目的 观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达以及调节性T细胞(Treg)数量在胰腺癌荷瘤鼠中的变化,并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 建立小鼠胰腺癌模型,荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot分析肿瘤组织周嗣引流淋巴结(TDLNs)IDO表达水平;并利用流式细胞术检测荷瘤鼠TDLNs及脾脏中CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T比例;荧光定虽PCR测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平.结果 胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO在mRNA(1.670±0.099比1.123±0.243),蛋白表达水平(1.401±0.079比0.872±0.193),高于正常对照组.差异均有统计学意义(P<0.05);荷瘤鼠和脾细胞中CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T细胞的比例明显高于对照鼠[TDLNs分别为(25.00±2.16)%和(11.02±1.31)%,P<0.05;脾脏分别为(22.14±2.33)%和(12.11±0.93)%,P<0.05];荷瘤鼠Foxp3 mRNA表达水平显著高于对照鼠,荷瘤鼠分别为:TDLNs 3.427±0.164、脾细胞2.098±0.112,而对照鼠分为:0.933±0.253、1.137±0.343(P<0.05).结论 胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结IDO表达明显增高,且TDLNs及脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞的数量增加.
作者： 刊期： 2009年第11期
我们采用改良Inaba法从骨髓前体细胞中诱导、扩增树突状细胞(DC),并对其根据形态和表型特征进行鉴定.一、材料与方法1.实验动物:6～8周龄雄性C57BL/6小鼠购自武汉大学实验动物中心,合格证号鄂00001292.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察肉桂提出物甲基查尔斯多酮(MHCP)对糖尿病肾损害的作用.方法 单侧肾切除并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型,随机分为3组,然后灌胃给药12周,测定血管内皮细胞生成因子(VEGF)、Ⅳ胶原(Collogen Ⅳ)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)等指标,并观察大鼠肾脏的组织形态学变化.结果 MHCP能够部分降低VEGF(平均相对吸光度为25.3%)、IRS-1(平均相对吸光度为189.5%)的表达,增强大鼠肾脏皮质抗氧化的物质的活性.结论 MHCP能够通过提高IRS-1活性增加机体对胰岛素的敏感性、减轻胰岛素抵抗,控制血糖、减少氧化应激和改善内皮细胞功能来减轻糖尿病肾损害.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察缺血再灌注损伤(IRI)对小鼠肾脏mir-210及其靶基因Ephrin-A3表达的影响.方法 将10只成年昆明雌鼠随机分为缺血再灌注组(IR)、假手术组(Sham),每组5只.IR组完全阻断双肾蒂40 min后恢复血流,Sham组暴露左右双肾40 min后关闭腹腔.每组在手术4 h后取肾组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测mir-210表达水平;RT-PCR和酶标免疫组织化学染色法检测Ephrin-A3基因和蛋白的表达情况.结果 IR组miR-210表达水平明显上升(P<0.05).因miR-210对靶基因Ephrin-A3的负向调节作用,PCR结果显示IR组Ephrin-A3基因表达水平明显高于Sham组(P<0.01).Ephrin-A3蛋白主要表达在肾小管上皮细胞胞质中,Sham组Ephrin-A3蛋白表达水平较IR组明显升高(P<0.01).结论 肾缺血再灌注损伤明显影响miR-210及其靶基因Ephrin-A3的表达,miR-210表达的变化可能与肾缺血再灌注损伤的修复有关.
