张振华;田拥军;李磊;王宝菊;孟忠吉;陆蒙吉;杨东亮
目的 应用磁共振扩散成像(DWI)和波谱(MRS)技术界定超急性脑梗死缺血半暗带,力求提出量化评定标准.方法 13例发病时间在2~6 h以内的超急性脑梗死患者行MRI检查,包括DWI及MRS技术,并在2~28 d内复查T2 WI确定终梗死范围.对梗死中心区、缺血半暗带及对侧镜像区,测量其扩散变化及代谢改变.结果 ①梗死中心区与缺血半暗带表观扩散系数(ADC)平均值分别为7.01×10-4 mm2/s及9.36×10-4 mm2/s,相对ADC(rADC)平均值分别为0.63及0.87,梗死中心区ADC及rADC均明显降低,缺血半暗带ADC及rADC轻度下降,二者之间差异有显著性意义(P<0.05).②超急性脑梗死的典型MRS改变为乳酸(Lac)浓度升高和氮-乙酰天门冬氨酸盐(NAA)水平降低.以肌酸和磷酸肌酸(Cr)为内标准的NAA/Cr比值、Lac/Cr比值及相对NAA(rNAA)在梗死中心区与缺血半暗带之间差异均无显著性意义(P>0.05).③缺血半暗带区ADC值轻度降低(<22%)、Lac升高且NAA正常或轻度下降(<14%);而ADC值明显降低(25%~53%)、Lac升高且NAA明显下降(16%~34%)的区域为不可逆损伤区的可能性大.④1例疑腔隙性脑梗死发病2 h DWI见右丘脑小团异常高信号灶,ADC下降幅度为16%,11d后复查T2 WI见原右丘脑高信号完全消失,提示为缺血半暗带,而非梗死.结论 DWI和MRS的联合应用可发现超急性脑梗死,并预测缺血半暗带.
作者:朱文珍;漆剑频;王伟 刊期: 2007年第05期
目的 调查武汉市社区获得性腹泻患者中志贺菌感染和流行状况,分析志贺菌血清型分布及耐药性,为社区获得性腹泻治疗和该菌的基因分型提供客观依据.方法 菌株来自2004年夏秋季武汉市4所大型医院门诊腹泻患者的粪便标本;药物敏感试验采用琼脂稀释法和纸片扩散法;结果分析采用WHONET5.3软件和SPSS 12.0软件;基因分型采用重复基因外回文序列-聚合酶链式反应(REP-PCR).结果 5 079份粪便标本分离出29株志贺菌,占所检出病原菌总数的23%,血清分型涉及B群和D群,D群占59%.志贺菌对头孢他啶和头孢吡肟的敏感率高,为100%;其次为氨曲南、呋喃妥因和氟喹诺酮(诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星),敏感率为93.1%~96.6%;对头孢曲松、头孢噻肟、卡那霉素和庆大霉素的敏感率为75.0%~82.8%;对氯霉素、氨苄西林、萘啶酸、四环素和大观霉素的敏感率均小于50%;未发现复方新诺明敏感株.耐药模式多达20种,多为12种联合耐药;各群有各自的优势耐药模式.REP-PCR基因分型结果提示16株D群志贺菌有7种指纹图谱,12株B群志贺菌有2种指纹图谱.结论 武汉地区因志贺菌感染导致社区获得性腹泻的比例较低,D群感染占优势.头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和氟喹诺酮有较好的抗菌活性.B群和D群对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸和氯霉素的敏感性差异有极显著性意义.多重耐药普遍存在,耐药模式繁多.武汉市志贺菌有相同或相似的克隆,血清型单一的D群有多种基因型,B群中f2a比f4c的遗传多样性高.
作者:游升荣;孙自镛 刊期: 2007年第05期
目的 探讨经阴道超声检查(TVS)结合多变量Logistic回归分析法对早期异位妊娠(EP)的诊断价值.方法 运用TVS检测和观察97例确诊的早期EP患者的子宫内膜厚度、对称性、回声、形态等二维声像图特征,进行单、多因素Logistic回归分析和ROC曲线分析,找出有意义的变量和建立预测方程.结果 子宫内膜三线状改变及内膜厚度≤9mm是有意义的超声诊断变量,OR值分别为299.59和34.139,多变量Logistic预测方程的建立比单独应用单一变量拥有更大的曲线下面积,能够更好地鉴别诊断EP.结论 TVS对EP的早期诊断敏感性较高.TVS结合多变量Logistic回归分析能克服用单一变量指标作为诊断和鉴别诊断标准时敏感性较低的问题,能更准确地预测EP.
