冀学宁；范学军；全秀莲；吴忠；王若雨；王为；马小军
目的 构建针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.方法 设计3条针对皮质肌动蛋白(cortactin)基因的短发卡RNA(shRNA)序列以及l条对照序列,退火后插入到PLKO.1慢病毒质粒载体中,质粒构建完成后和辅助质粒psPAX2,PCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,包装成慢病毒颗粒,感染胃癌SGC-7901细胞株,并使用嘌呤霉素筛选.终筛选出3个细胞株,提取该3株细胞的RNA和蛋白质分别进行实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测cortactin基因的mRNA和蛋白的表达.结果 在3株不同的稳定细胞株中,PLKO.1+shRNA3细胞株cortactin基因的mRNA和蛋白质表达下降为明显,约为对照组的10％.结论 成功构建出针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.
作者：魏军；李杨；尤天庚；所广军；赵中辛 刊期： 2014年第03期
目的 探讨血浆中雌二醇及其代谢产物与女性骨关节炎(OA)发病的关系.方法 64例女性膝OA(绝经前后各32例)作为实验组,48例健康女性(绝经前后各24例)作为对照组.应用高效液相色谱-电喷雾离子源-串联四极杆质谱联用技术对血浆内6种雌激素及其代谢产物定量测定.结果 实验组与对照组比较,绝经前卵泡期女性OA游离雌二醇水平[(65.0±9.2)比(72.3 ±10.4) ng/L;P ＜0.05]、绝经前卵泡期[(264.2±40.4)比(296.5 ±31.1) ng/L;P＜0.05]及黄体期[(262.7±45.4)比(304.1±51.5) ng/L;P ＜0.05]女性OA总2-羟基雌酮水平均降低.绝经后女性OA游离雌二醇[(13.7±3.1)比(18.2±5.6) ng/L;P＜0.05]及总雌二醇水平[(40.1±8.0)比(51.4±12.1)ng/L;P＜ 0.05]均降低;而总2-羟基雌二醇水平[(16.9±4.9)比(11.6±4.0) ng/L;P ＜0.01]升高.在调整体质量指数后,黄体期女性OA总2-羟基雌酮水平与总雌二醇水平明显相关(r =0.683,P＜0.01);绝经后女性OA总2-羟基雌二醇水平与游离(r=0.373,P＜0.05)及总雌二醇(r =0.416,P＜0.05)水平明显相关.结论 除雌二醇缺乏外,绝经前低水平的总2-羟基雌酮及绝经后高水平的总2-羟基雌二醇与女性OA发病明显相关.
作者：高万里；吴立生；訾金花；蔡道章；宋炎成；李延志 刊期： 2014年第03期
我们应用激光共聚焦显微镜观察硫化氢(H2S)对心肌细胞缺氧后细胞内Ca2+荧光强度的影响,现报道如下.一、材料与方法1.实验动物及分组:雄性SD大鼠(220～250 g)由河北省实验动物中心提供.大鼠随机分为5组,每组8只:(1)正常组;(2)缺氧组;(3)缺氧+硫氢化钠(NaHS) 100 μmol/L组;(4)缺氧+NaHS 200 μmol/L组;(5)缺氧+NaHS400 μmol/L组.参照文献[1]获得心肌细胞悬液.缺氧3h后缺氧4组心肌细胞分别置于NaHS终质量浓度为0、100、200、400μmol/L的充满95％N2的KB液.
作者：刘芳；刘广杰；张建新；李兰芳 刊期： 2014年第03期
目的 观察手术对肠道上皮细胞胰岛素信号通路的影响.方法 制作阻塞性黄疸大鼠模型,分别于手术前及手术后1、3、24h采血,计算胰岛素抵抗(IR)指数,免疫组织化学检测小肠上皮细胞胰岛素受体表达,Western blot检测肠上皮细胞胰岛素受体底物(IRS)-1、-2及蛋白激酶B(PKB)的表达.结果 手术组的IR指数在术后各时间点分别为3.40±0.12、4.29±0.11、5.34±0.18,其中24h值明显高于对照组和假手术组(P＜0.05).手术组的胰岛素受体强阳性表达数分别为3/10、2/10、2/10,其中术后24h较其他时间点下降明显(P＜0.05).手术组术后24h的胰岛素受体底物IRS-1相对表达量为0.42±0.04,较其他组下降明显(P＜0.05),而各组的IRS-2变化不明显.PKB的相对灰度值(0.52±0.10)在手术组中也明显下降(P＜0.05).结论 手术应激后IR的发生与肠上皮细胞的胰岛素受体表达降低及受体底物下降有关.PKB是术后IR信号途径中的重要一环.