作者： 刊期： 2009年第11期
心脏外科是一门比较年轻的学科,但发展快、潜力大,临床经验的不断积累和实践水平快速提高的同时,实验研究领域也不断深入和延伸.重视心脏外科的实验研究,将推动有潜力的基础实验研究成果向外科临床实践的转化.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 诱导分化骨髓间充质干细胞(BMSC)及内皮祖细胞(EPC),进行BMSC及EPC作为组织工程瓣膜(TEHV)种子细胞的对比.方法 分离扩增BMSC及EPC,分别定向诱导分化为内皮细胞,比较两种细胞在形态学、增殖能力、黏附力以及细胞冻存和复苏率方面的特点与区别.结果 光镜下,两种细胞均为贴壁生长细胞,BMSC的形态为梭形或多角型,EPC的形态为圆形及不规则形状,第2代诱导的BMSCs、EPCs的倍增时间分别为34 h和35 h,诱导后的BMSC冻存和复苏率以及黏附力与EPC之间差异无统计学意义;电镜示两种细胞均能够种植在去细胞猪主动脉瓣上.免疫组织化学结果显示两种细胞种植后的瓣膜上均有间质细胞生长.结论 BMSC和EPC诱导后可分化为内皮细胞,两者之间差异无统计学意义,都是合适的TEHV种子细胞.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨降低脑死亡大鼠肾脏免疫原性的有效途径.方法 雄性Wistar大鼠30只,体质量180～200 g,随机均分3组,脑死亡+SB203580组:诱导大鼠脑死亡时,静脉注射SB203580(1 mg/100 g·Wt);脑死亡组:诱导大鼠脑死亡.脑死亡后机械呼吸6 h,如大鼠血压>80mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),取肾脏;对照组:正常大鼠麻醉后取肾脏.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾脏肿瘤坏死因子(TNF)-α仅和白细胞介素(IL)-1βmRNA表达,Western blot检测肾脏磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)以及TNF-α和IL-1β蛋白表达.结果 肾脏TNF-α和IL-1βmRNA和蛋白表达,以及磷酸化p38MAPK蛋白表达,脑死亡组比对照组显著增加(P<0.01);脑死亡+SB203580组比脑死亡组显著下降(P<0.05),但比对照组明显增加(P<0.01).结论 SB203580能阻断p38MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肾脏磷酸化p38MAPK和促炎细胞因子表达,可望成为降低其免疫原性的一条有效途径.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 GPI-B7-1蛋白转移修饰肝癌细胞膜,观察其对肿瘤细胞的免疫诱导效应.方法 GPI-B7-1和B7-1蛋白修饰肝癌细胞膜,流式法测定其CD80(B7-1)的表达,分离患者外周血T细胞,检测不同蛋白修饰的肝癌细胞膜对T淋巴细胞的致增殖效应及granzyme B、perforin、IFN-γmRNA表达的影响.结果 GPI-B7-1蛋白修饰肝癌细胞膜表面B7-1表达率为85%.GPI-B7-1蛋白修饰的肝癌细胞膜致T淋巴细胞的增殖程度显著强于对照组和B7-1蛋白修饰组(P<0.01);该作用源于其可上调肝癌外周血T淋巴细胞granzyme B、perforin及IFN-γ mRNA表达水平.结论 GPI-B7-1蛋白转移修饰的肝癌细胞膜可上调granzyme B、perforin及IFN-γ mRNA表达,激活T细胞增殖,促进杀伤性T细胞的效应.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 建立一种简单、稳定的大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)长期存活模型.方法 将84只健康SD大鼠随机分为2组:Ⅰ组为假手术组,Ⅱ组为肺缺血再灌注组(每组n=42只).两组分别于开胸后、缺血1 h后再灌注0、2、4h、1、3、7 d取肺组织行髓过氧化物酶(MPO)活性、肺湿干比(W/D ratio)检测和肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的电镜超微结构评价;取支气管肺泡灌洗液检测肺通透性指数(LPI).结果 手术成功率达100%.Ⅱ组与Ⅰ组比较,缺血再灌注后2、4 h、1 d的MPO、LPI、W/D比差异均有统计学意义(P<0.01),开胸后、再灌注后0 h、3、7 d两组比较差异无统计学意义(P>0.05).ATⅡ的超微结构显示,再灌注4 h后损伤严重,再灌注1 d即出现明显的修复过程,再灌注7 d基本恢复正常结构水平.结论 本模型简单、可靠,LIRI后相关肺损伤指标和ATⅡ超微结构损伤变化特点吻合.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨缺血预处理(IPC)对大鼠减体积肝移植术后Akt生存信号通路的影响及意义.方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为2组:50%减体积肝移植组(Control组)和IPC组,Western blot检测肝组织总Akt和p-Akt及其下游的p-Bad和p-GSK3β蛋白水平,同时结合血清学和组织病理学分析Akt生存信号通路变化的意义.