调控效果及仙龙颗粒的抗癌机制.方法 选择250只SD大鼠予以致癌剂构建肝癌大鼠模型,将其平均分成5组各50只,分别为阳性对照组[静脉注射顺铂(DDP),60 mg/m2]、低剂量组(喂养仙龙颗粒水溶液,1.0 g/ml)、中剂量组(喂养仙龙颗粒水溶液,2.0g/ml)、高剂量组(喂养仙龙颗粒水溶液,6.0 g/ml)、阴性对照组(喂养蒸馏水),另取50只健康SD大鼠作空白组.对各组的大鼠进行肝脏肿瘤切除术,在手术前1周、手术后第6、12、24、36周分别按各组要求给药并每组处死1只SD大鼠作肝脏病理检查,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测剩余生存大鼠血液中的HBEGF、GOLPH2水平,统计HBEGF、GOLPH2阳性表达率.结果 死亡率方面,低剂量组术前1周为4.0％,术后36周为37.0％;中剂量组术前1周为2.0％,术后36周为2.4％;高剂量组术前1周为0.0％,术后36周为14.0％;GOLPH2阳性率,低剂量组术前1周为62.0％,术后36周为22.2％ (x2=9.577,P=0.002);中剂量组术前1周为64.0％,术后36周为7.1％(x2=28.941,P=0.000);高剂量组术前1周为20.0％,术后36周为38.2％(x2=7.092,P=0.008);HBEGF阳性率,低剂量组术前1周为58.0％,术后36周为22.0％(x2=7.666,P=0.006);中剂量组术前1周为62.0％,术后36周为16.7％ (x2=17.525,P=0.000);高剂量组术前1周为56.0％,术后36周为29.4％ (x2 =4.752,P=0.029).不同剂量的仙龙颗粒均能显著降低大鼠的死亡率、血清中HBEGF、GOLPH2的阳性率,但低剂量组、高剂量组的效果不及中剂量组.结论 仙龙颗粒可下调肝癌大鼠血清中HBEGF、GOLPH2的表达,从而抑制癌细胞增殖及促进其凋亡,达到抗癌、延长存活时间的效果.
作者：陈卓；李明晶；郭环宇；景年财 刊期： 2018年第04期
骨水泥渗漏是经皮椎体成形术(PVP)中常见的并发症[1-2].实验已经证实采用小空腔技术能够降低骨水泥渗漏的发生[2].本研究旨在探讨新型活检钳及小空腔技术在椎体成形术中的临床应用.一、资料与方法1.一般资料:2017年1月至2018年1月,符合本研究纳入标准的椎体压缩性骨折患者46例,其中男19例,女27例,年龄(68.13±8.19)岁.T10 5例,T11 10例,T12 14例,L1 12例,L2 5例.采用随机数字表法进行随机分组:A组(n=23):行传统椎体成形术治疗椎体压缩骨折,B组(n=23):PVP中应用新型活检钳及小空腔技术治疗椎体压缩骨折.上海凯利泰公司生产的PVP部分手术器械.自行研发的新型活检钳:工作长度230 mm、大直径1.8mm、钳头大直径2 mm、齿长5 mm、槽深1.5 mm、张开角度45°.
作者：赵云；齐向北；李旭；高翔；王坤龙 刊期： 2018年第04期
目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)联合顺铂对荷PC-9肺癌小鼠肿瘤生长的影响.方法 将60只荷PC-9肺癌肿瘤的裸鼠随机分为对照组、TRAIL组、顺铂组和联合治疗组,每组15只,TRAIL组经腹腔注射TRAIL 10 mg/kg,顺铂组经腹腔注射顺铂1.5 mg/kg,联合治疗组经腹腔分别注射TRAIL 10 mg/kg和顺铂1.5 mg/kg,对照组经腹腔注射等体积的生理盐水.所有小鼠每隔1d给药1次,连续治疗30d,测定每组小鼠肿瘤的生长情况和体重的变化.并采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色法分析4组小鼠肿瘤组织中细胞的凋亡水平.采用Western blot分析4组小鼠肿瘤组织细胞中p53、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3等凋亡相关蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤生长受到显著抑制(P=0.030、0.026、0.009),而联合治疗组小鼠肿瘤生长速度明显缓于TRAIL组和顺铂组(P=0.036、0.018).与对照组比较,顺铂组和联合治疗组小鼠体重明显下降(P=0.030、0.038),而TRAIL组小鼠体重变化差异无统计学意义(P =0.070).与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤组织中细胞凋亡比例明显增加(P=0.023、0.034、0.027).与顺铂组比较,TRAIL组和联合治疗组小鼠肿瘤组织细胞凋亡比例明显增加(P =0.028、0.013).Western blot结果显示与对照组比较,TRAIL组、顺铂组和联合治疗组p53和Caspase-3表达水平明显增加,而联合治疗组增加水平更加显著(P=0.018).结论 TRAIL联合顺铂能显著抑制荷PC-9小鼠肿瘤的生长,这一现象是通过促进肿瘤细胞凋亡相关基因表达,进而促进肿瘤细胞凋亡来实现的.
