目的 观察缺血再灌注损伤(IRI)对小鼠肾脏mir-210及其靶基因Ephrin-A3表达的影响.方法 将10只成年昆明雌鼠随机分为缺血再灌注组(IR)、假手术组(Sham),每组5只.IR组完全阻断双肾蒂40 min后恢复血流,Sham组暴露左右双肾40 min后关闭腹腔.每组在手术4 h后取肾组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测mir-210表达水平;RT-PCR和酶标免疫组织化学染色法检测Ephrin-A3基因和蛋白的表达情况.结果 IR组miR-210表达水平明显上升(P<0.05).因miR-210对靶基因Ephrin-A3的负向调节作用,PCR结果显示IR组Ephrin-A3基因表达水平明显高于Sham组(P<0.01).Ephrin-A3蛋白主要表达在肾小管上皮细胞胞质中,Sham组Ephrin-A3蛋白表达水平较IR组明显升高(P<0.01).结论 肾缺血再灌注损伤明显影响miR-210及其靶基因Ephrin-A3的表达,miR-210表达的变化可能与肾缺血再灌注损伤的修复有关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨体外定向诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为肝细胞的方法及肝损伤模型肝内移植的可行性.方法 常规培养ES细胞后,继续悬浮培养4 d以形成拟胚体(EBs),转移EBs到铺有明胶的6孔板中贴壁培养,并添加3 mmol/L丁酸钠开始诱导分化,7 d后加入淤胆血清筛选、纯化ES源性肝细胞,分化过程中用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝细胞特异性标志基因:白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、α1抗胰蛋白酶(AAT)、葡萄糖6磷酸酶(G6P)、酪氨酸转氨酶(TAT)mRNA水平的表达;以荧光示踪剂CFDA-SE标记诱导获得的肝细胞,并移植到肝损伤小鼠肝内,观察移植细胞在肝内的定居、增殖情况.结果 诱导分化过程中,ES细胞形态逐渐出现肝细胞样改变,其超微结构与小鼠肝细胞超微结构十分相似;RT-PCR结果显示,随着诱导时间的推进,标志肝细胞发育过程的ALB、AFP、TTR、AAT、G6P、TAT mRNA顺序表达;肝内移植实验结果显示:ES源性肝细胞可在肝损伤小鼠肝内定居并增殖.结论 丁酸钠联合淤胆血清可以诱导ES细胞分化为肝细胞,ES源性肝细胞肝损伤模型体内移植是可行的,这有可能为细胞移植治疗难治性肝病提供一种新的细胞来源.
作者： 刊期： 2009年第11期
心脏外科是一门比较年轻的学科,但发展快、潜力大,临床经验的不断积累和实践水平快速提高的同时,实验研究领域也不断深入和延伸.重视心脏外科的实验研究,将推动有潜力的基础实验研究成果向外科临床实践的转化.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察骨形成发生蛋白4(BMP4)和Smad4在阿霉素诱导U251细胞抑制中的表达变化.方法 应用噻唑蓝(MTT)检测空白组和阿霉素组U251细胞增长活性,应用公式(1-阿霉素组A/空白组A)×100%计算阿霉素组U251细胞增长抑制率.应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测空白组和阿霉素组BMP4和Smad4的表达.结果 阿霉素在24、36、48、60、72 h对细胞抑制率为分别为10%、21%、56%、49%、43%.在24 h抑制率为高(P<0.05).荧光定量PCR显示阿霉素组与对照组比较,BMP4表达增加了(13.0±0.7)%(P<0.05),Smad4表达增加了(35.0±1.0)%(P<0.05),Western blot显示BMP4和Smad4表达分别增加了23%和38%(P<0.05).结论 阿霉素抑制U251细胞的生长可能通过提高BMP4和Smad4的表达来实现,BMP4可能成为胶质瘤治疗的新靶点.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察人骨肉瘤组织中凋亡相关因子Smac、Livin和Cagpage-3表达,及其对骨肉瘤生物学行为影响.方法 采用免疫组织化学技术(SABC法)检测46例骨肉瘤组织中Smac、Livin及Cagpage-3蛋白表达,比较Smac、Livin表达与骨肉瘤主要临床病理参数的关系.