学术投稿

长链非编码RNA FEZF1-AS1对胃癌细胞株SGC-7901增殖和侵袭的影响

刘帅臣;张明凯;李玉明;胡宝光;王建平

关键词:胃癌, 长链非编码RNA, 增殖, 侵袭
摘要:目的 观察长链非编码RNA FEZF1-AS1(Linc FEZF1-AS1)的表达对胃癌细胞株SGC-7901增殖及侵袭的影响.方法 胃癌SGC-7901细胞分为两组:FEZF1-AS1小干扰RNA(siRNA)组(si-FEZF1-AS1)和阴性对照组(si-NC).通过siRNA干扰SGC-7901细胞中Linc FEZF1-AS1的表达,采用克隆形成实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕和Transwell侵袭实验检测胃癌细胞增殖及侵袭能力的变化,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)相关标志物的表达水平.结果 克隆形成实验结果显示,与si-NC组比较,si-FEZF1-AS1组细胞的克隆形成能力受到抑制[(43.22±4.35)%比(26.78±3.34)%,t=5.194,P=0.007];CCK-8实验显示,3d后si-FEZF1-AS1组细胞的抑制率明显高于si-NC组[(31.32±4.48)%比(13.86±0.64)%,t=11.590,P=0.000];划痕试验结果显示,si-FEZF1-AS1组痕间间距明显大于si-NC组[(598.67±18.81)μm比(428.32±13.90) μm,t=12.620,P=0.000];Transwell结果显示,si-FEZF1-AS1组侵袭转移细胞数明显减少[(60.50±5.13)个比(103.50±9.54)个,t=7.942,P=0.001];RT-PCR结果表明,si-FEZF1-AS1组E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA的相对表达水平明显上升[(2.01±0.36),t=5.435,P=0.002];波形蛋白(Vimentin)、p-连环蛋白(β-catenin) mRNA的相对表达水平明显下降[(0.54±0.05),t=9.734,P=0.000;(0.50±0.10),=8.019,P=0.000];Western blot实验结果显示,E-cadherin蛋白水平,si-FEZF1-AS1组较si-NC组明显上升[(86 304±447)比(35 623±227),f=175.100,P=0.000];Vimentin、[β-catenin蛋白水平,si-FEZF1-AS1组较si-NC组明显降低[(29 135±89)比(82 253±353),t=252.800,P=0.000;(15283±147)比(42 506±245),t=165.200,P=0.000].结论 干扰Linc FEZF1-AS1后可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭能力,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关.
中华实验外科杂志相关文献
  • 热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C/EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

    目的 观察热休克蛋白70 (HSP70)表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12、C/EBP同源蛋白(CHOP)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响.方法 应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70(HSP70)基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达,建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型,测定细胞凋亡,提取内质网测定,采用免疫组织化学和Western blot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变.结果 对照组细胞凋亡率(9.28±0.83)%、晚期(28.60±1.83)%,HSP70基因转染组早期细胞凋亡率(4.30±0.72)%、晚期(11.6±1.66)%,HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率(29.3±2.54)%、晚期(34.4±2.43)%,免疫组织化学和Westem blot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达;HSP70表达抑制细胞凋亡,但HSP70反义寡核苷酸则促进;HSP70显著抑制Caspase-12和CHOP的表达,HSP70增加JNK的表达;HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达.结论 转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡.

    作者:孙忠东;马海峰;任冠桦;赵春华 刊期: 2018年第10期

  • 胃癌组织对奥沙利铂化疗敏感性及其与微小RNA-150表达的关系

    目的 探讨胃癌组织中微小RNA(miRNA,miR)-150与肿瘤对奥沙利铂(L-OHP)化疗敏感性的关系,并分析临床意义.方法 收集80例胃癌组织及癌旁正常组织的手术标本,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测组织中miR-150及多药耐药基因1(MDR1)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等的mRNA表达;免疫组织化学法检测P-gp、GST-π、bcl-2、Survivin蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测胃癌组织及癌旁正常组织对L-OHP的体外敏感性.结果 miR-150在胃癌组织表达(0.324 1±0.063 6)明显低于癌旁正常组织(0.5760±0.1480)(t=-13.987,P=0.000);胃癌组织MDR1、GST-π、bcl-2、Survivin mRNA(分别为1.217 7±0.2726、0.695 3±0.256 7、0.898 5±0.196 2、0.826 2±0.2708)均高于癌旁正常组织(分别为0.302 0±0.092 1、0.347 7±0.162 8、0.195 2±0.085 6、0.348 6±0.172 0,t=28.464,P=0.000;t=10.228,P=0.000;t=29.387,P=0.000;t=13.316,P=0.000).MTT结果显示肿瘤组织细胞在L-OHP作用后相对活性为(62.11±25.65)%;miR-150强表达的肿瘤组织对L-OHP的活性[(52.02±28.71)%]低于miR-150弱表达者[(73.27±15.73)%,t=-4.045,P=0.000];在胃癌组织中P-gp、bcl-2、Survivin蛋白阳性的肿瘤组织对L-OHP的活性高于阴性表达者,GST-π-表达与肿瘤组织对L-OHP的活性无明显相关(t=0.228,P=0.821).Spearman相关分析显示,miR-150与MDR1、bcl-2的mRNA表达有负相关(r=-0.571,P=0.000;r=-0.561,P=0.000),与GST-π、Survivin的mRNA无明显相关(r=0.088,P=0.437;r=0.186,P=0.098).结论 miR-150可能通过调节MDR1、bcl-2等耐药相关基因参与胃癌对L-OHP的耐药形成.