作者:陈智毅;谢明星;柳建华;梁伟翔;梁琨 刊期: 2007年第05期
目的 探讨3种难培养支原体(发酵支原体,Mf;穿透支原体,Mpe;梨支原体,Mpi)的临床检测方法,同时了解其在温州地区妇科炎症患者中的感染情况.方法 采集妇科炎症患者和正常女性(各280例)的宫颈管分泌物,接种于SP-4培养液培养.阳性培养物应用套式聚合酶链反应(nPCR)和DNA测序等方法加以鉴定.结果 280例患者的宫颈分泌物中分离到8株Mf(2.86%)、7株Mpe(2.50%),而280例正常女性未分离到相应菌株.nPCR检测结果与之相符,阳性菌株经测序确认.结论 培养液分离培养法结合nPCR技术,准确、较快速,是进行艾滋病(AIDS)相关支原体分离鉴定较可靠实用的方法.温州地区妇科炎症患者存在Mf、Mpe感染,在临床诊治中应予关注.
作者:曹淑彦;周丽萍;姚群峰;王宇学;王忠永 刊期: 2007年第05期
目的 探讨Zn、Cu、TNF-α及细胞凋亡在胎膜早破发病机制中的作用及意义.方法 采集胎膜早破25例及足月妊娠正常分娩无并发症孕妇25例临产前肘静脉血,微分电位法测血清微量元素;放射免疫分析法测定血清中TNF-α浓度;分娩后取胎膜组织,石蜡包埋切片后行TUNEL法原位标记,镜下观察凋亡细胞并计算凋亡指数.结果 ①胎膜早破组血清TNF-α浓度明显高于正常对照组,差异有极显著性意义(P<0.01).②胎膜早破组母血Zn、Cu值低于正常对照组,差异有极显著性意义(P<0.01),Fe、Ca、Mg值两组间差异无显著性意义(P>0.05).③胎膜早破组细胞凋亡指数(13.34±3.87)明显高于正常对照组(2.12±0.71),P<0.01.结论 TNF-α可降解细胞外基质,促炎,促细胞凋亡,是胎膜早破的重要促发因子,微量元素Zn、Cu的含量改变与胎膜早破发病密切相关.
作者:张玲玲;张雄;李蓉 刊期: 2007年第05期
目的 探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用.方法 采用全细胞膜片钳技术.结果 ①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10~1 000 μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断.②预加WIN55,212-2(0.03~10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性.WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85 μmol/L vs 25.76μmol/L).③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断.细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用.结论 大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一.
作者:周莹;刘长金;李爱;胡新武;陈蕾;刘烈炬 刊期: 2007年第05期
目的 研究抗Fas锤头状核酶对T细胞Fas表达及其凋亡的影响,探讨增强供者淋巴细胞输注时移植物抗白血病(graft versus leukemia,GVL)效应的新策略.方法 构建可有效切割Fas mRNA的锤头状核酶真核质粒,电穿孔法将其导入小鼠细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)细胞株CTLL-2中,借助RT-PCR和Western blot检测细胞Fas的表达,同时检测转染前后细胞Caspase-3活性的改变和细胞凋亡(Annexin Ⅴ-FITC法).MTT法检测空白对照组、转染空载体组及转染pU6-RZ596组CTLL-2细胞的增殖情况和体外杀伤粒-单核白血病细胞(WEHI-3)的活性.结果 构建的U6嵌合型锤头状核酶RZ596在细胞内能有效切割Fas,RT-PCR电泳检测其与β-actin条带的灰度比值:CTLL-2细胞空白对照组为(1.06±0.12),转染空载体组为(0.98±0.15),转染pU6-RZ596组为(0.43±0.11)(n=3);Fas蛋白的Western blot检测显示:以空白对照组灰度值为1,转染空载体组和转染pU6-RZ596组电泳条带的灰度比值分别为(0.98±0.13)和(0.45±0.08)(n=3),提示抗Fas锤头状核酶可明显降低小鼠活化CTLL-2的Fas水平.与高表达Fas配体(FasL)的WEHI-3细胞共孵育,CTLL-2细胞的存活率和体外杀伤活性明显增加,空白对照组、转染空载体组和转染pU6-RZ596组的细胞凋亡率分别为88%、84%和37%,对WEHI-3细胞杀伤活性分别为32%、31%和67%.结论 抗Fas锤头状核酶能显著降低小鼠活化CTLL-2细胞的Fas表达,使其免于Fas途径的凋亡.