结果 Smac、Livin及Cagpage-3基因在骨肉瘤中表达分别为29例(63.0%)、30例(65.2%)、32例(72.4%);Smac、Livin表达率与骨肉瘤组织学分级、WHO分型无关,与转移有关(P<0.05);骨肉瘤中Smac和Livin基因表达正相关(r=0.639,P<0.01),两者与Caspase-3表达无关.结论 凋亡相关因子Smac、Livin和Cagpage-3高表达于骨肉瘤中,可能通过影响细胞凋亡共同参与肿瘤发生发展.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨缺血预处理(IPC)对大鼠减体积肝移植术后Akt生存信号通路的影响及意义.方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为2组:50%减体积肝移植组(Control组)和IPC组,Western blot检测肝组织总Akt和p-Akt及其下游的p-Bad和p-GSK3β蛋白水平,同时结合血清学和组织病理学分析Akt生存信号通路变化的意义.结果 与Control组比较,IPC组术后6、24 h丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著下降(6 h:1064.49±126.53比802.90±82.39;24 h:1401.13±172.73比943.80±116.25,P<0.01);Control组术后24 h,肝细胞明显空泡样变性伴局部坏死,小叶结构破坏,门脉周围水肿、充血,炎症细胞浸润明显,而IPC组损伤减轻;Western blot结果显示:与Control组比较,IPC组术后2、6、24 h肝组织中p-Akt、p-Bad、p-GSK3β蛋白水平上调.结论 IPC明显减轻减体积肝移植术后再灌注损伤,其机制可能与激活Akt生存信号通道密切相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达以及调节性T细胞(Treg)数量在胰腺癌荷瘤鼠中的变化,并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 建立小鼠胰腺癌模型,荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot分析肿瘤组织周嗣引流淋巴结(TDLNs)IDO表达水平;并利用流式细胞术检测荷瘤鼠TDLNs及脾脏中CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T比例;荧光定虽PCR测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平.结果 胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO在mRNA(1.670±0.099比1.123±0.243),蛋白表达水平(1.401±0.079比0.872±0.193),高于正常对照组.差异均有统计学意义(P<0.05);荷瘤鼠和脾细胞中CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T细胞的比例明显高于对照鼠[TDLNs分别为(25.00±2.16)%和(11.02±1.31)%,P<0.05;脾脏分别为(22.14±2.33)%和(12.11±0.93)%,P<0.05];荷瘤鼠Foxp3 mRNA表达水平显著高于对照鼠,荷瘤鼠分别为:TDLNs 3.427±0.164、脾细胞2.098±0.112,而对照鼠分为:0.933±0.253、1.137±0.343(P<0.05).结论 胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结IDO表达明显增高,且TDLNs及脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞的数量增加.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7721肝癌细胞生长的影响及机制.方法 采用放射配体法检测SMMC-7721肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Bel-7721肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1.33、13.33、133.30、1333.00μg/L)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞仪检测肝癌细胞在上述浓度rh-GH作用下细胞周期各时相细胞比率、增殖指数(PI)以及凋亡率.