    作者:檀碧波;李勇;范立侨;赵群;刘庆伟 刊期: 2018年第10期

  • 联合检测血清癌抗原19-9、癌胚抗原及间接胆红素对胆管癌的诊断价值

    目的 比较3种血清学指标癌抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)及间接胆红素(IBIL)的单独及联合检测胆管癌的敏感度.方法 回顾性分析胆管疾病患者376例的临床资料,分为胆管癌组57例与胆管良性病变组319例,通过单因素分析和Logistics回归分析,筛选胆管癌的独立危险因素.采用单独及联合检测,分别计算其敏感性、特异性等,并分析其差异有无统计学意义.结果 通过Logistics回归分析,CA19-9(P=0.046)、CEA(P=0.000)及IBIL(P =0.000)是胆管癌的独立危险因素.以胆管良性病变组作为对照组,胆管癌组CA19-9+IBIL+CEA联合检测时敏感性为89.5%,受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.813,其敏感性及AUC在单独及联合检测中均为高.结论 对于胆管癌早期诊断,CA19-9、CEA及IBIL的联合检测要优于单独指标的检测,明显提高胆管癌检出率、降低漏诊率.

    作者:李正航;胡志高;李江发;袁观斗;何松青 刊期: 2018年第10期

  • 中晚期肾癌患者手术前后、靶向治疗前后免疫功能的研究

    目的 探讨中晚期肾癌患者行根治性肾切除术前后以及舒尼替尼治疗前后机体免疫功能.方法 纳入2017年7月1日至2018年7月1日期间,我院泌尿外科住院的中晚期肾癌患者50例,采集患者术前、术后、靶向治疗后1个月静脉血,应用流式细胞术检测其总T细胞、辅助性T细胞(Th)、杀伤性T细胞(Tc)以及调节性T细胞(Treg)细胞比例.结果 研究结果显示肿瘤直径大小和Treg细胞占比有一定线性关系(R2=0.794);肿瘤患者的Treg细胞[(21±10)%]和Th细胞[(42±5)%]较正常组要高;相较于术前组,术后患者的Tc细胞[(34±5)%]显著升高,Th细胞[(30±3)%]、Treg细胞[(17±7)%]显著降低;术后患者再行靶向治疗,Tc细胞[(23±5)%]和Treg[(10 ±7)%]细胞降低,Th细胞[(35±6)%]上升,尽管Th细胞和Treg细胞较正常组为高,然总T细胞、Tc细胞以及辅助性T细胞与杀伤性T细胞的比值(Th/Tc)数值则恢复至正常水平.结论 肾癌、手术对机体的免疫功能有很大的影响,术后靶向治疗可以改善机体免疫功能.

    作者:邹永强;王道元;闫书贤;高燕华;刘柯柯;叶永利;杨兴强;刘东东 刊期: 2018年第10期

  • 乙二醇诱导果蝇草酸钙结石模型的建立

    目的 探索果蝇草酸钙结石模型的培养方法,并对果蝇模型的成功率、适用性进行评价.方法 将同天龄雄性黑腹果蝇400只随机分成结石A组(n1 =100)、结石B组(n2=100)、结石C组(n3=100)和对照组D组(n4=100),通过二氧化碳麻醉法,分别将其转入带有0.50%、0.75%、1.00%乙二醇的果蝇培养基和不含乙二醇的正常培养基并放入25℃恒温箱内培养.观察统计果蝇的寿命,并解剖果蝇分离体内的马氏管,观察果蝇的结晶形成情况,对形成的晶体进行定性分析.结果 在偏光显微镜下观察,A、B、C、D组的果蝇马氏管结晶生成率分别为87.0%、92.0%、98.0%和6.0%(x2=273.057,P=0.000).在含0.5%乙二醇培养基(A组)里果蝇中位生存期为36 d,0.75%乙二醇培养基(B组)里果蝇中位生存期为31d,1.0%乙二醇培养基(C组)里果蝇中位生存期为23 d,正常培养基(D组)的中位生存期为52 d,单因素方差分析显示F=35.403,P=0.000.所得晶体通过定性分析为草酸钙晶体.结论 0.75%的乙二醇浓度由于其诱导结石形成率高,死亡率相对较低被认为是较理想造模的浓度.稳定的果蝇草酸钙结石模型适合进行高通量的药物试验以及大样本量的结石机制研究.