作者：张春敭；齐宇；吴恺；张岩；赵松 刊期： 2018年第04期
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)影响肺腺癌细胞侵袭迁移,以及对上皮-间充质转化(EMT)和自噬的影响.方法 Transwell检测体外TGF-β1对肺腺癌细胞A549和SK-LU-1迁移与侵袭能力的影响;免疫荧光检测TGF-β1引起的A549细胞自噬水平变化;Western blot实验检测在A549细胞中TGF-β1对EMT标志分子及自噬调控基因表达的影响.结果 在A549和SK-LU-1细胞中,sh-TGF-β1干扰效率约为60％,GV358-TGF-β1过表达组过表达效率均在4倍以上;迁移实验结果显示,A549细胞中,随机干扰对照组(shNC组)迁移率为1.02±0.06,TGF-β1过表达组为5.14±0.43(t=16.440,P=0.004);SK-LU-1细胞中,shNC组迁移率为1.04±0.08,TGF-β1过表达组为4.92±0.48(t=13.810,P=0.005),差异均有统计学意义;侵袭实验结果显示,A549细胞中,随机干扰对照组(shNC组)侵袭率为0.96±0.07,TGF-β1过表达组为4.28 ±0.51(t=11.170,P =0.007);SK-LU-1细胞中,shNC组侵袭率为1.03±0.05,TGF-β1过表达组为4.11±0.36(t=10.410,P=0.009),差异均有统计学意义;免疫荧光实验结果可见,与对照组比较,TGF-β1过表达组点状分布的自噬小体数目明显增多(t=22.340,P=0.000),荧光强度显著增强;Westem blot实验结果显示,TGF-β1过表达组E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量明显减少,波形蛋白(Vimentin)、Twist、Snail的表达显著增加;自噬相关蛋白Beclin1表达上调,磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达上调;而TGF-β1干扰组的结果则与过表达组相反.结论 在肺腺癌细胞中,TGF-β1阳性表达诱导的自噬和EMT可能与其增强肺腺癌细胞侵袭迁移能力相关.
作者：柳惠斌；郭骏；蒲艳；张萌萌；宋建忠；王强 刊期： 2018年第04期
目的 以转移性前列腺癌患者为研究对象,探讨基于循环肿瘤细胞(CTCs)的前列腺癌相关基因标志物,用于转移性前列腺癌的诊断.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对人前列腺癌细胞(LNCap)中人激肽释放酶相关酶2(KLK2)、人激肽释放酶相关酶3(KLK3)、叉头框蛋白A1(FOXA1)、粒状头样转录因子2(GRHL2)及同源盒B13 (HOXB13)5个基因的表达进行检测,建立多基因表达的联合检测的方法.采集30例转移性前列腺癌患者和20例健康志愿者的血液样本,利用血液样本和前列腺癌细胞对检测方法的一致性、重复性、线性和灵敏度方面进行了评估.通过比较患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果,确定前列腺癌相关标志基因表达水平对于患者预后的意义.结果 该联合检测方法中各基因表达水平与单基因表达水平具有一致性;5个基因表达量在LNCap RNA不同稀释浓度(1 pg～1 μg)的对数范围内呈现较明显的线性关系:KLK2(0.995)、KLK3 (1.000)、FOXA1 (0.992)、GRHL2 (0.999)、HOXB13 (1.000);各基因检测浓度范围分别是KLK2(5 pg ～1 μg)、KLK3(1 pg～1 μg)、FOXA1(10 pg ～1 μg)、GRHL2(100 pg～1 μg)、HOXB13(100 pg ～1 μg);患者血液样本中CTCs计数和基因表达结果对比显示两者具有相关性,即CTCs计数越高的患者,其基因表达阳性率也越高.结论 KLK2、KLK3、FOXA1、GRHL2及HOXB13 5个基因表达水平的联合检测方法具有操作更简单便捷的技术优势和较好的准确性和灵敏度.