结果 rhGH对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的生长具有一定程度刺激作用,表现为rhGH在133.30μg/L浓度促进肝癌细胞增殖较显著,而rhGH在其他浓度(1.33、13.33、1333.00μg/L)对肝癌细胞增殖虽也表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在133.30 μg/L浓度为弱.rhGH作用48 h后流式细胞检测各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高(P<0.05);G_2-M细胞所占比率,13.33、133.30与1333.00μg/L组较对照组显著增高(P<0.05),1.33μg/L与对照组比较差异无统计学意义;各实验组凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).放射配体法发现SMMC-7721肝癌细胞株表达GHR.结论 一定浓度范围的rhGH对7721肝癌细胞生长有促进作用,原因可能与7721肝痛细胞表达GHR,rhGH可促进肝癌细胞DNA合成,提高细胞分裂增殖能力有关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 GPI-B7-1蛋白转移修饰肝癌细胞膜,观察其对肿瘤细胞的免疫诱导效应.方法 GPI-B7-1和B7-1蛋白修饰肝癌细胞膜,流式法测定其CD80(B7-1)的表达,分离患者外周血T细胞,检测不同蛋白修饰的肝癌细胞膜对T淋巴细胞的致增殖效应及granzyme B、perforin、IFN-γmRNA表达的影响.结果 GPI-B7-1蛋白修饰肝癌细胞膜表面B7-1表达率为85%.GPI-B7-1蛋白修饰的肝癌细胞膜致T淋巴细胞的增殖程度显著强于对照组和B7-1蛋白修饰组(P<0.01);该作用源于其可上调肝癌外周血T淋巴细胞granzyme B、perforin及IFN-γ mRNA表达水平.结论 GPI-B7-1蛋白转移修饰的肝癌细胞膜可上调granzyme B、perforin及IFN-γ mRNA表达,激活T细胞增殖,促进杀伤性T细胞的效应.
作者： 刊期： 2009年第11期
牛颈静脉带瓣管道(BJVC)目前被国内外学者认为是一种非常具有研究前途的材料,而对BJVC的研究主要是着眼于寻找更好的材料处理方法[1].我们拟用戊二醛固定、2,3-丁二醇改性后的BJVC作巴马猪右室流出道与肺动脉连接,观察这种管道抗钙化能力及血流动力学参数的变化.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨中国人群中肿瘤坏死因子超家族15(TNFSF15)基因的多态性分布及其与克罗恩病(CD)的相关性.方法 飞行质谱法检测144例CD和500例正常对照者的TNFSF15基因多态性位点,分析基因多态性与CD发病及各临床表型的相关性.结果 在检测的5个SNF位点中,CD组和正常对照组间,有4个位点的基因型频率和等位基因频率存在差异,并且差异具有统计学意义(P<0.05).在构建的我国人群特有单倍型中,单倍型Haplotype 1在CD组中低于正常对照组(P<0.05),是CD的保护性单倍型.各CD临床表型与基因型见无明显相关(P>0.05).结论 TNFSF15基因的是我国CD的易感基因,在IBD的发病过程中具有重要作用.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察3种不同预处理对在体缺血再灌注心肌的保护作用,探讨钙网蛋白(CRT)在预处理心肌细胞缺血再灌注损伤的作用.方法 将30只成年SD大鼠随机分成5组(n=6),分别为缺血再灌注组、缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组和假手术组.建立大鼠在体缺血冉灌注损伤模型,观察各组缺血再灌注前后心功能变化,并检测再灌注末血清肌钙蛋白T(cTnT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化以及心肌组织CRT的表达.结果 缺血预处理组、远程预处理组与缺血再灌注组比较(±dp/dt max)有明显提高(P<0.05).缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组cTnT、MDA值均低于缺血再灌注组,SOD值高于缺血再灌注组(P<0.05);腺苷预处理组SOD值高于缺血预处理组和远程预处理组,cTnT值则低于后2组(P<0.05);缺血预处理组、腺苷预处理组、远程组与缺血再灌注组比较,CRT表达灰度值均显著降低(P<0.05).