    作者:江弘炀;刘卓;刘继红 刊期: 2018年第10期

  • 血浆微小RNA-21鉴别甲状腺滤泡癌与乳头状甲状腺癌

    目的 探讨血浆微小RNA(miRNAs,miR)-21在鉴别甲状腺滤泡癌和甲状腺乳头状癌中的应用价值.方法 选择45例甲状腺滤泡癌患者、61例甲状腺乳头状癌患者及50例正常人作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测血浆中miR-21表达水平.建立受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-21区分甲状腺滤泡癌与乳头状甲状腺癌的截断值(Cut-off值)及敏感性、特异性等指标.结果 正常人、甲状腺滤泡癌和例甲状腺乳头状癌患者血浆miR-21相对表达水平分别为0.254±0.123、4.047±1.499、1.274±0.581,3组比较差异有统计学意义(P=0.010),甲状腺滤泡癌患者血浆miR-21相对表达水平显著高于甲状腺乳头状癌患者和正常人(P=0.010);甲状腺乳头状癌患者血浆miR-21相对表达水平显著高于正常人(P=0.010).建立以血浆miR-21表达水平为检验变量,以甲状腺滤泡癌和甲状腺乳头状癌为状态变量的ROC曲线,曲线下面积(AUC)为0.931 [95%可信区间(CI):0.890 ~0.991].血浆miR-21相对表达水平鉴别甲状腺滤泡癌和甲状腺乳头状癌佳Cut-off值为2.325.以血浆miR-21相对表达水平≥2.325作为诊断甲状腺滤泡癌的标准,此时该指标鉴别甲状腺滤泡癌和甲状腺乳头状癌的敏感度和特异度分别为85.11%和96.72%,阳性预测值和阴性预测值分别为95.24%和89.39%,约登指数为81.83%.结论 检测患者血浆miR-21表达水平有助于甲状腺滤泡癌和甲状腺乳头状癌鉴别,辅助区分滤泡型甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡癌.

    作者:张建祥;马艳梅;张素琴;王芳;李建华 刊期: 2018年第10期

  • 非小细胞肺癌转移瘤基因型变化及耐药性机制研究

    目的 探讨非小细胞肺癌(NSC LC)转移瘤与原位肿瘤基因突变的差异以及耐药性产生的机制.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测正常肺组织、非小细胞肺癌原位肿瘤组织与转移灶肿瘤组织中高频突变基因的表达差异;Real-time PCR检测正常肺组织、原位肿瘤细胞和转移灶肿瘤细胞体外传代P5、P10后高频突变基因表达变化,Transwell迁移实验、划痕实验检测各代细胞的迁移能力;用化疗药物处理正常肺组织、原位肿瘤细胞和转移灶肿瘤细胞,扩增3代后检测其高频突变基因表达差异,Transwell迁移实验、划痕实验检测各代细胞的迁移能力.结果 Real-time PCR结果显示原位肿瘤组织RB1表达降低(0.72±0.05,P=0.013),转移灶组织RB1(0.75 ±0.02,P=0.004)与p53(0.23±0.07,P=0.021)表达降低,差异有统计学意义,证明原位肿瘤组织与转移灶组织基因突变有差异;传代后,原位肿瘤细胞与转移灶肿瘤细胞基因突变无变化,Transwell迁移实验和划痕实验结果差异无统计学意义;化疗药处理后,原位肿瘤细胞KRAS表达增加(3.43 ±0.31,P=0.002),转移灶组织第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)表达降低(0.43 ±0.25,P=0.015);迁移能力增强,差异有统计学意义(P=0.048、0.011).结论 NSCLC转移灶肿瘤基因突变与原位肿瘤不同,其是由转移过程造成;化疗可驱动肿瘤细胞产生新基因突变,从而使其具有耐药性.

