目的 观察高原不同海拔地区低氧应激对兔睾丸组织及生精的损害.方法 将平原兔12只随机分为4组,每组3只.A组为对照组,B、C、D组为平原兔在48 h内直接迁饲到海拔4320 m后,1、7、30 d组.随机将6只饲养在海拔2260 m高原兔分为2组,每组3只.E组为高原对照组,F组为高原兔24 h内迁饲到4320m后1 d.各组宰杀后行睾丸组织病理学观察.结果 从平原急进高原4320 m地区后,病理检查发现,睾丸组织内大部分曲细精管的各级生精细胞减少,以初级母细胞减少明显;精子细胞明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),睾丸间质内血管充血,间质细胞明显减少,无成堆现象.曲细精管内细胞计数C、D组分别为390.40±158.94、580.80±167.32,A组868.80±293.98(P<0.05).精子密度减少,C、D组分别为0.0027±0.0011、0.004±0.0017,A组0.006±0.002(P<0.05).曲细精管内生精细胞与支持细胞的比率降低,支持细胞计数A、B、C、D、E、F组分别为113、191、187、48、112、162.曲细精管内生殖细胞与支持细胞比率:A、B、C、D、E、F组分别为7.69、6.91、2.09、12.10、8.54、5.26,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 从平原急进高原地区可致兔睾丸组织受损,表现为各级生精细胞及间质细胞减少.当大气氧分压突然较大幅度降低时,不同大气压环境下生存的动物引起睾丸组织损害的病理组织学改变大致相同.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织AQP4表达变化与脑水肿之间关系.方法 成年雄性SD大鼠48只制作颅脑损伤模型,术后6、12、24 h、3、7 d用于湿重法、免疫组织化学法分别测定水肿脑组织含水量及AQP4表达.结果 自伤后6 h,脑组织含水量开始增加(78.48±0.50)%,24 h达高峰(82.54±1.89)%,持续至3 d(80.61±0.49)%,然后开始下降,至7 d基本恢复到正常.组织学证实了脑水肿趋势.免疫组织化学显示水肿脑组织AQP4表达于伤后6 h开始增加(0.178±0.016),24 h达高峰(0.331±0.024),持续至3 d后下降(0.307±0.019),7 d仍高于假手术组;线性相关分析发现AQP4表达与脑含水量呈正相关(r=0.940,P<0.05).结论 AQP4表达上调可能在鼠液压冲击伤脑水肿的消散中起重要作用.
作者： 刊期： 2009年第11期
肿瘤干细胞和肿瘤的发生、进展和预后密切相关[1].我们应用脑胶质瘤细胞株U251,证实人脑胶质瘤干细胞的存在.一、材料与方法1.材料:人脑胶质瘤细胞株U251(购自中国科学院细胞库).DMEM/F12培养基(Hyclone),EGF(Peprotech),FGF(Peprotech),LIF(Millipore),1327(Invitro-gen),鼠抗人Nestin单抗(中杉金桥),鼠抗人MAP2单抗(Sigma),鼠抗人PE-CD133单抗(eBioscience),兔抗人GFAP单抗(BIOSS),逆转录试剂盒(Toyobo),SYBR Green mix(Toyobo),等.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 通过RNAi技术干扰T细胞CD28、CD134基因表达后,诱导获得抑制性T细胞(Ts);探讨Ts免疫学特性.方法 设计针对目标基因的siRNA,转染大鼠T淋巴细胞,FCM检测CD28、CD134水平,混合淋巴细胞反应(MLR)检测转染后的T淋巴细胞对异体淋巴细胞的增殖能力的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞因子水平.结果 siRNA转染大鼠T淋巴细胞后,抑制CD28、CD134分子的表达,siRNA转染24 h后,siRNA组CD28、CD134表达受到抑制[转染后及转染前表达分别为(22.35±4.37)%及(34.76±3.51)%(P<0.05)],T淋巴细胞分泌细胞因子IL-10水平增高,转染组及未转染组表达分别为(77.15±12.60)ng/L及(37.56±5.93)ng/L(P<0.01).而转染组及未转染组的IL-2表达分别为(2.79±0.51)及(4.35±1.11)ng/L(P<0.05);干扰素(IFN)-γ表达分别为(277.15±14.8)、(682.7±53.5)ng/L(P<0.05).结论 siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28、CD134基因表达,抑制了IL-2、IFN-γ的表达,提高了IL-10细胞因子表达水平,从而产生了免疫耐受效应.Ts细胞具有抗原特异性,而且在外源性rrIL-2存在时,不能逆转Ts细胞的功能.