作者：张靖；宁松毅；何明芳；谢婧婧；胡建鹏；崔飞伦 刊期： 2018年第04期
目的 采用浓度梯度法诱导建立顺铂(DDP)及吉西他滨(GEM)多药耐药膀胱癌细胞株(T24/DDP&GEM),并分析其生物学特征.方法 利用人膀胱癌细胞株T24,采用DDP和GEM作为诱导剂在体外建立DDP及GEM多药耐药的人膀胱癌细胞模型T24/DDP&GEM.通过倒置相差显微镜下观察T24、T24/DDP&GEM细胞形态差异,细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测相关细胞的耐药性,生长曲线检测相关膀胱癌细胞的增殖能力,Western blot检测P-糖蛋白(P-gP)的表达.结果 经过DDP和GEM 12个月的交替的诱导,成功建立了T24/DDP&GEM.倒置相差显微镜下观察并与T24细胞比较,T24DDP/GEM形态不规则,体积变大,细胞内可见空泡和颗粒形成.T24/DDP&GEM的增殖能力与T24比较显著下降,T24/DDP&GEM的倍增时间为(39.51 ±0.36)h,T24的倍增时间为(28.06±0.76)h,倍增时间延长(11.45 ±0.41)h.T24/DDP&GEM的耐药性明显提高,其耐药指数对于DDP为4.25,对于GEM为62.97.与T24细胞比较,T24/DDP&GEM细胞的S和G2期的细胞比例显著减少,而G1期细胞比例显著增多,细胞周期减慢.Western blot结果显示,T24/DDP&GEM细胞中P-gp的表达水平明显高于T24.结论 人工诱导的DDP及GEM耐药膀胱癌细胞株T24/DDP&GEM具有多药耐药肿瘤细胞特征.
作者：王鹏；陈明坤；陈子坚；郭晓彬；杨诚；卞军；周其赵；郭文彬；薛康颐；张万松；杨建昆；刘存东 刊期： 2018年第04期
我们构建靶向长链非编码RNA (lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)基因的短发卡RNA (shRNA)载体,观察其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响.一、材料与方法1.shRNA载体构建及转染:pRNAT-U6.1(美国GenScript公司)和shRNA模板双酶切后定向连接后测序鉴定.胃癌细胞转染按照转染试剂盒(美国Invitrogen公司)说明书进行.2.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测:提取总RNA,检测CCAT2及POU5 F1B基因的表达情况.3.噻唑蓝(MTT)法检测:细胞存活率检测按照MTr细胞增殖检测试剂盒(碧云天公司,南通)说明书进行.
作者：余招焱；袁平；朱昕；张忠民；丁杰 刊期： 2018年第04期
目的 通过3D打印脊柱骨盆模型及计算机软件辅助导航,介绍S3髂骨螺钉内固定的置钉入路及参数分析.方法 通过3D打印模型及计算机软件相关数据确定S3节段的置钉空间,并选取本次髂骨螺钉进针点位置.随机抽取已进行过骨盆三维CT重建扫描的男女成年患者图像各20份,选取本次已确定可以进钉的螺钉入点(O),以身体冠状面或骶骨水平横切面为水平切面(X),测量球形探针进针偏角小角度范围(A)、大角度范围(B)及佳进钉角度范围(Z),并测量本次进针点位置螺钉钉道长度及宽度.对应成人3D打印模型中证实本次新型置钉方式的准确性及安全性.结果 进针角度由小角度OA范围至大角度OB角度范围内,在窄横径超过7 mm的条件下,均可安全置入万向髂骨螺钉(平均长度80 ～ 90 mm)进行固定.进针角度范围:男性X-OA-OB平面[(47.1±1.9)°～(56.7±1.4)°],佳角度X-OZ范围[(52.3±1.1)°];女性X-OA-OB平面[(49.6±0.8)°～(59.9±1.1)°],佳角度X-OZ范围[(53.7±0.8)°].钉道长度范围:男性OA平面为(91.4±2.3) mm,OB平面为(89.5±4.6)mm,OZ平面范围为(94.2±2.1)mm;女性OA平面为(90.4±1.9) mm,OB平面为(85.6±2.3)mm,OZ平面范围为(96.4±1.7) mm.在佳置钉角度OZ,男性与女性比较,置钉角度(F =4.276,P =0.001)及置钉长度比较差异均有统计学意义(F =3.647,P=0.001);OA中,男性与女性的置钉偏角数值比较,差异有统计学意义(F=5.268,P=0.001),置钉长度数值比较差异无统计学意义(F=1.513,P=0.139).OB中,男性与女性比较,置钉角度(F=8.153,P=0.001)及置钉长度比较差异均有统计学意义(F=3.341,P=0.002).在相同的置钉平面上,不同性别的成人钉道尾向偏角数值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经S3侧块髂骨螺钉置钉均可安全有效置入髂骨螺钉,通过进针点O-Z方向的髂骨螺钉是理论上安全性及稳定性较好的脊柱骨盆固定术置入髂骨螺钉的位置角度.