    作者:李基伟;张全;韩志军;陈晓;务森;魏立 刊期: 2018年第10期

  • 婆罗双树样基因4基因对胶质瘤细胞增殖的影响

    目的 检测婆罗双树样基因4(SALL4)基因在胶质瘤中的表达水平,探讨SALL4基因对胶质瘤细胞的增殖影响.方法 生物信息手段分析癌症基因组图谱(TCGA)中SALL4基因的表达水平与预后的关系;定量聚合酶链反应(qPCR)验证SALL4基因在56例高级别胶质瘤(WHOⅢ、Ⅳ级)标本及6例非瘤脑组织标本中的表达差异;小干扰RNA (siRNA)沉默SALL4基因后,细胞计数试剂盒(CCK-8)试验、细胞周期试验检测肿瘤细胞的增殖变化;Western blot法检测SALL4基因被沉默后SALL4和第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)蛋白的表达变化.结果 来源于TCGA的数据表明SALL4基因在肿瘤中高表达,约50%的SALL4低表达的胶质瘤母细胞瘤患者获得了更高的生存率;在56例高级别胶质瘤标本中SALL4的表达水平较6例非瘤脑组织更高(2.89±2.53比0.70±0.30,P=0.000);在SALL4基因被沉默后胶质瘤细胞的增殖能力被抑制,PTEN蛋白表达升高.结论 SALL4基因参与了胶质瘤细胞生长的调控,抑制SALL4基因的表达能抑制胶质瘤细胞的增殖.

    作者:徐杰;沈亮;刘传金;周幽心;孙春明 刊期: 2018年第10期

  • 内镜黏膜下剥离术和经肛门内镜下微创手术治疗直肠肿瘤的比较

    目的 比较内镜黏膜下剥离术(ESD)与经肛门内镜下微创手术(TEM)治疗对于直肠肿瘤的疗效以及安全性.方法 选取进行ESD治疗的直肠腺瘤42例,直肠早期癌27例以及直肠神经内分泌肿瘤18例,以及TEM治疗的直肠腺瘤25例,直肠早期癌18例以及直肠神经内分泌肿瘤9例,观察两组肿瘤大小、位置、完整切除、治愈性切除、手术操作时长、并发症、抗生素使用、住院时间、术后复发率等指标.结果 两组肿瘤大小[(7.8±3.4)cm比(6.9±3.5) cm,P=0.398],位置[距离肛缘(7.8±3.4)cm比(6.9±3.5) cm,P=0.320],完整切除(100%比100%)、治愈性切除(94.3%比100.0%,P=0.053)、穿孔率(6.9%比0%,P=0.053)和术后复发率(0%比0%)差异无统计学意义;ESD组手术操作时长[(42.1±27.3)min比(78.5 ±21.3) min,P=0.018]、抗生素使用(32.2%比100.0%,P=0.000)及住院时间[(6.3±4.8)d比(13.7±2.9)d,P=0.021]明显低于TEM组,而TEM组术中出血量[(53.0±18.7) ml比(31.7±12.4) ml,P=0.033]小于ESD组,差异有统计学意义.结论 ESD是治疗直肠肿瘤的有效方法.

    作者:罗晓雅;冀明;吴咏冬;王国军;张澍田 刊期: 2018年第10期

  • 类泛素化蛋白酶1在肝细胞肝癌组织的表达及其与侵袭和转移的关系

    目的 探讨类泛素化蛋白酶1(SENP-1)在人肝细胞肝癌中的表达及其与肝癌细胞侵袭转移的关系.方法 应用聚合酶链式反应(PCR)和免疫组织化学方法检测肝癌组织,癌边缘组织,非癌组织中SENP-1和缺氧诱导因子-1 α(HIF-1α)的表达,同时检测微血管密度(MVD),使用PCR和Western blot检测3种肝癌细胞株MHCC97H、MHCC97L和HepG2的SENP-1表达,SENP1-siRNA质粒转染基因沉默高表达SENP-1基因的肝癌细胞MHCC97H,划痕和侵袭试验检测转染前后肝癌细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测转染前后半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-8)、B淋巴细胞瘤2基因(bcl-2)和相关下游基因HIF-1 α和血管内皮生长因子(VEGF)表达变化.结果 肝癌边缘组织中SENP-1、HIF-1α的表达显著高于肝癌组织及非癌组织(P=0.000),癌边缘组织中MVD低于癌组织(P=0.000).3种肝癌细胞株SENP-1表达均比人永生化肝细胞株高,SENP-1的表达随着肝癌细胞株侵袭转移能力的增加而增高.SENP1-siRNA质粒转染MHCC97H细胞后,促细胞凋亡蛋白Caspase-8表达升高,抑制细胞凋亡蛋白bcl-2表达降低,相关下游基因HIF-1α和VEGF的表达降低.划痕试验结果显示,转染后肝癌细胞划痕距离在24h后较未处理组增加.Transwell试验结果显示,转染后肝癌细胞穿膜细胞数较未处理组明显减少(P=0.000).结论 SENP-1在人肝癌细胞肝癌中的高表达具有促进肝细胞癌侵袭转移的作用,其机制可能与SENP-1的过表达促进肝癌细胞适应缺氧微环境和抑制细胞凋亡有关.