作者： 刊期： 2009年第11期
在脊髓型颈椎病(CSM)椎管减压术后发生的神经并发症中,常表现为减压节段水平以下多髓节神经功能障碍,症状多以颈部轴向疼痛、肩活动受限、手指精细活动障碍或内在肌萎缩等下运动神经元(LMN)通路损害及手部皮肤潮湿、少汗等自主神经系统受累不适为主,MRI显示有硬膜内出血时可同时发生脊神经根刺激症状,MRI提示硬膜外血肿时常发生脊髓压迫症表现[1],实系病变累及脊髓内固有神经元(PNs)或中间神经元(INs)所致[2],由于其数量多且分布广泛,相关轴突纤维多位于灰、白质交汇处,恰位于脊髓前、后动脉各自交通吻合支的终末端区域,易因滋养动脉间吻合薄弱或血液供应不足而影响其正常代谢所需.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 以新型巯基烷基化壳聚糖(TACS)为载体介导重组共表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP4体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨TACS用作骨组织工程中基因载体的可行性.方法 复凝聚法制备TACS-基因纳米粒,检测其形态和粒径;全骨髓培养法分离、培养大鼠MSCs;将纳米粒转染第3代大鼠MSCs,并设壳聚糖组、脂质体组及裸质粒组分别为实验对照、阳性对照及阴性对照,噻唑蓝(MTT)比色法测定TACS的细胞毒性.分别于转染后3、4 d提取MSCs的总RNA、总蛋白,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测目的 基因的表达.结果 TACS能有效包裹和保护共表达质粒,TACS组细胞存活率(73.18±6.56)%,明显高于脂质体组(45.92±4.93)%(P<0.01).除阴性对照组外,RT-PCR和Western blot均检测到转染后MSCs中hVEGF121及hBMP4的表达,TACS组目的 蛋白表达量低于脂质体组(P<0.05),但明显高于壳聚糖组(P<0.01).结论 共表达质粒在TACS介导下成功转染大鼠MSCs并获得表达.TACS细胞毒性小,且较未改性壳聚糖转染效率明显提高.
作者： 刊期： 2009年第11期
我们采用改良Inaba法从骨髓前体细胞中诱导、扩增树突状细胞(DC),并对其根据形态和表型特征进行鉴定.一、材料与方法1.实验动物:6～8周龄雄性C57BL/6小鼠购自武汉大学实验动物中心,合格证号鄂00001292.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中VEGF基因表达的抑制作用.方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型.将成功造模的30只裸鼠随机分为A、B、C 3组(每组10只),分别给予不同处理.观察肿瘤生长.免疫组织化学检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(MVD)改变.结果 治疗5周后,VEGF shRNA组(A组)的肿瘤体积为654.0 mm~3、抑瘤率达65.2%,与空质粒组(B组)1790.4 mm~3、4.7%或PBS组(C组)1880.3 mm~3、0%比较,差异有统计学意义(P<0.05).A组荷瘤组织中VEGF和MVD分别为9.52、22.02,与B组17.18、43.58或C组17.82、45.32比较,差异有统计学意义(P<0.05).VEGF蛋白表达与MVD间存在正相关性(r=0.721,P<0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人脑胶质瘤细胞株U251裸小鼠移植瘤的生长.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察3种不同预处理对在体缺血再灌注心肌的保护作用,探讨钙网蛋白(CRT)在预处理心肌细胞缺血再灌注损伤的作用.方法 将30只成年SD大鼠随机分成5组(n=6),分别为缺血再灌注组、缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组和假手术组.建立大鼠在体缺血冉灌注损伤模型,观察各组缺血再灌注前后心功能变化,并检测再灌注末血清肌钙蛋白T(cTnT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化以及心肌组织CRT的表达.结果 缺血预处理组、远程预处理组与缺血再灌注组比较(±dp/dt max)有明显提高(P<0.05).缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组cTnT、MDA值均低于缺血再灌注组,SOD值高于缺血再灌注组(P<0.05);腺苷预处理组SOD值高于缺血预处理组和远程预处理组,cTnT值则低于后2组(P<0.05);缺血预处理组、腺苷预处理组、远程组与缺血再灌注组比较,CRT表达灰度值均显著降低(P<0.05).结论 腺苷预处理、远程预处理均可以模拟缺血预处理的心肌保护作用;预处理可能通过下调钙网蛋白高表达减轻在体大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨17β-雌二醇对小鼠骨髓源性内皮祖细胞(BM-EPCs)迁移功能的影响及其机制.