彭静；郭晶晶；敖翔；周天骏；王梅；李钰泉；张惠忠
目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝癌中的表达及与肝癌侵袭转移的关系.方法 收集非肝癌的肝脏组织15例,肝癌并伴门静脉转移的癌组织30例,按病理分化程度分为3组:低分化组、中分化组和高分化组.采取逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌组织中α-SMAmRNA的表达和免疫组织化学的方法检测α-SMA在癌组织及门静脉癌栓组织的表达.结果 RT-PCR结果显示α-SMA在所有肝癌组织中均呈阳性表达；免疫组织化学显示α-SMA在对照肝脏、肝癌组织和门脉癌栓组织的表达值分别为125.69±29.17、187.43±17.66、218.70±13.52,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P＜0.01),门脉癌栓组表达高；按照肝脏病理分为3组:低分化组、中分化组和高分化组,表达值分别为237.14±25.83、190.57±19.90、165.67±22.64,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P＜0.01),在低分化组表达高.结论 α-SMA在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组及低分化组,与肝癌的侵袭、转移有关.
作者：潘延凤；陶丰宝；王永刚；兰超；冯磊；张贤强 刊期： 2012年第03期
目的 检测犬门静脉压力与胃黏膜原位末端标记(TUNEL)染色测凋亡指数(AI值)及多克隆抗体Caspase-3行免疫组织化学计算各染色强度细胞评分总和(H值),探讨门静脉压力与门静脉高压性胃病( PHG)的相关性.方法 本地杂种犬32条,采用一期门静脉缩窄法制备犬门静脉高压症动物模型,术中及术后14周后开腹测量门静脉压力及取胃组织标本,测胃黏膜AI值及H值.结果 术后14周门静脉压力和AI值行直线回归分析得回归系数b=0.5799,常数项a=3.3064,两者呈正线性相关(r=0.8079,P＜0.01).术后14周门静脉压力和H值行直线回归计算得回归系数b=2.6277,常数项a=6.7828.相关分析得相关系数r=0.7960,P＜0.01,可以认为两者呈正线性相关.结论 PHG与门静脉压力呈正线性相关,治疗PHG的关键在于降低门静脉压力.
作者：戴向华；龚卫东；丁浩；盛宝军；朱美琴 刊期： 2012年第03期
目的 探讨新的长链非编码RNA(lncRNA) UC001 kfo在肝癌中的表达及与肝癌侵袭、转移的关系.方法 收集肝脏组织60例,分为肝硬化组、肝癌组、癌旁组、门静脉转移肝癌组.原位杂交检测UC001 kfo和ACTA2(α-平滑肌肌动蛋白的基因)在肝癌组织的表达.结果 UC001kfo在肝硬化组不表达或低表达,在其他3组均为阳性表达,以上4组的表达值分别为113.30±11.79、137.59±6.23、148.78±8.23、160.28 ±9.47,方差分析显示UC001kfo表达差异有统计学意义(P＜0.01),4组间的差异有统计学意义(P＜0.01),分别为肝硬化组＜癌旁组织＜肝癌组＜门脉癌栓组.ACTA2的表达分别为109.89±9.74、125.22±32.16、149.06±8.43、156.57±8.86,ACTA2表达差异有统计学意义(P＜0.01),4组间差异有统计学意义(P＜0.05),表达分别为肝硬化组＜癌旁组织＜肝癌组＜门脉癌栓组.结论 UC001 kfo和ACTA2在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组,UC001kfo可能通过调控ACTA2的表达促进肝癌的侵袭转移.
作者：潘延凤；娄海山；余祖江；张贤强；冯磊；梁红霞 刊期： 2012年第03期
小肝癌(病理证实原发性肝癌,肿瘤直径≤5 cm).手术切除仍然是首选临床治疗手段.我院2002至2010年共收治75例符合小肝癌诊断标准,对75例小肝癌均实施手术切除,现报道如下.