作者：陈洪流；谭庆丰；陈振勇 刊期： 2014年第03期
目的 探讨曲美他嗪(TMZ)抗大鼠心肌缺血再灌注损伤中炎性反应的作用及其机制.方法 雄性健康成年SD大鼠24只,体质量为180～220 g.采用随机区组设计将大鼠随机分为对照组(A组)和TMZ组(B组),B组于实验前6d,每日给予生理盐水稀释的TMZ 10 mg/kg灌胃,各组均采用冠状动脉结扎法制作缺血再灌注损伤(IRI)模型,缺血30 min,再灌注90 min.分别于缺血前、再灌注30、60、90 min后,取大鼠静脉血2ml,测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,实验结束后处死大鼠,再灌注区取组织,免疫组织化学检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达.结果 对照组缺血前、再灌注后30、60、90 min血清TNF-α含量分别为(0.18 ±0.10)、(1.15 ±0.29)、(0.98±0.27)、(0.52±0.23) μg/L,TMZ组TNF-α含量在再灌注各测试时点[(0.16±0.12)、(0.87±0.22)、(0.73±0.32)、(0.38 ±0.17) μg/L]均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);TMZ组与对照组比较,可显著降低心肌组织内VCAM-1(4.571 2±1.121 3比6.203 5±1.451 3)的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TMZ可通过限制再灌注损伤中炎性反应保护大鼠缺血再灌注损伤心肌.
作者：文冰；韩辉；焦周阳；刘超；夏冰；赵文增 刊期： 2014年第03期
CXC趋化因子配体14(CXCL14)作为趋化因子CXC子家族的一员,普遍存在于人体正常组织,有提供维持机体稳态的作用,但在各类实体肿瘤中表达高低不一[1-2].本研究旨在观察CXCL14在胃癌中的表达,并探讨其机制.一、材料与方法1.材料:Trizol试剂(Invitrogen公司);逆转录酶、SYBR Green试剂(Toyobo 公司);CXCL14多克隆抗体(Abcam公司);二步法免疫组织化学检测试剂、二氨基联苯胺(DAB)试剂(北京中杉金桥公司);DNA Methylation-Gold试剂盒(ZYMO公司);引物、测序(上海生工公司).
作者：胡畅远；沈贤；薛向阳；庞文洋；陈文静；张丽芳；朱冠保 刊期： 2014年第03期
目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默垂体瘤转化基因(PTTG)对原代培养的人泌乳素型垂体瘤细胞(HPAs)生长的影响.方法 原代培养人泌乳素型垂体腺瘤细胞,稳定传代后分为3组:空白对照组、阴性对照组、siRNA-PTTG转染组,转染48 h后细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测定PTTG mRNA、蛋白的表达;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)试剂盒检测Caspase-3的活性;放射免疫法测定各组细胞上清中泌乳素的水平.结果 与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA-PlTG转染组HPAs细胞PTTG mRNA和蛋白表达明显下调,细胞增殖受到抑制[阴性对照组、转染组抑制率分别为(3.02±1.77)％、(25.38±0.11)％,P＜0.05],凋亡明显增多[3组凋亡率分别为:(6.21±2.36)％、(7.23±3.56)％、(32.33±5.69)％,P＜0.05],Caspase-3活性增加(P＜0.05);放射免疫法显示siRNA-PTTG转染组上清中泌乳素分泌水平下降,为空白对照组的32.9％ (P ＜0.05).结论 下调PTTG基因可抑制人泌乳素型垂体瘤细胞生长,促进其凋亡,从而降低泌乳素分泌水平.