    作者:刘延;王国良;柳严;刘江伟;赵鹏伟;李湘竑;杨定华;黄建钊 刊期: 2018年第10期

  • 蛋白转导血红素氧合酶-1对大鼠肝移植辅助性T细胞17/调节型T细胞平衡的影响

    本研究旨在观察蛋白转导结构域TAT与血红素氧合酶-1(HO-1)融合蛋白(TAT-HO-1)供肝冷保存对大鼠肝移植辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡的影响.一、材料与方法1.实验分组:建立大鼠肝移植急性排斥反应模型.C组应用组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐(HTK)液,P组应用含TAT-HO-150μg/ml HTK液进行供肝冷保存.2.指标检测:流式细胞仪检测外周血Th17及Treg细胞比例.酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-17(IL-17)水平.计算肝组织排斥活动指数(RAI),并观察生存情况.

    作者:岳立辉;朱喜春;赵砚丽 刊期: 2018年第10期

  • 叉头蛋白转录因子3a/p27激酶抑制蛋白1及氧化应激介导紫铆因抗肺腺癌的机制

    目的 观察紫铆因(Butein)的抗肺腺癌作用及叉头蛋白转录因子3a(FOXO3a)/p27激酶抑制蛋白1(p27kip1)和氧化应激在该过程中的作用.方法 常规培养A549细胞,分别给予25、50、100 μmol/L的Butein处理24 h后,检测细胞活力、细胞迁移能力、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性、活性氧(ROS)含量、总谷胱甘肽(GSH)水平,从而明确Butein通过激活氧化应激抑制A549细胞.Western blot法检测FOXO3a、p27kip1、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)的表达水平.进而采用小干扰RNA(siRNA)干扰法敲减FOXO3a表达并检测FOXO3a、p27kip1以及bax、bcl-2的表达水平,从而明确FOXO3a/p27kip1通路在该过程中的作用.结果 25、50、100 μmol/L的Butein处理A549细胞24h后,细胞活力分别下降到(78.3±4.6)%、(63.5±4.8)%和(40.1±4.1)%(t=10.330,P=0.000),细胞划痕间距增大到(120.0±8.4)%、(150.0±10.6)%和(175.0±11.1)%(t=4.777,P=0.001).Butein处理后Caspase-3、NADPH氧化酶的活性增强,ROS含量增多,总GSH减少.Western blot结果显示Butein激活了FOXO3a/p27kip1通路,上调了bax/bcl-2的比值.siRNA处理后阻断了FOXO3a/p27kip1通路,逆转了Butein引起的bax的增多和bcl-2的减少.结论 Butein能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移,该作用可能是通过激活FOXO3a/p27kip1信号通路和细胞内氧化应激进而诱导细胞凋亡实现的.

    作者:刘红岗;闫小龙;张勇;董小平;彭诗元;王小平;李小飞 刊期: 2018年第10期

  • 荷载特异性核基质结合区结合蛋白-1基因shRNA的溶瘤腺病毒联合奥沙利铂对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