作者:黎纬明;刘凌波;邹萍;何伟;张敏 刊期: 2007年第05期
目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区-1082位点多态性与冠状动脉疾病(CAD)相关性及其对血清IL-10水平的影响.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)检测50例CAD患者、60例健康对照者基因组DNA IL-10基因启动子区域-1082位点的基因多态性,并进行相关性分析.用双抗体夹心ELISA法测定血清IL-10水平.结果 CAD组血清IL-10水平显著低于健康对照组(P<0.05).CAD组和健康对照组IL-10-1082A/G基因型和等位基因频率比较,差异有显著性意义.等位基因频率的相对风险分析显示,A等位基因携带者患CAD的相对风险是G等位基因的2.827倍.携带A等位基因的CAD患者血清IL-10水平显著低于非携带者.结论 IL-10基因启动子-1082位点多态性影响血清IL-10水平并可能与CAD的临床发展过程相关,其中A等位基因可能是CAD发病的遗传易感基因.
作者:陈剑;孙宗全;夏家红;徐磊 刊期: 2007年第05期
目的 研究血吸虫肝纤维化小鼠肝组织中交感神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)及其受体(adrenal receptor,AR)的表达.方法 应用腹部敷贴尾蚴法使小鼠感染血吸虫.30只昆明种小鼠随机分成正常对照组(N组)和肝纤维化模型组(M组).采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变,高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法检测肝组织中NE的含量,同时应用Western blot方法检测肝脏组织中AR的表达水平.结果 血吸虫肝纤维化小鼠的肝组织中NE的含量明显低于正常小鼠,而AR的含量明显高于正常组,其差异具有统计学意义(P<0.01).结论 小鼠血吸虫肝纤维化时肝组织中去甲肾上腺素表达减少,这可能是肝纤维化时交感神经促进肝纤维化发展的作用机制之一.
作者:刘红艳;段瑞娴;郭燕;高潇;唐望先 刊期: 2007年第05期
目的 研究大鼠移植动脉新生内膜平滑肌细胞Sry基因的表达,探讨骨髓细胞在移植物动脉硬化中的作用.方法 采集雄性Wistar大鼠的骨髓细胞,将其移植到经γ射线照射预处理的雌性Wistar大鼠体内,制备嵌合体大鼠;4周后建立大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应模型,分为4组:雌性同系移植组、雌性异系移植组、雄性异系移植组、嵌合体异系移植组.术后8周,制备移植动脉组织标本进行病理组织学观察,分析移植动脉硬化情况;用抗平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)单抗进行SABC法免疫组化染色,检测移植动脉新生内膜细胞α-SMA的表达情况;采用显微切割技术收集移植动脉冰冻切片新生内膜平滑肌细胞,用PCR检测其Sry基因的表达,分析移植动脉新生内膜平滑肌细胞是否来源于骨髓细胞.结果 异系移植组移植动脉新生内膜中α-SMA表达阳性平滑肌细胞大量增生,致动脉内膜显著增厚,血管管腔明显狭窄;动脉壁新生内膜面积及新生内膜/中膜面积比均显著高于同系移植组(P<0.01),而异系移植组之间差异无显著性意义(P>0.05).PCR扩增显示,嵌合体异系移植组和雄性异系移植组一致,在相对分子量为225 bp处均有一条特异性扩增条带,而雌性异系移植组则无相应的核酸扩增条带;结果提示移植物动脉新生内膜平滑肌细胞来源于骨髓细胞.结论 在动脉移植慢性排斥反应中,骨髓细胞分化为血管新生内膜平滑肌细胞,参与移植物动脉硬化的发生和发展.