作者：刘晓东；苗旺；王宏勤；赵艳；张秀峰；范益民 刊期： 2014年第03期
目的 分离培养前列腺癌相关成纤维细胞(CAF)及正常成纤维细胞(NPF),探讨两者生物学差异.方法 用Percoll技术分离培养CAF及NPF细胞,用免疫荧光法检测上皮细胞标志物(Pan-CK),成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和平滑肌细胞标志物平滑肌肌动蛋白(SMA);用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长能力;用软琼脂糖实验检测两种细胞诱导良性细胞BPH-1恶变.结果 CAF与NPF细胞形态相似,均高表达Vimentin,不表达Pan-CK,CAF细胞高表达SMA.CAF细胞生长速度快于NPF细胞,第4天吸光度值分别为0.98 ±0.07、0.74±0.04,P＜0.05;第6天吸光度值分别为2.06±0.13、1.59±0.14(P ＜0.05),且能诱导BPH-1恶性变.结论 CAF细胞高表达SMA,增殖能力强,能促进前列腺良性细胞恶性变.
作者：于胜强；王科；杨典东；王健涛；李光磊；高振利 刊期： 2014年第03期
骨肉瘤靶向治疗方法较多,机制各异[1].我们通过席弗碱原理(西佛碱),以亲骨性药物——阿仑膦酸钠(ALN)为骨导向部分,制备骨靶向药物表阿霉素(EPI)-氧化葡聚糖-ALN聚合物,探讨亲骨性药物在骨肉瘤靶向治疗中的作用及机制.一、材料和方法1.材料:ALN、EPI、葡聚糖T-40、高碘酸钠、钼酸铵、截流相对分子质量3 500的透析袋、葡聚糖凝胶G-50、葡聚糖标样(Dex).
作者：田大为；刘娜；余黎；吴斌；胡超；蔡林 刊期： 2014年第03期
手术切除气管成人若超过全长50％(即超过6 cm)、儿童超过全长30％时,端端吻合困难,须植入气管替代物才能重建气道[1].由于供应气管的血管纤细且呈节段性分布,使得气管无法通过显微外科技术直接进行血管吻合.气管移植亦多因血供问题而终导致失败,严重制约了气管外科的发展[2].干细胞定位到靶组织后,在体内微环境的特异信号作用下,能定向分化成组织所需的细胞类型[3];或者通过模拟体内环境,在体外实现干细胞的定向诱导分化,这为干细胞治疗疾病提供了理论基础[4].骨髓单个核细胞(BM-MNCs)包括造血干细胞、间充质干细胞(MSCs)、内皮祖细胞(EPCs)、中胚层来源细胞等多种分化潜能的细胞群,且具有容易采集、操作简单和低免疫排斥反应等优点,因而目前干细胞临床应用较多的仍以自体骨髓和外周血单个核细胞为主[3-4].
作者：潘枢；孙飞；史宏灿 刊期： 2014年第03期
目的 探讨膜联蛋白A2在结直肠癌中的磷酸化水平及其与临床病理特征及肿瘤预后的相关性.方法 分析2006年8月至2007年7月在第二军医大学附属长海医院肛肠外科进行治疗的183例散发性结直肠癌患者的临床及随访资料.建立患者肿瘤标本组织芯片,对磷酸化膜联蛋白A2的水平进行免疫组织化学检测并对结果进行统计分析.结果 肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2的水平高于非恶性的对照组织(P＜0.01).患者肿瘤组织中较高的磷酸化膜联蛋白A2水平与T分期(P＜0.01)、N分期(P＜0.05)、肝转移(P＜0.01)、TNM分期(P＜0.01)、Duke分期(P＜0.01)、复发(P＜0.01)、肿瘤致死(P＜0.05)密切相关.生存曲线分析显示肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2水平较低的患者其未复发率(P＜0.01)和总体生存率(P＜0.05)均高于磷酸化膜联蛋白A2水平较高的患者.多因素分析显示肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2的水平可以作为衡量患者未复发率(P＜0.05)和总体生存率(P＜0.05)的独立因素.结论 结直肠癌患者肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2的水平与肿瘤分期和临床特征密切相关.