    目的 观察荷载特异性核基质结合区结合蛋白-l(SATB1)基因短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-SATB1)联合化疗药物奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响.方法 将SW620细胞分为5组进行干预,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)组、L-OHP组(16 μg/ml)、病毒ZD55-SATB1组[转染倍数(MOI)=10]、荷载增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)的病毒对照组ZD55-EGFP(10 MOI)、ZD55-SATB1联合L-OHP组(10 MOI+ 16 μg/ml).细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定单独给药L-OHP(0、4、8、16、32 μg/ml)、单独感染病毒ZD55-SATB1(0、0.1、1.0、10.0、50.0 MOI)干预SW620细胞96h后细胞存活率,与5实验组干预SW620细胞48 h后细胞存活率;Hoechst33258和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V/FITC)实验检测细胞凋亡;Western blot检测溶瘤腺病毒早期区1A基因(E1A)、SATB1基因及凋亡相关半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白的表达.结果 CCK-8实验结果显示ZD55-SATB1联合L-OHP组干预SW620细胞48 h后存活率为(35.22±2.42)%,与ZD55-SATB1组(52.18±2.85)% (P=0.028)、ZD55-EGFP组(60.19±0.82)%(P=0.036)、L-OHP组(63.29±2.01)% (P =0.014)比较,对SW620细胞的增殖具有更强的抑制作用;Hoechst33258实验结果显示ZD55-SATB1联合L-OHP组干预SW620细胞48 h后,细胞凋亡率为(59.49±2.53)%,与ZD55-SATB1组(44.24±8.81)% (P=0.019)、ZD55-EGFP组(23.59±6.28)% (P =0.026)、L-OHP组(8.61±2.83)% (P=0.015)比较,联合组对细胞的凋亡有更显著的促进作用;Annexin V碘化丙锭(PI)/FITC实验结果显示ZD55-SATB1联合L-OHP组干预SW620细胞48 h后,细胞凋亡率为(55.84±2.14)%,与ZD55-SATB1组(36.17±1.51)%(P=0.018)、ZD55-EGFP组(25.43±3.25)% (P =0.012)、L-OHP组(23.86±1.92)% (P =0.017)比较,联合组对细胞的凋亡有更显著的促进作用;Western blot结果表明病毒ZD55-SATB1、ZD55-EGFP可在细胞中高效复制,且L-OHP不影响腺病毒在细胞中的复制;ZD55-SATB1联合L-OHP更高效抑制SATB1的表达,同时Caspase-3、Caspase-8、bax表达增加,bcl-2表达降低(P=0.000).结论 荷载SATB1基因shRNA的溶瘤腺病毒ZD55-SATB1对结肠癌SW620细胞的增殖起到抑制作用,能诱导细胞凋亡;ZD55-SATB1与L-OHP联合应用的治疗效果优于单药治疗,协同发挥对结肠癌SW620细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用.

    作者:潘俊;丁猛;于海元;刘渠贺;毛立军 刊期: 2018年第10期

  • 右美托咪啶对微创冠脉旁路移植患者术中肺部核因子-κB通路的影响

    目的 观察右美托咪啶对微创冠脉旁路移植患者术中肺部炎症核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 22例接受微创冠状动脉旁路移植术患者随机均分为右美托咪啶组和对照组,两组患者均静脉全身麻醉诱导,以静脉泵入丙泊酚、舒芬太尼麻醉维持,间断静脉注射顺阿曲库铵.右美托嘧啶组于麻醉诱导前静脉泵人右美托咪啶1.0 μg/(kg·h)10 min后,持续静脉泵入右美托咪啶0.5 μg/(kg·h)维持,对照组同期给以等量生理盐水,于T1(气管插管后)、T2(单肺通气30 min、吻合血管前)、T3(双肺通气即刻)、T4(术后6h)、T5(术后3d)5个时间点采集颈内静脉血4ml,于T1 ~T3时间点采集通气侧肺泡灌洗液采用酶联免疫吸附法测定血浆及肺泡灌洗液高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、NF-κB浓度.结果 右美托嘧啶组血浆HMGB1、NF-κB水平在T3、T4、T5点低于对照组:HMGB1(1.81±0.09比2.45±0.13,P=0.010;2.25±0.16比3.52±0.21,P=0.001;2.17±0.20比3.48±0.23,P=0.001),NF-κB:(40.05±1.85比84.62±3.25,P=0.001;45.52±1.21比96.21±2.36,P=0.010;43.48±1.23比88.53±2.12,P=0.001);右美托嘧啶组肺泡灌洗液HMGB1、NF-κB水平在T2、T3低于对照组:HMGB1(3.78±0.67比5.14±0.85,P=0.001;4.83±0.64比8.25±1.13,P=0.001);NF-κB:(50.02±2.13比66.60±2.27,P=0.001;62.01±2.85比86.61±3.15,P=0.001).结论 右美托嘧啶对微创冠脉旁路移植术中,通过降低HMGB1、NF-κB水平,抑制NF-κB炎症通路,发挥抗炎作用.