作者：惠宝锋；王志杰；褚言琛；侯庆先；杨文玖；宫硕 刊期： 2018年第04期
目的 探讨干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体(IFIT2)在人胃癌进展中的作用及机制.方法 通过使用RNA干扰(RNAi)技术构建IFIT2稳定下调表达的人胃癌细胞株SGC-7901及AGS,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别在RNA水平和蛋白水平验证两株细胞株LV-IFIT2-短发卡RNA(shRNA)组的IFIT2的表达水平,进一步研究IFIT2在人胃癌细胞株中的生物学功能.结果 Real-time PCR检测结果显示,SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组IFIT2mRNA表达水平均显著低于LV-NC组(SGC-7901:0.426 ±0.140比1.000±0.157,P=0.004;AGS:0.232±0.090比1.000±0.194,P=0.003);蛋白质印迹检测结果显示,SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组的IFH2的蛋白表达水平均显著低于LV-NC组(SGC-7901:0.344 ±0.041比1.000±0.062,P=0.002;AGS:0.091±0.001比1.000±0.106,P=0.000).对稳定转染LV-IFIT2-shRNA及LV-NC的人胃癌细胞系SGC-7901和AGS进行CCK-8增殖实验、划痕实验、Transwell实验和细胞周期测定.在培养的48、72 h shRNA组的吸光度值显著高于LV-NC组,提示下调IFIT2的表达可以显著抑制人胃癌细胞系SGC-7901和AGS的增殖能力(SGC-7901:48 h:0.348±0.031比0.276 ±0.026,P =0.013;72 h:0.523±0.042比0.411±0.027,P =0.004;AGS:48 h:0.454±0.034比0.362±0.038,P=0.011;72 h:0.696±0.053比0.553±0.030,P=0.003);划痕实验显示SGC-7901和AGS细胞IFIT2干扰组的迁移能力明显高于NC组的迁移能力,提示IFIT2表达的降低可明显增强SGC-7901和AGS细胞的迁移能力(SGC-7901:0.640±0.029比0.447±0.056,P=0.006;AGS:0.444±0.036比0.166±0.034,P=0.001);Transwell侵袭实验中,LV-IFIT2-shRNA组的结晶紫染色迁移细胞数明显多于LV-NC组,表明SGC-7901和AGS细胞下调IFIT2表达后的侵袭能力提高(SGC-7901:299.3±45.6比162.3 ±25.9,P=0.011;AGS:404.0±44.5比235.0±30.0,P =0.003);流式细胞术分析细胞周期显示,LV-IFIT2-shRNA组的S期细胞比例高于LV-NC组,提示人胃癌细胞系中IFIT2的敲除可显著影响细胞周期.结论 IFIT2表达降低可促进胃癌进展,并可预测患者的不良预后.
作者：翟文斯；陈陆俊；郑晓；胡文蔚；吴晨；王琦；卢斌峰；蒋敬庭 刊期： 2018年第04期
目的 观察不同浓度的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对糖尿病大鼠血糖浓度的影响.方法 取正常SD大鼠的骨髓,分离、纯化培养得到BMSCs,并检测表面分子标志物CD34、CD44、CD45和CD90的表达.建立的糖尿病大鼠模型随机分为对照组、低浓度组、高浓度组以及正常饲养的大鼠为正常组.低浓度组、高浓度组分别注射1×105和5×106个BMSCs,正常组和对照组则注射磷酸盐缓冲液(PBS),分别检测注射后1、2、3周的血糖浓度并进行统计学分析.结果 细胞免疫荧光检测显示CD34(-)、CD44(+)、CD45(-)和CD90(+),证实为BMSCs.静脉注射BMSCs治疗后,低浓度治疗组大鼠血糖浓度在治疗前2周无明显变化,第3周下降16.1％;高浓度治疗组与对照组比较,随着治疗时间推移,大鼠的血糖浓度表现出显著的降低,第3周血糖浓度下降42.0％.正常组和对照组治疗前后血糖浓度无明显变化.结论 静脉移植高浓度(5×106个)的BMSCs,有助于控制并调节糖尿病大鼠的血糖浓度.