作者：过欣来；丁涵之；黄金鑫；靳晓丽；丛壮志；王圣刚；魏军；朱哲；杨永康；钟明安；所广军；尤天庚；赵中辛 刊期： 2012年第03期
目的 构建肝癌相关蛋白FAM172A2的原核表达载体,诱导融合蛋白的表达,并对其进行纯化；制备兔抗FAM172A2蛋白多克隆抗体并进行鉴定.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以HepG2细胞总RNA为模板,扩增FAM172A2目的基因片段1113bp,构建原核表达载体,Western blot分析证实融合蛋白表达的特异性.诱导其大量表达后纯化、复性并制备多克隆抗体,Western blot及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性及其效价.结果 扩增获得FAM172A2基因片段,成功诱导FAM172A2融合蛋白表达并制备其多克隆抗体.ELISA检测证实其效价＞1∶160000,且特异性良好.结论 利用大肠埃希菌BL21( DE3)能够成功表达FAM172A2蛋白,获得高特异性、高效价兔抗FAM172A2蛋白的多克隆抗体.
作者：冯志强；张洪义；肖梅；黄志强；王燕生 刊期： 2012年第03期
目的 探讨脂肪基质干细胞(ADSCs)诱导分化为巢蛋白(nestin)阳性的神经干细胞(NSCs)后移植治疗帕金森病(PD)大鼠模型的疗效及作用机制.方法 将大鼠随机分为对照组(正常大鼠16只)、生理盐水组(成功的PD模型大鼠22只)、细胞移植组(成功的PD模型大鼠22只).溴尿嘧啶(BrdU)标记NSCs( 1.2×106个/只),生理盐水12μl分别注入模型鼠右侧纹状体,在干预后2、4、8周分别观察行为学变化；脑冰冻切片免疫荧光染色检测双标细胞；8周时,免疫组织化学法检测脑纹状体区酪氨酸羟化酶(TH)数量变化；RT-PCR检测脑内TH mRNA的表达；高效液相色谱法检测脑内多巴胺(DA)的含量.结果 ADSCs可定向诱导表达nestin的NSCs；细胞移植干预后4周(29±7)r、8周(21 ±4)r,PD大鼠行为学得到明显改善；在纹状体移植区可见BrdU/nestin、BrdU/NF-200、BrdU/GFAP双标的神经细胞,但未发现明显的BrdU/TH双标的细胞；脑内TH数量[(17.70±4.61)个/视野]、TH mRNA (2.79±0.40)及DA[ (25.60±0.79) μg/g]含量都有所增加.结论 脂肪源性的NSCs移植治疗PD大鼠可以有效改善行为学症状.
作者：高华；王玉玲；杨新玲 刊期： 2012年第03期
目的 建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应(PCR) TLR4检测方法,构建标准曲线,并测定小干扰RNA( siRNA)沉默TLR4的效率.方法 设计TLR4 qPCR扩增引物,以SYBRGreen qPCR master mix,95℃15min,95℃15s,60℃ 1min 50个循环进行扩增,同时1:4稀释阳性对照,构建标准曲线.以65℃为起点,0.5℃为阶梯逐步增加至95℃,于每个温度点测定荧光强度,获得熔解曲线.LipofectamineTM 2000介导不同浓度的siRNA(60、80、100 nmol/L)转染SW480细胞6h后撤除.分别于24、48 h后,使用qPCR检测TLR4 mRNA水平表达变化.结果 (1)SYBR Green定量检测TLR4扩增曲线呈典型S型动力学曲线,扩增效率为100.9％,熔解曲线成单峰,熔解温度为81.5℃.(2) siRNA在24h、80 nmol/L时,TLR4 Ct值为27.72,较未干扰组(25.96)明显增加.(3)琼脂糖凝胶电泳显示转染组(24h、80 nmol/L)在PCR扩增28个循环时不能被检出,而阳性对照则扩增条带清晰.结论 (1) qPCR检测TLR4方法稳定,结果可靠.(2) siRNA浓度80 nmol/L,可对肠癌SW480细胞的TLR4 24 h时的表达水平明显抑制.
