王玉峰；王岩峰；祝勇
目的 观察C6脑胶质瘤血-瘤屏障(BTB)通透性及超微结构,探讨BTB通透性增高的主要途径.方法 建立SD大鼠C6脑胶质瘤模型,以肿瘤中心、肿瘤边缘、邻近肿瘤脑组织(BAT)、远隔肿瘤脑组织(BDT)和正常脑组织(NBT)为研究点,经免疫组织化学半定量分析内源性白蛋白血管外渗,外源性硝酸镧(La3+)和辣根过氧化物酶(HRP)示踪电镜观察脑血管内皮细胞(BMECs)紧密连接(TJs)和胞饮的改变.结果 C6胶质瘤间质呈中-强度白蛋白阳性反应,BAT弱阳性,BDT与NBT阴性(P＜0.05);光镜示肿瘤区HRP在血管腔及管壁周围弥散分布,而非肿瘤区限于血管腔;电镜示肿瘤区La3+/HRP通过TJs渗至脑间质裂隙内,BAT有La3+/HRP渗至局部基膜(BM),而NBT/BDT完全封闭于管腔内;BM呈线状连续型,管腔内无瘤细胞;肿瘤BMECs胞质内吞饮囊泡数显著高于非肿瘤组(P＜0.05),但两者均几乎无充填HRP的囊泡(P＞0.05).结论 TJs开放是C6胶质瘤BTB通透性增高的结构基础和主要原因,胞饮作用甚微;C6胶质瘤诱导的屏障功能破坏随至肿瘤距离的增加而减弱;胶质瘤细胞仍具有部分诱导形成BBB的能力.
作者：吴波；黄光富；游潮；郭付有 刊期： 2007年第09期
目的 比较分离培养人类软骨细胞的3种方法,探讨各种方法的特点及对细胞骨架的影响.方法 分别采用酶消化法、组织贴块法、酶消化结合组织贴块法分离软骨细胞,测量每种方法分离的软骨细胞瓶底汇合形成单层时间,进行比较,以甲苯氨蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学评价细胞的生物特性,并用磁驱动原子力显微镜(MAC mode AFM)对二代细胞表面形态及细胞骨架特性进行检测.结果 MAC mode AFM检测显示,酶消化结合组织贴块法分离软骨细胞表面形态、细胞骨架分布更接近生理状态,甲苯氨蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示强阳性,进行方差分析及q检验,3种方法分离的软骨细胞瓶底汇合形成单层时间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 酶消化结合组织贴块法细胞分离效率高、生长速度快、细胞骨架特性保持更好、细胞纯度高,在细胞骨架研究中可优先选用.
作者：李兵；吴志宏；刘广源；肖军；韩东；邱贵兴 刊期： 2007年第09期
目的 观察应用新型输送系统经胸微创封堵膜周部室间隔缺损(VSD)效果.方法 11例膜周VSD患儿,年龄11月～12岁(中位年龄3.2岁),体重(15.8±6.4)kg,接受经胸微创非体外循环室间隔缺损封堵术.根据经食道超声心动图(TEE)选择合适的封堵器类型,然后自胸骨下端3～5 cm小切口入胸,TEE引导和实时监测下穿刺右心室前壁,建立轨道,释放封堵器关闭VSD.TEE评估封堵器的位置、对主动脉瓣、房室瓣的影响以及有无残存分流.结果 11例患儿均1次封堵成功,超声引导下释放封堵器的时间为5～12 min,无残余分流和主动脉瓣反流,心电监测无明显心律失常.术后3～5 d出院,随访5个月以上无残余分流、主动脉瓣反流以及周围组织卡压.结论 应用新型输送系统经胸微创非体外循环下置入室间隔缺损封堵器是一种安全、有效的治疗方法,有较大临床推广价值.
作者：邢泉生；庄忠云；泮思林；段书华；荣佑宝；李生德；侯可峰；武钦 刊期： 2007年第09期
神经干细胞(NSCs)是一种具有自我更新及多向分化潜能的细胞,在胚胎及成体动物的中枢神经系统中都有存在.NSCs的发现不仅改变了人们对神经系统及其发育的固有观念,也深刻影响了对神经系统损伤及修复的认识.自其发现至今的数十年间,该项研究的发展已经有了长足的进步.然而目前我们对NSCs的研究成果并不足以使我们完整地刻画出这一细胞的形象,大量不得而知的细节限制了其在临床的应用,更多的研究停留在动物实验的阶段.现阶段对NSCs的研究集中在3个方面:细胞本身及其分化和细胞分泌产物的研究;受体对NSCs的反应;细胞移植后活体检测新技术的探索.这3个方面的研究对于跨学科合作有着更加强烈和深入的要求.在这里,谨对该研究领域所存在的一些问题进行总结,对未来的发展趋势做出展望.