作者:宋自芳;郑启昌;李伟;舒晓刚;尚丹;管思明;胡青钢 刊期: 2007年第05期
目的 通过在缺血/再灌注心肌中应用阿片受体激动剂吗啡和阻滞剂纳络酮,研究缺血后处理的保护机制和吗啡药物后处理的保护作用.方法 SD大鼠60只随机分为6组行Langendorff心脏灌流:①停灌/再灌组(I/R);②纳络酮组(NAL);③缺血后处理组(Post-con);④纳络酮加后处理组(NAL+Post-con);⑤吗啡组(MOR);⑥吗啡加纳络酮组(MOR+NAL).观测左室内压变化速率(±dp/dtmax),心肌梗死面积,冠脉流出液中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶含量(LDH),心肌超微结构改变.结果 心脏复灌初期采取缺血后处理或灌注吗啡可以改善心功能,减小梗死面积.纳络酮对停灌/再灌心肌没有影响,但可削弱缺血后处理的心肌保护效果并完全取消吗啡的心肌保护作用.结论 阿片受体的激活是缺血后处理心肌保护作用的机制之一.再灌之初给予吗啡能起到缺血后处理样的心肌保护作用.
作者:毛张凡;杜心灵;孙宗全;夏家红 刊期: 2007年第05期
Marshll-White综合征临床少见,近几年来报道逐渐增多,自1994年以来国内已有20例报道[1-4].为分析该综合征的临床特点,我们对协和医院皮肤科门诊1999年10月至2006年6月所诊治的10例该综合征患者进行分析,现报道如下.
作者:樊超;朱里;刘文韬;黄长征;涂亚庭 刊期: 2007年第05期
目的 探讨体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)中单卵双胎妊娠的发生率及可能的机制.方法 回顾性分析2003年10月至2005年5月间实施体外受精-胚胎移植术并获得临床妊娠的617个周期,其中常规IVF-ET术周期442例,卵泡浆内单精子注射术(ICSI)周期175例;562个周期为新鲜胚胎移植周期,其余55个周期为冷冻-复苏周期.统计单卵双胎妊娠的发生率,分析可能影响其发生的相关因素.结果 617个临床妊娠周期中共发生单卵双胎妊娠16例,发生率为2.59%;其中单卵双绒毛膜双胎6例(37.5%),单绒毛膜双胎10例(62.5%);单卵双胎妊娠与非单卵双胎妊娠病例之间的年龄,促排卵方案、剂量与时间,移植胚胎数量与质量间差异均无显著性意义(P>0.05);ICSI周期中单卵双胎的发生率(2.86%)高于常规IVF-ET周期(2.49%),但差异无显著性意义(P>0.05);冷冻复苏周期中单卵双胎的发生率(7.27%)明显高于新鲜胚胎移植周期(2.14%)(P<0.05).结论 IVF-ET术中单卵双胎的发生率高于自然妊娠,这可能与体外培养条件和冷冻复苏技术的应用有关,而单纯ICSI术不会明显提高单卵双胎的发生率.
作者:李舟;朱桂金;刘玉芹;章汉旺 刊期: 2007年第05期
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用.方法 采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3△C,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶(ALP)和核心结合因子(cbfa1)mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3△C对MSCs成骨分化的影响.结果 在TGF-β1刺激后24 h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少(P<0.01),而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化(P>0.05);稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs(空载体转染组)中ALP、cbfa1 mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3△C-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3△C-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48 h有明显增加(P<0.05),但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义(P<0.01).结论 TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节.
作者:王运涛;郑启新;吴小涛;郭晓东;茅祖斌;陈辉;赵梓汝 刊期: 2007年第05期
目的 观察核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究Survivin在其诱导肝癌细胞HepG2凋亡中的作用.方法 将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NF-κB圈套寡核苷酸转染至HepG2细胞中,荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位观察,凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染前后NF-κB活性变化;流式细胞仪和TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白Survivin的改变.结果 NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降.与未处理组、转染错义组相比,转染NF-κB圈套寡核苷酸组的HepG2细胞凋亡率增加,Survivin蛋白表达下调[(39.8±1.9)、(42.7±2.5)vs(20.1±3.1)].结论 NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肝癌细胞HepG2凋亡的作用,其机制可能与下调Survivin的表达有关.