    作者:胡杰;李斌;陈兴澎 刊期: 2018年第10期

  • 超声引导下腹横肌平面阻滞对结肠癌根治术患者镇痛效果的影响

    目的 探讨超声引导下腹横肌平面(TAP)阻滞用于结肠癌手术中术后镇痛效果.方法 择期行结肠癌手术的患者96例,性别不限,美国麻醉医师协会评分标准(ASA)分级Ⅰ~Ⅲ级,采用随机数字表法将其分为两组:对照组(C组)和观察组(TAP组).对照组为常规全身麻醉,观察组在对照组基础上加超声引导下TAP阻滞.观察两组患者在基础状态(Tl)、切皮时(T2)、切皮后5 min(T3)、切皮后30 min(T4)、缝皮肤(T5)时血压、平均动脉压、心率、熵指数、手术容积指数、舒芬太尼用量等变化;在术后4个时点:拔管后30 min (T6)、术后6 h(T7),术后24 h(T8)、术后48 h(T9),无线网络镇痛系统自动记录术后患者自控静脉镇痛(PCIA)舒芬太尼用量及术后专人盲法随访镇痛效果.结果 与C组比较,TAP患者舒芬太尼用量在T3(0.64±0.11) μg/kg比(0.71±0.12) μg/kg;T4(0.66 ±0.15) μg/kg比(0.81 ±0.15) μg/kg;T5(0.70 ±0.12)μg/kg比(0.93±0.15) μg/kg;T6(0.99±0.12) μg/kg比(1.07±0.19) μg/kg;T7(1.35±0.20) μg/kg比(1.49±0.16) μg/kg;T8(2.00±0.42) μg/kg比(2.25 ±0.31)μg/kg;T9(2.67±0.50)μg/kg比(3.27±0.47) μg/kg均减少,差异有统计学意义(P=0.006、0.000、0.000、0.027、0.001、0.002、0.000).T8时镇痛不足由C组17例减少为8例,差异有统计学意义(x2=4.381,P=0.036).结论 超声引导下TAP阻滞在结肠癌根治术患者术中及术后镇痛中有明显效果.

    作者:张才军;钱娟娟;张宏利;周红梅;张梁;朱志鹏 刊期: 2018年第10期

  • 肿瘤相关成纤维细胞上调自噬促进结直肠癌耐药

    目的 探讨结直肠癌中肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)促进结直肠癌肿瘤细胞(CRC)对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药及其机制.方法 体外培养原代结直肠癌组织CAFs及普通纤维细胞(NFs),收集肿瘤相关成纤维细胞来源上清(CAF CM)或普通纤维细胞来源上清(NF CM)与5-Fu共同处理人类结肠癌细胞株SW48,利用Hoechst33342染色观察凋亡细胞形态变化、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染检测肿瘤细胞早期凋亡比例的变化,细胞计数试剂盒(CCK-8)绘制毒性曲线,Western blot法检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、LC3、Beclin-1的表达水平,利用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)检测自噬在此过程中的作用.结果 Hoechst33342染色显示,肿瘤细胞5-Fu较空白对照组及5-Fu+ CAF CM组凋亡细胞比例明显上升,Annexin VFITC/PI双染示,3-MA组、5-Fu组、5-Fu+ CAF CM组、5-Fu+ CAF CM+ 3-MA组凋亡百分比分别为(7.21±1.3)%、(35.4%±2.6)%、(19.1±0.5)%、(30.4±2.1)%,Western法检测发现5-Fu+CAF CM组较5-Fu+ NF CM组的LC3-B上升(1.52±0.4)倍、beclin-1表达水平上升(1.76±0.3)倍,与5-Fu比较,5-Fu+ CAF CM组在各时间点细胞活性均明显上升,而5-Fu+ CAF CM+ 3-MA组与5-Fu组比,细胞活力差异无统计学意义.以上结论显示CAF CM+ 5-Fu组凋亡率较5-Fu组明显减少,差异有统计学意义(P=0.000),3-MA+ CAF CM+ 5-Fu组凋亡率较CAF CM+ 5-Fu组明显上升,差异有统计学意义(P =0.008),CAF CM+ 5-Fu组较NF CM+ 5-Fu组LC3-B、beclin-1表达增强,差异统计学意义(P=0.040、0.001).结论 肿瘤相关成纤维细胞可以减少结直肠癌对5-Fu的药物敏感性,而这一效应可能依赖保护性自噬的增强.

    作者:张容圣;李庚;张小超;胡俊波;冯永东 刊期: 2018年第10期

  • 赖氨酸特异性脱甲基酶2B在胃癌组织表达及临床意义

    目的 探讨赖氨酸特异性脱甲基酶2B(KDM2B)在胃癌组织中表达及临床病理意义.方法 选取有完整随访资料的胃癌组织标本236例,免疫组织化学法检测KDM2B在胃癌组织中的表达,并分析其与临床病理参数及预后的关系.结果 KDM2B在胃癌组织中表达增高(58.9%,139/236),显著高于对照胃黏膜(11.4%,4/35).KDM2B在胃癌组织中表达上调(x2=25.690,P=0.000),KDM2B阳性表达与患者组织学分型、淋巴结状态、TNM分期和人表皮生长因子受体2(Her-2)表达明显相关(x2=12.922、6.817、15.089、5.143,P=0.002、0.033、0.001、0.023),KDM2B阳性表达组胃癌患者5年生存率为22.3%,中位生存期为19个月,KDM2B阴性表达组胃癌患者5年生存率为49.5%,中位生存期为66个月[风险比(HR)=2.340,P=0.000],Cox分析提示KDM2B是一个独立的预后参数.结论 KDM2B参与胃癌发生发展,是一个独立的预后参数.