作者：邹新华；杜烨；任国强；王知；张静；李炳辉 刊期： 2018年第04期
目的 探讨中低位直肠癌术后预防性肠造口不能回纳的危险因素.方法 分析我院315例中低位直肠癌住院病例.x2检验分析造口类型与临床病理变量之间的关系.用Kaplan-Meier生存曲线分析永久性造口的预测因素.用Cox比例风险回归法对危险因素进行评估.结果 在315例患者中,127例行预防性造口,其中116例行末端回肠袢式造口,11例行结肠造口.其中94例回肠造口术后予回纳,造口到回纳间隔时间的中位值为6.3个月;3例造口关闭后重新造口,25例患者回肠预防性造口成为永久性造口.随访2年,回肠造口不可回纳的累计发生率为14％.单因素分析显示,浸润深度、淋巴结转移、远处转移、括约肌间切除、吻合口手工缝合和术前放化疗与永久性造口相关,而多因素分析显示远处转移、浸润深度、术前放化疗是预防性肠造口不能回纳的危险因素.结论 直肠癌远处转移或局部复发是影响造口回纳的重要因素,而肿瘤距肛门缘的距离、淋巴结转移的数量、吻合的方式均对造口回纳影响较小.
作者：王庆涛；甄劲雄；黄海洋 刊期： 2018年第04期
目的 观察大黄素对肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移抑制作用.方法 采用原代人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC),常规培养、建立缺氧细胞模型,采用不同浓度(0、5、10、15、20 μmol/L)大黄素分别处理于缺氧环境下培养12、24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)和Transwell侵袭实验检测缺氧肺动脉细胞增殖及迁移.用Westemblot法测定大黄素对缺氧HPASMC p38蛋白的表达.结果 大黄素对缺氧HPASMC的增殖及迁移呈浓度及时间依赖性抑制.浓度为20 μmol/L时效果显著,其12、24、48、72 h抑制率依次为(53.46±1.81)％、(61.32±2.69)％、(76.34±3.05)％、(84.43±3.18)％.Transwell实验组(5、10、15、20μmol/L)大黄素干预后细胞迁移数依次为(68.90±8.49)、(46.10±5.63)、(27.56±5.38)、(12.61±3.68)个与对照组[(88.59±8.56)个]比较明显减少.与对照组比较,实验组p38蛋白的表达均减少(P=0.001).结论 大黄素可明显抑制缺氧环境下人肺动脉平滑肌细胞的增殖及迁移,并下调其p38蛋白表达水平.
作者：李海燕；李鲲；冯旭；王康；覃家锦 刊期： 2018年第04期
骨肉瘤(Osteosarcoma)是常见的原发恶性骨肿瘤,其恶性程度高、预后差,严重威胁儿童和青少年的健康.表皮生长因子受体(EGFR)家族属于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶受体,其表达能够抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖、血管生成和远处转移.目前国内外有关EGFR家族与骨肉瘤进展的研究十分有限且存在较大争议.本文将对EGFR家族表达与骨肉瘤进展相关性以及EGFR抑制剂在骨肉瘤治疗中的应用作综合性阐述.
作者：王生淋；余凤强；林建华 刊期： 2018年第04期
目的 检测儿童类风湿关节炎亚型(S-JIA、JIA少关节型)外周血Nod样受体家族包含pyrin结构域蛋白-3(NLRP-3)mRNA基因表达差异,探讨NLRP-3 mRNA表达水平差异与患儿临床表现特征的相关性.方法 收集28例初治类风湿关节炎(S-JIA13例,JIA少关节型15例)住院患儿及20例同期正常体检患儿的外周血标本,提取标本总RNA,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测外周血标本中NLRP-3 mRNA表达的差异.结果 在外周血中NLRP-3 mRNA在S-JIA组的相对表达量为0.0667 ±0.0044,高于JIA少关节型组(0.0107±0.001 5)及正常对照组(0.021 3 ±0.003 2),差异有统计学意义(F=5.491,P=0.010);正常对照组与JIA少关节型组之间比较时,差异无统计学意义(F=1.745,P=0.105).结论 NLRP-3 mRNA水平升高,是导致S-JIA产生炎性反应的重要影响因素之一.