作者：张燕；江波；张婷；茆勇；高翔；华东 刊期： 2012年第03期
为研究Claudin-7在机体中的功能[1],我们建成Claudin-7基因敲除小鼠模型并分析其特点.一、材料与方法1.材料:利用DNA同源重组技术建立基因敲除小鼠,SPF级动物房饲养,兔抗COX-2、P-Histone H3多抗(cell signaling,USA),兔抗Claudin-7多抗购自日本IBL公司;鼠抗GAPDH单抗购自美国Calbiochem公司;抗兔和抗鼠辣根过氧化酶标记的二抗购自美国Promega公司.
作者：丁磊；高宏；于海蛟；朱昱冰；陈奕至 刊期： 2012年第03期
目的 筛查动脉粥样硬化闭塞症( ASO)血管重建术后再狭窄相关miRNA基因表达谱,分析并鉴定表达差异显著的miRNA及其潜在靶基因.方法 取下肢ASO患者股动脉标本6例,3例未行血管重建术(A组),3例动脉重建术后再狭窄(R组),另取正常股动脉3例为正常对照(N组).利用miRNA基因芯片检测miRNA差异表达谱,以实时逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)验证其表达,并通过构建双荧光素酶报告基因系统鉴定预测靶基因.结果 与N组比较,病变组(A组+R组)miRNA-1和miRNA-335表达下调,没有miRNA表达上调；R组miRNA-623表达上调,17个miRNAs下调；A组miRNA-1和miRNA-335表达下调,没有miRNA表达上调.与A组比较,R组17个miRNAs上调,9个miRNAs下调.表达下调以miRNA-1显著,并经real-time RT-PCR证实(P＜0.05).双荧光素酶实验证实miRNA-1靶向抑制Kruppel样因子4(KLF4)的表达(P＜0.05).结论 miRNA可能参与ASO及动脉重建术后再狭窄的发病机制,其中miRNA-1可能起重要作用.
作者：张亦；黄英；李维敏；陆信武；黄新天；陆民；蒋米尔 刊期： 2012年第03期
目的 构建和筛选靶向阿片受体(MOR)基因外显子7(exon-7)的有效干扰的mRNA质粒载体.方法 构建方法:针对阿片受体基因外显子7的目标序列,设计并分别合成短发夹RNA(shRNA)寡核苷酸序列4条(exon-71、exon-72、exon-73、exon-74),退火形成双链DNA,稀释退火片段分别与线性化pGenesil-1.1质粒表达载体的连接,取连接产物转化感受态细胞DH5α,培养过夜后提取质粒,并分别用Sac I作酶切鉴定,同时送转化菌液去测序.筛选方法:提取质粒与含阿片受体基因的CHO-K1细胞在细胞培养箱中培养24、48、72 h后分别收集各细胞样品作RNA的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 质粒酶切鉴定结果,在插入的目的基因片段里,我们分别设计了1个Sac I的酶切位点,面质粒pGenesil-1.1有1个Sac I的酶切位点,如若插入正确,质粒就能被Sac I酶切出1条约916 bp的DNA小带.经酶切鉴定分析:质粒exon-71、exon-72、exon-73、exon-74均可切出1条约916bp的DNA小带.测序结果显示与设计片段相符.4组shRNA在与CHO-K1细胞培养72 h后的MOR-1 C1 mRNA相对含量为94％、33％、88％、91％,仅exon-72组的MOR-1C1 mRNA相对含量小于50％,对exon-7 mRNA的表达有明显抑制作用.结论 成功构建1条阿片受体基因外显子7的mRNA的载体.
作者：陈锋；郑文忠；张宗泽；彭勉；王焱林 刊期： 2012年第03期
目的 构建人肠凝集素-1( ITLN-1)基因的真核表达载体,观察其在胃癌细胞中的表达.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增ITLN-1 cDNA,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1,测序鉴定；在脂质体的介导下,重组质粒瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901 72 h后,Western blot法检测细胞培养上清中ITLN-1表达,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、Transwell小室实验检测癌细胞增殖、侵袭活性.结果 真核表达载体pEGFP-ITLN-1转染SGC-7901细胞72 h后,ITLN-1 蛋白表达上调5.72倍(P＜0.01),细胞增殖活性降低52.8％ (P＜ 0.01),细胞侵袭能力下调58.1％ (P＜0.01).结论 成功构建人ITLN-1真核表达载体,转染胃癌细胞过表达后,能抑制癌细胞的增殖和侵袭活性.