作者：安沂华；张涵 刊期： 2007年第09期
目的 观察雪旺细胞(SCs)和人胚神经干细胞(NSCs)共移植治疗帕金森病(PD)猴模型的疗效.方法 采用恒河猴自体SCs和人胚NSCs共同移植治疗PD猴,3只成年恒河猴偏侧部分损伤性PD模型采用3种不同的移植物,对照猴移植磷酸缓冲液(PBS),干细胞猴移植人胚NSCs,共移植猴移植SCs+NSCs.结果 猴行为学评分:在移植术后1个月,共移植猴中的各项指标有不同程度的恢复,而干细胞猴及对照猴无明显变化;2个月后,干细胞猴及共移植猴,恢复程度都在2分以上,术后4个月,共移植猴和干细胞猴已接近正常.PET示DAT的显像剂18F-FP-β-CIT在移植后2个月,共移植猴在正常侧(左侧)纹状体区呈明显的放射性浓聚,而在毁损侧(右侧)纹状体区放射性摄取也出现明显浓聚,干细胞猴毁损侧(右侧)纹状体区放射性摄取仍不明显;在移植后6个月,共移植猴和干细胞猴,DAT的显像剂在毁损侧(右侧)纹状体区放射性摄取都出现明显的浓聚,而对照猴仍无明显变化.移植区脑组织TH染色显示,对照猴中未见到TH阳性细胞,干细胞可见到有TH染色阳性细胞从移植区向周围迁移;而共移植猴可见到TH染色阳性细胞从移植区向周围迁移的数量明显增多,且细胞体积也较饱满.结论 SCs和NSCs共移植能有效的治疗PD猴模型,SCs可来源于患者自体的周围神经,能避免排异反应及伦理问题,可望在临床上推广应用.
作者：夏鹰；江澄川；丁忠良；汪洋；徐斌；管一晖 刊期： 2007年第09期
目的 观察亚低温条件下离体大鼠肝细胞悬浮培养后的完整性和功能.方法 离体肝细胞悬浮于添加有葡萄糖和牛血清白蛋白(BSA)的碳酸氢盐缓冲介质内30℃下孵育48 h,期间及其后测定细胞的完整性和功能指标.结果 30℃条件下离体0、24及48 h内白蛋白合成及Ⅰ相药物生物转化能力差异无统计学意义(P＞0.05),流式细胞仪活细胞计数和台盼蓝清除率显示细胞完整性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝细胞混悬液内的离体肝细胞在亚低温条件下能够保持较高活力,为制备应用于生物人工肝的离体肝细胞混悬液提供了可行性.
作者：叶启发；袁金忠；明英姿；熊力；牛英 刊期： 2007年第09期
目的 探讨大鼠脊髓锥体束损伤后多唾液酸神经细胞黏附分子(PSA-NCAM)的表达及意义.方法 Wistar大鼠60只,实验组(30只)毁损胸髓T10左侧锥体束,对照组(30只)未损伤脊髓.应用免疫组织化学和Western blot检测5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)、PSA-NCAM的表达.结果 免疫组织化学染色:BrdU阳性细胞数,对照组(23.4±6.3),实验组在伤后第3天(93.1±7.6),第7天(65.1±8.6),组间差异有统计学意义(P＜0.05);PSA-NCAM阳性细胞数,对照组(2.5±1.5),实验组在伤后第3天(82.1±11.4),第7天(31.1±5.2),组间差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot:蛋白表达组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 锥体束损伤可激活自体室管膜细胞的增殖及迁移,后者具有一定的可塑性,参与脊髓的结构修复.
作者：王玉峰；王岩峰；祝勇 刊期： 2007年第09期
我们通过检测良恶性胆道疾病患者胆汁中糖蛋白糖链结构的差异和胆道恶性肿瘤组织中糖基转移酶活力的改变,探讨这些变化在良恶性胆道病变中的鉴别诊断价值.