作者：向明丽；刘秋亮；刘玉峰；张素琴；丁婧 刊期： 2018年第04期
目的 探讨榄香烯对神经母细胞瘤增殖和凋亡的作用.方法 将SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株分为对照组和实验组,实验组中加入不同浓度的榄香烯.应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定榄香烯对SK-N-SH细胞增殖活力的影响,采用流式细胞仪测定榄香烯对SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测榄香烯对SK-N-SH细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9的mRNA表达的影响,并进一步用Caspase活性试剂盒测定Caspase-3和Caspase-9的活性.结果 榄香烯作用24 h后,各浓度点的抑制率为(10.963 ±2.994)％、(50.013±3.641)％、(77.515 ±4.612)％,t=4.220、5.615、8.096,P=0.022、0.000、0.000;榄香烯作用48 h后,各浓度点的抑制率为(14.478±2.270)％、(56.387±3.494)％、(79.531±3.874)％,t=4.229、5.379、7.842,P=0.021、0.000、0.000;榄香烯作用72 h后,各浓度点的抑制率为(24.174±2.920)％、(64.619±3.180)％、(87.375±4.189)％,t=4.759、6.773、15.384,P=0.001、0.000、0.000.榄香烯作用SK-N-SH细胞24 h后显著诱导细胞凋亡,各浓度点的凋亡率为(19.280±2.991)％、(52.493±4.379)％、(82.189 ±3.175)％,t=4.166、6.324、9.703,P=0.048、0.000、0.000.榄香烯作用SK-N-SH细胞后上调其Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达,Caspase-3 mRNA在各浓度点的上调倍数为(2.712 ±0.127)、(3.013 ±0.304)、(3.931 ±0.410),t=4.714、6.079、9.318,P=0.015、0.000、0.000;Caspase-9 mRNA在各浓度点的上调倍数为(1.206±0.136)、(2.331 ±0.412)、(2.824 ±0.410),t =4.874、7.523、10.530,P =0.038、0.010、0.000.并且榄香烯增强Caspase-3和Caspase-9的活性,Caspase-3的活性在各浓度点的上调倍数为(1.517±0.192)、(2.016±0.323)、(2.081 ±0.361),t=5.175、7.107、12.100,P=0.005、0.001、0.000;Caspase-9在各浓度点的上调倍数为(1.672 ±0.331)、(2.100 ±0.276)、(2.328 ±0.361),t=4.605、6.532、15.101,P=0.003、0.011、0.000.结论 榄香烯对神经母细胞瘤的增殖有抑制作用,并且通过激活Caspase-3和Caspase-9诱导其凋亡.
作者：周景儒；赵婉妮；王栋梁；梁剑峰 刊期： 2018年第04期
目的 观察RNA干扰下调泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因对人胃癌SGC-7901细胞生长、凋亡、侵袭转移和周期分布变化的影响.方法 合成针对UHRF1基因的小干扰RNA(siRNA)片段,转染至胃癌细胞株SGC-7901;实验分为3组:转染组(转染特异性siRNA)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)、空白对照组;细胞转染24h后用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)和Western blot检测转染前后UHRF1的mRNA和蛋白的表达水平变化;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Matrigel和Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布.结果 转染后,胃癌细胞株SGC-7901 UHRF1 mRNA的相对表达量为0.22±0.02,低于阴性对照组(P=0.003)和空白对照组(P=0.001),UHRF1蛋白的相对表达量为0.17±0.01,低于阴性对照组(P =0.001)和空白对照组(P=0.000);细胞增殖能力显著降低(P=0.000);转染组细胞和非特异性阴性对照组侵袭细胞数分别为(117.3±4.2)个和(433.3±5.5)个(P=0.000),迁移细胞数分别为(123.0±3.6)个和(377.3±4.7)个(P=0.000),细胞的侵袭迁移能力显著减弱;转染组凋亡率为(16.36±0.84)％较阴性对照组(9.67±0.36)％、空白对照组(8.63±0.10)％明显增加(P=0.002);细胞周期分布改变显著,G0/G1期的细胞明显增多(P=0.010).结论 UHRF1能促进胃癌细胞株SGC-7901增殖,增强其迁移侵袭能力,抑制细胞凋亡.
作者：屈芫；王天明；严枫 刊期： 2018年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