作者：齐盟；张桓瑜；郑丽端；戚腾；童强松 刊期： 2012年第03期
目的 观察Zn2+改性羧甲基纤维素( Zn2+ -SCMC)对术后腹腔粘连的预防作用.方法 将90只大鼠随机分为A、B、C3组,每组各30只.先行均制作肠粘连模型,取A组腹腔内不放药物,B、C组于腹腔内损伤部位分别置入3ml、浓度3％的羧甲基纤维素(SCMC)及3ml、浓度3％的Zn2+ -SCMC,术后10d处死大鼠,观察各组腹腔粘连情况.结果 大鼠肠壁组织病理:A组纤维细胞增生明显,胶原纤维排列致密；B组纤维细胞增生较明显,胶原纤维排列略密；C组纤维细胞增生较轻,胶原纤维排列较疏松.术后10d腹腔内粘连情况:C组腹腔内轻微粘连,粘连发生率44.8％,B组中度粘连,粘连发生率80.0％,A组广泛粘连,致密,粘连发生率100.0％.A组Ⅲ～Ⅳ级粘连多为17只,B组Ⅱ级粘连多12只,C组0级粘连多16只,C组粘连分级较B组、A组明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Zn2+ -SCMC能明显减轻术后腹腔粘连程度,其作用优于SCMC.
作者：刘国辉；刘莉；伦志军；王广义 刊期： 2012年第03期
目的 观察丁酸钠(NaB)对干扰素-γ(IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响.方法 利用低浓度(10、20、30、40 mmol/L)的NaB作用于人肝癌细胞HepG2 24 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖；利用蛋白印迹法及细胞免疫化学法检测NaB对HepG2细胞内IDO表达的影响;蛋白印迹法检测NaB对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1 (IRF-1)及信号转导和转录激活因子1(STAT1)的影响.结果 低浓度NaB对人肝癌细胞HepG2的增殖具有1％～20％的抑制作用；3 mmol/L的NaB能完全抑制IFN-γ诱导的IDO的表达；这种抑制作用通过抑制STAT-1701位的酪氨酸磷酸化实现.结论 NaB通过抑制STAT1的磷酸化而抑制肝癌细胞HepG2中IDO的表达.
作者：侯敬申；赵莉；覃媛；张曼；黄劭 刊期： 2012年第03期
临床上腹膜后肿瘤侵犯下腔静脉(IVC)的临床报道较多[1],但难以在早期被发现,预后也极差.目前,临床上对恶性肿瘤侵犯肾静脉以上、以下下腔静脉处理原则、方式尚有争议[2].本研究旨在比较兔VX2肿瘤侵犯肾静脉以上和以下下腔静脉动物模型生物学特点.
作者：张元国；任为 刊期： 2012年第03期
CD28-B7和CD40-CD40L共刺激分子系统是T细胞依赖的免疫反应启动和维持所必不可少的基本信号系统.缺乏或阻断共刺激信号,将会引起T细胞的无反应性或细胞凋亡.我们用CTLA4Ig和CD40Ig双基因局部转染大鼠肾脏后进行异种移植,观察双基因局部共转染能否诱导移植肾免疫耐受.
作者：蔡曼波；吴艳平；罗志刚；李建军 刊期： 2012年第03期
目的 观察胃转流术(GBP)对糖尿病大鼠血糖的控制效果及胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的影响.方法 采用链脲佐菌素建立糖尿病SD大鼠模型20只,随机分为糖尿病手术组(DO组)和糖尿病对照组(DC组),另取20只非糖尿病大鼠随机分为正常对照组(NC组)和正常手术组(NO组).分别检测各组大鼠术前、术后72 h、1周、4周和8周空腹血糖水平以及血清GLP-1浓度.结果 术前DO组与DC组以及NC组与NO组大鼠空腹血糖之间的比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；DO组大鼠术后空腹血糖进行性下降,术后8周由术前的(20.84±1.98) mmol/L下降到(5.56±0.11) mmol/L(P＜0.05)；DC组大鼠术前及术后各时相的差异无统计学意义(P＞0.05).DO组和NO组大鼠术后血清GLP-1浓度出现明显升高(P＜0.05),术后8周分别由术前的(7.10±0.55)、(10.73 ±0.67) pmol/L上升到(26.48±1.14)、(13.98±0.92) pmol/L(P＜0.05).结论 GBP对2型糖尿病大鼠具有明显的降糖作用,GLP-1的升高在其中起着重要作用,但对正常大鼠血糖无影响.