作者：刘厚宝；王炳生；陈惠黎；童赛雄；赵家宏 刊期： 2007年第09期
目的 检测单核苷酸多态性(SNP)位点Arg399Gln在散发性结直肠癌患者和非癌对照组中的分布情况,分析其与散发性结直肠癌及其临床病理特征的相关性.方法 从178例肿瘤组织和非癌对照组的180例血样中提取DNA,采用Taqman探针技术检测Arg399Gln多态性表型,并用统计软件计算各基因型的比值比(OR)和95%可信区间(95%CI).结果 肿瘤组与对照组就XRCC1 Arg399Gln多态性的基因表型差异有统计学意义(P＜0.05);年龄不超过60岁的患者和超过60岁的患者在该位点的基因型差异有统计学意义(P＜0.05);以399Arg/Arg基因型为参照,在年龄超过50岁的人群中(OR=0.64,95%CI 0.50～0.83,P＜0.05)和男性人群中(OR=0.64,95%CI 0.51～0.79,P＜0.05)携带至少一个Gln等位基因可致罹患散发性结直肠癌的风险显著降低;XRCC1 399SNP与患者性别及散发性结直肠癌的发生部位、Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移以及病理分型均无显著相关性(P均＞0.05).结论 XRCC1 399SNP可能通过改变DNA的损伤修复功能,成为散发性结直肠癌的易感因素.
作者：任卓；樊军卫；周崇治；裘国强；贺林；彭志海 刊期： 2007年第09期
新型人工心脏瓣膜的研制及改进,动物体内植入是临床前评估不可少的重要环节[1,2],家猪的解剖及凝血特性与人相近,但体重增长过快为其不足,容易造成人工瓣膜失功及瓣周漏而影响其用于体内植入的远期评估[3].为了新型人工机械瓣膜体内植入远期评估研究的需要,本研究旨在建立小型猪人工二尖瓣植入远期存活模型.
作者：李德闽；张利东；申翼；王常田；任斌辉；牛冬梅；景华；黄楠 刊期： 2007年第09期
目的 观察核因子(NF)-κB、细胞间黏附分子(ICAM)-1和炎症细胞因子在急性胰腺炎(AP)肝损伤中的作用.方法 36只SD大鼠随机分为AP组、假手术组(SO组),通过胰胆管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠溶液制作大鼠AP模型.术后3、6、12 h胰腺组织光镜检查;肝组织光镜、电镜观察;检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);放射免疫法(RIA)测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6;酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织TNF-α mRNA、IL-6 mRNA;肝组织Envision法免疫组织化学测定NF-κB、ICAM-1.结果 病理学证实建立AP组,出现肝损伤的病理形态变化;与SO组比较,AP组的血清ALT以及TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10水平显著增高(P＜0.05),其中血TNF-α水平在3 h升高、6 h达高水平,血IL-6在AP 3 h明显升高,下降缓慢.AP 6、12 h组肝NF-κB活化,AP各组间肝NF-κB活性表达差异均有统计学意义(x2=15.048,P＜0.05),ICAM-1无表达.AP 3～12 h内,AP组肝TNF-α mRNA在3 h明显升高、6 h高表达;AP组的肝IL-6 mRNA则在3 h已增加、3 h后缓慢下降,均显著高于各自时段的SO组(P＜0.05).结论 AP发生后,肝脏NF-κB活化,可能介导肝TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达来参与肝损伤,ICAM-1对AP早期肝损伤无明显作用.
作者：万涛；卓阳；贺亚东；滕龙；方周溪；朱冠保 刊期： 2007年第09期
目的 将高磷酰胆碱基团接枝的壳聚糖(PC-Chi)涂在微弹簧圈(MC)上,研究评价应用多孔复合膜微弹簧圈骨架系统(PC-Chi-MC)栓塞动脉瘤的治疗效果.方法 体外研究PC-Chi与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞相容性,以平行板流动装置使切应力分别为5和40 Pa,流动作用时间24 h,测定流体切应力对PC-Chi的HUVEC黏附性的影响;将Chi、PC-Chi分别涂层在MC的表面,以强力拉伸机测定多孔复合膜MC骨架系统的拉伸强度和弹性模量.将MC和PC-Chi-MC分别栓塞在侧壁型动脉瘤腔中,3个月后观察内皮细胞覆盖动脉瘤颈的情况.结果 PC-Chi与HUVEC的细胞相容性很好,细胞增殖超过了普通细胞培养板的性能(67.43%);在40 Pa切应力条件下PC-Chi表面培养内皮细胞24 h,细胞的形态尚未发生明显改变,20 mm以下位移时PC-Chi-MC与MC的应力变化差异无统计学意义(P＞0.05);以Pc-Chi-MC栓塞的动脉瘤瘤颈处有较多的内皮细胞覆盖,表现出良好的治疗效果.结论 应用PC-Chi-MC栓塞AN可以使内皮细胞尽早在瘤颈部位生长、愈合,这种情况有可能减少栓塞后动脉瘤的再通、复发,从而增强动脉瘤栓塞后的长期疗效.