结果 与Control组比较,IPC组术后6、24 h丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著下降(6 h:1064.49±126.53比802.90±82.39;24 h:1401.13±172.73比943.80±116.25,P<0.01);Control组术后24 h,肝细胞明显空泡样变性伴局部坏死,小叶结构破坏,门脉周围水肿、充血,炎症细胞浸润明显,而IPC组损伤减轻;Western blot结果显示:与Control组比较,IPC组术后2、6、24 h肝组织中p-Akt、p-Bad、p-GSK3β蛋白水平上调.结论 IPC明显减轻减体积肝移植术后再灌注损伤,其机制可能与激活Akt生存信号通道密切相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 测定不同年龄组颈椎椎间盘中的蛋白多糖酶活性,探讨蛋白多糖酶活性与年龄之间的相关性.方法 对40个不同年龄颈椎间盘的蛋白多糖酶活性进行了测定,分别来自胎儿组、17～25岁组、40～60岁组以及60～75岁组,用含有10.0 mmol/L CaCl_2的0.05 mol/L Tris/HC对椎间盘中的蛋白多糖酶进行提取,用1 mmol/L APMA将其激活,与取自牛肩胛软骨的蛋白多糖单体底物进行反应,以酶标仪来测定蛋白多糖酶的活性.结果 胎儿组、17～25岁组、40～55岁组和60～75岁组颈椎间盘的蛋白多糖酶活性的吸光度值分别是1.911±0.21、0.881±0.155、1.720±0.19、1.777±0.142.胎儿组颈椎间盘与60～75岁组颈椎间盘的吸光度值高,两者之间差异无统计学意义(P>0.05),胎儿组与17～25岁组、40～55岁组颈椎间盘的吸光度值结果差异有统计学意义(P<0.05),17～25岁组的吸光度值低,与胎儿组、40～55岁组和60～75岁组的测得值差异有统计学意义(P<0.01),40～55岁组和60～75岁组的吸光度值差异无统计学意义(P>0.05).结论 颈椎间盘中的蛋白多糖酶活性与年龄明显相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
我们通过体外诱导节律基因Per2的过表达,观察Per2对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响;同时通过小鼠体内实验观察Per2对肿瘤生长的影响,探讨Per2表达对卵巢癌细胞的肿瘤抑制作用.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 利用基因表达谱芯片技术探讨E2F-1小分子干扰RNA(E2F-1-siRNA)影响胃癌细胞MGC803生物学行为的分子机制.方法 分别抽取E2F-1-siRNA转染组和对照组(negative control-siRNA)的细胞总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记cDNA探针,与含有21522条人类22k基因表达潜芯片进行杂交.采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析.结果 在21522条基因中,两组胃癌细胞间差异性表达基因为18条,其中上调基因8条,下调基因10条,下调的基因中有1条功能信息不明.结论 体外干扰E2F-1基因表达后,胃癌MGC803细胞生物学行为的变化是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果,其中的关键基因和信号传导通路值得进一步研究.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 建立体外获得唾液酸化路易斯抗原X(SLeX)ssDNA适配子(aptamers)的方法.方法 构建长度为70 nt的初始随机单链DNA库,其中含30个随机序列,以溴化氰活化的琼脂糖小球为筛选介质,运用指数富集配体的系统进化技术(SELEX技术)获得SLeX的ssDNA适配子.将适配子库克隆、测序,采用DNAMAN软件对其结构进行分析,通过生物素-亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定适配子与SLeX的亲和力.结果 经逐轮筛选,所得富集库与SLeX的亲和力逐步提高(A值从0.145增加到了0.460),大部分适配子克隆测序后与预期相符.结论 经9轮筛选获得的ssDNA适配子与SLeX的体外结合有高度的特异性及亲和力.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察模拟舱室爆炸伤后肺部损伤特点及炎症早期发展的动态规律.方法 采用模拟舱室、开阔地以600 mg雷管电起爆致伤清醒大鼠,在伤前、后1、3、5、8、12、24、72 h观察肺损伤并检测白细胞介素(IL)-1β,肿瘤坏死因子(TNF)-α水平.结果 舱室与开阔地均压值无差异,但舱室冲击波压力波持续时14.0 ms、峰压力上升时间0.06 ms显著高于开阔地爆炸冲击波(P<0.01);大鼠肺损伤评分及病理特征明显重于开阔地(P<0.01),其中8 h舱室肺伤情评估均值高为34.33;IL-1β、TNF-α浓度明显升高,且分别在8 h和12 h达到峰值(P<0.01),伤后72 h仍高于对应开阔地血浆浓度.结论 舱室爆炸伤为复杂冲击波,肺伤情较开阔地严重,与IL-1β和TNF-α浓度正相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 以4种不同载体材料和骨髓基质干细胞(BMSC)复合培养,观察不同载体材料的体外生物相容性.方法 将密度为2×10~5个/ml的BMSC与纳米相羟基磷灰石胶原复合材料(NHAC)、可注射性纳米相羟基磷灰石胶原复合材料(INHAC)、非纳米相羟基磷灰石胶原复合材料(HAC)、珊瑚羟基磷灰石(CHA)体外与BMSC复合培养,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,并行扫描电镜观察,进行形态学和功能测定.