结论 腺苷预处理、远程预处理均可以模拟缺血预处理的心肌保护作用;预处理可能通过下调钙网蛋白高表达减轻在体大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨脑膜瘤中HER2基因扩增与HER2蛋白过表达的关系.方法 运用免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)技术,对手术切除的80例脑膜瘤石蜡标本进行HER2状态的检测.结果 80例中,26例HER2蛋白(+)(32.50%),其中HER2基因扩增7例(8.75%);10例HER2蛋白(+++/++)(12.50%),HER2基因扩增7例(8.75%),占高表达组的100.00%;70例HER2蛋白(+/0)(87.50%)中,无HER2基因扩增.结果 HER2蛋白(+++/++)与HER2基因扩增密切相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨经主动脉瓣插管的左心室辅助方式应用于急性心力衰竭动物模型的可行性.方法 在6头猪的急性心力衰竭模型中,尝试经主动脉瓣插管的左心室辅助.并进行血流动力学及心脏超声指标的观察.结果 6头猪中有5头完成了实验.它们在血流动力学方面都显示急性心力衰竭状态的建立(P<0.05).心超指标未提示经主动脉瓣插管对主动脉瓣、二尖瓣及左心室功能的显著影响(P>0.05).在循环辅助下的血流动力学指标及部分生化指标也都较心衰状态有显著改善(P<0.05).心脏超声所示的左心室射血分数(LVEF)也有显著改善(P<0.05).结论 在急性心力衰竭模型建立后,经主动脉瓣的插管对瓣膜及左心室的功能未造成不良影响.这种循环辅助方式可以在短时间内改善急性心力衰竭的状态.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织AQP4表达变化与脑水肿之间关系.方法 成年雄性SD大鼠48只制作颅脑损伤模型,术后6、12、24 h、3、7 d用于湿重法、免疫组织化学法分别测定水肿脑组织含水量及AQP4表达.结果 自伤后6 h,脑组织含水量开始增加(78.48±0.50)%,24 h达高峰(82.54±1.89)%,持续至3 d(80.61±0.49)%,然后开始下降,至7 d基本恢复到正常.组织学证实了脑水肿趋势.免疫组织化学显示水肿脑组织AQP4表达于伤后6 h开始增加(0.178±0.016),24 h达高峰(0.331±0.024),持续至3 d后下降(0.307±0.019),7 d仍高于假手术组;线性相关分析发现AQP4表达与脑含水量呈正相关(r=0.940,P<0.05).结论 AQP4表达上调可能在鼠液压冲击伤脑水肿的消散中起重要作用.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 评估乙肝病毒L蛋白颗粒作为一种新型肝癌靶向性基因治疗转运载体的可行性.方法 通过电穿孔方法(电压=400 V,脉冲时间=60 us,pGFP:L颗粒=4:10)将绿色荧光表达质粒pGFP导入乙肝病毒L颗粒,形成的L/pGFP颗粒转染各种肝来源细胞株以及非肝来源细胞株,以脂质体作为对照转染相同细胞株,荧光湿微镜检测各细胞株基因转运效率.结果 L/pG-FP颗粒对各种肝来源细胞株均保持较高的转染效率.对正常肝来源细胞L02的转染效率(67.0±2.6)%低于肝癌细胞株HepG2(75.0±3.5)%和7721(72.0±2.3)%,然而均显著高于脂质体的转染效率(P<0.05).非肝来源的乳腺癌细胞株MCF-7不能被L/pGFP颗粒有效转染.未接受电穿孔的L颗粒+pGFP混合液不能有效转染任何细胞株.结论 L颗粒能特异性、高效转运外源性基因至各种肝来源细胞,可作为一种安全高效的靶向性转运载体用于肝癌的基因治疗.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 比较两种去神经支配压力性尿失禁(SUI)模型的效果.方法 30只雌性Wistar大鼠随机分为3组.测漏尿点压力(LPP),3组分别切断坐骨神经、阴部神经和只游离不切断,术后2周测LPP,行喷嚏试验.术后1月行尿道组织学检查.解剖坐骨、阴部神经.结果 3组术前LPP差异无统计学意义(P>0.05).