作者：徐锋；王启弘；朱剑虹；周良辅 刊期： 2007年第09期
目的 利用逆转录病毒作为载体将小鼠白细胞介素(IL)-23基因转染小鼠乳腺癌细胞(MA-891),建立分泌IL-23的肿瘤细胞株(IL-23/MA-891),观察对其生长特点及体内成瘤情况.方法 应用逆转录病毒载体(LXSN)将IL-23基因质粒经ψ2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞包装后,转染MA-891细胞,经G418筛选后获得表达IL-23的IL-23/MA-891细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定转染细胞mRNA的表达;激光共聚焦显微镜(LSCM)观察其蛋白表达;用ELISA法检测IL-23/MA-891细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力;用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖能力;用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡.小鼠皮下接种转染IL-23的IL-23/MA-891细胞观察其体内致瘤性的变化,小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用.结果 IL-23转染MA-891细胞后,在mRNA水平水平可获得稳定表达;LSCM可观察到其细胞内表达.IL-23基因转染MA-891细胞后,与对照组比较,其体外增殖能力不受影响,致瘤率也无改变,但IL-23基因转染组肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05).结论 成功建立表达小鼠IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞系(IL-23/MA-891);在体内,IL-23转染组具有明显的抗肿瘤作用.
作者：刘爽；陈砚凝；冯永路；单保恩 刊期： 2007年第09期
战、烧伤创面覆盖和修复问题成为战伤救治和后期康复的重点问题,而战、烧伤实验研究在创伤和创面修复上做了许多卓有意义的工作,其中目前研究热点就是以组织工程方法构建的活性皮肤替代物(living skin replacement)等研究.组织工程是一个新兴的前沿学科,其基本方法是:取少量组织,在体外分离、培养细胞,将一定量的培养细胞接种到具有一定空间结构的三维支架材料上继续培养,或将其植入体内,通过细胞生长繁殖,形成具有一定结构和功能的组织或器官.目前皮肤组织工程在其中居领先地位,迄今,已应用组织工程学方法研制出多种活性皮肤替代物并应用于临床.
作者：王钰；李恒宇；夏照帆 刊期： 2007年第09期
目的 探讨胃癌生长过程中胃周淋巴管、小血管分布及变化规律.方法 以SGC-7901胃癌组织块植入裸鼠胃壁,尔后每隔1周处死1批,取胃周组织切片、双酶染色和苏木素-伊红(HE)染色,光镜观察淋巴管及微血管并图像分析,荷瘤组为实验组,与正常裸鼠对照.结果 早期荷瘤鼠的淋巴管及微小血管面积、直径、不规则程度、密度与对照组比较无明显变化(P＞0.05);随肿瘤生长,胃周淋巴管面积、大直径、平均直径呈总体增加趋势,植瘤3周后较3周前比较差异有统计学意义(P＜0.05),总体荷瘤鼠淋巴管密度比正常裸鼠高,差异有统计学意义(P＜0.05);胃周血管面积、大直径、平均直径、不规则程度随肿瘤生长呈总体增高趋势,植瘤2周后较2周前比较差异有统计学意义(P＜0.05),密度变化差异无统计学意义(P＞0.05);原位植瘤6周后可见胃周5'-核苷酸酶(5'-Nase)活性管道与碱性磷酸酶(ALPase)活性管道存在相通现象.结论 随肿瘤生长胃周组织淋巴管密度增加、管径增粗;血管变化以管径增粗为主.晚期移植瘤的胃周血管可能与淋巴管存在相通现象.