    作者:夏苏华;陈东芹;覃玲艳;黄山;金建强;齐晓薇;谢菁 刊期: 2018年第10期

  • 中药淫羊藿甙干预TDP-43介导的骨关节炎软骨细胞病变的分子机制

    骨关节炎的发生发展与炎性反应密切相关,关节滑液中得到炎性细胞以及分泌的炎性因子发挥诱导作用[1].本研究旨在探讨中药淫羊藿甙干预TDP-43介导的骨关节炎软骨细胞病变的分子机制.一、材料与方法TDP-43基因全长克隆质粒和软骨细胞获得:TDP-43克隆质粒本项目组已经获得,并已进行克隆测序鉴定;构建TDP-43高表达的软骨细胞株(TDP-43-HC-α).用5μg/ml的淫羊藿甙(ICA)分别作用于人软骨细胞HC-α和TDP43-HC-α,即分为HC-α、TDP-43-HC-α、HC-α+ICA和TDP-43-HC-α+ICA组.

    作者:桑敬伟;韦中阳;李国有;高雁卿;王军霞;王晓娜 刊期: 2018年第10期

  • 二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1在甲状腺乳头状癌组织的表达

    目的 观察二磷酸腺苷(ADP)核糖化因子鸟苷酸激酶1(ASAP1)在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织荧光、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Westernblot检测ASAP1在28例甲状腺乳头状癌及癌旁组织中的表达.结果 甲状腺乳头状癌和癌旁组织中ASAP1蛋白荧光信号主要定位于细胞质,甲状腺乳头状癌组织中ASAP1蛋白的平均荧光值中位数为202.50,癌旁组织中ASAP1蛋白平均荧光值中位数为72.50,两组差异有统计学意义(P=0.000);ASAP1 mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量(0.802 ±0.126)显著高于癌旁组织(0.142±0.023)且差异有统计学意义(P=0.000);甲状腺乳头状癌组织中ASAP1蛋白的相对表达量(0.697±0.138)高于癌旁组织(0.129±0.037)且差异有统计学意义(P=0.000).结论 ASAP1在甲状腺乳头状癌组织中呈明显过表达,在甲状腺乳头状癌的发生发展中可能起重要作用.

    作者:张园园;卢秀波;樊玉霞 刊期: 2018年第10期

  • 持续灌注氧合血保存的离体猪肺缺血再灌注损伤体外评估

    目的 探讨氧合血体外持续灌注对离体供肺的保护作用.方法 将Celsior液单次经肺动静脉灌注后的供肺,分为对照4个组(低温静态法,C4、C8、C12、C18组)及实验4个组(体外灌注法,T4、T8、T12、T18组).保存后的离体供肺再与体外灌注系统及呼吸机连接工作6h,检测离体供肺通气阻力(LR)、左下肺静脉血氧分压(LIPV-PO2)、左下肺静脉血二氧化碳分压(LIPV-PCO2)、肺含水量(LWC)等肺功能指标,光镜观察肺水肿分级(LEC),原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 肺功能评估:(1)体外灌注法肺功能相对稳定,T18组LR、LWC才显著高于T4组(P值分别为0.012、0.010);低温静态法C12组LR、LWC已显著高于C4组(P值分别为0.018、0.015);相同时间点T12、T18的LR、LWC分别显著低于C12、C18(LR:P值分别为0.025、0.028;LWC:P值分别为0.021、0.027);(2)肺损伤评估:体外灌注法T18组LEC及凋亡细胞数显著高于T4组(P值分别为0.023、0.020);低温静态法C12、C18组LEC显著高于C4组(P值分别为0.023、0.020),凋亡细胞数也显著增高(P值分别为0.015、0.011);C18组LEC及凋亡细胞显著高于T18组(P值分别为0.007、0.026).结论 氧合血体外持续灌注可明显减轻低温保存供肺所致的时间依赖性缺血再灌注损伤,但仍需在完全生理状态下进行进一步评估.

    作者:龙小毛;林辉;贺榜福;胡彦艳;黄剑伟;黄爱兰;蒋伟;钟永泷 刊期: 2018年第10期

中华实验外科杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中华医学会