对照组手术前后LPP分别为(27.567 70±5.434 89)、(30.132 20±5.790 94)cm H_2O,差异无统计学意义(P>0.05);坐骨神经组为(30.911 00±5.467 62)、(30.400 80±5.515 54)cm H_2O,差异无统计学意义(P>0.05);阴部神经组为(27.84930±5.23036)、(9.588 30±2.342 55)cm H_2O,差异有统计学意义(P<0.01).阴部神经组术后喷嚏时漏尿,镜检尿道括约肌萎缩.解剖证明坐骨、阴部神经各自独立,支配尿道括约肌的是阴部神经.结论 切断阴部神经可以建立大鼠去神经支配SUI模型,切断坐骨神经则不能.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察阴茎海绵体内注射川芎嗪对兔阴茎勃起效应的影响.方法 12只成年雄性新西兰大白兔,静脉麻醉后游离一侧颈总动脉和阴茎海绵体,颈总动脉插管与电生理记录仪连接监测平均动脉压(MBp),阴茎海绵体内置入25 G针头与电生理记录仪连接用于测定阴茎海绵体内压(ICP).通过在兔阴茎海绵体内注射不同剂量(0.5～5.0 mg/kg)川芎嗪和等体积生理盐水,分别记录ICP变化(ICP)、阴茎膨胀持续时间(DT)和MBp的变化.结果 阴茎海绵体内分别注射不同剂量的川芎嗪(0.5、1.0、2.0、5.0 mg/kg),ICP分别由基线增加至(19.1±3.7)、(24.8±2.1)、(30.2±4.8)、(39.7±6.1)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa), ICP为6.5～25.8 mm Hg,大ICP为(25.8±5.9)mm Hg,DT为(8.5±2.8)～(22.9±7.3)min.阴茎海绵体内注射川芎嗪呈剂依赖性提高ICP(P<0.05),对MBp没有显著影响(P>0.05).结论 川芎嗪呈剂量-效应依赖性地增强兔阴茎勃起效应.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 观察短发夹RNA(shRNA)对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞磷酸二酯酶5型(PDE5)基因表达的抑制作用,探讨运用RNA干扰(RNAi)技术治疗勃起功能障碍(ED)的可行性.方法 构建靶向大鼠PDE5基因的shRNA重组腺病毒rAd-rPDE5-shRNA,将其转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞48 h后,通过荧光标签进行显微计数确定转染效率,并以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测PDE5基因的表达水平.结果 rAd-rPDE5-shRNA构建成功,转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞效率达95%以上,并使PDE5基因表达在mRNA水平抑制(80.78±2.30)%,在蛋白水平抑制(67.39±3.33)%.结论 以腺病毒为载体表达的shRNA能稳定、有效地抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5基因的表达.
作者： 刊期： 2009年第11期
目的 测定不同年龄组颈椎椎间盘中的蛋白多糖酶活性,探讨蛋白多糖酶活性与年龄之间的相关性.方法 对40个不同年龄颈椎间盘的蛋白多糖酶活性进行了测定,分别来自胎儿组、17～25岁组、40～60岁组以及60～75岁组,用含有10.0 mmol/L CaCl_2的0.05 mol/L Tris/HC对椎间盘中的蛋白多糖酶进行提取,用1 mmol/L APMA将其激活,与取自牛肩胛软骨的蛋白多糖单体底物进行反应,以酶标仪来测定蛋白多糖酶的活性.结果 胎儿组、17～25岁组、40～55岁组和60～75岁组颈椎间盘的蛋白多糖酶活性的吸光度值分别是1.911±0.21、0.881±0.155、1.720±0.19、1.777±0.142.胎儿组颈椎间盘与60～75岁组颈椎间盘的吸光度值高,两者之间差异无统计学意义(P>0.05),胎儿组与17～25岁组、40～55岁组颈椎间盘的吸光度值结果差异有统计学意义(P<0.05),17～25岁组的吸光度值低,与胎儿组、40～55岁组和60～75岁组的测得值差异有统计学意义(P<0.01),40～55岁组和60～75岁组的吸光度值差异无统计学意义(P>0.05).结论 颈椎间盘中的蛋白多糖酶活性与年龄明显相关.
作者： 刊期： 2009年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