结果 细胞活度A值所绘制的生长曲线显示,BMSC的活性未受到NHAC、INHAC、CHA的影响,HAC组随培养时间的延长细胞活性逐渐下降,与其他组比较差异均有统计学意义(P<0.01).碱性磷酸酶活性测定:CHA组为2.207±0.079、NHAC组为2.225±0.059、INHAC组为2.194±0.088、HAC组为0.981±0.210、空白对照组为2.231±0.087,NHAC、INHAC、CHA与空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),和HAC组筹异均有统计学意义(P<0.01).扫描电镜观察可见,细胞能在NHAC、INHAC、CHA材料上良好地增殖、生长,而HAC不利于骨髓基质干细胞的黏附、增殖.结论 3种材料具有良好的生物相容性,可作为骨组织工程骨替代材料,HAC不适合做细胞载体材料.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察整合素连接激酶(ILK)在大鼠创面中的表达,探讨其在创面愈合中的作用及机制.方法 健康SD大鼠20只,随机选取16只建立浅Ⅱ度烫伤模型,4只作为正常对照,烫伤后第1、5、10、15天分别随机选取4只大鼠,运用免疫组织化学检测创面中ILK的表达.7例人正常皮肤成纤维细胞,转化生长因子(TGF)-β1组给予TGF-β1刺激72 h,同一细胞培养相同时间作为对照,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组ILK和纤维连接蛋白(Fn)的表达.结果 烫伤后第5、10天大鼠烫伤创面中ILK的表达显著高于正常皮肤和愈合后(第15天,P<0.05).TGF-β1组细胞中ILK和Fn mRNA表达均显著强于对照组(P<0.05);对照组ILK与Fn mRNA表达强度呈正相关(r=0.57).结论 ILK可能同时通过参与整合素和TGF-β1信号通路,在创面愈合过程中发挥一定作用.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织AQP4表达变化与脑水肿之间关系.方法 成年雄性SD大鼠48只制作颅脑损伤模型,术后6、12、24 h、3、7 d用于湿重法、免疫组织化学法分别测定水肿脑组织含水量及AQP4表达.结果 自伤后6 h,脑组织含水量开始增加(78.48±0.50)%,24 h达高峰(82.54±1.89)%,持续至3 d(80.61±0.49)%,然后开始下降,至7 d基本恢复到正常.组织学证实了脑水肿趋势.免疫组织化学显示水肿脑组织AQP4表达于伤后6 h开始增加(0.178±0.016),24 h达高峰(0.331±0.024),持续至3 d后下降(0.307±0.019),7 d仍高于假手术组;线性相关分析发现AQP4表达与脑含水量呈正相关(r=0.940,P<0.05).结论 AQP4表达上调可能在鼠液压冲击伤脑水肿的消散中起重要作用.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察短发夹RNA(shRNA)对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞磷酸二酯酶5型(PDE5)基因表达的抑制作用,探讨运用RNA干扰(RNAi)技术治疗勃起功能障碍(ED)的可行性.方法 构建靶向大鼠PDE5基因的shRNA重组腺病毒rAd-rPDE5-shRNA,将其转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞48 h后,通过荧光标签进行显微计数确定转染效率,并以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测PDE5基因的表达水平.结果 rAd-rPDE5-shRNA构建成功,转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞效率达95%以上,并使PDE5基因表达在mRNA水平抑制(80.78±2.30)%,在蛋白水平抑制(67.39±3.33)%.结论 以腺病毒为载体表达的shRNA能稳定、有效地抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5基因的表达.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 评价左旋聚乳酸(PLLA)和卵磷脂共混的新型复合材料的亲水性和细胞相容性,为血管组织工程(VTE)提供理想的支架材料.方法 采用溶液共混法制备了PLLA/0-15%卵磷脂(质量百分比例)的共混物膜,通过测定静态水接触角评价不同材料的亲水性;将大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)接种在不同材料上以研究其细胞相容性,MSCs的生长增殖能力通过噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶实验检测,细胞形态通过碘化丙锭(PI)染色和扫描电镜观察.结果 随着共混物膜中卵磷脂含量的提高,材料的亲水性能明显增加,MSCs在PLLA/5%卵磷脂共混物膜上增殖能力佳且该材料没有明显的细胞毒性.结论 PLLA/卵磷脂复合支架材料具有良好的亲水性和细胞相容性,可作为骨髓MSCs的理想的载体应用于血管组织工程.
作者： 刊期： 2009年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