作者：郝立强；傅传刚；薛赓；洪永刚；张艳 刊期： 2014年第03期
实验外科是外科学的重要组成部分、外科学发展的技术先导和理论依据.而在许多外科医生的潜意识中,实验外科带有浓厚的“动物外科”、“实验室外科”和“基础研究”的色彩,这种意识,圈禁了实验外科的发展.究其原因,这种认识有着历史的背景,前两者(即“动物外科”和“实验室外科”意识)多半来源于20世纪实验外科的主体对象,乃至实验外科的起源,后者(即“基础研究”)则与近年来实验外科的导向不无关系.随着医学的发展,外科学也随之进步,传统的实验医学或实验外科正在凸显出其内核与真谛.
作者：龚建平；杨镇；吴在德 刊期： 2014年第03期
目的 检测大肠腺癌中肺癌肿瘤抑制因子-1(TSLC-1)的表达及其基因的甲基化状态,探讨其临床意义.方法 用免疫组织化学Envision二步法检测大肠癌组织中TSLC-1蛋白的表达,分析其表达与临床病理参数和预后的相关性,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测TSLC-1基因的甲基化状态.结果 癌旁正常肠黏膜与大肠腺癌的TSCL-1表达阳性率分别为100％(20/20)和 41.51％ (22/53),差异有统计学意义(P＜0.05).大肠腺癌中,TSLC-1表达阴性组具有更高的淋巴结转移率和临床分期(P ＜0.05);TSLC-1表达阴性组的平均生存时间为32.22个月,明显低于TSLC-1表达阳性组(平均生存时间为47.55个月,P＜0.05);TSLC-1表达阴性组中TSLC-1基因的甲基化检出率为41.94％(13/31),明显高于TSLC-1表达阳性组[9.09％(2/22)]及癌旁正常黏膜组[5.00％ (1/20),P＜0.05].结论 TSLC-1在大肠腺癌中表达下降,对预后的判断具有重要的参考价值,其基因的甲基化可能是大肠腺癌TSLC-1表达下调的重要机制.
作者：刘剑；顾栋桦 刊期： 2014年第03期
目的 分析影响脑胶质瘤患者复发的因素.方法 采用聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学法分别检测肿瘤精子蛋白32前体(OY-TES-1) mRNA和蛋白表达.采用Cox比例风险回归模型分析影响胶质瘤复发的因素.结果 复发性脑胶质瘤OY-TES-1 mRNA阳性率为57.50％(46/80),OY-TES-1蛋白阳性表达率为33.75％ (27/80).多困素分析显示首次病理级别和OY-TES-1 mRNA表达水平是影响胶质瘤复发时间的独立预后因素.结论 检测OY-TES-1 mRNA有助于检测胶质瘤复发时间.
作者：严峻；卢桂花；阮玉山；廖兴胜；罗昱；肖绍文 刊期： 2014年第03期
目的 应用基因芯片技术检测颞叶癫痫大鼠与正常大鼠海马的基因表达差异,从基因水平探讨癫痫的发病机制.方法 应用立体定向技术建立大鼠颞叶癫痫模型,行电生理及超微结构检测.提取大鼠海马RNA,进行基因芯片杂交,获取芯片数据.对数据进行比较分析,获取差异表达的基因.按照基因功能分类方法,将差异基因进行功能分类.结果 癫痫大鼠模型的脑电及超微结构出现相应的异常改变.按癫痫组与对照组的基因转录产物表达比值＞1.50或＜0.67并且统计量＞2或＜-2为标准筛选,癫痫模型大鼠与正常大鼠比较,差异表达基因113个,其中上调基因46个,下调基因67个.这些差异基因涉及分子功能、生物学进程以及分子组成等功能.结论 基因芯片技术可筛选出癫痫大鼠模型制备前后的差异基因.对差异表达的基因进行分类,可为研究基因功能和传导通路提供基础,为癫痫的治疗提供指导方向.
作者：韩春雷；葛燕；孟凡刚；张建国；张凯；张鑫；史增敏 刊期： 2014年第03期
目的 探讨血浆心房钠尿肽(ANP)在游泳力竭小鼠分泌及其抗氧化作用机制.方法 对小鼠进行分组后,让其负重游泳,并检测小鼠力竭后血浆ANP、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)及乳酸脱氢酶(LDH)水平.结果 力竭组小鼠心脏LD为(1.69±0.29) mmol/g蛋白、LDH为(23.69±5.28) U/mg蛋白、ANP为(13.65±1.69)mg/L,显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).ANP对双氧水(H2O2)引起的心脏组织损伤具有保护作用,而LY83583阻断剂破坏该种保护作用,从而导致小鼠MDA水平增加,与ANP组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ANP对心脏具有一定的抗氧化作用,在一定程度上能保护心脏免受损伤,其释放途径主要是通过环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶C(PKC)信号传输途径实现.