作者：吴晖；何裕隆；蔡世荣；吴文辉；詹文华 刊期： 2007年第09期
目的 探讨变异型IκBα(IκBαM)基因对人类多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、-9表达的调控作用.方法 通过构建质粒、基因转染以及IκBαM蛋白表达的筛选,建立稳定表达IκBαM的人类GBM细胞株,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞及肿瘤组织内MMP-2、MMP-9在RNA水平的表达;并将肿瘤细胞植入裸鼠皮下制作异位移植瘤生长动物模型,进一步通过免疫组织化学染色方法分析MMP-2、MMP-9的蛋白表达.结果 RT-PCR结果显示,体外试验中,MMP-2与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为1.450±0.180(G36△-W)、0.292±0.040(G36△-M)、1.187±0.140(G36△-P)和1.463±0.160(G36△);MMP-9与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为1.424±0.130(G36△-W)、0.275±0.020(G36△-M)、1.357±0.180(G36△-P)和1.608±0.240(G36△).在体内试验中,MMP-2与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为0.870±0.060(G36△-W)、0.024±0.010(G36△-M)、0.785±0.070(G36△-P)和0.686±0.070(G36△);MMP-9与对应GAPDH平均吸光度值的比值分别为0.768±0.010(G36△-W)、0.054±0.010(G36△-M)、0.802±0.020(G36△-P)和0.746±0.020(G36△).在体外和体内试验中,G36△-M组与其余各组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05),而其他3组间差异无统计学意义.体内试验肿瘤组织中,MMP-2及MMP-9的在G36△-M组中的染色显著低于G36△、G36△-W和G36△-P组;而在G36△、G36△-W和G36△-P三组间的表达差异无统计学意义.结论 IκBαM基因可以在分子及蛋白水平显著抑制人类恶性胶质瘤中MMP-2、MMP-9的表达,减弱肿瘤细胞的侵袭和浸润能力.
作者：吴建梁；史学芳；范振增；孔世奇；李鹏；扈玉华 刊期： 2007年第09期
急性脊髓损伤(ASCI)后,神经细胞死亡的方式不仅仅是坏死,同时细胞凋亡广泛存在[1,2].本研究旨在探讨Fas、Caspase-3基因与细胞凋亡的关系及在脊髓损伤发生发展中的作用.
作者：高万旭；程爱国；王相利 刊期： 2007年第09期
我们通过本实验用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)诱导、无血清悬浮培养技术进行培养,获得的细胞具有多向分化潜能、表达干细胞抗原、能自我复制,也具备干细胞的特征.
作者：李进；李涛；康皓；陈振兵；陈燕花；洪光祥 刊期： 2007年第09期
目的 观察紧密连接蛋白ZO-1在实验性兔脊髓空洞前状态中的表达及变化规律.方法 通过Kaolin枕大池注射,建立兔脊髓空洞模型,分别在术后第1、3、7、14、21天,应用Evansblue法、免疫组织化学和Western blot测定60只(实验组40只,对照组20只)中国白兔血脊髓屏障功能、上颈髓中ZO-1表达含量,并探讨其内在相关性.结果 与对照组比较,实验组动物脊髓组织中Evansblue含量在术后第3天开始增高(2.79±0.42)mg/L,7 d达到高峰(3.53±0.45)mg/L,持续到14 d(3.45±0.35)mg/L,21 d好转(3.36±0.27)mg/L.Western blot结果显示,ZO-1表达含量在第3天开始减弱(195.32±23.50),第7天(126.28±27.40)、14 d(119.36±18.70)表达弱,21 d(165.70±21.20)部分恢复.同时免疫组织化学测定ZO-1表达变化趋势和Western blot结果一致.统计学分析表明,ZO-1表达与Evansblue含量在空洞前状态中的时相变化具有明显相关性(r=-0.9502,P＜0.01).结论 ZO-1的表达强度变化趋势与实验性兔脊髓空洞前状态中的血脊髓屏障功能破坏程度变化相一致,ZO-1表达下降是形成实验性脊髓空洞前状态病理改变的重要因素.
作者：李建峰；孙国柱；张庆俊 刊期： 2007年第09期
一氧化氮(NO)是一种可高度弥散的自由基.作为第2信使和神经递质,是细胞-细胞间信息传递的重要调节因子[1].NO可以调节成骨细胞(osteoblast,OB)的增殖及其功能活性,从而在维持骨形态和骨重建中起着重要作用.我们在以往实验基础上[1],观察不同浓度的NO外源性供体左旋精氨酸(L-arginine)对大鼠OB增殖,护骨素(OPG)分泌及eNOS和iNOS表达的影响.
作者：镐英杰；王珍；李秀群；裴福兴 刊期： 2007年第09期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