方法 培养卵巢切除BALB/C小鼠BM-EPCs.分别采用0、1、10、100 nmol/L 17β-雌二醇或相应浓度17β-雌二醇和雌激素受体拮抗剂ICI182 780与BM-EPCs共培养.48 h后,Transwell小室检测BM-EPCs经或未经CXCR4抑制剂AMD3100处理后向基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的迁移功能.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测各组BM-EPCs CXCR4的表达.结果 17β-雌二醇呈剂量依赖性促进BM-EPCs迁移(0 nmol/L:80.33±6.02;1 nmoL/L:110.67±7.51;10 nmol/L:139.67±9.50;100 nmol/L:168.00±10.00/400倍视野,P<0.05)以及CXCR4 mRNA(CXCR4/β-actin:0 nmol/L:0.091±0.007;1 nmol/L:0.189±0.009;10 nmol/L:0.208±0.006;100 nmol/L:0.235±0.009,P<0.05)和蛋白[CXCR4阳性率:0 nmol/L:(29.57±4.20)%;1 nmol/L:(49.23±6.01)%;10 nmol/L:(64.69±4.46)%;100 nmol/L:(75.59±4.88)%,P<0.05]的表达,但被雌激素受体拮抗剂ICI182 780完全阻断(P>0.05).结论 17β-雌二醇通过雌激素受体途径上调BM-EPCs CXCR4的表达而增强其迁移功能.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察促红细胞生成素(EPO)对急性脊髓损伤神经功能恢复的疗效.方法 急性脊髓损伤患者65例,根据用药分为EPO治疗组35例和对照组30例;分别于入院时及治疗后末次随访时对脊髓损伤程度按ASIA2000评分标准进行神经功能评定,观察两组差异;同时监测患者用药前后血常规及血清EPO浓度,记录不良反应.结果 65例患者术后随访1～3年,平均1.7年,末次随访时治疗组患者ASIA运动、触觉、痛觉功能评分为58,2±8.2、78.5±11.5、82.6±13.5,显著优于对照组运动、触觉、痛觉功能评分45.6±6.8、65.5±13.4、68.7±14.7,差异有统计学意义(P<0.05),EPO组治疗过程中未见明显不良反应.结论 促红细胞生成素是治疗急性脊髓损伤安全有效的药物,早期应用EPO对促进患者神经功能的改善与恢复具有积极意义.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察瑞芬太尼对腹腔感染脓毒症小鼠肺组织和肝组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.方法 采用小鼠盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型,将40只雄性昆明小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、瑞芬太尼治疗组(R1组)、瑞芬太尼对照组(R2组).Western blot方法检测肺组织和肝组织iNOS蛋白表达,双抗体夹心酶联免疫吸附法测定肝肺组织白细胞介素(IL)-10和IL-6水平,观察PaO_2、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、血清ALT和AST活性及电镜下组织超微结构改变.结果 与Sham组比较,CLP组PaO_2显著降低,肺组织和肝组织中iNOS蛋白表达、肺组织MPO活性、ALT和AST活性显著增强(P<0.01),肺组织IL-6和IL-10水平显著增加为649.74±90.47和501.06±57.67(P<0.01),肝组织IL-6和IL-10水平显著增加为341.05±28.73和267.50±41.82,R2组以上指标均无明显变化;与CLP组比较,R1组PaO_2明显增加,iNOS蛋白表达,IL-6和IL-10水平、MPO活性、ALT和AST活性显著降低(P<0.01),电镜显示肺组织和肝组织损伤程度较CLP组略减轻.结论 瑞芬太尼对脓毒症感染致急性肺损伤和肝损伤有保护作用,其机制可能通过抑制iNOS蛋白的表达,降低炎性因子水平有关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 诱导分化骨髓间充质干细胞(BMSC)及内皮祖细胞(EPC),进行BMSC及EPC作为组织工程瓣膜(TEHV)种子细胞的对比.方法 分离扩增BMSC及EPC,分别定向诱导分化为内皮细胞,比较两种细胞在形态学、增殖能力、黏附力以及细胞冻存和复苏率方面的特点与区别.结果 光镜下,两种细胞均为贴壁生长细胞,BMSC的形态为梭形或多角型,EPC的形态为圆形及不规则形状,第2代诱导的BMSCs、EPCs的倍增时间分别为34 h和35 h,诱导后的BMSC冻存和复苏率以及黏附力与EPC之间差异无统计学意义;电镜示两种细胞均能够种植在去细胞猪主动脉瓣上.免疫组织化学结果显示两种细胞种植后的瓣膜上均有间质细胞生长.结论 BMSC和EPC诱导后可分化为内皮细胞,两者之间差异无统计学意义,都是合适的TEHV种子细胞.