作者：李廷武；徐敬 刊期： 2014年第03期
目的 观察超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心房组织中的表达,探讨伴发心房颤动的发生机制.方法 收集43例风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者(AF组),对照组为窦性心律患者(SR组),采用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、Western blot法和免疫组织化学法,检测风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织中HCN2 mRNA及蛋白的表达.结果 FQ-PCR结果显示AF组和SR组HCN2 mRNA表达量分别为0.70±0.14和0.39±0.08;而Western blot结果显示AF组和SR组HCN2蛋白表达量分别为0.52±0.19和0.21 ±0.12,AF组均明显高于SR组(P＜0.01);免疫组织化学结果显示AF组右心耳心肌细胞溶解、肥厚并广泛间质纤维化,且HCN2蛋白表达量明显高于SR组(P＜0.01).结论 HCN2在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心耳组织中表达明显上调,并参与其心房颤动的发生发展过程.
作者：刘文洲；周华富；孙宇；王俊龙；赵春鹤；冯旭 刊期： 2014年第03期
股骨近端防旋髓内钉(PFNA)和粗隆部伽马钉(TGN)渐渐地被应用于治疗股骨粗隆间骨折.我们应用Meta分析比较TGN和PFNA治疗股骨粗隆间骨折的手术效果和并发症的发生率,现报道如下.一、材料和方法1.材料:计算机检索Cochrane(2013年第3期)、PubMed(1978至2013年)、Medline(1966年1月至2013年10月)、中国生物医学文献数据库(CMB1978年1月至2013年10月)、中文学术期刊全文数据库(CNKI1989年1月至2013年10月)及相关文章的参考文献,并手工检索相关杂志及会议论文中未发表的文献.检索语种限制于英文和中文.
作者：张寅；张潇；周晓中 刊期： 2014年第03期
随着基础医学和技术的不断进步,细胞、分子、蛋白质、基因等不同层面的研究不断深入,对于胃疾病的认识也不断深入.新时代的胃外科医生不应该仅仅将精力集中于临床手术中,而应该时刻关注医学前沿进展,才能把握学科发展方向和趋势,顺应新世纪胃外科的发展潮流.
作者：秦新裕；刘凤林 刊期： 2014年第03期
目的 观察偶联西妥昔单抗(C225)的金纳米颗粒(AuNPs)对肺腺癌A549细胞株的作用,研究其对细胞功能以及相关蛋白的影响并探讨其分子机制.方法 应用浓度分别为1、10、100、500 mg/L的C225、偶联IgG的金纳米颗粒(IgG-AuNPs)、偶联C225的金纳米颗粒(C225-AuNPs)处理A549细胞,药物作用24、48 h后通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞抑制率;通过流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,通过Transwell小室法检测细胞迁移,Western blot检测表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白的表达变化.结果 C225-AuNPs对A549细胞株的抑制率呈剂量依赖性,当浓度达到100 mg/L时,大抑制率为28％,相对单用IgG-AuNPs和C225,C225-AuNPs显著抑制细胞增殖.100 mg/L的C225-AuNPs作用后A549细胞凋亡率为(27.40±3.54)％,明显高于相同浓度C225的(11.80±2.02)％以及IgG-AuNPs的(9.50±2.76)％;但是C225-AuNPs对细胞周期的影响并不明显;C225-AuNPs处理组后穿膜细胞数目为(94±9)个,与C225组[(155±12)个]以及IgG-AuNPs组[(136±15)个]比较明显减少;通过Western blot检测经过C225-AuNPs处理后p-AKt、p-ERK以及bcl-2蛋白的表达量较C225以及IgG-AuNPs组明显下调.结论 C225-AuNPs显著抑制A549细胞增殖、迁移,促进凋亡,增强A549细胞对C225单抗的敏感性.
作者：钱亦淳；任斌辉；田艳艳；张帅；王洁；张宇；顾宁；尹荣；许林 刊期： 2014年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