作者：郑志坚；史逸华；宋军；戴灵波；江玲雅 刊期： 2012年第03期
颅脑损伤是一类临床常见的疾病和疾病的并发症.近年来,脑损伤的特异性生化标志物的研究得到了临床医生和研究人员越来越多的关注.这些指标对于及时诊断、早期判断病情、评估预后及调整治疗方案等方面有着重要临床意义.其中星形胶质源性蛋白(S100B)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP-1)是目前研究较多的几种.
作者：王广斌；季泰令 刊期： 2012年第03期
目的 探讨精索静脉曲张大鼠干细胞因子(SCF)的变化和意义.方法 将清洁级雄性SD大鼠20只喂养1周后,随机取10只应用左肾静脉部分结扎法进行造模,设为模型组；另外10只行左肾静脉分离后不结扎,设为假手术组.两组均于60d后处死大鼠,检测血清SCF、睾丸组织SCF及附睾精子的密度和活率.结果 模型组睾丸组织SCF为(654.6±30.5)ng/L,与假手术组(382.8±25.6) ng/L比较明显升高(P＜0.05)；两组血清SCF比较差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠附睾精子密度为(2.36±1.58),与假手术组(4.07±1.40)比较明显降低(P＜0.05),两组大鼠精子活率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 检测睾丸组织SCF有助于判断生精细胞损伤.
作者：张轶乐；韩兆峰；刘建荣 刊期： 2012年第03期
目的 观察化疗前后不同时期胶质瘤组织中毛细血管扩张性共济失调突变基因( ATM)表达变化.方法 利用人胶质瘤U251细胞裸鼠皮下异位移植制作胶质瘤化疗模型,通过顺铂对荷瘤裸鼠进行化疗(每天5 mg/kg,连续腹腔注射4d),建立胶质瘤化疗和化疗后复发模型.利用功能分类基因芯片系统检测化疗前后不同时期胶质瘤组织中ATM的表达,并利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法进行验证.结果 ATM在化疗前后不同时期表达出现明显变化,化疗结束时ATM相对表达量较化疗前明显上调(27.96±14.78比1.00±0.00,P＜0.01),在化疗后肿瘤消退至小时ATM表达又明显下调(4.40±3.41,P＜0.05),然而在胶质瘤复发时其表达再次明显上调(30.15±7.02,P＜0.01),定量RT-PCR和免疫组织化学结果与此一致.结论 化疗前后不同时期胶质瘤组织中ATM的表达呈动态变化并存在时间窗口特征.
作者：甄世明；杨丽娟；胡胜利；林志雄 刊期： 2012年第03期
胃肠道间质肿瘤(GIST)是位于胃肠道或腹腔内的表达KIT(CD117)蛋白的间叶源性肿瘤,大多数存在KIT和血小板源性生长因子受体α-多肽(PDGFRA)基因的突变[1].伊马替尼(Imatinib)是一种口服的ATP的竞争性抑制剂,能竞争性地结合于KIT酪氨酸激酶功能区的ATP结合位点,从而阻断了失控的信号传导通路,因此目前已成为治疗GIST的标准药物.然而一般在Imatinib平均治疗24个月后,将产生继发性耐药.关于Imatinib耐药(包括原发和继发)的机制还不是很清楚.目前认为Imatinib发生耐药的大可能是由于KIT和PDGFRA基因的继发突变导致Imatinib耐药性克隆的出现.我们通过建立Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系,并对其进行生物学特征的初步探讨,明确其耐药的可能机制,探讨GIST发生耐药后的分子改变事件,为GIST的靶向治疗寻找新的分子靶点.
作者：郑松；王昊；冷建杭；童文娟；陶德友；潘月龙 刊期： 2012年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