作者： 刊期： 2009年第11期
心脏外科是一门比较年轻的学科,但发展快、潜力大,临床经验的不断积累和实践水平快速提高的同时,实验研究领域也不断深入和延伸.重视心脏外科的实验研究,将推动有潜力的基础实验研究成果向外科临床实践的转化.
作者： 刊期： 2009年第11期
近年来,体外循环(CPB)心脏手术后死亡率显著下降,但术后神经系统并发症仍不少见,严重影响患者的生活质量[1].本研究旨在观察兔脑微空气栓塞对缺血脑组织bcl-2表达和血清S100β蛋白的影响以及银杏叶提取物对两者干预作用,探讨药物干预对脑组织的保护机制,为体外循环脑保护提供实验依据.
作者： 刊期： 2009年第11期
我们建立大鼠脊髓损伤(SCI)模型并在硬膜外置管,每天经硬膜外置管给予一定量硫氧还蛋白(Trx),通过BBB评分观察大鼠脊髓损伤后不同时间后肢运动功能的恢复情况,采用免疫组织化学观察脊髓组织中神经中丝200(NF200)的分布特点,同时计数阳性细胞,探讨硫氧还蛋白对大鼠脊髓损伤后神经元和神经功能的影响.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 制备聚乙二醇(PEG)转化生长因子(TGF)-β1缓释微球左细胞瓣复合支架,观察生物学性能.方法 制备聚乙二醇微球,电镜观察粒径.去细胞瓣与PEG微球耦联,吸附TGF-β1,行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,形态学与分子生物学检测.种植大鼠肌成纤维细胞,体外培养7 d,构建组织工程心脏瓣膜(TEHV),行形态学与分子生物学检测.结果 PEG微球粒径(42.72±3.48)nm.ELISA检测示TGF-β1包封率82.01%,7 d TGF-β1释放率67.22%.与去细胞瓣支架比较,复合支架组细胞紧密联合且细胞外基质丰富,羟脯氨酸含量和DNA含量增高.结论 PEG-TGF-β1缓释微球去细胞瓣复合支架,利于细胞生长,胶原的分泌及TEHV的构建.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察白细胞介素(IL)-12两亚基(IL-12p35、IL-12p40)干扰RNA(IL-12p35siRNA、IL-12p40siRNA)重组腺病毒载体感染树突状细胞(DC)后对淋巴细胞增殖的影响.方法 用重组腺病毒载体(IL-12p35siRNA、IL-12p40siRNA、阴性对照HKsiRNA)感染DC,之后与同种小鼠T细胞行混合淋巴细胞培养,并测定上清液中IL-4和干扰素(IFN)-γ浓度以及淋巴细胞增殖反应.结果 IL-12p35siRNA、IL-12p40siRNA重组腺病毒载体分别感染树突状细胞后,只有IL-12p35siRNA重组腺病毒载体感染DC在混合淋巴细胞培养中引起的淋巴细胞增殖能力低,并导致混合培养上清液中IL-4的上升和IFN-γ的下降.结论 IL-12p35亚基特异性siRNA抑制DC的共刺激活动,导致在体外TH2偏移.
作者： 刊期： 2009年第11期
众多研究结果显示前列腺上皮源性Ets转录因子(PDEF)具有较强的肿瘤相关性,提示可以在临床上以PDEF作为靶基因,制定出特异性的肿瘤治疗和控制方案[1],我们先期研究表明随着前列腺癌临床分期进展,PDEF mRNA的表达强度也不断增强,提示PDEF基因的表达存在明显的临床分期的表达差异,说明PDEF与前列腺癌的转移浸润有关[2].本研究旨在探讨PDEF在激素非依赖型前列腺癌中的表达情况及其与临床治疗的相关性.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨脑膜瘤中HER2基因扩增与HER2蛋白过表达的关系.方法 运用免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)技术,对手术切除的80例脑膜瘤石蜡标本进行HER2状态的检测.结果 80例中,26例HER2蛋白(+)(32.50%),其中HER2基因扩增7例(8.75%);10例HER2蛋白(+++/++)(12.50%),HER2基因扩增7例(8.75%),占高表达组的100.00%;70例HER2蛋白(+/0)(87.50%)中,无HER2基因扩增.结果 HER2蛋白(+++/++)与HER2基因扩增密切相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