作者:张万广;杨盛力;李哲夫;张峰;徐宗全;王其;张志伟 刊期: 2007年第05期
目的 探讨牛磺酸在体外冲击波碎石术(ESWL)致肾损伤中的保护作用及机制.方法 40只家兔随机分为:生理盐水对照组、牛磺酸组.分别测定ESWL前后外周血中损伤相关因子内皮素(ET-1)、丙二醛(MDA)及保护相关因子一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.并观察肾脏组织形态及细胞超微结构变化.结果 两组在ESWL后外周血ET-1、MDA含量均升高,NO和SOD的含量则均降低,同期牛磺酸组ET-1、MDA升高幅度明显低于对照组,同期牛磺酸组SOD、NO降低幅度也明显低于对照组.结论 牛磺酸可能通过减少肾组织氧自由基的产生,调节ET-1、NO水平之间平衡的机制,保护肾脏,缓解ESWL引起的肾脏损伤
作者:朱伟;曾甫清;刘聪;何延瑜 刊期: 2007年第05期
目的 研究抗心律失常肽(AAP10)对乳鼠心肌细胞急性缺氧时细胞间传导的影响.方法 原代培养的乳鼠心肌细胞,随机分为正常组、缺氧2 h组和100 nmol/L AAP10干预组,每组n=9.采用划痕标记染料示踪技术测定细胞间通讯,Western blot技术检测缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)磷酸化水平的改变.结果 划痕标记染料示踪技术结果显示:缺氧组细胞间传导下降,而AAP10干预后能促进荧光黄的扩散.Western blot结果显示:缺氧组总Cx43蛋白表达下降,与正常组比较P<0.01,而去磷酸化的Cx43(NP-Cx43)蛋白表达不变;AAP10干预组能提高总Cx43蛋白表达,与缺氧组比较P<0.01,但对NP-Cx43蛋白表达无影响.结论 急性缺氧时磷酸化的Cx43(p-Cx43)蛋白表达下降,而AAP10改善传导主要通过促进Cx43磷酸化.
作者:王荣;张存泰;刘念;阮燕菲;王琳 刊期: 2007年第05期
目的 研究胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)在急性髓细胞性白血病(AML)中的表达特点及抗IGF-Ⅰ R单克隆抗体对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60的作用.方法 通过流式细胞仪检测白血病细胞和HL-60细胞表面IGF-ⅠR的表达,并用鼠抗人IGF-ⅠR单克隆抗体(IGF-ⅠR MAb)作用于HL-60细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化.结果 IGF-Ⅰ R在急性髓细胞白血病和HL-60细胞普遍表达,原始细胞比例越高,IGF-Ⅰ R表达越强(P<0.01).0.001~10.000 μg/ml的IGF-Ⅰ R MAb可抑制HL-60细胞生长,且随时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更加明显(P<0.05).0.001~10.000 μg/ml浓度范围内,IGF-Ⅰ RMAb诱导HL-60细胞的凋亡率随药物浓度的增大而增高,但对HL-60细胞周期无显著影响.结论 IGF-Ⅰ R在急性髓细胞性白血病中普遍表达,IGF-Ⅰ R的高表达可能与细胞的恶性转化和白血病细胞的生长有密切关系.IGF系统对肿瘤细胞的促增殖及抗凋亡作用能被IGF-Ⅰ R单克隆抗体所阻断,IGF-Ⅰ R有可能成为抗白血病治疗的靶点.
作者:孙思;刘隽;周咏明;熊芳;李玥莹;刘伟;王萍;黄士昂 刊期: 2007年第05期
目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P<0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.
作者:于利利;王泽华 刊期: 2007年第05期
目的 构建人同种异体移植炎症因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)基因的真核表达载体并在小鼠成纤维细胞系(NIH3T3)中表达,为进一步研究AIF-1蛋白的功能奠定基础.方法 利用基因重组技术,构建带有AIF-1基因的2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1.利用脂质体法将2种重组质粒分别转染NIH3T3细胞,用荧光倒置显微镜及Western blot方法观察及鉴定AIF-1在细胞中的稳定表达及瞬时表达.结果 酶切分析及DNA序列测定证实,AIF-1基因片段被分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)与pEGFP-C1.荧光显微镜观察到NIH3T3细胞中有绿色荧光分布.Western blot结果表明,转染重组质粒的NIH3T3细胞中,AIF-1表达量明显增高.结论 成功构建了2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1,经转染NIH3T3细胞株获得了AIF-1蛋白的瞬时表达及稳定表达.
作者:付康;程首超;刘收;陈孝平;陆婕;柳欣;陈正望 刊期: 2007年第05期